CN106011022B - 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 - Google Patents
一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106011022B CN106011022B CN201610538584.7A CN201610538584A CN106011022B CN 106011022 B CN106011022 B CN 106011022B CN 201610538584 A CN201610538584 A CN 201610538584A CN 106011022 B CN106011022 B CN 106011022B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- culture medium
- solid
- rose yellow
- solid fermentation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Abstract
本发明涉及一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法,微生物发酵领域。培养基以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分以重量比计,包括:沙土10%~49.5%、玉米粉30%~60%、稻壳10%~20%、玉米秸秆粉10%~20%、碳酸钙0.5%~1%。利用该组分制备的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基进行液‑固双相发酵,即得到玫瑰黄链霉菌菌剂。该方法简单易行,成本低,孢子粉有效活菌数达到78亿~99亿个/g,且能够有效缩短生产周期,使生产效率得到极大的提高。
Description
技术领域
本发明涉及微生物发酵领域,具体涉及一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的配方、培养基的制备以及固体发酵方法。
背景技术
植物病原线虫是植物病害的重要病原物之一,每年都会对农林业造成严重损失。随着人们环保意识的加强,被允许使用的化学杀线剂逐渐退出市场,仅有少数低毒高效低残留的化学杀线剂仍在使用。人们越来越多地关注微生物,从中寻求新的防治线虫的解决办法。放线菌(Actinomycete)是一种重要的产生抗生素的微生物资源,许多农用抗生素成功开发用于防治植物病原线虫,譬如灰色链霉菌(Streptomyces avermitilis)产生的阿维菌素就可以有效防治根结线虫。由于链霉菌(Streptomycetaceae)是抗生素主要产生菌,因此是放线菌中研究最多的菌属。
其中,玫瑰黄链霉菌(Streptomyces roseoflavus)广泛分布于自然界的土壤、空气及水中,对多种植物病害病原菌具有强烈的抑制作用,可以防治包括棉花黄萎病(Verticillium dahliae)、番茄灰霉病(Botrytis cinerea)、黄瓜枯萎病(Fusariumoxysporum)等在内的多种种传和土传真菌病害。此外,其代谢产物对蔬菜根结线虫具有抑制作用,因此,玫瑰黄链霉菌在农业生物防治上具有广阔的应用前景。
但是,土壤中自然生长的玫瑰黄链霉菌数量太少,无法发挥上述抑菌促生的作用,需要通过微生物发酵技术对菌种进行扩繁。但是,目前的发酵技术中,玫瑰黄链霉菌固体发酵存在工艺复杂,发酵周期长、产孢量少等缺点,使其难以实现工业化生产。
中国专利CN 104041519A公开了一种玫瑰黄链霉菌微生物杀菌剂的颗粒剂的制备方法,该发明是将在PDA培养基上培养了4-5天的玫瑰黄链霉菌接种到种子培养基上培养3天,后又接种至液体培养基上连续发酵两次进行扩繁,每次培养时间为3天,所制得的发酵液与粉碎好的玉米芯进行固体发酵,培养5-7天,最后再干燥5-7天,制得玫瑰黄链霉菌的杀菌剂颗粒剂。即使不把孢子粉有效活菌数检测的时间计算在内,杀菌剂颗粒的整个制备过程也需要耗时26-31天,周期长,过程繁琐复杂,在生产上应用潜力较小。
中国专利CN 103125527A公开了一种玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂的可湿性粉剂的制备方法。该生物杀菌剂是先将玫瑰黄链霉菌菌种进行液体发酵,然后以硅藻土为基质进行固体发酵,干燥后,添加木质素磺酸钠制成玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂可湿性粉剂。该生物杀菌剂对黄瓜白粉病有较好的防治效果,且玫瑰黄链霉菌的整个发酵周期有所减少,为10-11天(不计孢子粉有效活菌数检测过程)。但是在其固体发酵过程中以硅藻土为基质,缺少微生物生长、产孢所需要的有机物质,因而微生物的发酵产物不够理想,每克颗粒剂中含有链霉菌活体孢子和菌丝体的总数仅为10~20亿个或以上。
发明内容
有鉴于此,针对现有技术的不足,本发明目的在于提供一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基配方、培养基制备方法以及固体发酵方法,以解决现有技术中发酵工艺复杂、发酵周期长、产孢量少等技术问题。
本发明涉及的玫瑰黄链霉菌,保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏编号为CGMCC No.11963。
本发明的技术方案如下:
