CN101386827A - 多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法 - Google Patents

Abstract

一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，是将好氧菌枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母、黑曲霉、米曲霉按不同的培养基在摇床上培养出原种液；同时将嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、粪肠球菌利用克氏瓶进行厌氧培养，并用克氏瓶在光照下培养光合细菌原菌夜；将上述原菌夜按4％的接种量接入种子罐进行厌氧培养发酵，发酵时间48～60小时；将培养好的种子液按10％接入生产罐，进行厌氧培养发酵，发酵时间60～72，当pH值降至4.0时即达到发酵终点。优点是：所生产的菌剂镜检活菌数大于50亿/毫升，安全、无毒，不仅能提高畜禽的抗病力，并能促进畜禽的快速生长，降低了料肉比，提高了肉蛋奶的品质。

Description

多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法

技术领域

本发明属于微生物液体深层发酵技术，特别是采用多菌种混合液体发酵生产畜禽用菌剂的方法。

背景技术

多菌种混合发酵始于古老的酿酒技术，但随着现代工业微生物的发展，深层液体发酵在酿酒、制药、保健等领域逐渐占主导地位。发酵菌种的选择也有多菌种转向单菌种发酵，这种转变与工业化生产单一品种有关，如生产抗生素、味精、氨基酸等，随着微生态制剂在畜禽上的广泛应用，单菌种液体微生态制剂无论在保质期还是在功能上远不能满足市场需求。

发明内容

本发明的目的是，通过筛选多菌种混合液体发酵，生产出含菌量高、保质期长、多功能性的畜禽保健微生态制剂，镜检活菌数大于50亿/毫升。

本发明所采用的技术方案是：一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，步骤如下：

(1)、选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的原菌种，接入三角瓶中震荡培养24—48小时，再按不同的培养基在摇床上进行好氧发酵，好氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的重量份数及加入比例是：枯草芽孢杆菌20—30份，地衣芽孢杆菌30—40份，纳豆芽孢杆菌30—40份，啤酒酵母菌40—60份，黑曲霉菌15—25份，米曲霉菌15—25份；

所述好氧发酵的温度为31—33℃，转速180r/min，好氧发酵期通气比1：0.6，好氧发酵时间16小时；

(2)、选用嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的原菌种，接入克氏瓶中，在37℃恒温下培养24小时，进行厌氧发酵，厌氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的重量份数及加入比例是：嗜酸乳杆菌30—40份，双歧杆菌30—40份，粪肠球菌20—30份；

所述厌氧发酵的温度为31—33℃，厌氧发酵的时间40—50小时；

(3)、选用纯化后的光合菌液接入克氏瓶中，在60瓦白炽灯下培养3—5天；

(4)、取上述步骤(1)所述原菌液总重量的2％，取上述步骤(2)所述原菌液总重量的1％，取上述步骤(3)所述光合菌液总重量的0.5％，混合，按混合后总重量的4％接种，接入种子罐，种子罐内的余量为种子培养基和水，进行厌氧培养，培养时间48—60小时，制成种子液；

(5)、将上述步骤(4)所述的种子液，取总重量的10％，接入生产罐，生产罐内的余量为培养基和水，进行厌氧发酵；

(6)、生产罐的发酵条件控制：温度控制在31—33℃，全程搅拌，转速为180r/min，发酵时间60—72小时，当PH值降至4.0时，即为发酵终点，镜检活菌数大于50亿/毫升。

本发明，所述种子罐的种子培养基为：红糖、豆粕、磷酸二氢钾、氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：红糖5—8份、豆粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH值调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

本发明，所述生产罐的培养基为：糖蜜、粕、磷酸二氢钾、氯化钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：糖蜜8—12份、粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH值调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

本发明，所述的糖蜜是红糖或蜂蜜；所述粕是菜粕、棉粕或豆粕。

其生产方法采用独特的好氧发酵与厌氧发酵相结合的发酵方法，将我国允许在畜禽上使用的安全的有益菌进行提纯筛选并将这些有益的好氧菌和厌氧菌混合培养，在特定的培养基下进行培养，形成多种微生物菌群，这些微生物菌群在生长过程中，其代谢产物互为利用，同时好氧菌的夺氧又为厌氧菌的生长提供了生长空间，菌群之间形成了互惠共生的增值关系，组成了复杂而稳定的微生态系统，生成大量促生长、抗病功能活性物质。

本发明，所述的各菌种均从中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)或农业微生物菌种保藏管理中心(ACCC)引进，确保了各菌液的发酵质量。

用本发明所制成的畜禽用菌剂，于2007年3月—2008年9月在河南省的部分地区进行了试用，实际使用效果实例如下：

试用实例1：2007年3月—2008年9月，试用于河南省平顶山市新华区滍阳镇何庄村养猪场，饲养种类：肉猪；饲养头数：100头；所饲养的100头猪全部食用本发明所制成的畜禽用菌剂加用蛋白饲料，经与同期用其它饲养的100头猪相比，平均增重9.6％；存活率提高18.7％；经济效益显著。

试用实例2：2007年4月—2008年8月，试用于河南省平顶山市新华区滍阳镇西滍村养殖户康民的鱼塘，养殖量：10亩鱼塘；采用我公司生产的畜禽用菌剂，并配合微生物水质净化剂精养草鱼，产量达到1750Kg/亩，与往年相比，饵料系数降低18.2％，净产量提高29.3％，成活率达92.5％。其池塘净化效果为：养殖水体溶解氧比对照提高16.2％，氨氮和亚硝酸盐分别降低了54.4％和68.5％，透明度比对照池塘提高39.6，生物耗氧量降低34.7％，池水呈茶褐色，以褐藻为主。

