CN101864376B

CN101864376B - 一种荧光假单胞菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用

Info

Publication number: CN101864376B
Application number: CN2010101091620A
Authority: CN
Inventors: 王卫平; 薛智勇; 朱凤香; 陈晓旸; 洪春来; 吴传珍
Original assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Zhejiang Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2010-02-10
Filing date: 2010-02-10
Publication date: 2012-03-07
Anticipated expiration: 2030-02-10
Also published as: CN101864376A

Abstract

本发明提供了一种利用病原菌拮抗微生物防治番茄青枯病的菌株，即荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’，其保藏编号为CGMCC NO.3330。本发明还提供了一种由荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂。本发明还提供了荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’菌株在防治番茄青枯病中的应用，尤其是作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用。本发明从自然界定向分离选育出荧光假单胞前(Pseudomonas fluorescens)②-16’，先通过培养繁殖后，制成该菌剂产品，利用食用菌栽培后的菇渣通过发酵腐熟后与其他基材按一定比例配制成育苗基质，将生防菌剂直接与育苗基质有机的结合起来，它具有可利用资源丰富、成本低廉、能够避免环境二次污染的诸多优点，是解决土传病害番茄青枯病一条有效的途径。

Description

一种荧光假单胞菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株番茄青枯病拮抗菌株及利用此菌株的菌剂配制的育苗基质对番茄青枯病的生物防治领域。

背景技术

菇渣以香菇、金针菇等栽培后废弃菌筒为主，其主要成分是木渣、棉籽壳，以木质素为主，养分含量较低，经过食用菌栽培分解后，菇渣略带酸性比较松软，其吸水性、保水肥性、通气性较好，更适合花卉苗木的幼苗根系生长。因此菇渣更适合开发用于花卉苗木的容器苗生产基质。因此项目的研发目标更明确、研究内容更有针对性、技术工艺更切合生产实际应用。我省既是菌菇生产大省，也是花卉苗木生产大省，但却是苗木生产基质原材料资源如草炭等大量缺乏。因此开展这项研究不仅可以解决菌菇生产废弃物随意倾倒造成农村环境污染，改善新农村建设面貌，同时又可以解决蔬菜工厂化育生产、草坪生产、花卉苗木生产基质资源不足，降低生产成本，实现农业生产的节能减排和资源循环再生利用。

番茄青枯病是由茄青枯拉尔氏菌[Ralatonia solanacearum(smith)Yabuuchi et al]引起世界范围内的毁灭性土传病害，热带、亚热带的国家和地区，如：南美洲、日本、印度、菲律宾，我国台湾、广东、浙江、福建、江苏、湖北、四川、重庆等地区严重发生。该病可造成植株大面积萎蔫死亡，一般田块发病率为10％～15％，重病田发病率高达80％～98.5％，导致番茄产量严重下降，造成重大的经济损失。R.solanacearum是一种土壤习居菌，能够在无寄主情况下的土壤中存活很长时间。R.solanacearum主要从根系侵入植株，也可从茎部伤口侵入并直接进入导管系统，在其中大量繁殖并产生代谢物质，阻碍植物体内水分运输，造成植株萎蔫。目前，针对番茄青枯病缺少有效的化学药剂，加之青枯菌对化学农药易产生抗药性，而且大量使用化学农药会造成环境污染和生产成本上升。休耕期撒施石灰可减轻病害发生，但易造成土壤板结。抗病育种工作，由于缺乏理想的抗源材料，进展缓慢。水旱轮作要求轮作年限长，且附近无其它宿主存在方可起到良好效果，因而实施起来较困难。土壤灭菌后形成了土壤生物真空，一旦土壤受到病原菌侵染，会导致病原菌的大爆发而造成更为严重后果，且在大田操作也不可行。利用抗病占木培育嫁接苗对防治土传病害有明显的效果，但要有好的占木并配合适宜的嫁接技术才能做到，大规模应用也有一定的局限性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供了一种利用病原菌拮抗微生物防治番茄青枯病的菌株，即荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’，其保藏编号为CGMCCNO.3330，它的保藏时间为2009年10月9日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址为北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所。

本发明还提供了一种由荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂，所述菌剂中荧光假单胞菌菌株②-16’菌数达1亿cfu/ml以上。

本发明还提供了荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’菌株在防治番茄青枯病中的应用，尤其是作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用。

