CN105200000B - 一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法。本发明采用双歧杆菌与枯草芽孢杆菌XWJLSP‑1共生培养，在一定条件下实现了好氧菌与严格厌氧菌的共生培养，且使得双歧杆菌这种培养要求苛刻的益生菌实现了在普通低成本的培养基中培养。
Description
技术领域
本发明涉及微生态制剂生产技术领域，特别是涉及一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法。
背景技术
我国农业部公布了能够用于生产微生态制剂的菌种有枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）、双歧杆菌等。双歧杆菌是人体肠道正常菌群的优势菌株,已经证明具有扶正肠道菌群、抗感染、抑制肿瘤活性、促进乳糖消化等多方面的生态效应和保健功能,因此,双歧杆菌越来越受到人们的重视。但在目前, 双歧杆菌的培养需在厌氧条件下，发酵时要充入二氧化碳或氮气等惰性气体，而且培养基中要加入牛肉膏，鲜牛奶，酵母浸粉等昂贵的氮源，生产成本高。现国内已有的双歧杆菌制品普遍存在生产成本高的问题。
枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)属于对人畜无毒无害的细菌,在自然界分布广泛,于1989年被美国食品与药物管理局(FDA)批准使用，1999年被我国农业部批准使用。枯草芽孢杆菌含有丰富的产酶系统，菌体进入宿主肠道后能分泌多种营养物质和抑菌物质，维持肠道生态平衡，增强宿主免疫力，从而能够被广泛使用。
人体菌群微生态失衡，能引起多种疾病，国内外多采用双歧杆菌，乳酸菌和枯草芽孢杆菌等微生态制剂作为保健品或药品来防治肠胃病，心脑血管疾病，增强免疫力和抗肿瘤等。
现有技术中未见公开一种可行的双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养方法，因此需要一种低成本双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养方法。
发明内容
本发明的目的就是针对上述存在的缺陷而提供一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，实现了好氧菌与严格厌氧菌的共生培养，且使得双歧杆菌这种培养要求苛刻的益生菌实现了在普通低成本的培养基中培养。
本发明的一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法技术方案为，采用双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养，步骤如下：
①配制培养基：配制液态培养基，调pH，121℃消毒20分钟；
②把枯草芽孢杆菌接入①中配制好的培养基，通气培养，转速为135-140转/分钟；
③培养9h后,转速改为35-40转/分钟，停止通气，继续培养1-1.5h后，接入双歧杆菌共生培养，转速变为25-30转/分钟；
④培养26-28h后停止培养。
所述的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1，已于2012年8 月28 日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNo.6478。
步骤①中，液态培养基为葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%，余量为水。
步骤①中，用碳酸钙调pH 6.8。
步骤②中，培养装液量为2/5-3/5，温度为35-37℃。
步骤③中，培养温度为35℃。
所述的一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，步骤如下：
①配制培养基：配制液态培养基，用碳酸钙调pH 6.8，121℃消毒20分钟；
②把枯草芽孢杆菌接入①中配制好的培养基，在5升发酵罐中通气培养，通气速度为9升/分钟，罐压保持在0.3-0.5mpa,装液量为3/5，温度为35-37℃，转速为135-140转/分钟；
③培养9h后,转速改为35-40转/分钟，停止通气，继续培养1-1.5h后，接入双歧杆菌共生培养，转速变为25-30转/分钟，温度为35-37℃；
④培养26-28h后停止培养。
所述的通气培养，为通入含氧气体。
所述的通气培养，为通入经过过滤除菌的空气。
步骤④结束后加入保护剂制成冷冻干燥粉。
本发明的有益效果为：本发明实现了好氧菌与严格厌氧菌的共生培养，且使得双歧杆菌这种培养要求苛刻的益生菌实现了在普通低成本的培养基中培养。具体如下：
1、 双歧杆菌的培养过程需要严格厌氧条件，必需连续充入氮气或其它惰性气体来维持严格厌氧条件；采用枯草芽孢杆菌与双歧杆菌共生培养的方法，利用枯草芽孢杆菌消耗氧气，创造一个缺氧的微环境，省去了连续充入氮气或惰性气体的环节，确能保持严格的厌氧培养条件。
2、某些简单的培养基例如玉米浆葡萄糖培养基经过枯草芽孢杆菌发酵一段时间后，可适合双歧杆菌要求苛刻的培养条件。
3、减少了双歧杆菌的培养成本。
具体实施方式：
为了更好地理解本发明，下面用具体实例来详细说明本发明的技术方案，但是本发明并不局限于此。
实施例1
双歧杆菌（江苏紫石微康生物科技有限公司的两歧双歧杆菌）与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1的共生培养
