CN110679943A - 具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素及制备方法，按重量份计，其包括：苦瓜肽粉30‑35、芹菜籽粉5‑10份、红曲粉0.5‑1份、奇亚籽油3‑5份、三七粉5‑8份、香菇3‑5份、燕麦粉10‑15份、魔芋精粉2‑4份、山药粉5‑10份、低聚木糖3‑5份、山楂提取物5‑10份、西红柿籽粉1‑2份、L‑阿拉伯糖5‑8份、牡蛎粉3‑5份、橄榄油2‑3份。其具有丰富的膳食纤维以及苦瓜肽、奇亚籽油等降血糖、血脂成分，能够充分促进肠道吸收，可起到轻身减肥、降脂控糖等作用。
Description
技术领域
本发明涉及营养功能性食品与生物发酵领域。更具体地说，本发明涉及一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素及制备方法。
背景技术
随着人类生活水平的不断提高及人们饮食结构的变化，肥胖和血脂超标者在人群中的比例不断升高。肥胖和血脂超标是心脑血管疾病、糖尿病、动脉硬化等疾病发病的主要原因，而心脑血管疾病在全球范围内每年夺走1200万人的生命，接近全球总死亡人口的1/4，具有极大的社会危害性，在我国心脑血管的死亡人口已占总死亡人口的首位，这种现象显然严重地威胁人类的生命与健康。
越来越多的研究证明：冠心病、糖尿病、肠胃疾病、肥胖等生活中常见的慢性疾病的起因，已不仅仅是高热量、高脂肪食物的过多食用，还有就是膳食纤维的摄入严重不足。有研究表明，60％以上的肥胖和便秘相关。便秘会增加人体对食物中的能量物质的吸收，导致肥胖的发生，严重地，还会使有毒、有害物质对肠壁作用的时间延长，引发高血压、高脂血症、糖尿病、癌症等多种疾病。
目前，市场上所出现的减肥和降脂的保健品以及药品虽种类繁多，但因减肥产品主要通过抑制食欲、利尿和致泻为手段以达到减肥的作用，而采用食欲抑制剂类减肥药品，其药物的全身性副作用较多，甚至发生严重的不良反应；采用利尿剂或致泻剂使之身体脱水并体重减轻但脂肪却未减少。而且长期服用危害较大，会出现胃肠功能紊乱、贫血、糖尿病、肾功能损害且有反弹现象，甚至危及生命。现有的降脂产品多有毒副作用，会产生不同程度的肝、肾及横纹肌损伤。
因此，如何提供一种具有减肥降脂效果，且同时能避免产生副作用的食品或保健品显得尤为重要。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素及其制备方法，其具有丰富的膳食纤维以及苦瓜肽、奇亚籽油等降血糖、血脂成分，能够充分促进肠道吸收，可起到轻身减肥、降脂控糖等作用。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，按重量份计，其包括：苦瓜肽粉30-35份、芹菜籽粉5-10份、红曲粉0.5-1份、奇亚籽油3-5份、三七粉5-8份、香菇3-5份、燕麦粉10-15份、魔芋精粉2-4份、山药粉5-10份、低聚木糖3-5份、山楂提取物5-10份、西红柿籽粉1-2份、L-阿拉伯糖5-8份、牡蛎粉3-5份、橄榄油2-3份。
优选的，所述营养酵母包括富硒酵母和/或富铬酵母。
优选的，所述胰酶包括胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，且按重量份计，胰蛋白酶：胰淀粉酶：胰脂肪酶＝1:1.5:2。
优选的，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-12h，取出再用去离子水冲洗2-3遍；
S12、将清洗后的苦瓜原料进行干燥，打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进行温度处理，以获得浸提物；
所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃，保温45-60min，再降温至20-25℃，保温25-30min，并记录此时混合体系整体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和缓冲液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1；补入第一混合液后，升温至60-75℃，保温60-75min，再降温至45-55℃，保温30-35min，并记录此时混合体系整体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*75％补入含有去离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝3：1；补入第二混合液后，升温至80-90℃，保温75-85min，再降温至60-75℃，保温35-45min；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃，保温45-60min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃，保温40-60min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃，保温30-45min后得到第三酶解体系；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣后获得苦瓜肽粗提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa；再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4.5％的活性炭，静置45-50min后离心，去沉渣；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为60℃，以获得微滤膜透过液；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，过滤温度为45-50℃，以获得超滤膜透过液；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩液；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含量不低于30％的苦瓜肽粉。
优选的，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
优选的，所述奇亚籽油的提取方法包括：
S21、取新鲜奇亚籽，在25℃下浸泡24-36h后取出，冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得奇亚籽粉；
S22、取奇亚籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按奇亚籽粉重量的3-4％加入胰蛋白酶以及按奇亚籽粉重量的8-10％加入用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液，调节pH值至6.5-7.5，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；所述透性调节液由酸溶液、甘油、氯化钠和溶菌酶组成，且按重量比计，酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：(0.5-0.8)：(0.05-0.08)：(0.01-0.03)；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3.0-4.5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-60℃，保温30-35min后得到第二酶体系；
第三次酶解：待第二次酶体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S23、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得奇亚籽粗提体系；
S24、在奇亚籽粗提体系中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣，获得奇亚籽粗提液；再将奇亚籽粗提液经硅藻土过滤，得到奇亚籽油清液，且过滤压力控制在0.3-0.4MPa；再在奇亚籽油清液中按其重量加入3％的活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，静置2-3h后取上层油层，即得到所述奇亚籽油。
还提供一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素的制备方法，其特征在于，包括：
S100、按照上述组分用量称取各组分，并混合4-6分钟，得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.6-0.7Mpa，造粒温度为80℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；
S300、对所述粗成品进行8目过筛，最终获得所述具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素。
本发明至少包括以下有益效果：
本发明通过阶段性升温、反复酶解以及多重过滤的提取工艺，使得苦瓜肽中苦瓜多肽蛋白含量不低于20％，以及通过反复酶解的方式获得奇亚籽油，由此可大幅提高Omega-3、亚油酸、亚麻酸的含量，使其充分发挥其降血脂、预防动脉硬化的功能，进一步的，苦瓜肽粉、奇亚籽油与其他富含膳食纤维、降脂控糖的组分(如芹菜籽粉、红曲粉、西红柿籽粉、牡蛎粉、魔芋精粉、山楂提取物、香菇以及三七粉等)复配使用后，其通过其中的洛伐他丁、牛磺酸、黄酮等活性成分达到降血糖、降血压血脂、减肥等功效。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<实施例1>
按重量份计，本实施例中的具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素包括：苦瓜肽粉30份、芹菜籽粉5份、红曲粉0.5份、奇亚籽油3份、三七粉5份、香菇3份、燕麦粉10份、魔芋精粉2份、山药粉5份、低聚木糖3份、山楂提取物5份、西红柿籽粉1份、L-阿拉伯糖5份、牡蛎粉3份、橄榄油2份。其中，所述营养酵母包括富硒酵母和/或富铬酵母；所述胰酶包括胰酶含胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，且按重量份计，胰蛋白酶：胰淀粉酶：胰脂肪酶＝1:1.5:2份。
进一步的，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-10h(优选8.5h)，取出再用去离子水冲洗2-3遍，以去除农残药残以及杂质；