本发明从自然界定向分离选育出具有拮抗番茄枯萎病、活力强等特性的微生物菌株荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’；先通过培养繁殖后，制成该菌剂产品；利用食用菌栽培后的菇渣通过发酵腐熟后与其他基材按一定比例配制成育苗基质，再按一定比例将拮抗菌剂与育苗基质混配至合适的含水率及含有效菌数，最后将其配制方法形成规范化制备技术。本发明利用生防菌剂直接与育苗基质有机的结合起来，作为防治作物病害的方法，它具有可利用资源丰富、成本低廉、能够避免环境二次污染的诸多优点，是解决土传病害番茄青枯病一条有效的途径。

附图说明

图1是本发明中菌株②-16’对青枯拉尔氏菌的拮抗效果示意图。

图2是本发明中番茄苗移栽入盆15天后CK1和CK2盆裁效果示意图。

图3是本发明中番茄苗移栽入盆15天后菌株②-16’处理与对照CK2盆栽效果示意图。

图4是本发明中含有②-16’菌剂的菇渣育苗基质在盆栽上对番茄青枯病生防效果的试验结果图。

具体实施方式

通过借助以下实施例将更详细说明本发明。以下实施例仅是说明性的，本发明并不受这些实施例的限制。

实施例1：荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’菌株的获得

本发明提供了一种利用病原菌拮抗微生物防治番茄青枯病的菌株，具体是荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’。2008年实验者从金华、台州及丽水等不同地区采集连作蔬菜地的土壤样品，利用细菌培养基采用稀释分离法从中定向分离出各类细菌等共300多株，并进行菌株纯化，进而对菌株通过斜面和摇瓶在28-30℃培养条件下培养和在多种育苗基质接种效果测定，从中筛选出拮抗番茄青枯病菌的菌株②-16’。

1培养基

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15-20g，H₂O 1000ml，PH 7.0-7.2。121.3℃灭菌20分钟。

2试验步骤

2.1培养基的制备

配制如1所述的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，制备细菌斜面培养基。

2.2土壤稀释液的制备

(1).称取10g土壤，加入100ml带有玻璃珠的无菌水500ml三角瓶中，振荡15分钟，即10^-1；

(2).吸取土悬液10ml，加入90ml无菌水500ml三角瓶中，即10^-2；

(3).从(2)中吸取10ml，加入90ml无菌水500ml三角瓶中，即10^-3；

(4).从(3)中吸取5ml，加入45ml无菌水250ml三角瓶中，即10^-4；

(5).从(4)中吸取5ml，加入45ml无菌水250ml三角瓶中，即10^-5；

(6).从(5)中吸取5ml，加入45ml无菌水250ml三角瓶中，即10^-6。

2.3细菌分离

(7).从(3)(4)(5)中分别吸取0.1ml，加入到牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板中进行涂布培养(28-30℃培养2-3天)，各设置3个重复；

(8).选择20-200菌落数的培养皿进行挑取菌落进行斜面培养(28-30℃培养2-3天)；

2.4多个土样

(9).共21个土样，每个土样重复上述2.1～2.3步骤。

2.5结果

按上述方法分离得到细菌300多株。

实施例2：分离得到的细菌对番茄青枯病茄青枯拉尔氏菌的平板拮抗试验

1.培养基

1.1固体培养基

青枯病菌培养基配制：MgSO₄ 7H₂O 0.3g，K₂HPO₄ 2.0g，Yeast extract(酵母浸膏)4.0g，Casein hydrolysate(洛蛋白水解物)8.0g，Sucrose(蔗糖)10.0g，Agar(琼脂)18g，Distilled water(蒸馏水)1000ml。

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制：同实施例1中1。

1.2液体培养基

细菌液体摇瓶培养基：牛肉膏蛋白胨培养基不加琼脂即可。

番茄青枯病菌液体摇瓶培养基：青枯病菌培养基不加琼脂即可。

2、试验步骤

2.1培养基制备

配制青枯病菌培养基(固体、液体)，制备病原菌茄青枯拉尔氏菌斜面；配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基(固体、液体)，制备细菌斜面。

2.2平板拮抗试验

2.2.1菌种活化

番茄青枯病菌和细菌进行菌种活化：番茄青枯病菌和分离细菌分别转接至青枯病菌培养基斜面和牛肉膏蛋白胨琼脂培养基斜面，28-30℃，培养16-28小时，备用。

2.2.2制备青枯病菌平板

活化青枯病菌接入液体培养基中进行摇瓶培养，28-30℃，200转/分。隔天以青枯病菌培养基倒平板，等培养基凝固后每个平板中加入0.1ml(浓度为10⁹～10¹⁰个/ml)青枯病菌发酵液(发酵约40小时)，涂布，28-30℃培养过夜，备用。

