CN105767506A - 水产专用发酵剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水产专用发酵剂及其制备方法和应用，属于水产用发酵剂的制备及应用领域。本发明水产专用发酵剂由地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母经过混合液态高密度培养制成，该发酵剂的酶系丰富，活菌数高，且制备方法简单，生产成本低。应用本发明水产专用发酵剂发酵饼粕的操作简单，且发酵效果好，饼粕发酵后的营养价值有明显改善，有毒物质的去除率高。将本发明发酵剂发酵的饼粕用于水产品养殖，不仅能够提高大水面养殖的产量、降低生产成本，而且可以有效改善水质，维护优良水环境，增产效果和综合效益明显。

Description

水产专用发酵剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及发酵剂，尤其涉及水产专用发酵剂及其制备方法，本发明还涉及所述水产专用发酵剂在发酵各种饼粕中的应用，属于水产用发酵剂的制备及应用领域。

背景技术

大水面养殖是指利用水库、湖泊、江河等养殖水产品的一种方式，包括湖泊、水库、河沟养殖。由于大水面水源好、病害少、单亩租金相对较低，鱼单斤成本一般比池塘低，且肉质较好，耐运输，养殖效益十分可观。但是大水面养殖投入大，而饲料成本又是所有成本中的最大因素。为了节约成本，目前大多采用传统的直接投喂价格低廉的饼粕类作为饲料喂养水产动物。

饼粕是从油料籽实提取油脂后的主要副产品，包括豆粕、棉粕、菜粕、芝麻粕、花生粕、茶籽粕、向日葵粕等。饼粕类原料的蛋白质含量都在35％以上，而且赖氨酸、苏氨酸和组氨酸等含量也很高，作为饲料在营养价值和价格方面具有明显优势。但饼粕中都含有抗营养因子和有毒物质，如豆粕和花生粕中的胰蛋白酶抑制剂、棉粕中的棉酚、菜粕中的硫代葡萄甙、茶籽粕中的茶皂素等，均对水产动物有很大的毒害作用，采用传统的饲喂方式，不进行脱毒处理直接使用，对养殖动物的健康危害比较大。同时，饼粕虽然蛋白含量高，但属于粗蛋白，分子量大，不易被吸收，消化率低，不被消化的蛋白进入水体容易造成氮污染，导致亚硝酸盐、铵盐等有害物质的升高，致使鱼病的爆发，进而增加了改水制剂和渔药的投入成本，反而得不偿失。因此，饼粕类作为饲料投喂之前，必须经过脱毒和蛋白改造的预处理，才能达到良好的养殖效果。

饼粕的预处理主要有膨化、水解和酶解等物理化学方法和微生物发酵的生物处理方法。饼粕的微生物发酵技术，是在饼粕中加入微生物(霉菌、芽孢等)进行发酵，加入的微生物在发酵培养基上生长并分泌酶系，将有毒物质分解利用。与传统的物理、化学处理方法比较，微生物发酵技术处理条件温和，能耗少，物料损失小，工艺简单，对设备要求低，成本低，而且不需要添加任何试剂，无化学残留，发酵产物不需要进行后续处理即可直接利用，是更为理想和有发展潜力的饼粕处理方法。

现有微生物发酵剂多为单一菌剂，酶系简单，发酵效果不理想；也有两种或几种菌的混合菌剂，但多为各种菌剂单独分别发酵后再混合，导致需要多套复杂工艺同时进行，所需设备较多，生产成本较高。因此，开发一种多种菌联用，利用一套工艺即可发酵完成的混合菌剂，对于改善各种饼粕类的发酵效果，降低大水面养殖的生产成本及改善水质等具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种水产专用发酵剂，包括地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母；该发酵剂的酶系丰富，对各种饼粕的发酵效果好，能够提高大水面养殖的产量、降低生产成本，且对养殖水体的水质也有明显改善作用；