S12、将冲洗后的苦瓜原料风干干燥，取出打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液(所述缓冲液为包含有酸、碱、盐等试剂的缓冲体系，如磷酸盐缓冲液)进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)(优选为1:5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进行温度处理，以获得浸提物；
其中，所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃(优选为50℃)，保温45-60min(优选为55min)，降温至20-25℃(优选为22℃)，保温25-30min(优选为28min)，并记录此时混合体系整体的第一体积数值；因在前述升温、保温过程中，其反应体系内的水、酸等会被蒸发，有可能会导致其中酸、碱以及无机离子的溶解度产生变化，从而影响浸提效果，因此，在前述升温、保温过程后，需按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和所述缓冲液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的浸提环境中；补入第一混合液后，升温至60-75℃(优选为65℃)，保温60-75min(优选为65min)，降温至45-55℃(优选为50℃)，保温30-35min(优选为32℃)，并记录此时混合体系整体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*75％补入含有去离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝3：1，该次升温、保温的温度相较第一次而言有所提高，因此，反应体系内的水、酸等的蒸发效果更为明显，因此此次补入的第二混合液的比例要有所上升(增加到75％)，且第二混合液中缓冲液的比例有所增加；补入第二混合液后，升温至80-90℃(优选为85℃)，保温75-85min(优选为80min)，降温至60-75℃(优选为70℃)，保温35-45min(优选为40min)；
本步骤中，通过阶段性的升温、保温，可使得组分的细胞结构(如细胞壁等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，同时，每一升温、保温阶段结束后补充相应比例的水以及缓冲液，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的浸提环境中，以达到最佳的浸提效果；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃(优选为37℃)，保温45-60min(优选55min)后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃(优选为50℃)，保温40-60min(优选50min)后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃(优选为58℃)，保温30-45min(优选35min)后得到第三酶解体系；
由于本发明中的组分多为植物组分，其细胞结构中包含有细胞壁，因此，本步骤中，通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对细胞壁进行充分酶解，使细胞壁中的纤维素、果胶等成分破坏殆尽，可使得细胞壁内的有效成分(如苦瓜多肽蛋白)得以充分释放，以提高其提取效率；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min(优选75min)后离心，去沉渣后获得苦瓜肽粗提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa(优选0.25MPa)；再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4-5％的活性炭，静置45-50min后离心，去沉渣；
通过上述活性炭、硅藻土的吸附处理，苦瓜肽酶解液中的色素、悬浮颗粒以及胶体等杂质，使最后获得的成品纯度更高；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为55-65℃(优选为60℃)，以获得微滤膜透过液；进一步的，所述微滤陶瓷膜采用三支膜并联使用；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，除去大分子杂质，操作温度控制在55-65℃，以获得超滤膜透过液；其中，卷式超滤膜为能截留分子量为100-200kDa的卷式超滤膜，且所述卷式超滤膜采用两支膜并联使用；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩液，且苦瓜肽浓缩液的固形物含量≥40％；其中，卷式高压反渗透膜系统为高压浓缩膜，具体由(PS)聚砜或(PFS)聚醚砜材料等复合材料膜制成，且采用四支膜串联使用；
该步骤中采用多层次的膜分离纯化技术分离纯化苦瓜多肽蛋白，其浓缩温度低，有效保证苦瓜蛋白多肽的天然活性及其高含量；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含量不低于30％的苦瓜肽粉。