本发明的有益效果是：所有菌株都是国家允许使用的安全菌种，安全、无毒，并且是一次性使用的产品，避免了再次发酵造成的杂菌感染；本发明的产品经多次试用效果良好，镜检活菌数大于50亿/毫升，不仅提高了畜禽的抗病力，并促进了畜禽的快速生长，降低了料肉比，提高了肉蛋奶的品质。

具体实施方式

一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，步骤如下：

(1)、选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的原菌种，接入三角瓶中震荡培养24—48小时，再按不同的培养基在摇床上进行好氧发酵，好氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的重量份数及加入比例是：枯草芽孢杆菌20—30份，地衣芽孢杆菌30—40份，纳豆芽孢杆菌30—40份，啤酒酵母菌40—60份，黑曲霉菌15—25份，米曲霉菌15—25份；

所述好氧发酵的温度为31—33℃，转速180r/min，好氧发酵期通气比1：0.6，好氧发酵时间16小时；

(2)、选用嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的原菌种，接入克氏瓶中，在37℃恒温下培养24小时，进行厌氧发酵，厌氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的重量份数及加入比例是：嗜酸乳杆菌30—40份，双歧杆菌30—40份，粪肠球菌20—30份；

所述厌氧发酵的温度为31—33℃，厌氧发酵的时间40—50小时；

(3)、选用纯化后的光合菌液接入克氏瓶中，在60瓦白炽灯下培养3—5天；

(4)、取上述步骤(1)所述原菌液总重量的2％，取上述步骤(2)所述原菌液总重量的1％，取上述步骤(3)所述光合菌液总重量的0.5％，混合，按混合后总重量的4％接种，接入种子罐，种子罐内的余量为种子培养基和水，进行厌氧培养，培养时间48—60小时，制成种子液；

(5)、将上述步骤(4)所述的种子液，取总重量的10％，接入生产罐，生产罐内的余量为培养基和水，进行厌氧发酵；

(6)、生产罐的发酵条件控制：温度控制在31—33℃，全程搅拌，转速为180r/min，发酵时间60—72小时，当PH值降至4.0时，即为发酵终点，镜检活菌数大于50亿/毫升。

本发明，所述种子罐的种子培养基为：红糖、豆粕、磷酸二氢钾、氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：红糖5—8份、豆粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH值调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

本发明，所述生产罐的培养基为：糖蜜、粕、磷酸二氢钾、氯化钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：糖蜜8—12份、粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH值调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

本发明生产出的菌液，我们称之为NEM菌剂，目的是区别市场上流行的EM菌，其最大特点是安全无毒性，所有菌株都是从中科院菌种保藏中心引进的，均为国家允许使用的安全菌种，并且是一次性使用的产品，避免了再次发酵造成的杂菌感染。本发明的产品用户试用后反应良好，不仅提高了畜禽的抗病力，并促进了畜禽的快速生长，降低了料肉比，提高了肉蛋奶的品质。

Claims (4)

1、一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)、选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的原菌种，接入三角瓶中震荡培养24—48小时，再按不同的培养基在摇床上进行好氧发酵，好氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、纳豆芽孢杆菌、啤酒酵母菌、黑曲霉菌和米曲霉菌的重量份数及加入比例是：枯草芽孢杆菌20—30份，地衣芽孢杆菌30—40份，纳豆芽孢杆菌30—40份，啤酒酵母菌40—60份，黑曲霉菌15—25份，米曲霉菌15—25份；

所述好氧发酵的温度为31—33℃，转速180r/min，好氧发酵期通气比1：0.6，好氧发酵时间16小时；

(2)、选用嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的原菌种，接入克氏瓶中，在37℃恒温下培养24小时，进行厌氧发酵，厌氧发酵时加入20％的水，制成原菌液；

所述嗜酸乳杆菌、双歧杆菌和粪肠球菌的重量份数及加入比例是：嗜酸乳杆菌30—40份，双歧杆菌30—40份，粪肠球菌20—30份；

所述厌氧发酵的温度为31—33℃，厌氧发酵的时间40—50小时；

(3)、选用纯化后的光合菌液接入克氏瓶中，在60瓦白炽灯下培养3—5天；

(4)、取上述步骤(1)所述原菌液总重量的2％，取上述步骤(2)所述原菌液总重量的1％，取上述步骤(3)所述光合菌液总重量的0.5％，混合，按混合后总重量的4％接种，接入种子罐，种子罐内的余量为种子培养基和水，进行厌氧培养，培养时间48—60小时，制成种子液；

(5)、将上述步骤(4)所述的种子液，取总重量的10％，接入生产罐，生产罐内的余量为培养基和水，进行厌氧发酵；

(6)、生产罐的发酵条件控制：

温度控制在31—33℃，全程搅拌，转速为180r/min，发酵时间60—72小时，当PH值降至4.0时，即为发酵终点，镜检活菌数大于50亿/毫升。

2、如权利要求1所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于：步骤(4)中所述种子罐的种子培养基为：红糖、豆粕、磷酸二氢钾、氯化钠和轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：红糖5—8份、豆粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH値调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

3、如权利要求1所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于：步骤(5)中所述生产罐的培养基为：糖蜜、粕、磷酸二氢钾、氯化钠、轻质碳酸钙，各物料的重量份数及加入比例为：糖蜜8—12份、粕1—2份、磷酸二氢钾0.2份、氯化钠0.15份、轻质碳酸钙0.6份，余量为水，并将初始PH值调至7.0，在121℃时灭菌处理30分钟，冷却至30℃时接种。

4、如权利要求3所述的一种多菌体混合液发酵生产畜禽用菌剂的方法，其特征在于：所述的糖蜜是红糖或蜂蜜；所述粕是菜粕、棉粕或豆粕。