一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分以重量比计,包括:沙土10%~49.5%、玉米粉30%~60%、稻壳10%~20%、玉米秸秆粉10%~20%、碳酸钙0.5%~1%。
本发明优选的,所述沙土包括重量比为4:1的细土和沙子;其中,所述的细土粉碎后粒径为-60目;所述沙子为河沙,粒径为-40目;所述玉米秸秆粉为-5目。
本发明优选的,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分以重量比计,包括:沙土30%~45%、玉米粉30%~39%、稻壳10%~20%、玉米秸秆粉10%~16%、碳酸钙0.5%~1%。
进一步优选的,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分包括:沙土45%、玉米粉30.2%、稻壳12%、玉米秸秆粉12%,碳酸钙0.8%。
进一步优选的,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分包括:沙土31.5%、玉米粉40%、稻壳12%、玉米秸秆粉16%,碳酸钙0.5%。
进一步优选的,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分包括:沙土30%、玉米粉39%、稻壳14%、玉米秸秆粉16%,碳酸钙1%。
进一步优选的,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分包括:沙土34.5%、玉米粉35%、稻壳20%、玉米秸秆粉10%,碳酸钙0.5%。
本发明的还提供了一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法,包括以下步骤:
A按照上述质量比称取玉米粉、稻壳、玉米秸秆粉、沙土以及碳酸钙,将各原料均匀混合。
B在所述混合物中加入水,自然pH,搅拌均匀后经高压蒸汽灭菌处理,得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
本发明优选的,高压蒸汽灭菌的处理条件为:在121℃、1.0~1.5kg/cm3压力条件下,灭菌30~60min。
本发明还提供了一种玫瑰黄链霉菌的固体发酵方法,主要包括以下步骤:
(1)摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上培养3-5天的玫瑰黄链霉菌转接到液体高氏一号培养基上,进行种子初步扩繁,制备摇瓶种子液;
(2)液体发酵:将步骤(1)制得的摇瓶种子液转接于液体发酵培养基上进行液体发酵,振荡培养至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期,得到液体发酵种子液;
(3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至以上述方法制备的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中,进行固体发酵;
(4)干燥:将上述固体发酵物干燥得到玫瑰黄链霉菌菌粉。
根据本发明优选的,步骤(1)摇瓶种子液制备过程中,转接到液体高氏一号培养基后,在25~28℃,恒温培养箱振荡频率150~170r/min的条件下,恒温振荡培养3~5天,进行种子初步扩繁。
根据本发明优选的,步骤(2)液体发酵步骤中,摇瓶种子液接种量为所述液体发酵培养基体积的8~15%;其中,所述液体发酵的条件为:温度28~30℃,恒温培养箱振荡频率150~180r/min,恒温振荡培养48~72h;所述液体发酵培养基为花生饼35g,淀粉20g,葡萄糖20g,酵母膏2g,碳酸钙8.5g,硫酸亚铁0.7g,硫酸锌0.7g,氯化钠0.7g,硫酸二氢钾0.5g,硫酸铵7g,定容至1升。
根据本发明优选的,步骤(3)固体发酵步骤中,所述液体发酵种子液的接种量为所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基质量的10~20%;所述固体发酵条件为在28~30℃下静置培养4~6天。
本发明优选的,所述步骤(3)固体发酵包括发酵初期和发酵后期,发酵后期即产孢期;其中,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基在发酵初期水分含量为35~45%,在发酵后期水分含量为28%~32%。发酵初期水分含量以固体发酵培养基所含水分为基础,液体发酵种子液以100%含水量计,补充液体发酵种子液至所需水分含量;发酵后期水分含量为将所得固体发酵培养基称重(W0),彻底烘干后再次称重(Wt),根据以下公式计算发酵后期水分含量:发酵后期水分含量=(W0-Wt)/W0,环境湿度40-60%。
本发明优选的,所述干燥条件为自然晾干或40~60℃下以空气为干燥介质干燥。
现有技术中,微生物固体培养基常用的麸皮和黄豆粉存在以下问题:麸皮营养成分含量高,但其价格贵,且杂菌含量较高,在生产发酵过程中易感染杂菌,从而提高所得菌剂中的杂菌含量;而以黄豆粉为菌体的唯一氮源时,菌体生长速度缓慢,不利于孢子的产生,菌剂孢子产生的数量较少。
本发明提供的固体发酵培养基以玉米粉、玉米秸秆粉及稻壳取代常规固体发酵培养基中的麸皮和黄豆粉。其中以玉米粉为氮源,有利于玫瑰黄链霉菌的生长,缩短发酵周期,避免发酵周期过长导致感染杂菌。花生饼粉、豆粕粉等常用物料也可以作为固体发酵培养基的氮源。
稻壳和玉米秸秆粉分别是是大米收获后的外壳以及玉米秸秆磨成的粉。利用稻壳及玉米秸秆粉代替麸皮,一方面能够起到提高固体发酵培养基透气性的作用,另一方面,玉米秸秆粉中含有大量的碳水化合物及蛋白质和脂肪,能够促进菌体生长及孢子的产生。