此外，奇亚籽富含人体必需脂肪酸α-亚麻酸，而亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，也是Omega-3的前体物质。Omega-3是一组多元不饱和脂肪酸，其含有的二十碳五烯酸(EPA)具有降低胆固醇和甘油三酯的含量、促进体内饱和脂肪酸代谢，从而起到降低血液粘稠度、增进血液循环、提高组织供氧而消除疲劳、防止脂肪在血管壁的沉积、预防动脉粥样硬化的形成和发展、预防脑血栓、脑溢血、高血压等功效；并且奇亚籽油自身含有多种抗氧化活性成分(绿原酸，咖啡酸，杨梅酮，槲皮素，山奈酚等)，可保护Omega-3的品质，使其不易腐坏变质和产生有毒物质和异味。以此本发明还提供了一种奇亚籽油的提取方法，其具体包括：
S21、取新鲜奇亚籽，在25℃下浸泡24-36h(优选30h)后取出，冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得奇亚籽粉；
S22、取奇亚籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按奇亚籽粉重量的3-4％(优选3.5％)加入胰蛋白酶以及按奇亚籽粉重量的8-10％(优选8.5％)加入用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液，调节pH值至6.5-7.5(优选7.0)，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃(优选为43.5℃)，保温35-40min(优选为35min)后得到第一酶解体系；所述透性调节液由酸溶液、甘油、氯化钠和溶菌酶组成，且按重量比计，酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：(0.5-0.8)：(0.05-0.08)：(0.01-0.03)(优选为酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：0.7：0.05：0.02，且所述酸溶液为柠檬酸溶液)；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5(优选为4.0)，按第一次酶解体系重量的3.0-4.5％(优选为4.0％)加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-60℃(优选为55℃)，保温30-35min(优选为32min)后得到第三酶解体系；
第三次酶解：待第二次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5(优选为5.0)，按第二次酶解体系重量的2-4％(优选为3.0％)加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃(优选为60℃)，保温25-35min(优选为30min)后得到第三酶解体系；
S23、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得奇亚籽粗提体系；
S24、在奇亚籽粗提体系中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min(优选为70min)后离心，去沉渣，获得奇亚籽粗提液；再将奇亚籽粗提液经硅藻土过滤，得到奇亚籽油清液，且过滤压力控制在0.3-0.4MPa(优选为0.35Mpa)；再在奇亚籽油清液中按其重量加入3％的活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，静置2-3h(优选为2.5h)后取上层油层，即得到所述奇亚籽油。
<实施例2>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，本实施例中的具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素由以下组分组成：苦瓜肽粉35份、芹菜籽粉10份、红曲粉1份、奇亚籽油5份、三七粉8份、香菇5份、燕麦粉15份、魔芋精粉4份、山药粉10份、低聚木糖5份、山楂提取物10份、西红柿籽粉2份、L-阿拉伯糖8份、牡蛎粉5份、橄榄油3份。
<实施例3>
本实施例与实施例1的不同之处仅在于，按重量份计，本实施例中的具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素包括：苦瓜肽粉32份、芹菜籽粉7份、红曲粉0.8份、奇亚籽油4份、三七粉7份、香菇4份、燕麦粉13份、魔芋精粉3份、山药粉8份、低聚木糖4份、山楂提取物7份、西红柿籽粉1.5份、L-阿拉伯糖8份、牡蛎粉4份、橄榄油2.5份。
<苦瓜肽分子量检测结果>
采用申请号201710832199.8(“一种全程低温生产苦瓜多肽蛋白提取物的新方法、苦瓜多肽蛋白提取物及其应用”)的专利申请中实施例1所述的方法提取苦瓜肽，以作为对比例1，将其与通过本发明实施例1-3中的苦瓜肽粉制备方法制备获得的苦瓜肽粉进行高效凝胶过滤色谱法检测，以获得苦瓜肽分子量大小及分布范围，其结果如表1所示。
表1苦瓜肽分子量大小及分布范围
