CN110564655A - 烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌sl-19菌剂制备及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL‑19菌剂制备及应用,属于生物防治技术领域;本发明的菌剂通过:(1)斜面活化扩增培养;(2)种子液发酵培养;(3)发酵培养,最终枯草芽孢杆菌SL‑19菌剂中的活孢子数≥50亿/ml;斜面活化扩增培养时,将枯草芽孢杆菌SL‑19试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于液体培养基中进行活化培养至对数生长期(60小时),制得活化菌群液体。本发明采用以菌治菌的生物防治方式,使用枯草芽孢杆菌SL‑19应用到烟草赤星病的防治中,且本发明枯草芽孢杆菌SL‑19菌剂结合叶面喷雾技术,可使烟草赤星病的发病率降至4.8%,且最终防效可高达83.78%。
Description
技术领域
本发明涉及生物防治技术领域,尤其涉及一种用于烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备及应用。
背景技术
烟草赤星病是一种气传流行性病害,发生普遍并且分布广泛,属于危害非常严重的顽固性真菌性病害,不同年份烟草赤星病的发病率为30%到50%,在后期多雨潮湿条件,可造成毁灭性灾害,严重影响经济作物烟草的生产,据统计并且每年会造成数亿元的经济损失。目前我国各产烟区都有该病害的发生,以山东、河南、安徽、黑龙江、吉林、陕西等地发生严重;其次是四川、云南、贵州、辽宁等烟区。烟草赤星病菌主要以菌丝在田间的烟叶等病株残体上越冬或杂草上越冬。病残体上的分生孢子也可直接越冬,作为初侵染来源。其主要通过气流传播(越冬菌丝产生的分生孢子)。
长距离传播主要靠气流和风力,雨水只能作短距离传播,由气流、风、雨传播到田间烟株上侵染下部叶片(初侵染),形成分散的多个发病中心,这些发病的烟株病斑上产生分生孢子,又由风雨传播,形成再次侵染。经过多次再侵染,使病害逐渐扩展流行。所以该病害初侵染和再侵染来源广泛,传播速度快,造成了防治困难
另一方面,由于该病害没有良好的抗病品种或者有抗性的品种但农艺性状差,所以迄今为止,我国防治烟草赤星病还主要用化学防治,但是化学农药的大量应用,不但让赤星病病菌对化学农药产生很强的抗药性,而且农药的残留和施药时对人体造成很大的损害。所以,用以菌治菌,以菌防菌的方法来控制烟草赤星病就显得至关重要。
对此,与现有防治烟草赤星病的化学制剂相比,本发明一种枯草芽孢杆菌SL-19菌剂用于以菌治菌的生物防治方式,来针对性的防治烟草赤星病。本发明中的枯草芽孢杆菌SL-19具有生长速度快,定植和繁殖能力强,营养需求简单,对人畜无害、不污染环境等特点,且制得的本发明菌剂制剂稳定,无毒无害、绿色环保、施用方便。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中缺少对烟草赤星病良好防治效果的问题,而提出的一种用于室内装潢的垂直绿化装置。
为了实现上述目的,本发明采用了如下技术方案:烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,枯草芽孢杆菌SL-19保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号CGMCCNo.18089;
制备方法包括以下步骤:
S1、斜面活化扩增培养:将枯草芽孢杆菌SL-19试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于液体培养基中进行活化培养至对数生长期(60小时),制得活化菌群液体;
S2、种子液发酵:将步骤一制得活化菌群液体在以种子罐体积9%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培养,溶氧量为18%,转速230rpm,种子罐的温度32℃,接种发酵菌液39小时后,每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测,直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时,获得发酵菌种,种子罐中的发酵时间为48小时;
S3、发酵培养:将步骤二制得的发酵菌种的9%接种于发酵罐中的NBP培养液中发酵培养,溶氧量为18%,搅拌速度230rpm,发酵罐的温度32℃,接种发酵29小时后,每隔2小时对发酵罐进行发酵质量检测,观察菌含量,直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达50亿/ml以上时,即可将发酵液出罐,进行分装,发酵罐中的发酵时间为48小时,制得枯草芽孢杆菌SL-19菌剂。
在上述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备中,步骤一中的液体培养基组分如下,均为重量百分比:葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.4%,蛋白胨1.2%,氯化钠1.0%,余量为水,pH7.3。
在上述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备中,步骤一中的活化培养条件为:将斜面保存的菌种接种于液体培养基中,32℃,230转/分振荡培养96小时,即为活化菌体。