2.2.3准备细菌液体发酵液

在青枯病菌液体摇瓶培养第二天，活化分离细菌接入液体培养基中进行摇瓶培养，28-30℃，200转/分，隔天备用(发酵约40小时)。

2.2.4平板拮抗试验

用灭菌滤纸片(Φ9mm)蘸取分离细菌发酵液放入青枯病菌平板，每个平板放5株不同拮抗细菌，3个重复。24h左右观察实验结果，主要考察抑菌圈有无及大小。

3、结果

通过平板拮抗试验得到拮抗效果较好的细菌27株，菌株②-16’就是其中一株。参见图1。图1实验为先在平板上涂0.1ml青枯拉尔氏菌发酵液，然后用滤纸片蘸取菌株②-16’发酵液放在平板上，同时培养而得。

由图1可以看出抑菌圈明显，说明菌株②-16’生长速度快，扩散能力强，对茄青枯拉尔氏菌具明显地拮抗作用。

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’(以下简称为②-16’菌株)，该菌于2008年8月，用上述方法从浙江杭州分离而得。经中国科学院微生物研究所依据细菌分类学实验结果，最后分析确定，该细菌为荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)。该新菌株于2009年10月09日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC NO.3330。

②-16’菌株具有下述性质：理化实验结果(BIOLOG GN2)：细胞形态杆状，革兰氏染色阴性，氧化酶、接触酶阳性，该菌能同化α-D-葡萄糖、N-乙酰葡萄糖胺、Tween40、Tween80、D-阿糖醇、D-果糖、D-半乳糖、D-甘露糖、丙酮酸甲酯、D-甘露醇、乙酸、顺-阿康酸、柠檬酸、D-半乳糖酸内酯、D-葡糖酸、b-甲基葡糖苷、b-羟基丁酸、α-氧代戊二酸、D，L-乳糖、丙二酸、丙酸、奎尼酸、D-己糖酸、丁二酸、溴代丁二酸、D-丙二酸、L-丙二酸、L-丙氨酰甘氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酰谷氨酸、L-组氨酸、羟基脯氨酸、L-亮氨酸、L-脯氨酸、L-焦谷氨酸、L-丝氨酸、D，L-肉碱、g-氨基丁酸、尿刊酸、肌苷、尿苷、腐胺、2-氨基乙醇、甘油。不能同化α-环糊精、糊精、糖原、N-乙酰半乳糖胺、核糖醇、L-阿拉伯糖、D-纤维二糖、i-赤藓糖、L-果糖、龙胆二糖、m-肌醇、α-D-乳糖、Lactulose、麦芽糖、D-蜜二糖、甲基葡糖苷、D-阿洛酮糖、D-棉籽糖、L-鼠李糖、D-山梨醇、蔗糖、D-海藻糖、松二糖、木糖醇、丁二酸一甲酯、甲酸、D-半乳糖醛酸、D-葡糖糖醛酸、α-羟基丁酸、g-羟基丁酸、p-苯乙醇酸、衣康酸、α-氧代丁酸、α-氧代戊酸、葵二酸、琥珀酰胺酸、葡糖醛酰胺、L-丙胺酰胺、甘氨酰天冬氨酸、L-苯丙氨酸、D-丝氨酸、胸甘、苯基乙胺、2，3-丁二醇、D，L-甘油磷酸盐、D-葡糖-1-磷酸、D-葡糖-6-磷酸。L-鸟氨酸、L-苏氨酸结果不定。

菌株②-16’的16S rRNA基因序列测定结果为：

ACCGTCCTCCCGAAGGTTAGACTAGCTACTTCTGGTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGG

GCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGACATTCTGATTCGCGATTACTAGCG

ATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTATGGGA

TTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCAACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCC

AGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCA

GTCTCCTTAGAGTGCCCACCATAACGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTAC

GGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAA

TGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCATTGGATGTCAAGGCCTGGTAAGGT

TCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTC

ATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTAATGCGTTAGCTGCGC

CACTAAGAGCTCAAGGCTCCCAACGGCTAGTTGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGG

GTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGTCCAGGTGGT

CGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCA

CCACCCTCTACCATACTCTAGCTCGCCAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGG

ATTTCACATCCAACTTAACGAACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACG

CTTGCACCCTCTGTATTACCGCGGCTGCTGGCACAGAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTCGGT

AACGTCAAAATTGCAGAGTATTAATCTACAACCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAAT

CCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAATAT

TCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCAT

CCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTCGCCTTGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATC

CGACCTAGGCTCATCTGATAGCGCAAGGCCCGAAGGTCCCCTGCTTTCTCCCGTAGGACGT

ATGCGGTATTAGCGTTCCTTTCGAAACGTTGTCCCCCACTACCAGGCAGATTCCTAGGCATT

ACTCACCCGTCCGCCGCTGAATCCGGGAGCAAGCTCCCTTCATCCGCTCGACT

将此16S rRNA基因序列进行Blast结果分析，得到与荧光假单胞菌模式菌株相似度达99％，根据16S rRNA基因序列测定结果来看，该菌株可以归为荧光假单胞菌。

实施例3：菌株②-16’的拮抗菌剂的制备

本发明所述的具有拮抗番茄青枯病的微生物菌剂是由荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)②-16’菌株经培养、繁殖而成。

具体操作过程如下：荧光假单胞菌②-16’以牛肉膏培养基为基础加入少量无机盐如钙、镁、磷等进行液体摇瓶发酵，25～35℃培养，转速120～220rpm。以此为菌种接种液体发酵罐制作液体母种，液体发酵罐原料为麸皮、菜饼、和豆饼粉(比例1％～5％∶0～3％∶0～3％∶0～3％)及少量无机盐等，加水量为99～86％，高压灭菌后，待发酵罐液体温度冷却至35℃以下时，再按1.0～10％的接种量以无菌操作方式接种于液体发酵罐的培养基中，液体发酵罐始终保持0.01MPa以上的正压，25-35℃通气培养24-48小时，发酵菌数达1亿cfu/ml以上即可，无菌包装成菌剂(袋装或瓶装)。

由荧光假单胞菌②-16’制成的菌剂中的菌数达1亿cfu/ml时，将菌剂应用于育苗基质中即可以达到有效的防治番茄青枯病的效果，此1亿cfu/ml是作为发酵菌剂中菌数的最低临界值，此数值以上均可以达到防治番茄青枯病的效果，但是因为在具体试验过程中菌剂中的发酵菌数不可能无限制的增加，所以在具体应用过程中发酵菌数是存在上限的，下限即发酵菌数为1亿cfu/ml。

实施例4：拮抗番茄青枯病育苗基质的配制

首先进行菇渣的无害化处理：运用堆肥原理将菇渣加入一定的氮源，调整碳氮比，按一定比例加水调整至含水率55～65％，加入适量堆肥用发酵菌剂，做堆，堆高80～120cm，长度任意，经过55～65℃的高温过程7～10天，在其间经过3-5次的翻堆混匀，使物料中经过生物发酵高温分解无害化过程，使物料中潜在的病原杂菌、有害生物及有毒物质杀灭或消除，达到均一稳定的效果。

拮抗番茄青枯病育苗基质的配制：以堆置发酵腐熟的菇渣为主要原料替代南方省份原料稀缺的草炭资源，将配制的基质原料按以下比例进行混合均匀，配方为：腐熟的香菇渣或金针菇渣∶草炭∶蛭石∶珍珠岩＝10～1∶1～5∶0.5～3∶0.5～1，各种基质原料以体积份计，再添加占基质总重量比0～2％的商品有机肥，然后用拮抗发酵菌剂②-16’和自来水调节基质的含水率至60％～70％，使基质中含拮抗菌数达0.1亿cfu/g以上即可包装。基质中含拮抗菌数达0.1亿cfu/g以上的数值范围下限为0.1亿cfu/g，上限也是因具体试验过程而存在的，解释同上。

配制后的育苗基质的基本理化性质见表1：

表1以菇渣为主要原料配制的基质的基本理化性质

容重g/cm3	总孔隙度％	通气孔隙％	持水孔隙％	pH	电导率ms/cm	有机碳％	全氮％	速效氮mg/kg	速效磷mg/kg	速效钾mg/kg
											0.15-0.25	65-75	12-18	50-65	6.2-7.2	0.35-20	20-35	0.25-0.35	240-300	300-480	1100-1800

表2香菇渣基质栽培的番茄幼苗的考察结果

处理	株高cm	根长cm	茎粗cm	鲜重g	成苗率％	长势	草炭替代率％
								CK	93	2.4	0.14	2.4	86	较好	0
香菇渣配方	11.1	2.6	0.142	2.5	88	好	66.7