由此可见，本发明的苦瓜肽粉制备方法中，首先通过阶段性的升温、保温，可使得组分的细胞结构(如细胞壁等)组成在不同的温度变化环境下被反复冲击、破坏，同时，每一升温、保温阶段结束后补充相应比例的水以及缓冲液，由此对水、酸等蒸发后的反应体系进行补偿，使反应体系始终处于较优的浸提环境中，进一步再进行阶段性升温、反复酶解以及多层次的膜分离纯化技术提取工艺来制备苦瓜多肽蛋白，使得到的苦瓜多肽提取物中苦瓜多肽蛋白的含量高于30％，且提取物产品中不含大豆蛋白多肽等其他非苦瓜来源的多肽蛋白。从表1中可以看出，本发明制备获得的5000-7000Da范围内的苦瓜多肽片段占比接近30％，而5000-7000Da范围内的苦瓜多肽片段正是具有调节血糖功能、片段大小最接近胰岛素分子量的片段，因此得到的苦瓜多肽提取物具有非常好的调控血糖代谢效果，尤其是可大幅度提高胰岛素受体的结合能力及降血糖的效果。
<奇亚籽油检测结果>
首先取新鲜500g，于100℃烘箱内烘干10-12h，取出粉碎，过100目筛后按照料液比(mL/g)4：1加入石油醚，形成预混料，并将预混料投入到萃取罐中进行萃取，萃取温度为30℃、压力为5MPa，萃取时间为3-4h分钟，得到萃取液；将萃取液在常压下冷却至0℃，再加入吸附剂除杂，过滤即得做为对比例2的奇亚籽油，再将其通过本发明实施例1-3中的奇亚籽油提取方法获得的奇亚籽油进行检测，以获得奇亚籽油提取率、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及亚麻酸的相对含量，其结果如表2所示。
表2奇亚籽油提取率、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及亚麻酸含量
本发明通过在不同阶段采用不用的酶及酶解条件对奇亚籽细胞壁进行充分酶解，使细胞壁中的纤维素、果胶等成分破坏殆尽，同时，酸溶液、甘油、氯化钠、溶菌酶可通过改变细胞壁或细胞膜结构来改变两者的通透性，因此本发明中通过采用调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液来调节细胞膜和/或细胞壁透性，可使得细胞壁和/或细胞壁结构被破坏，使其内容的有效成分(如亚麻酸等)得以充分释放，进一步发挥其增强免免疫力、降血脂功效。具体的，由表2中可以看出，通过本发明的制备方法获得的奇亚籽油中，奇亚籽油提取率、棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸及亚麻酸含量均相对于对比例2有显著提高，其中，本发明制备获得的奇亚籽油中不饱和脂肪酸的含量约为86％，相较对比例2(约为35％)提高了约1.5倍，且其中亚麻酸的含量达到37％，相较对比例2(约为25％)提高了约0.5倍，而正是所述亚麻酸可起到增强免疫力，降低血脂的作用。
<实施例4>
本实施例还提供了一种实施例1-3任一项中的具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素的制备方法，其包括：
S100、按照实施例1-3之一中的组分用量称取各组分，并混合4-6分钟(优选5min)，得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.6-0.7Mpa(优选0.65Mpa)，造粒温度为80℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm(优选为2mm)；
S300、对所述粗成品进行8目过筛，最终获得所述具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素。
<降血脂功效评价试验>
选取健康雌性大鼠120只，在实验环境下预饲一周后随机分为正常对照组、高脂模型组、低、中、高剂量组(每剂量组包括实施例1、2、3组)，每组10只。除正常对照组采用基础饲料组外，其它各组均采用高脂饲料。造模8周后，取血样检测生化指标确定高脂血症模型是否成功。以每天灌胃量为大鼠体重的2％，将本发明的苦瓜多肽复合营养素(以下均为“苦瓜多肽复合营养素”)配制成相应浓度的溶液，高、中和低剂量组每天分别按150mg/kg、100mg/kg和50mg/kg灌胃。其他组给予相应体积的蒸馏水，治疗期为4周。实验期间，动物在饲养房内饲养，室温(23±2)℃，12h明暗交替，自由摄食和饮水。
连续喂养12周，末次喂养后，禁食不禁水10h用，水合氯醛麻醉后，腹主动脉取血。血样于室温静置30min后，4000r/min离心获得血清，按试剂盒说明测定大鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的浓度结果如表3所示。
表3苦瓜多肽复合营养素对大鼠TC、TG、HDL-C、LDL-C影响
由表3可见，高脂模型组中小鼠血清中的TC、TG含量均显著性高于正常对照组，说明通过试验期间高脂饲料的喂养，成功建立了小鼠高血脂模型；分别给予高、中、低剂量的苦瓜多肽复合营养素可降低大鼠血清中TC和TG浓度，其中中剂量组的降脂效果最为显著，实施例1，2，3的中剂量组与高脂模型对照组的TC浓度相比分别降低了28.7％，33.6％，28.9％；TG浓度分别降低了39.1％，46.8％，40.0％。由此可见，苦瓜多肽复合营养素对TG浓度的降低更为显著，可起到降低总胆固醇和甘油三酯的功效。
同时，高脂模型组中小鼠血清中的HDL-C，LDL-C浓度均显著性高于正常对照组，说明通过试验期间高脂饲料的喂养，成功建立了小鼠高血脂模型；分别给予高、中、低剂量的苦瓜多肽复合营养素可提高大鼠血清中HDL-C浓度，并且降低LDL-C浓度，其中中剂量组的降脂效果最为显著，实施例1，2，3的中剂量组与高脂模型对照组的HDL-C浓度相比分别升高了了11.2％，20.5％，12.0％；LDL-C浓度分别降低了15.1％，24.4％，18.5％。由此可见，苦瓜多肽复合营养素具有降低低密度脂蛋白，提高高密度脂蛋白的能力，因此具有降血脂功能，对高脂血症具有一定的治疗作用。