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1，已于2012 年8 月28 日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCC No.6478。
①配制培养基：配制葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%的液态培养基200ml，用碳酸钙调pH 6.8。121℃消毒20分钟。
②把枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1接入①中配制好的培养基，摇瓶培养，装液量为2/5，转速为136转/分钟，温度为35℃。
③培养9h后，再改变转速为36转/分继续培养1h,接入双歧杆菌共生培养，培养温度和装液量均与②同，转速变为26转/分钟，温度为35℃。
④培养26h后停止培养检测双歧杆菌的浓度，得到双歧杆菌浓度为108/ml枯草芽孢杆菌浓度为109/ml的共生培养液189ml。
实施例2
双歧杆菌（江苏紫石微康生物科技有限公司的两歧双歧杆菌）与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1的共生培养
1、配制培养基：配制葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%的液态培养基3升，用碳酸钙调pH 6.8。121℃消毒20分钟。
2、把枯草芽孢杆菌接入1中配制好的培养基，在5升发酵罐中通气培养，通气速度为9升/分钟，罐压保持在0.3-0.5mpa,转速为136转/分钟，温度为35℃。
3、培养9h后, 再改变转速为29转/分，停止通气，继续培养1.5h,接入双歧杆菌共生培养，转速变为29转/分钟，温度35℃。
4、培养27h后停止培养,检测双歧杆菌的浓度，得到双歧杆菌浓度为107/ml枯草芽孢杆菌浓度为109/ml的共生培养液2.76升。
5、加入保护剂制成冷冻干燥粉。
实施例3
双歧杆菌（从市售某酸奶中分离的双歧杆菌）与枯草芽孢杆菌（从本地土壤中分离的枯草芽孢杆菌）的共生培养
①配制培养基：配制葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%的液态培养基200ml，用碳酸钙调pH 6.8。121℃消毒20分钟。
②把枯草芽孢杆菌接入①中配制好的培养基，摇瓶培养，装液量为2/5，转速为136转/分钟，温度为35℃。
③培养9h后，再改变转速为36转/分继续培养1h,接入双歧杆菌共生培养，培养温度和装液量均与②同，转速变为26转/分钟，温度为35℃。
④培养26h后停止培养检测双歧杆菌的浓度，得到长歧杆菌浓度为106/ml枯草芽孢杆菌浓度为109/ml的共生培养液187ml。
实施例4
双歧杆菌（购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的CICC 21711）与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1的共生培养
1、配制培养基：配制葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%的液态培养基3升，用碳酸钙调pH 6.8。121℃消毒20分钟。
2、把枯草芽孢杆菌接入1中配制好的培养基，在5升发酵罐中通气培养，通气速度为9升/分钟，罐压保持在0.3-0.5mpa,转速为136转/分钟，温度为36℃。
3、培养9h后, 再改变转速为29转/分，停止通气，继续培养1.5h,接入双歧杆菌（购自中国工业微生物菌种保藏管理中心的CICC 21711）共生培养，转速变为29转/分钟，温度36℃。
4、培养27h后停止培养,检测双歧杆菌的浓度，得到双歧杆菌浓度为106/ml枯草芽孢杆菌浓度为109/ml的共生培养液2.65升。
5、加入保护剂制成冷冻干燥粉。
Claims (4)
1.一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，其特征在于，步骤如下：
①配制培养基：配制液态培养基，用碳酸钙调pH 6.8，121℃消毒20分钟；液态培养基为葡萄糖浓度5%，玉米浆干物质浓度3%，余量为水；
②把枯草芽孢杆菌接入①中配制好的培养基，在5升发酵罐中通气培养，通气速度为9升/分钟，罐压保持在0.3-0.5mpa， 装液量为3/5，温度为35-37℃，转速为135-140转/分钟；
③培养9h后， 转速改为35-40转/分钟，停止通气，继续培养1-1.5h后，接入双歧杆菌共生培养，转速变为25-30转/分钟，温度为35-37℃；
④培养26-28h后停止培养；
所述的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis XWJLSP-1，已于2012 年8月28 日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNo.6478。
2.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，其特征在于，步骤②中，所述的通气培养，为通入含氧气体。
3.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，其特征在于，步骤②中，所述的通气培养，为通入经过过滤除菌的空气。
4.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌与枯草芽孢杆菌共生培养的方法，其特征在于，步骤④结束后加入保护剂制成冷冻干燥粉。
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