本发明所要解决的另一个技术问题是提供所述水产专用发酵剂在发酵饼粕中的应用。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明首先公开了一种水产专用发酵剂，包括：地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母；其中，每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌40-60亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌20-30亿CFU/ml、热带假丝酵母20-30亿CFU/ml；优选的，每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌50亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌30亿CFU/ml、热带假丝酵母20亿CFU/ml。

本发明所述地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)的菌株保藏编号为ACCC01198；所述嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)的菌株保藏编号为ACCC11073；所述热带假丝酵母(Candidatropicalis)的菌株保藏编号为ACCC20004。

本发明进一步公开了一种制备所述水产专用发酵剂的方法，包括以下步骤：(1)分别制备地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液；(2)将地衣芽孢杆菌种子液接种到发酵罐中，发酵；(3)发酵结束后，再向发酵罐中分别接入嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液，继续发酵，得到发酵液；(4)将发酵液离心，收集菌体，喷雾干燥，即得。

其中，按照体积比计，步骤(2)所述地衣芽孢杆菌种子液的接种量为1-5％(即地衣芽孢杆菌种子液的体积和接种后培养液体积的比例为1-5％)，优选为1％；所述发酵的条件包括：转速为200rpm，罐压为0.04-0.06MPa，发酵温度为28-37℃，发酵时间为20-36小时；优选的，发酵温度为32℃，发酵时间为24h；所述发酵用的液体发酵培养基包括：按照g/ml计，2％糖蜜、1％氨基酸粉、2％豆饼粉、0.05％磷酸二氢钾、0.03％磷酸氢二钾、0.05％七水硫酸镁、1％NaCl，余量为水；所述液体发酵培养基的起始pH为6.5-7.5。按照体积比计，步骤(3)所述嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液的接种量分别为1-5％(即嗜酸乳杆菌种子液或热带假丝酵母种子液的体积和接种后培养液体积的比例分别为1-5％)，优选为1％；所述发酵的条件包括：转速为100rpm，罐压为0.04-0.06MPa，28-37℃发酵20-36小时；优选的，32℃发酵24h。

本发明制备所述水产专用发酵剂的方法中，步骤(1)所述地衣芽孢杆菌种子液的活菌数为40-60亿CFU/ml，优选为50亿CFU/ml；所述嗜酸乳杆菌种子液的活菌数为20-40亿CFU/ml，优选为30亿CFU/ml；所述热带假丝酵母种子液的活菌数为20-30亿CFU/ml，优选为25亿CFU/ml；具体的，步骤(1)所述地衣芽孢杆菌种子液的制备包括：将地衣芽孢杆菌经PDA斜面、LB液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得；所述嗜酸乳杆菌种子液的制备包括：将嗜酸乳杆菌经YPD斜面、MRS液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得；所述热带假丝酵母种子液的制备包括：将热带假丝酵母经PDA斜面、YPD液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得。

本发明还公开了所述水产专用发酵剂在发酵饼粕中的应用，包括以下步骤：(1)向饼粕中添加磷酸二氢钾和葡萄糖，得到混合原料；(2)向混合原料中加入水，然后接入所述水产专用发酵剂，混合均匀，发酵，即得。

其中，步骤(1)所述磷酸二氢钾、葡萄糖的添加量分别为饼粕质量的0.1-3‰，优选为1‰；步骤(2)所述水的加入量为饼粕质量的1-5倍，优选为3倍；所述水产专用发酵剂的接入量为饼粕质量的1-10‰，优选为5‰；所述发酵的温度为20℃-40℃，发酵的时间为20-40h，发酵时间达到二分之一时翻料一次；优选的，所述发酵的温度为25℃-35℃，发酵的时间为32h；其中发酵16h时翻料一次。所述饼粕包括：豆粕、菜粕、棉粕、芝麻粕、花生粕、茶籽粕、向日葵粕中的任意一种或多种按照任意比例组成的混合物。

本发明水产专用发酵剂选用三种肠道益生菌联用，包括地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母菌，酶系丰富，对物料的适应能力和降解有毒物质的能力强，对各种饼粕的改性效果好。