<小鼠肝脏指数影响功效评价试验>
小鼠120只经适应性饲养1周后，其中110只小鼠喂饲高脂饲料(配方:基础饲料88.5％、猪油10％、胆固醇1.5％)，其余10只小鼠喂饲普通饲料，作为正常对照组.高脂模型组小鼠饮用含0.2％丙硫氧嘧啶的蒸馏水，普通饲料组小鼠饮用蒸馏水，喂养4周，实验前禁食不禁水12h，称重。
取高脂模型小鼠100只，随机分成高脂模型组，苦瓜多肽复合营养素低、中、高剂量组(每剂量组包括实施例1、2、3组)，每组10只。将苦瓜多肽复合营养素配制成相应浓度的溶液，高、中和低剂量组每天分别按100mg/kg、75mg/kg和50mg/kg进行灌胃，给药体积均为20mL·kg-1，造模成功后连续喂养4周，模型组和空白组给予等量生理盐水。四周后，实验前禁食不禁水12h，末次给药后2h，称重，颈椎脱臼处死并分离肝脏，生理盐水洗去污血后用滤纸吸干，称重并计算肝脏指数，其结果如表4所示。其中，肝脏指数(g/100g)＝肝脏重量(g)/体重(g)×100。
表4苦瓜多肽复合营养素对大鼠肝脏指数影响
由表4可见，高脂模型组与正常对照组相比，小鼠肝脏指数显著升高。苦瓜多肽复合营养素喂养的各组小鼠肝脏指数与高脂模型组比明显降低。中剂量组对小鼠肝脏减重最为显著，实施例1，2，3的中剂量组与高脂模型对照组的肝脏指数相比分别降低了37.0％，35.1％，39.8％；以上结果表明本发明中的苦瓜多肽复合营养素能降低高脂血症大鼠肝脏指数，具有降脂功效。
<大鼠血清胰岛素影响功效评价试验>
取120只大鼠分笼饲养，适应性普通饲料喂养1周，温度(20±2)℃，湿度(60±5)％。除正常对照组大鼠外均高脂高糖饲料喂养。8周后禁食12h，按照25mg/kgSTZ的量尾静脉注射(严格按照每只大鼠的体重快速注射)。72小时后取禁食12h大鼠的尾血用便携式血糖仪测定血糖值，以空腹血糖≥11.1mmol/L为糖尿病大鼠造模成功的指标，挑选合格大鼠进行后续实验。所有大鼠继续用标准饲料喂养。
取普通饲料喂养大鼠10只作为空白对照组，糖尿病模型大鼠100只，高脂模型组，苦瓜多肽复合营养素低、中、高剂量组(每剂量组包括实施例1、2、3组)，每组10只。苦瓜多肽复合营养素喂养的高、中、低剂量组，分别每天给予100、200和300mg/kg的苦瓜多肽复合营养素；在造模成功1周后分别采用灌胃给药方式连续给药8周，1组和2组大鼠不给予任何药物进行治疗。给药8周末称重，腹腔注射戊巴比妥钠(120mg/kg)麻醉已禁食大鼠。仰卧式固定大鼠后开胸，用5ml注射器从心尖取血，每只大鼠取4ml全血，立即装于1支促凝管(4ml/支)中，2h后离心，置于-20℃保存用于测定胰岛素。
用ELISA法按照试剂盒说明书检测大鼠血清胰岛素：
(1)试剂盒平衡至室温后先配置标准品：将标准品分别稀释至40、20、10、5、2.5、1.25、0.625mIU/L。
(2)加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔不加样品、生物素标记的胰岛素抗体、链霉亲和素-HRP，只加显色剂A、B和终止液，其余各步骤相同；标准孔：加入标准品50μl，链霉亲和素-HRP50μl；待测样品孔：加入样品40μl，然后各加入抗-胰岛素抗体10μl、链霉亲和素-HRP50μl，盖上封膜，轻轻震荡混匀，37℃温育60min。
(3)配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
(4)洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置半
分钟后弃去，如此反复5次，拍干。
(5)显色：每孔加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10min。
(6)终止：每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。
(7)测定：以空白孔调零，用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度值。
(8)根据标准品的浓度及对应的光密度值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的光密度值在回归方程上计算出对应的样品浓度。检测结果如表5所示。
表5苦瓜多肽复合营养素对大鼠血清胰岛素浓度影响
由表5看出，本发明的苦瓜多肽复合营养素喂养的大鼠的血清胰岛素浓度明显低于模型对照组，其中高剂量组胰岛素浓度下降最为明显，表明苦瓜多肽复合营养素可降低糖尿病模型大鼠的血清胰岛素，起到降糖的作用。
<大鼠减重功效评价试验>
选取健康雌性大鼠60只，体重约在110-120g，在实验环境下预饲一周后，选取10只作为空白对照组，采用基础饲料喂养，其他50只使用高脂饲料喂养建离肥胖大鼠模型。造模8周后，以体重明显大于空白对照组大鼠的平均体重(p＜0.05)作为饮食诱导肥胖大鼠模型建立成功的标准，记录高脂组大鼠最终的体重。将成功建模肥胖大鼠取40只随机分为4组(每组10只)，即肥胖建模对照组和本发明的苦瓜多肽复合营养素实验组(包括实施例1、2、3组)。减重实验过程中，正常对照组以普通饲料喂养，自由进食饮水；高脂对照组以高脂饲料喂养，自由进食饮水；实验组对应将苦瓜多肽复合营养素实施例1、2、3分别掺入高脂饲料中，自由进食饮水。记录初始体重，治疗期为8周，实验过程中每周检测1次体重变化情况，实验结束称量体重并记录，实验前后大鼠体重测量结果如表6所示。