本发明的沙土是指包括重量比4:1的土壤和沙子的混合物。按此比例混合的土壤及沙子能够作为固体培养所需的支持体。
本发明优选的固体发酵培养基的灭菌处理条件为:在121℃下施加1.0~1.5kg/cm3压力条件下,灭菌30~60min。按此条件进行灭菌,能充分消灭固体发酵培养基中的杂菌,尤其是土壤中的杂菌,能够降低发酵过程中染菌的几率。
本发明提供的固体发酵培养基发酵采用液-固双相发酵方法,该液体发酵是在固体发酵前用于种子液的发酵,目的是为菌株提供氮源、碳源和无机盐养分,通过液体发酵过程,使玫瑰黄链霉菌得到充分萌发及扩繁。而液体发酵可以选择对玫瑰黄链霉菌生长有利的液体发酵培养基及条件,避免其他杂菌生长。
所述液体发酵过程中,采用温度为28~30℃,震荡频率为150~180r/min的发酵条件,恒温振荡培养48~72h,有利于玫瑰黄链霉菌菌体生长,不易染杂菌。
本发明所述的固体发酵过程中,液体发酵液接种量为固体发酵培养基质量的10%~20%。采用该接种量接种,能够保证接入固体发酵培养基中的菌体数量适宜,避免水分过大,导致菌体增殖缓慢。
所述的固体发酵阶段分为发酵初期和发酵后期即产孢期。固体发酵培养基水分含量在发酵初期控制在35~45%,发酵后期水分含量控制在28%~32%。采用此条件发酵,能够避免过度培养,导致后期染菌,并降低成本。
本发明所述的干燥过程中,干燥条件为自然晾干或40~60℃下以空气为干燥介质。采用该方法能够避免玫瑰黄链霉菌孢子受热不均匀,降低活性。另外,该固体发酵培养基具有良好的透气性,能够加快干燥速度。
按照发明所述的方法制备的玫瑰黄链霉菌发酵培养基具有多种用途,可用于生产微生物肥料、微生物杀菌剂颗粒、微生物杀菌剂可湿性粉剂、种子处理剂、肥料增效剂等。
本发明的有益效果在于:
1、本发明提供的固体发酵培养基通过加入稻壳、玉米秸秆粉,并优化玉米粉和沙土,使其保证足够有机质的同时,也能增加固体发酵培养基质内的通气量,使玫瑰黄链霉菌的生长量和产孢量得到提高,孢子粉有效活菌数达到78亿~99亿个/g。
2、本发明采用液体-固体联合发酵培养工艺进行玫瑰黄链霉菌菌剂的培养,发酵条件适宜,生产一批次玫瑰黄链霉菌菌粉周期约12~14天,其中包括:液体发酵约3天,固体发酵约5天,干燥约2~4天,孢子粉有效活菌数检测约2天。采用本发明提供的生产方法,能够有效缩短生产周期,使生产效率得到极大的提高。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明做进一步说明,但不限于此。
以下结合实施案例对本发明进行详细说明,但本发明可以有权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
以下实施例中所采用原料和设备均为市售商品,其中各种培养基按常规方法配制。液体发酵在恒温振荡器上完成,高压灭菌处理在立式高压灭菌锅内完成,固体发酵在30cm×20cm×4cm托盘内完成,干燥室内自然风干。实施例所述玫瑰黄链霉菌,保存于中国普通微生物菌种保藏管理中心,菌种保藏编号为CGMCC No.11963。
实施例1:
1、制备玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基:
A按质量百分比计,称取以下物料:沙土45%、玉米粉30.2%、稻壳12%、玉米秸秆粉12%、碳酸钙0.8%,在金属托盘中混合均匀。
B加入占固体物料重量30%的水,用牛皮纸将托盘与物料包起来,在121℃施加1.0Kg/cm3压力条件下灭菌40min,即得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
2、玫瑰黄链霉菌的发酵方法:
(1)摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上已经培养3天的玫瑰黄链霉菌转接到液体高氏一号培养基;在25℃,恒温培养箱振荡频率150r/min的条件下,恒温振荡培养5天,进行种子初步扩繁,制备摇瓶种子液;
(2)液体发酵:将上述步骤制备的摇瓶种子液按8%的接种量,转接于液体发酵培养基,在28℃下150r/min振荡培养72h,至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期,得到液体发酵种子液;
(3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中,接种量为玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基物料重量的10%,搅拌均匀,在28℃下培养4天。在此期间定期取样并用显微镜观察是否产孢。发酵初期控制玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分为40%,后期控制玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分为30%。
(4)风干:固体发酵结束后,置于室外阴凉处风干3天,即可得到玫瑰黄链霉菌菌粉。
实施例2:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的固体原料配比不同,为沙土31.5%、玉米粉40%、稻壳12%、玉米秸秆粉16%、碳酸钙0.5%。
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,步骤(1)摇瓶种子液制备步骤中,所选取的玫瑰黄链霉菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同,为5天;转接到液体高氏一号培养基上,在28℃,恒温培养箱振荡频率170r/min的条件下,恒温振荡培养3天,进行种子初步扩繁。