采用本发明水产专用发酵剂处理豆粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高3.1％，20倍、23倍、5倍，胰蛋白酶抑制剂去除率达到98.8％，益生菌增殖达11.4亿CFU/g，增殖100倍左右。采用本发明水产专用发酵剂处理棉粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高4.5％、15倍、4.3倍、6.7倍，游离棉酚去除率达到81.5％，益生菌增殖达10.8亿CFU/g。采用本发明水产专用发酵剂处理菜粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高7.0％、18倍、5.3倍、4.5倍，硫代葡萄甙去除率达到87％，益生菌增殖达11.3亿CFU/g，增殖100倍左右。

投食本发明水产专用发酵剂发酵的饼粕后，可以有效改善鱼类肠道微生态，提高免疫力；而且有益菌进入水体后还可以有效调节水质，维护优良水环境，例如使用本发明发酵剂发酵饼粕的养殖水体，亚硝酸盐控制在0.08mg/L以内，氨氮控制在0.012mg/L以下，蓝藻控制在40％以内，长年无蓝藻水华出现，水质明显改善。另外，利用本发明水产专用发酵剂发酵的饼粕泼洒水库、湖泊喂鱼，产量相较于对照组可提高10％左右；同时，可减少改水制剂和鱼病防治的投入成本，经济效益十分可观。

本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明选择地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母菌三种肠道益生菌联用，经混合液态高密度培养工艺制备水产专用发酵剂，该发酵剂的酶系丰富，活菌数高，且其制备流程少，所需设备少，有效的降低了生产成本。

(2)本发明水产专用发酵剂对各种饼粕的发酵效果好，发酵后饼粕的营养成分明显改善，且发酵操作简单、成本低。每吨饼粕发酵总成本在120元左右，增加的微生态制剂价值1000元以上。

(3)施用本发明水产专用发酵剂发酵饼粕的养殖水体，水质明显改善，水体污染得到有效控制。

(4)本发明水产专用发酵剂发酵的饼粕可以有效改善鱼类肠道微生态，提高免疫力，提高鱼产量，同时能够减少改水制剂和鱼病防治的投入成本。

本发明所涉及到的术语定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。

“接种量”是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例。

“菜粕”，又称为“菜籽粕”，为油菜籽榨油后的副产物。

附图说明

图1为本发明水产专用发酵剂的制备工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。

1、原料

1.1菌种

地衣芽孢杆菌，保藏编号为ACCC01198；嗜酸乳杆菌，保藏编号为ACCC11073；热带假丝酵母，保藏编号为ACCC20004；均购于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心。

1.2饼粕

豆粕、棉粕、菜粕均购自中粮集团。

实施例1水产专用发酵剂的制备

地衣芽孢杆菌经PDA斜面、LB液体摇瓶和种子罐扩大培养成种子液；嗜酸乳杆菌经YPD斜面、MRS液体摇瓶和种子罐扩大培养成种子液；热带假丝酵母菌经PDA斜面、YPD液体摇瓶和种子罐扩大培养成种子液。具体的：

地衣芽孢杆菌：斜面为PDA斜面，称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸半个小时，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml(视试管大小而定)，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。摇瓶培养基为LB培养基，培养基配方为胰蛋白胨(Tryptone)10g/L，酵母提取物(Yeastextract)5g/L，氯化钠(NaCl)5g/L，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右，冷却后贮存备用。种子液培养基配方为：氨基酸粉：1g/L，酵母提取物(Yeastextract)2g/L，MgSO₄0.05g/L，MnSO₄0.1g/L，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右，冷却后接入种子液，37℃左右发酵48小时生物量达50亿CFU/ml左右。