表3白菇渣基质栽培蔬菜番茄幼苗考察

处理	株高cm	根长cm	茎粗cm	鲜重g	成苗率％	长势	草炭替代率％
								CK	12.2	4.4	0.165	3.88	90	差	0
白菇渣配方	14.5	3.9	0.191	5.08	90	好	33.3

从上述表2和表3的内容看出，按所述基质原料及配方配置的育苗基质进行番茄育苗试验观察显示，配制的育苗基质优于常规配方的育苗基质。

实施例5：含有②-16’菌剂的拮抗番茄青枯病的菇渣育苗基质在盆栽上对番茄青枯病生防效果的试验

具体实验步骤如下：

1.育苗

拮抗菌育苗基质为：腐熟的香菇渣或金针菇渣∶草炭∶蛭石∶珍珠岩＝10～1∶∶1～5∶0.5～3∶0.5～1，各种基质原料以体积份计，再添加占基质总重量比0～2％的商品有机肥，然后用拮抗发酵菌剂②-16”和自来水调节基质含水率至60％～70％，使基质中含拮抗菌数达0.1亿cfu/g以上，备用。

常规对照基质为：腐熟的香菇渣或金针菇渣∶草炭∶蛭石∶珍珠岩＝10～1∶1～5∶0.5～3∶0.5～1，各种基质原料以体积份计，再添加占基质总重量比0～2％的商品有机肥，用自来水调节基质含水率至60％～70％，备用。

2播种

在育苗穴盘每穴中分别装入四分之三高左右的上述制备的两种基质，用手轻压，然后每穴中均匀撒入50颗蕃茄种子，再铺上一层薄薄的基质，并用塑料袋盖住穴盘，防止水分蒸发，备用。

3出苗

将准备好的播种穴盘放入人工气候箱培养，温度25℃，打开所有日光灯，18点以后全部关掉，并保证日夜温差在10℃以上。大约4～5天出苗，出苗后掀掉塑料袋，等两子叶平展，备用。

4、苗移栽穴盘中培养

分别在穴盘每穴中装满按上述制备的两种基质(略压紧)，然后每穴中移入1株上述准备好的两子叶平展苗，两指在根部略压紧，在大棚中培养。穴盘中培养至3～4片真叶(大约3～4周)。

5、青枯病菌雷尔氏菌发酵液准备

青枯雷尔氏菌活化，然后每株接液体摇瓶培养，28～30℃，200转/分钟，培养约40小时，备用。

6、盆栽

采用浙江丽水番茄种植基地青枯病发病严重的地块土壤，每盆(规格280×220)称取4.5公斤的土壤，混合均匀2％有机肥，装入盆中。所有盆中移裁番茄苗都是带基质移栽(尽量减少基质损失)，每盆中移栽5株番茄苗，根据需要补充水分。本试验设2个对照，即CK1和 CK2，处理1，每个处理6盆，每盆5株苗，均匀分布。CK1：移栽时用对照基质苗不加任何菌；CK2：移栽时每株只浇50ml青枯菌雷尔氏菌稀释发酵液(稀释1000倍)拮抗菌基质处理：移栽时用拮抗菌基质育苗移栽时每株根部先浇50ml青枯菌雷尔氏菌稀释发酵液(稀释1000倍)，每天记录每盆发病株数。

7.结果分析

图1和图2照片为番茄苗移栽入盆第15天拍摄的照片，即2009年5月31日拍摄。由图3可以看出CK1列观察结束即2009年6月22日无发病株；CK2从2009年5月21日开始发病，到2009年5月31日发病株数达到24株；带有菌株②-16’接抗菌基质育苗的处理从2009年5月21日开始发病，到2009年5月31日发病株数还只有12株，说明该育苗基质培育处理对番茄青枯病具一定防效，直到观察结束菌株②-16’基质育苗处理病株数仍比对照CK2少。因此建议使用带有菌株②-16’的接抗菌基质育苗进行青枯病防治时，后期补用菌株②-16’制剂，同时结合种植园艺措施效果会更好。

以菇渣为主要原料配制的育苗基质接种拮抗青枯病菌的菌剂②-16’，培育番茄育苗后进行移栽试验，与未接拮抗菌仅接种青枯病菌的对照相比，青枯病发病率降低40％以上。且发病时期推迟10天以上。

本发明的有益效果是：一是利用拮抗番茄青枯病的菌剂应用于育苗基质的生产，利用有机肥发酵场地进行菇渣的堆肥化处理，提高了加工场地设备的利用率，降低了生产成本，然后混配成具有拮抗土传番茄青枯病的番茄育苗基质；二是通过菇渣等农业废弃物的无害化处理，减少了环境的二次污染，同时可以替代不可再生的稀缺资源草炭，有较好的经济、防治污染及防治土传番茄青枯病的效果。因此，本发明既能变废为宝，适用于规模化农业有机废弃物的发酵处理及利用，并能形成具有拮抗土传病的商品育苗基质的产业化开发，提高农业效益。

序列表

<110>浙江省农业科学院

<120>一种荧光假单胞菌菌株、菌剂及其作为防治番茄青枯病的育苗基质的应用

<130>

<160>1

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>1399

<212>DNA

<213>Pseudomonas fluorescens

<40)0>1

accgtcctcc cgaaggttag actagctact tctggtgcaa cccactccca tggtgtgacg 60

ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcgaca ttctgattcg cgattactag 120

cgattccgac ttcacgcagt cgagttgcag actgcgatcc ggactacgat cggttttatg 180

ggattagctc cacctcgcgg cttggcaacc ctttgtaccg accattgtag cacgtgtgta 240

gcccaggccg taagggccat gatgacttga cgtcatcccc accttcctcc ggtttgtcac 300

cggcagtctc cttagagtgc ccaccataac gtgctggtaa ctaaggacaa gggttgcgct 360

cgttacggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacagccat gcagcacctg 420

tctcaatgtt cccgaaggca ccaatccatc tctggaaagt tcattggatg tcaaggcctg 480

gtaaggttct tcgcgttgct tcgaattaaa ccacatgctc caccgcttgt gcgggccccc 540

gtcaattcat ttgagtttta accttgcggc cgtactcccc aggcggtcaa cttaatgcgt 600

tagctgcgcc actaagagct caaggctccc aacggctagt tgacatcgtt tacggcgtgg 660

actaccaggg tatctaatcc tgtttgctcc ecacgctttc gcacctcagt gtcagtatca 720

gtccaggtgg tcgccttcgc cactggtgtt ccttcctata tctacgcatt tcaccgctac 780

acaggaaatt ccaccaccct ctaccatact ctagctcgcc agttttggat gcagttccca 840

ggttgagccc ggggatttca catccaactt aacgaaccac ctacgcgcgc tttacgccca 900

gtaattccga ttaacgcttg caccctctgt attaccgcgg ctgctggcac agagttagcc 960

ggtgcttatt ctgtcggtaa cgtcaaaatt gcagagtatt aatctacaac ccttcctccc 1020

aacttaaagt gctttacaat ccgaagacct tcttcacaca cgcggcatgg ctggatcagg 1080

ctttcgccca ttgtccaata ttccccactg ctgcctcccg taggagtctg gaccgtgtct 1140

cagttccagt gtgactgatc atcctctcag accagttacg gatcgtcgcc ttggtgagcc 1200

attacctcac caactagcta atccgaccta ggctcatctg atagcgcaag gcccgaaggt 1260

cccctgcttt ctcccgtagg acgtatgcgg tattagcgtt cctttcgaaa cgttgtcccc 1320

cactaccagg cagattccta ggcattactc acccgtccgc cgctgaatcc gggagcaagc 1380

tcccttcatc cgctcgact 1399

Claims

1.一种荧光假单胞菌菌株②-16’，其分类命名为荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.3330。

2.一种由权利要求1所述的荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂，其特征在于所述菌剂中荧光假单胞菌菌株②-16’菌数达1亿cfu/ml以上。

3.如权利要求2所述的一种荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂在防治番茄青枯病中的应用。

4.如权利要求2所述的一种荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂在作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用。

5.如权利要求4所述的一种荧光假单胞菌菌株②-16’在作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用，其特征在于所述育苗基质含有菇渣和由荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂。

6.如权利要求4所述的一种荧光假单胞菌菌株②-16’在作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用，其特征在于所述育苗基质的配方为：菇渣∶草炭∶蛭石∶珍珠岩＝10～1∶1～5∶0.5～3∶0.5～1，各种基质原料以体积份计，添加占基质总重量比有0～2％的商品有机肥，由荧光假单胞菌菌株②-16’制成的菌剂和自来水调节基质的含水率至60％～70％，所述育苗基质中含拮抗菌数达0.1亿cfu/g以上。

7.如权利要求6所述的一种荧光假单胞菌菌株②-16’在作为防治番茄青枯病的育苗基质中的应用，其特征在于所述菇渣为金针菇渣、白菇渣或香菇渣的一种或几种。