步骤(3)所述固体发酵过程中,固体发酵培养基的水分状况不同,发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在45%,发酵后期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在32%;所述干燥过程中,固体发酵物的风干时间不同,为2天。
实施例3:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同,为沙土30%、玉米粉39%、稻壳14%、玉米秸秆粉16%、碳酸钙1%。
玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备过程中,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的高温高压灭菌时间为30min。
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,步骤(1)摇瓶种子液制备步骤中,将玫瑰黄链霉菌转接到液体高氏一号培养基上,在26℃,恒温培养箱振荡频率160r/min的条件下,恒温振荡培养4天,进行种子初步扩繁。
步骤(2)液体发酵过程中,所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种子液的接种量为10%;
步骤(3)固体发酵过程中,培养时间不同,为5天,固体发酵培养基的水分状况也不同,发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在40%,发酵后期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在28%。
实施例4:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同,为沙土34.5%、玉米粉35%、稻壳20%、玉米秸秆粉10%、碳酸钙0.5%。
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,所述摇瓶种子液制备步骤中,所选取的玫瑰黄链霉菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同,为4天;所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种子液的接种量为10%;所述固体发酵过程中,培养时间不同,为5天,固体发酵培养基的水分状况也不同,发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在35%,发酵后期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在30%;所述干燥过程中,固体发酵物的风干时间不同,为2天。
实施例5
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的原料配比不同,为沙土20%、玉米粉50%、稻壳10%、玉米秸秆粉19%、碳酸钙1%。
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,所述摇瓶种子液制备步骤中,所选取的玫瑰黄链霉菌在固体高氏一号培养基上培养天数不同,为4天;所述用于液体发酵培养基接种的摇瓶种子液的接种量为10%;所述固体发酵过程中,培养时间不同,为6天,固体发酵培养基的水分状况也不同,发酵初期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在35%,发酵后期玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基水分含量控制在30%;所述干燥过程中,固体发酵物的风干时间不同,为2天。
实施例6
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备过程中,在121℃下施加1.5Kg/cm3压力条件下灭菌60min,即得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
实施例7
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,步骤(2)液体发酵:摇瓶种子液接种量为所述液体发酵培养基体积的15%,转接于液体发酵培养基,在30℃下180r/min振荡培养48h,至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期,得到液体发酵种子液。
实施例8
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于:
玫瑰黄链霉菌的发酵过程中,步骤(3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中,接种量为玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基物料重量的20%,搅拌均匀,在30℃下培养4天。
对比例1
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于固体发酵培养基组份以重量百分比计,包括硅藻土60%,麸皮20%,黄豆粉15%,其余为水。
对比例2