嗜酸乳杆菌：斜面为YPD斜面，按照g/ml计，由1％YeastExtract(酵母膏)，2％Peptone(蛋白胨)，2％Dextrose(glucose)(葡萄糖)，加入2％琼脂粉溶解后，分装试管，每试管约5-10ml(视试管大小而定)，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。摇瓶培养基为MRS培养基，配方：按g/L计，蛋白胨10.0，肉膏10.0，酵母浸粉5.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二铵2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.58，硫酸锰0.25，半胱氨酸0.5，吐温801.0，pH值6.2-6.4，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右，冷却后贮存备用。种子液培养基配方为：按g/ml计，蔗糖5‰，柠檬酸三铵2‰，酵母膏5‰，乙酸钠5‰，磷酸氢二钾2‰，硫酸镁0.2‰，硫酸锰0.05‰，碳酸钙2％，37℃左右发酵48小时生物量达30亿CFU/ml左右。

热带假丝酵母菌：斜面为PDA斜面，同地衣芽胞杆菌PDA斜面，液体摇瓶培养基和种子液培养基均为YPD培养基，由1％(g/ml)YeastExtract(酵母膏)，2％(g/ml)Peptone(蛋白胨)，2％(g/ml)Dextrose(glucose)(葡萄糖)，15磅蒸气(121℃)灭菌30分钟左右，冷却后贮存备用。种子液28℃发酵48小时生物量达25亿CFU/ml左右。

按1％接种量(体积比)将地衣芽孢杆菌种子液接种到发酵罐中，液体发酵培养基成分为：2％糖蜜(g/ml)、1％(g/ml)氨基酸粉(购自湖北兴银河原料药公司，酸粉级别：BR，复合氨基酸粉总氮氨基酸类：≥11.5％，复合氨基酸粉氨基酸态氮：≥8.5％，复合氨基酸粉氨基酸：≥80.0％，pH：4.5～6.5，水分：≤7.5％，炽烧残渣：氨基酸类≤2.0％)、2％(g/ml)豆饼粉(豆饼粉为购自中粮集团43蛋白豆粕粉碎至40目制得)、0.05％(g/ml)磷酸二氢钾、0.03％(g/ml)磷酸氢二钾、0.05％(g/ml)七水硫酸镁、1％(g/ml)NaCl，余量为水。起始pH6.5-7.5，转速200rpm，罐压0.04-0.06MPa，32℃发酵24h。24h后，按各1％的接种量(体积比)，接入嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母菌种子液，控制转速100rpm，罐压0.04-0.06MPa，32℃继续发酵24h。结束后，所得发酵液中含有地衣芽孢杆菌50亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌30亿CFU/ml、热带假丝酵母20亿CFU/ml，离心搜集菌体。再经常规喷雾干燥、检测、包装后制得成品制剂。

实施例2水产专用发酵剂的制备

地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、热带假丝酵母菌种子液的制备同实施例1；其中，所述地衣芽孢杆菌种子液的活菌数为60亿CFU/ml；所述嗜酸乳杆菌种子液的活菌数为40亿CFU/ml；所述热带假丝酵母种子液的活菌数为30亿CFU/ml。按5％接种量(体积比)将地衣芽孢杆菌种子液接种到发酵罐中，液体发酵培养基同实施例1，转速200rpm，罐压0.04-0.06MPa，37℃发酵36h。36h后，按各5％的接种量(体积比)，接入嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母菌种子液，控制转速100rpm，罐压0.04-0.06MPa，37℃继续发酵36h。结束后，所得发酵液经离心搜集菌体，再经常规喷雾干燥、检测、包装后制得成品制剂。

实施例3水产专用发酵剂的制备

地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液、热带假丝酵母菌种子液的制备同实施例1；其中，所述地衣芽孢杆菌种子液的活菌数为40亿CFU/ml；所述嗜酸乳杆菌种子液的活菌数为20亿CFU/ml；所述热带假丝酵母种子液的活菌数为20亿CFU/ml。按2％接种量(体积比)将地衣芽孢杆菌种子液接种到发酵罐中，液体发酵培养基同实施例1，转速200rpm，罐压0.04-0.06MPa，28℃发酵20h。20h后，按各2％的接种量(体积比)，接入嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母菌种子液，控制转速100rpm，罐压0.04-0.06MPa，28℃继续发酵20h。结束后，所得发酵液经离心搜集菌体，再经常规喷雾干燥、检测、包装后制得成品制剂。