表6苦瓜多肽复方植物药对大鼠体重的影响
由表6可以看出，随着试验时间的延长，各组大鼠体重均有所增长。在试验结束时，实施例1-3组的体重均显著低于高脂模型组和空白对照组，可起到降脂的作用，且实施例2的效果最好。
<人体减肥功效评价试验>
在自愿原则基础上挑选80名单纯性肥胖自愿者参加测试，人群要求：年龄区间25-40岁的成年脑力劳动者，体脂率≥35％，近期无疾病感染，未服用任何药物，设置空白组和实验组(实验组包括实施例1组、实施例2组和实施例3组)，每组男女各10名。
按照分组制定60天的复合营养素减肥饮食计划。实验组每日对应领取实施例1、2、3营养素各两份(25g/份)，空白组领取空白对照剂各两份，用于中、晚餐前服用，实验组与空白组早餐、午餐与晚餐供应饮食种类和热量一致，早餐：脱脂牛奶250ml，鸡蛋1个，全麦吐司面包2片；午餐：果蔬180克，鱼或肉制品50g,豆制品75g,米饭若干；晚餐：蔬菜150克，鱼或肉制品75g,豆制品50g,米饭若干。全天正常饮水不少于1500ml。
测试复合营养素减肥饮食计划前后，体重和体脂率变化。结果如表7所示：
表7人体减肥功效实验评价结果
由人体减肥功效实验评价结果可知，空白组实验前后的体重以及体脂率几乎没有变化；而实验组中男女参与者的体重和体脂率在实验后均有所下降，体重和体脂率平均下降分别为3.2kg和2.4％；其中实施例2组的体重和体脂率较平均下降明显，分别为3.6kg和3.4％。同时，空白组和实验组参与者也均未出现身体不适感，工作生活质量未受任何影响。因此，本发明的具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素，具有减肥减脂功效，适于肥胖人群日常食用。
需要说明的是，上述实施例一至四中的技术方案可进行任意组合，且组合后获得的技术方案均属于本发明的保护范围。
综上所述，本发明通过阶段性升温、反复酶解以及多重过滤的提取工艺，使得苦瓜肽中苦瓜多肽蛋白含量不低于20％，以及通过反复酶解的方式获得奇亚籽油，由此可大幅提高Omega-3、亚油酸、亚麻酸的含量，使其充分发挥其降血脂、预防动脉硬化的功能，进一步的，苦瓜肽粉、奇亚籽油与其他富含膳食纤维、降脂控糖的组分(如如芹菜籽粉、红曲粉、西红柿籽粉、牡蛎粉、魔芋精粉、山楂提取物、香菇以及三七粉等)复配使用后，其通过其中的洛伐他丁、牛磺酸、黄酮等活性成分达到降血糖、降血压血脂、减肥等功效。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实例。
Claims (7)
1.具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，按重量份计，其包括：苦瓜肽粉30-35份、芹菜籽粉5-10份、红曲粉0.5-1份、奇亚籽油3-5份、三七粉5-8份、香菇3-5份、燕麦粉10-15份、魔芋精粉2-4份、山药粉5-10份、低聚木糖3-5份、山楂提取物5-10份、西红柿籽粉1-2份、L-阿拉伯糖5-8份、牡蛎粉3-5份、橄榄油2-3份。
2.如权利要求1所述的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，所述营养酵母包括富硒酵母和/或富铬酵母。
3.如权利要求1所述的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，所述胰酶包括胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶，且按重量份计，胰蛋白酶：胰淀粉酶：胰脂肪酶＝1:1.5:2。
4.如权利要求1所述的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，所述苦瓜肽粉的制备方法包括如下步骤：
S11、取新鲜苦瓜、干燥苦瓜、苦瓜籽中的一项或几项作为苦瓜原料，加入苦瓜原料重量5倍的去离子水，并在25℃水温下浸泡8-12h，取出再用去离子水冲洗2-3遍；
S12、将清洗后的苦瓜原料进行干燥，打碎磨浆，得到苦瓜浆液；
S13、取苦瓜浆液以及缓冲液进行混合，以获得混合体系，按重量比计，按照苦瓜浆液：缓冲液＝1:(4.5-5.5)；记录混合体系总体积数值，将pH值调节为7后对混合体系进行温度处理，以获得浸提物；
所述温度处理过程包括：
升温至45-55℃，保温45-60min，再降温至20-25℃，保温25-30min，并记录此时混合体系整体的第一体积数值；按照(总体积-第一体积)*60％补入含有去离子水和缓冲液的第一混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝4：1；补入第一混合液后，升温至60-75℃，保温60-75min，再降温至45-55℃，保温30-35min，并记录此时混合体系整体的第二体积数值；按照(总体积-第二体积)*75％补入含有去离子水和缓冲液的第二混合液，且按照重量比计，去离子水：缓冲液＝3：1；补入第二混合液后，升温至80-90℃，保温75-85min，再降温至60-75℃，保温35-45min；