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基组份以重量百分比计,包括固体物料和水,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分包括:沙土10%、玉米粉70%、稻壳5%、玉米秸秆粉10%、碳酸钙5%。
对比例3
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于,摇瓶种子液接种到液体发酵培养基后,在温度35℃,振荡频率150r/分钟条件下,装恒温振荡摇床培养72小时。
对比例4
所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法、玫瑰黄链霉菌的发酵方法同实施例1,不同之处在于,固体发酵时,将液体发酵种子液接种到所得固体发酵培养基后,固体发酵培养条件为在35℃下静置培养6天。
实验例
所制备菌粉中有效活菌数的测定方法:培养基为高氏一号培养基,硝酸钾1.0g/L、磷酸二氢钾0.5g/L、硫酸镁0.5g/L、硫酸亚铁0.01g/L、氯化钠0.5g/L、可溶性淀粉20g/L、琼脂20g/L、pH7.2-7.4,121℃高压蒸汽灭菌20min,冷却至50~55℃,制备成无菌平皿,备用。
表1实施例1~8、对比例1~4的有效活菌数、杂菌含量、固体发酵时间表
序号 | 有效活菌数/亿/g | 杂菌含量/% | 固体发酵时间/天 |
实施例1 | 99 | 5 | 4 |
实施例2 | 90 | 2 | 4 |
实施例3 | 86 | 8 | 5 |
实施例4 | 89 | 3 | 5 |
实施例5 | 78 | 8 | 6 |
实施例6 | 83 | 3 | 4 |
实施例7 | 82 | 5 | 4 |
实施例8 | 80 | 4 | 4 |
对比例1 | 47 | 13 | 4 |
对比例2 | 42 | 17 | 4 |
对比例3 | 48 | 15 | 4 |
对比例4 | 45 | 18 | 6 |
根据表1可以看出,采用本发明提供的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及发酵方法,能够提高有效活菌数即孢子数,另一方面能够减少发酵过程中杂菌的污染,降低杂菌含量,提高生产效率。
Claims (13)
1.一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,其特征在于,以重量百分比计,由固体物料和水组成,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分以重量比计,为:沙土30%~45%、玉米粉30%~39%、稻壳10%~20%、玉米秸秆粉10%~16%、碳酸钙0.5%~1%。
2.根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,其特征在于,所述沙土包括重量比为4:1的细土和沙子;其中,所述的细土粉碎后粒径为-60目;所述沙子为河沙,粒径为-40目;所述玉米秸秆粉为-5目。
3.根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,其特征在于,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,由固体物料和水组成,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分为:沙土45%、玉米粉30.2%、稻壳12%、玉米秸秆粉12%,碳酸钙0.8%;
或,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,由固体物料和水组成,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分为:沙土30%、玉米粉39%、稻壳14%、玉米秸秆粉16%,碳酸钙1%。
4.根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,其特征在于,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,由固体物料和水组成,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分为:沙土31.5%、玉米粉40%、稻壳12%、玉米秸秆粉16%,碳酸钙0.5%。
5.根据权利要求1所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,其特征在于,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基,以重量百分比计,由固体物料和水组成,水的重量占固体物料重量的30%,其中,固体物料组分为:沙土34.5%、玉米粉35%、稻壳20%、玉米秸秆粉10%,碳酸钙0.5%。
6.一种如权利要求1-5任意一项权利要求所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法,包括以下步骤:
(A)按照上述质量比称取玉米粉、稻壳、玉米秸秆粉、沙土以及碳酸钙,将各原料均匀混合;
(B)在所述混合物中加入水,自然pH,搅拌均匀后经高压蒸汽灭菌处理,得到玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基。
7.根据权利要求6所述的玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基的制备方法,其特征在于,步骤(B)中,高压蒸汽灭菌的处理条件为:在121℃、1.0~1.5kg/cm3压力条件下,灭菌30~60min。