实施例4水产专用发酵剂

每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌40亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌30亿CFU/ml、热带假丝酵母30亿CFU/ml。经喷雾干燥制成固态粉剂。

实施例5水产专用发酵剂

每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌60亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌20亿CFU/ml、热带假丝酵母20亿CFU/ml。经喷雾干燥制成固态粉剂。

实施例6利用发酵剂发酵饼粕

饼粕(豆粕)添加1‰磷酸二氢钾和1‰葡萄糖(即磷酸二氢钾、葡萄糖的添加量分别为饼粕质量的1‰)，按料水比1：3加水(即豆粕质量：水的质量＝1：3)，按豆粕质量5‰的量接入本发明实施例1制备的发酵剂，混合搅拌均匀，25℃-35℃，发酵32h，期间16h时翻料一次，发酵结束后可闻到明显的酒香味和酸香味，即可作为饲料投喂。

如果需要长期保存，可将其压紧压实，确保严格密封，待用时取出即可。

实施例7利用发酵剂发酵饼粕

饼粕(菜粕)添加1‰磷酸二氢钾和1‰葡萄糖(即磷酸二氢钾、葡萄糖的添加量分别为饼粕质量的1‰)，按料水比1：3加水(即菜粕质量：水的质量＝1：3)，按菜粕质量5‰的量接入本发明实施例1制备的发酵剂，混合搅拌均匀，25℃-35℃，发酵32h，期间16h时翻料一次，发酵结束后可闻到明显的酒香味和酸香味，即可作为饲料投喂。

实施例8利用发酵剂发酵饼粕

饼粕(棉粕)添加1‰磷酸二氢钾和1‰葡萄糖(即磷酸二氢钾、葡萄糖的添加量分别为饼粕质量的1‰)，按料水比1：3加水(即棉粕质量：水的质量＝1：3)，按棉粕质量5‰的量接入本发明实施例1制备的发酵剂，混合搅拌均匀，25℃-35℃，发酵32h，期间16h时翻料一次，发酵结束后可闻到明显的酒香味和酸香味，即可作为饲料投喂。

实施例9利用发酵剂发酵饼粕

饼粕(花生粕)添加0.1‰磷酸二氢钾和0.1‰葡萄糖(质量比)，按料水比1：1加水(即花生粕质量：水的质量＝1：1)，按花生粕质量1‰的量接入本发明实施例1制备的发酵剂，混合搅拌均匀，20℃发酵40h，期间20h时翻料一次，发酵结束后即可作为饲料投喂。

实施例10利用发酵剂发酵饼粕

饼粕(茶籽粕)添加3‰磷酸二氢钾和3‰葡萄糖(质量比)，按料水比1：5加水(即茶籽粕质量：水的质量＝1：5)，按茶籽粕质量10‰的量接入本发明实施例1制备的发酵剂，混合搅拌均匀，40℃发酵20h，期间10h时翻料一次，发酵结束后即可作为饲料投喂。

试验例1发酵剂对各类饼粕的改性效果

各类饼粕经本发明发酵剂发酵处理后(本发明实施例6、7、8制备)，各成分对比数据见表1。

表1饼粕处理前后成分对比情况

由表1可以看出，本发明发酵剂采用三种菌联用，酶系丰富，对物料的适应能力和降解有毒物质的能力都很强，对各种饼粕类都具有较好的改性效果。发酵剂处理豆粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高3.1％，20倍、23倍和5倍，胰蛋白酶抑制剂去除率达到98.8％，益生菌增殖达11.4亿CFU/g。发酵剂处理棉粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高4.5％、15倍、4.3倍、6.7倍，游离棉酚去除率达到81.5％，益生菌增殖达10.8亿CFU/g。发酵剂处理菜粕，蛋白、游离氨基酸、小肽、有机酸含量分别提高7.0％、18倍、5.3倍、4.5倍，硫代葡萄甙去除率达到87％，益生菌增殖达11.3亿CFU/g。