S14、将浸提物温度降至20-25℃后对所述浸提物进行酶解，以获得苦瓜肽酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：将浸提物的pH值调节至8.0，按浸提物重量的4.5％加入胰蛋白酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至35-40℃，保温45-60min后得到第一酶解体系；
第二次酶解：待第一酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5，按第一酶解体系重量的3％加入果胶酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至45-55℃，保温40-60min后得到第二酶解体系；
第三次酶解：待第二酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.8，按第二酶解体系重量的2％加入纤维素酶，80-100转/min条件下搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃，保温30-45min后得到第三酶解体系；
S15、待步骤S14中的酶解过程完成后，对获得的第三酶解体系升温至90℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得苦瓜肽粗提体系；再在所述苦瓜肽粗提体系中按其重量的4-5％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温60-90min后离心，去沉渣后获得苦瓜肽粗提液；
将所述苦瓜肽粗提液经硅藻土过滤，以得到苦瓜肽清液，且过滤压力为0.2-0.3MPa；再在所述苦瓜肽清液中按其重量加入4.5％的活性炭，静置45-50min后离心，去沉渣；
S16、将去沉渣后的苦瓜肽清液经过滤孔径为0.5-0.8μm的微滤陶瓷膜进行过滤，过滤温度为60℃，以获得微滤膜透过液；
再将所述微滤膜透过液经截留分子量为100-200kDa卷式超滤膜进行过滤，过滤温度为45-50℃，以获得超滤膜透过液；
再将所述超滤膜截留液经截留分子量为150-1000Da的卷式高压反渗透膜进行浓缩，以除去水分及部分残留无机盐和小分子杂质，浓缩温度在40℃以下，以得到苦瓜肽浓缩液；
S17、通过真空冷冻干燥方法对所述苦瓜肽浓缩液进行干燥，以获得苦瓜多肽蛋白含量不低于30％的苦瓜肽粉。
5.如权利要求4所述的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。
6.如权利要求1所述的苦瓜多肽复合营养素，其特征在于，所述奇亚籽油的提取方法包括：
S21、取新鲜奇亚籽，在25℃下浸泡24-36h后取出，冲洗2-3遍，烘干后磨碎，过100目筛，以获得奇亚籽粉；
S22、取奇亚籽粉，并在其中加入其重量5-10倍的去离子水，以获得酶解原料，并对所述酶解原料进行酶解，以获得酶解体系；其中，所述酶解过程包括：
第一次酶解：按奇亚籽粉重量的3-4％加入胰蛋白酶以及按奇亚籽粉重量的8-10％加入用于调节细胞膜和/或细胞壁通透性的透性调节液，调节pH值至6.5-7.5，充分搅拌，且搅拌的同时升温至40-45℃，保温35-40min后得到第一酶解体系；所述透性调节液由酸溶液、甘油、氯化钠和溶菌酶组成，且按重量比计，酸溶液：甘油：氯化钠：溶菌酶＝1：(0.5-0.8)：(0.05-0.08)：(0.01-0.03)；
第二次酶解：待第一次酶解体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至3.5-4.5，按第一次酶解体系重量的3.0-4.5％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-60℃，保温30-35min后得到第二酶体系；
第三次酶解：待第二次酶体系温度降至20-25℃后，再调整其pH值至4.0-5.5，按第二次酶解体系重量的2-4％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-65℃，保温25-35min后得到第三酶解体系；
S23、待酶解完成后，对获得的第三酶解体系升温至85℃，维持10min，以完成灭酶活过程，获得奇亚籽粗提体系；
S24、在奇亚籽粗提体系中按其重量的4％加入活性炭，搅拌均匀，在65℃下保温65-85min后离心，去沉渣，获得奇亚籽粗提液；再将奇亚籽粗提液经硅藻土过滤，得到奇亚籽油清液，且过滤压力控制在0.3-0.4MPa；再在奇亚籽油清液中按其重量加入3％的活性炭，静置45-50min，然后离心，去沉渣，静置2-3h后取上层油层，即得到所述奇亚籽油。
7.一种具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素的制备方法，其特征在于，包括：
S100、按照权利要求1中的组分用量称取各组分，并混合4-6分钟，得到混合料；
S200、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.6-0.7Mpa，造粒温度为80℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；
S300、对所述粗成品进行8目过筛，最终获得所述具有减肥降脂效果的苦瓜多肽复合营养素。
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