在上述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备中,步骤二中液体发酵培养基组分如下,均为重量百分比:玉米粉2.1%,蛋白胨2.5%,豆饼粉2.0%,淀粉1.0%,酵母浸膏1.0%,NaCl 3.0%,MgSO4·7H2O0.12%,余量为水,PH7.1。
在上述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备中,步骤三中NBP培养液的组成成分及重量百分比为:牛肉膏3.5%,蛋白胨4.0%,酵母浸膏2.5%,葡萄糖3.5%,NaCl 2.0%,余量为水,pH7.2。
一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,制备的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂用于防治烟草赤星病。
一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,将制备的菌剂与水按质量份1:400混合,用于移栽前将进行土壤喷雾处理,使用量为10g/㎡。
一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,将制备的菌剂与水按质量份1:400混合,用于移栽后用稀释的菌剂进行叶面喷雾,喷雾量为100g/㎡。
与现有的技术相比,本发明的优点在于:
本发明的枯草芽孢杆菌的发酵液对烟草赤星病有很强的抑制作用,与现有的化学制剂相比较,本发明是采用以菌治菌的方式使用枯草芽孢杆菌SL-19制备菌剂,该菌剂相比化学制剂而言,不会产生化学农药残留、环境污染、不会使赤星病病菌产生抗药性,且在成本上更加低廉、在技术工艺上更加便于实施与制备。本发明提出的是一种绿色环保、无毒无害的生防菌剂。
具体实施方式
以下实施例仅处于说明性目的,而不是想要限制本发明的范围。
实施例
烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,枯草芽孢杆菌SL-19保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号CGMCCNo.18089;
制备方法包括以下步骤:
S1、斜面活化扩增培养:将枯草芽孢杆菌SL-19试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于液体培养基中进行活化培养至对数生长期(60小时),制得活化菌群液体;
S2、种子液发酵:将步骤一制得活化菌群液体在以种子罐体积9%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培养,溶氧量为18%,转速230rpm,种子罐的温度32℃,接种发酵菌液39小时后,每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测,直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时,获得发酵菌种,种子罐中的发酵时间为48小时;
S3、发酵培养:将步骤二制得的发酵菌种的9%接种于发酵罐中的NBP培养液中发酵培养,溶氧量为18%,搅拌速度230rpm,发酵罐的温度32℃,接种发酵29小时后,每隔2小时对发酵罐进行发酵质量检测,观察菌含量,直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达50亿/ml以上时,即可将发酵液出罐,进行分装,发酵罐中的发酵时间为48小时,制得枯草芽孢杆菌SL-19菌剂。
步骤一中的液体培养基组分如下,均为重量百分比:葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.4%,蛋白胨1.2%,氯化钠1.0%,余量为水,pH7.3;
步骤一中的活化培养条件为:将斜面保存的菌种接种于液体培养基中,32℃,230转/分振荡培养96小时,即为活化菌体;
步骤二中液体发酵培养基组分如下,均为重量百分比:玉米粉2.1%,蛋白胨2.5%,豆饼粉2.0%,淀粉1.0%,酵母浸膏1.0%,NaCl 3.0%,MgSO4·7H2O 0.12%,余量为水,PH7.1;
步骤三中NBP培养液的组成成分及重量百分比为:牛肉膏3.5%,蛋白胨4.0%,酵母浸膏2.5%,葡萄糖3.5%,NaCl 2.0%,余量为水,pH7.2;
上述制备方法制备的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,制备的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂用于防治烟草赤星病
使用时将制备的菌剂与水按质量份1:400混合,用于移栽前将进行土壤喷雾处理,使用量为10g/㎡;也可用于移栽后用稀释的菌剂进行叶面喷雾,喷雾量为100g/㎡。
试验例
选择九块土壤性状一致、肥力均匀中等,且赤星病较重的烟草田,分组为基础对照田1、2、3、试验对照田1、2、3和菌液试验田A、B、C,基础对照田1、2、3分别做如下处理:
在移栽3天之前使用清水对土壤喷雾处理,待土壤处理完成后,烟草品种为红花大金元,将生长至苗叶期的烟草移栽之处理后的对照田1、2、3,待移栽缓苗之后每隔7天使用清水、市售化学制剂以及枯草芽孢杆菌SL-19稀释剂(下简称稀释菌剂)进行叶面喷雾一次,共施用3次;
试验对照田1、2、3分别做如下处理:
在移栽3天之前使用市售化学制剂对土壤喷雾处理,待土壤处理完成后,烟草品种为红花大金元,将生长至苗叶期的烟草移栽之处理后的试验对照田1、2、3,待移栽缓苗之后每隔7天使用清水、市售化学制剂以及稀释菌剂进行叶面喷雾一次,共施用3次;
菌液试验田A、B、C分别做如下处理:
在移栽3天之前使用稀释菌剂对土壤喷雾处理,待土壤处理完成后,烟草品种为红花大金元,将生长至苗叶期的烟草移栽之处理后的菌液试验田A、B、C,待移栽缓苗之后每隔7天使用清水、市售化学制剂以及稀释菌剂进行叶面喷雾一次,共施用3次;
试验结果见下表。
从上表可以明显看出,菌液试验田C在移栽前和移栽后均施用本发明的菌液,最终的发病率仅有4.80%,相比较对照组和市售化学制剂组都有着明显的下降,且发病率下降程度为2-7倍左右;本发明枯草芽孢杆菌SL-19菌剂对赤星病的最终防效可达83.78%。
基础对照田3在移栽前使用清水喷雾处理,移栽后喷施本发明的菌液,相对于基础对照田1和基础对照田2均有着明显的发病率下降;
同样地,试验对照田3在移栽前使用市售化学制剂,移栽后喷施本发明的菌液,相对于试验对照田1和试验对照田2均有着明显的发病率下降;
菌液试验田C在移栽前和移栽后均施用本发明的菌液,相对于菌液试验田A和菌液试验田B同样有着明显的发病率下降。
综上,本发明提出的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂对烟草赤星病具有良好的防治效果。
以上所述实施例仅表达了本发明的优选实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制,应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形、改进及替代,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,其特征在于,枯草芽孢杆菌SL-19保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号CGMCCNo.18089;
制备方法包括以下步骤:
S1、斜面活化扩增培养:将枯草芽孢杆菌SL-19试管斜面接种于平板进行菌落活化和扩增、将扩增好的菌落平板接种于液体培养基中进行活化培养至对数生长期(60小时),制得活化菌群液体;
S2、种子液发酵:将步骤一制得活化菌群液体在以种子罐体积9%接种于种子罐中的发酵培养液中发酵培养,溶氧量为18%,转速230rpm,种子罐的温度32℃,接种发酵菌液39小时后,每隔2小时对种子罐中的发酵液进行发酵质量检测,直到发酵液菌体生长比较饱满即将出现芽孢时,获得发酵菌种,种子罐中的发酵时间为48小时;
S3、发酵培养:将步骤二制得的发酵菌种的9%接种于发酵罐中的NBP培养液中发酵培养,溶氧量为18%,搅拌速度230rpm,发酵罐的温度32℃,接种发酵29小时后,每隔2小时对发酵罐进行发酵质量检测,观察菌含量,直到发酵罐中发酵液中的活孢子数达50亿/ml以上时,即可将发酵液出罐,进行分装,发酵罐中的发酵时间为48小时,制得枯草芽孢杆菌SL-19菌剂。
2.根据权利要求1所述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,其特征在于,步骤一中的液体培养基组分如下,均为重量百分比:葡萄糖1.0%,酵母浸粉1.4%,蛋白胨1.2%,氯化钠1.0%,余量为水,pH7.3。
3.根据权利要求1所述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,其特征在于,步骤一中的活化培养条件为:将斜面保存的菌种接种于液体培养基中,32℃,230转/分振荡培养96小时,即为活化菌体。
4.根据权利要求1所述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,其特征在于,步骤二中液体发酵培养基组分如下,均为重量百分比:玉米粉2.1%,蛋白胨2.5%,豆饼粉2.0%,淀粉1.0%,酵母浸膏1.0%,NaCl 3.0%,MgSO4·7H2O 0.12%,余量为水,PH7.1。
5.根据权利要求1所述的烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂制备,其特征在于,步骤三中NBP培养液的组成成分及重量百分比为:牛肉膏3.5%,蛋白胨4.0%,酵母浸膏2.5%,葡萄糖3.5%,NaCl 2.0%,余量为水,pH7.2。
6.一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,其特征在于,制备的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂用于防治烟草赤星病。
7.一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,其特征在于,将制备的菌剂与水按质量份1:400混合,用于移栽前将进行土壤喷雾处理,使用量为10g/㎡。
8.一种根据权利要求1所述制备方法制备烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌SL-19菌剂的应用,其特征在于,将制备的菌剂与水按质量份1:400混合,用于移栽后用稀释的菌剂进行叶面喷雾,喷雾量为100g/㎡。
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