试验例2发酵剂在实际养殖池塘中净水效果试验

本试验于2014年7月14日-2014年7月20日在武汉市江夏区多福科技农庄养殖场进行。试验挑选3个水质富营养化较为严重的草鱼养殖池塘A、B和C，这3个池塘NO^- ₂-N浓度都超过了0.2mg/L，池水老化发黑，氨氮超标，有大片蓝藻漂浮。对其中池塘A作投施本发明实施例7发酵菜粕，投施量为500g/亩·米；池塘B作投施市场同类产品菌剂(同类菌剂为市场购买的广州市海贝生物技术有限公司产品：海联科106，其主要成分为：含有具有硝化作用的芽孢杆菌和具有反硝化作用的乳酸菌；其中芽孢杆菌>10CFU/毫升；反硝化菌>1亿CFU/毫升)处理，投菌量为200g/亩·米；池塘C按500g/亩投施未经发酵处理的菜粕。

7月14日投菌后连续监测3个鱼池中的亚硝酸盐含量，结果见表2。

表2富营养化池塘治理前后亚硝酸盐含量变化(mg/L)

由表2可以看出，投放了本发明发酵产物后的池塘A的亚硝酸盐浓度呈明显下降趋势，处理4天后亚硝酸盐由0.279mg/L下降到0.028mg/L，去除率89.9％，并在试验后期池塘亚硝酸盐浓度未有反弹。同期，投施对照菌剂池塘有所下降，但不明显；投施未经发酵处理的菜粕的对照池塘亚硝酸盐浓度没有下降，反而有上升趋势。

富营养化池塘治理前后氨氮含量变化见表3。

表3富营养化池塘治理前后氨氮含量变化(mg/L)

由表3可以看出，投放了本发明发酵产物后的池塘A的氨氮呈明显下降趋势，处理4天后氨氮由0.054mg/L下降到0.018mg/L，去除率66.7％，达到养殖水体要求，并在试验后期池塘氨氮浓度未有反弹。同期，投施对照菌剂池塘有所下降，但不明显；投施未经发酵处理的菜粕的对照池塘氨氮浓度没有下降，反而有上升趋势。

富营养化池塘治理前后蓝藻比例变化见表4。

表4富营养化池塘治理前后蓝藻比例变化(％)

由表4可以看出，投放了本发明发酵产物后的池塘A的蓝藻比例呈明显下降趋势，处理4天后蓝藻比例由74％下降到42％，达到养殖水体要求，并在试验后期池塘蓝藻比例未有反弹。同期，另外两个池塘蓝藻比例没有下降，反而有上升趋势。

试验例3发酵剂在实际水库养殖中的应用效果

本试验于2014年5月22日-2014年11月22日在武汉市黄陂区进行。试验挑选2个水库A、B，2个水库分别为49.3亩和49.7亩，放养相同规格和数量的白鲢、花鲢和草鱼混养，进行对比试验。其中试验水库A投喂本发明发酵剂处理过的菜粕(实施例7制备)，对照水库B投喂未经处理的菜粕。其余所投放化肥、有机肥以及日常管理等基本保持一致。试验结束后，统计各库的收获情况和支出情况，结果见表5、表6。

表5两个水库收获情况

由表5可以看出，试验水库A的产量相较于对照水库B提高了10％左右，收入情况明显优于对照水库B。可见，本发明发酵剂处理菜粕具有良好的脱毒作用，同时转化菜粕中的粗蛋白为优质小肽蛋白和菌体蛋白，提高了饲料转化率，养殖鱼类增重明显优于对照，从而带来可观的经济效益。

表6两个水库支出情况

由表6可以看出，试验水库A日常管理中改水制剂和鱼病防治投入都低于对照水库B。可见，本发明发酵剂处理菜粕增殖了大量益生菌，一部分进入水体，有效调节水质，促进了花白鲢增重，同时减少了改水制剂投入；一部分进入鱼体肠道可有效调节肠道微生态平衡，抑制有害微生物，增加了鱼体免疫力，减少了鱼病的发生。

Claims (10)

1.一种水产专用发酵剂，其特征在于，包括：地衣芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌和热带假丝酵母。

2.按照权利要求1所述的水产专用发酵剂，其特征在于：每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌40-60亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌20-30亿CFU/ml、热带假丝酵母20-30亿CFU/ml；

优选的，每100亿CFU/ml活菌中，含有地衣芽孢杆菌50亿CFU/ml、嗜酸乳杆菌30亿CFU/ml、热带假丝酵母20亿CFU/ml。

3.按照权利要求1或2所述的水产专用发酵剂，其特征在于：所述地衣芽孢杆菌的菌株保藏编号为ACCC01198；所述嗜酸乳杆菌的菌株保藏编号为ACCC11073；所述热带假丝酵母的菌株保藏编号为ACCC20004。

4.一种制备权利要求1或2所述水产专用发酵剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)分别制备地衣芽孢杆菌种子液、嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液；(2)将地衣芽孢杆菌种子液接种到发酵罐中，发酵；(3)发酵结束后，向发酵罐中分别接入嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液，继续发酵，得到发酵液；(4)将发酵液离心，收集菌体，喷雾干燥，即得。

5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：按照体积比计，步骤(2)所述地衣芽孢杆菌种子液的接种量为1-5％，优选为1％；所述发酵的条件包括：转速为200rpm，罐压为0.04-0.06MPa，发酵温度为28-37℃，发酵时间为20-36小时；优选的，发酵温度为32℃，发酵时间为24h；

按照体积比计，步骤(3)所述嗜酸乳杆菌种子液和热带假丝酵母种子液的接种量分别为1-5％，优选为1％；所述发酵的条件包括：转速为100rpm，罐压为0.04-0.06MPa，28-37℃发酵20-36小时；优选的，32℃发酵24h。

6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述发酵用的液体发酵培养基包括：按照g/ml计，2％糖蜜、1％氨基酸粉、2％豆饼粉、0.05％磷酸二氢钾、0.03％磷酸氢二钾、0.05％七水硫酸镁、1％氯化钠，余量为水；

其中，所述液体发酵培养基的起始pH为6.5-7.5。

7.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述地衣芽孢杆菌种子液的活菌数为40-60亿CFU/ml，优选为50亿CFU/ml；

所述嗜酸乳杆菌种子液的活菌数为20-40亿CFU/ml，优选为30亿CFU/ml；

所述热带假丝酵母种子液的活菌数为20-30亿CFU/ml，优选为25亿CFU/ml；

更优选的，所述地衣芽孢杆菌种子液的制备包括：将地衣芽孢杆菌经PDA斜面、LB液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得；

所述嗜酸乳杆菌种子液的制备包括：将嗜酸乳杆菌经YPD斜面、MRS液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得；

所述热带假丝酵母种子液的制备包括：将热带假丝酵母经PDA斜面、YPD液体摇瓶和种子罐扩大培养，即得。

8.权利要求1或2所述的水产专用发酵剂在发酵饼粕中的应用。

9.按照权利要求8所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)向饼粕中添加磷酸二氢钾和葡萄糖，得到混合原料；(2)向混合原料中加入水，然后接入所述水产专用发酵剂，混合均匀，发酵，即得。

10.按照权利要求9所述的应用，其特征在于：步骤(1)所述磷酸二氢钾、葡萄糖的添加量分别为饼粕质量的0.1-3‰，优选为1‰；

步骤(2)所述水的加入量为饼粕质量的1-5倍，优选为3倍；所述水产专用发酵剂的接入量为饼粕质量的1-10‰，优选为5‰；

所述发酵的温度为20-40℃，发酵的时间为20-40h；优选的，所述发酵的温度为25-35℃，发酵的时间为32h；其中发酵16h时翻料一次；

所述饼粕包括：豆粕、菜粕、棉粕、芝麻粕、花生粕、茶籽粕、向日葵粕中的任意一种或多种按照任意比例组成的混合物。