8.一种利用如权利要求1-5任意一项权利要求所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基进行玫瑰黄链霉菌的固体发酵方法,包括以下步骤:
(1)摇瓶种子液制备:将固体高氏一号培养基上培养3-5天的玫瑰黄链霉菌转接到液体高氏一号培养基上,进行种子初步扩繁,制备摇瓶种子液;
(2)液体发酵:将步骤(1)制得的摇瓶种子液转接于液体发酵培养基上进行液体发酵,振荡培养至所述液体发酵培养基中菌体生长进入所述玫瑰黄链霉菌的对数生长期,得到液体发酵种子液;
(3)固体发酵:将所述液体发酵种子液接种至玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基中,进行固体发酵;
(4)干燥:将上述固体发酵物干燥得到玫瑰黄链霉菌菌粉。
9.根据权利要求8所述的固体发酵方法,其特征在于,步骤(1)摇瓶种子液制备过程中,转接到液体高氏一号培养基后,在25~28℃,恒温培养箱振荡频率150~170r/min的条件下,恒温振荡培养3~5天,进行种子初步扩繁。
10.根据权利要求8所述的固体发酵方法,其特征在于,步骤(4)中,干燥条件为自然晾干或40~60℃下以空气为干燥介质干燥。
11.根据权利要求8所述的固体发酵方法,其特征在于,步骤(2)液体发酵步骤中,摇瓶种子液接种量为所述液体发酵培养基体积的8~15%;其中,所述液体发酵的条件为:温度28~30℃,恒温培养箱振荡频率150~180r/min,恒温振荡培养48~72h;所述液体发酵培养基为花生饼35g,淀粉20g,葡萄糖20g,酵母膏2g,碳酸钙8.5g,硫酸亚铁0.7g,硫酸锌0.7g,氯化钠0.7g,硫酸二氢钾0.5g,硫酸铵7g,定容至1升。
12.根据权利要求8所述的固体发酵方法,其特征在于,步骤(3)固体发酵步骤中,所述液体发酵种子液的接种量为所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基质量的10~20%;所述固体发酵条件为在28~30℃下静置培养4~6天。
13.根据权利要求12所述的固体发酵方法,其特征在于,所述步骤(3)固体发酵包括发酵初期和发酵后期;其中,所述玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基在发酵初期水分含量为35~45%,玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基在发酵后期水分含量为28%~32%。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610538584.7A CN106011022B (zh) | 2016-07-08 | 2016-07-08 | 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610538584.7A CN106011022B (zh) | 2016-07-08 | 2016-07-08 | 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106011022A CN106011022A (zh) | 2016-10-12 |
CN106011022B true CN106011022B (zh) | 2019-10-25 |
Family
ID=57109155
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610538584.7A Active CN106011022B (zh) | 2016-07-08 | 2016-07-08 | 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106011022B (zh) |
Families Citing this family (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106635878A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-05-10 | 扬州大学 | 链霉菌5x4及其作为植物病害生防细菌的用途 |
CN108522211A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-09-14 | 昆山新港湾园林绿化有限公司 | 一种用于种植玫瑰花的改良基质的制备方法 |
CN108277177B (zh) * | 2018-02-01 | 2021-09-21 | 山东五福生生态工程有限公司 | 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法、发酵产物、生防产品和应用 |
CN110387343B (zh) * | 2019-09-06 | 2021-03-16 | 黑龙江省科学院微生物研究所 | 一种诺尔斯链霉菌发酵用固体培养基及其制备方法和应用 |
CN113215040A (zh) * | 2021-05-11 | 2021-08-06 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种5406放线菌固体发酵培养基及发酵方法 |
CN114717142A (zh) * | 2022-03-09 | 2022-07-08 | 山东劲牛集团股份有限公司 | 一种链霉菌复合菌剂的制备和应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103125527A (zh) * | 2011-11-22 | 2013-06-05 | 河北农业大学 | 一种玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂的可湿性粉剂 |
CN104041519A (zh) * | 2013-03-13 | 2014-09-17 | 河北农业大学 | 一种玫瑰黄链霉菌微生物杀菌剂颗粒剂 |
CN104087539A (zh) * | 2014-07-11 | 2014-10-08 | 湖南豫园生物科技有限公司 | 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法 |
-
2016
- 2016-07-08 CN CN201610538584.7A patent/CN106011022B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103125527A (zh) * | 2011-11-22 | 2013-06-05 | 河北农业大学 | 一种玫瑰黄链霉菌生物杀菌剂的可湿性粉剂 |
CN104041519A (zh) * | 2013-03-13 | 2014-09-17 | 河北农业大学 | 一种玫瑰黄链霉菌微生物杀菌剂颗粒剂 |
CN104087539A (zh) * | 2014-07-11 | 2014-10-08 | 湖南豫园生物科技有限公司 | 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63固态发酵培养基及其活菌制剂的研究;闫震;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 农业科技辑》;20101015(第10期);第5页第4段 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106011022A (zh) | 2016-10-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN106011022B (zh) | 一种玫瑰黄链霉菌固体发酵培养基及其制备和发酵方法 | |
US8518428B2 (en) | Antagonistic bacteria for controlling the Fusarium wilt of continuous cropping banana and their microbial organic fertilizer | |
CN101786914B (zh) | 一种促进水稻增产的微生物肥及其制备方法和应用 | |
CN101864376B (zh) | 一种荧光假单胞菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用 | |
CN101875571B (zh) | 增强型液体微生物有机肥料的制备方法 | |
CN108277177B (zh) | 细黄链霉菌固体发酵培养基、制备方法及其发酵方法、发酵产物、生防产品和应用 | |
CN105439725A (zh) | 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用 | |
CN107711891A (zh) | 一种防治枸杞根腐病死树的方法 | |
CN108513988A (zh) | 微生物复合农药 | |
CN104726378A (zh) | 采用强化耐盐微生物菌剂提高盐胁迫草坪草保护酶活性的方法 | |
CN112679280A (zh) | 一种高效生防促生人参复合微生物菌肥制备方法 | |
CN105638651B (zh) | 一种萎缩芽孢杆菌可湿性粉剂的制备方法 | |
CN102219567B (zh) | 一种以沼液为基础培养基发酵生产生物有机肥的方法 | |
CN106396862A (zh) | 一种防治病害的薯类专用微生物菌肥及其制备方法 | |
CN101659931B (zh) | 防除连作黄瓜立枯病的拮抗菌及其微生物有机肥料 | |
CN101818125B (zh) | 一种发根根瘤菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用 | |
CN106520595B (zh) | 一种节杆菌及其在生物防治番茄青枯病方面的应用 | |
CN108383653A (zh) | 一种使用秸秆制备肥料的方法及生物有机肥料 | |
CN104789494A (zh) | 采用强化垃圾堆肥微生物菌剂提高草皮抗盐性的方法 | |
CN104774788B (zh) | 垃圾堆肥中草坪耐盐强化复合微生物菌群的制备方法及应用 | |
CN115340968B (zh) | 微刺假单胞菌的新用途及其方法、微刺假单胞菌21 4.1 9.2-14及其产品 | |
CN108293480A (zh) | 利用生防菌剂防治番茄灰霉病的方法 | |
CN107974423A (zh) | 一种土壤生物活化剂及其制备方法 | |
CN103387427B (zh) | 截短侧耳素菌渣无害化处理的生物菌肥制造方法 | |
CN106883051A (zh) | 一种杀虫有机肥及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |