CN111747789A - 一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用，涉及微生物技术领域，该生物叶面肥由复配菌剂和助剂混合制成。其中，复配菌剂是由发明人精心挑选的芽孢杆菌菌株按照特定比例配置而成，对白粉病、赤星病具有较佳的防治效果，可成为植物内生菌，长期具有防控效果。该生物叶面肥在施用追肥的同时对病害进行防控，部分替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。并且，该生物叶面肥的制备方法简单方便，可以进行规模化的生产，适合进行大面积推广应用。

Description

一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方 法和应用
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体而言，涉及一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用。
背景技术
烟草白粉病是由专性寄生菌二孢白粉菌侵染所致的气传真菌性病害，俗称“上硝”、“上灰”、“发白”或“下霜”。自1919 年泽田兼吉在我国台湾省发现烟草白粉病以来，我国大陆在贵州、云南、山西、四川和广西等地也发现了烟草白粉病。烟草白粉病可发生于烟草整个生育期，主要危害烟草叶片，严重时也可蔓延到茎杆、花枝、萼片上。受害烟叶烘烤后叶色深褐，缺乏弹性和香味，且易破碎，轻则损失10%~20%，重则损失80% 以上，造成严重减产及品质降低。受病害侵染的烟叶，经调制后，颜色棕褐，叶面有明显点状病斑，身份薄，油分少，香气严重缺乏，杂气重，破损度大，造碎率高，工业可用性差，而失去经济价值。
烟草赤星病是由链格孢属真菌侵染引起的叶斑病害，特别是在烟叶采收中后期，成为影响烟叶成熟度的障碍因素。该病具有潜育期短、流行速度快的特点，烟株现蕾后至成熟期为易感病阶段，在环境条件适宜的情况下，短时间内即可大面积发生流行。病害从烟株下部叶片开始发生，随着叶片的成熟，病斑自下而上逐步发展，病斑质脆易破，病害严重时，许多病斑相互连接合并成大斑块枯焦。严重时还会危害茎杆、花梗和蒴果，影响烟叶产量和品质，不利于优质烟叶生产，但至今除了化学农药外，尚无有效的防治手段。
烟草白粉病和赤星病是烟草生产过程中主要的两种叶部真菌病害，当前这两种病害的控制最主要依赖于化学农药。由于化学农药防治存在农药残留、病原菌易产生抗性等缺点，同时易降低烟叶品质，破坏生态环境和影响人类健康。所以，从烟叶安全和对环境友好角度出发，一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物制剂对烟草产业的绿色可持续发展尤为重要。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，其配方科学合理，在施用追肥的同时对白粉病、赤星病等病害进行防控，部分替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。
本发明的第二目的在于提供一种上述生物叶面肥的制备方法，其操作简单方便，可以快速高效地制备上述生物叶面肥。
本发明的第三目的在于提供一种上述生物叶面肥的应用，其可以被用在烟草的白粉病和赤星病的防治中，具有较高的应用价值。
本发明的实施例是这样实现的：
一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂10~25份，黄原胶3~5份，EMA 5~10份、600#磷酸酯胺盐 8~15份，D4253~5份，OP-10 3~5份，吐温-20 1~2份，PEG600 0.5~1份，尿素0~0.5份，七水硫酸锌0~0.5份，以及对羟基苯甲酸甲酯0~1份；
其中，芽孢杆菌复配菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌；
贝莱斯芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19886；
枯草芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19887；
第一解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19888；
第二解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19889。
一种上述生物叶面肥的制备方法，其包括：
将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的保存液分别进行菌种活化、菌种纯化、扩大培养，得到贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液混合得到芽孢杆菌复配菌剂。
将芽孢杆菌复配菌剂与黄原胶，EMA，600#磷酸酯胺盐，D425 ，OP-10，吐温-20，PEG600，尿素，七水硫酸锌，以及对羟基苯甲酸甲酯混合，得到生物叶面肥。
一种上述生物叶面肥在治疗烟草的白粉病和赤星病中的应用。
本发明实施例的有益效果是：
本发明实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用，该生物叶面肥由复配菌剂和助剂混合制成。其中，复配菌剂是由发明人精心挑选的芽孢杆菌菌株按照特定比例配置而成，对白粉病、赤星病具有较佳的防治效果，可成为植物内生菌，长期具有防控效果。该生物叶面肥在施用追肥的同时对病害进行防控，部分替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。并且，该生物叶面肥的制备方法简单方便，可以进行规模化的生产，适合进行大面积推广应用。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用进行具体说明。
本发明实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂10~25份，黄原胶3~5份，EMA 5~10份、600#磷酸酯胺盐 8~15份，D4253~5份，OP-10 3~5份，吐温-20 1~2份，PEG600 0.5~1份，尿素0~0.5份，七水硫酸锌0~0.5份，以及对羟基苯甲酸甲酯0~1份；
其中，芽孢杆菌复配菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌；
其中，贝莱斯芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19886；
枯草芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19887；
第一解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19888；
第二解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19889。
其中，贝莱斯芽孢杆菌于2020年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：中国北京，分类命名为：贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis，保藏编号为：CGMCC No.19886。
枯草芽孢杆菌于2020年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：中国北京，分类命名为：枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis，保藏编号为：CGMCC No.19887。
第一解淀粉芽孢杆菌于2020年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：中国北京，分类命名为：解淀粉芽孢杆菌 Bacillusamyloliquefaciens，保藏编号为：CGMCC No.19888。
第二解淀粉芽孢杆菌于2020年5月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：中国北京，分类命名为：解淀粉芽孢杆菌 Bacillusamyloliquefaciens，保藏编号为：CGMCC No.19889。
以上四株菌株经过发明的精心筛选，在按照特定比例进行复配之后，对于烟草的白粉病和赤星病具有明显的防治效果。再次基础上，在配合合适的助剂以及营养物质得到的生物叶面肥可以在施用追肥的同时对病害进行防控，部分替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。
其中，黄原胶，又名汉生胶，是由野油菜黄单胞杆菌( Xanthomnas campestris)以碳水化合物为主要原料(如玉米淀粉) 经发酵工程生产的一种作用广泛的微生物胞外多糖。它具有独特的流变性，良好的水溶性、对热及酸碱的稳定性、与多种盐类有很好的相容性，作为增稠剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂。
EMA，又称蓖麻油聚氧乙烯醚，为黄色粘稠液体，耐硬水、酸、碱及无机盐。用于乳化和溶解油及其它水不溶性的物质。非离子型增溶剂。作为水不溶性药物或其他脂溶性药物的增溶剂和乳化剂应用在半固体及液体制剂中。
600#磷酸酯胺盐，主要成分为苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚磺酸盐，是一种分散剂，泡沫底，可自然降解。
D425，主要成分为烷基萘磺酸盐甲醛缩合物，是在水悬浮剂和干剂型中使用的分散剂，具有良好的分散性、悬浮性、耐硬水、PH值适用范围广、高温稳定性好、低泡、抗结块、应用广谱等特点。
OP-10，主要成分为聚氧乙烯辛基苯酚醚-10，具有优良的匀染、乳化、防蜡、缓蚀、润湿、扩散，抗静电性等特性。
吐温-20，是山梨醇及其一失水、双失水化合物与月桂酸酯按每摩尔山梨醇及其脱水化合物与约20摩尔的环氧乙烷在碱性条件下缩合而制得。酯化用的月桂酸中可能含有其它脂肪酸。吐温20为水包油（O/W）型乳化剂，可作增溶剂、扩散剂、稳定剂、抗静电剂、润滑剂。
PEG600，又名聚乙二醇600，具有优良的润滑性、保湿性、分散性、粘接剂、抗静电剂及柔软剂等。
在上述助剂的配合使用下，该生物叶面肥具备较佳的分散性、均一性，并且粘度适中，更加适合作为叶面肥释放。在此基础上，对羟基苯甲酸甲酯作为防腐剂，增加生物叶面肥的防腐性能。再辅以尿素，七水硫酸锌等无机养分，可做到在防治病害的同时，促进烟叶生长。
进一步地，芽孢杆菌复配菌剂中，贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的活菌数比为1：0.5~1.5：0.5~1.5：0.5~1.5；优选地，贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的活菌数比为1：1：1：1；更为优选地，芽孢杆菌复配菌剂的有效活菌数大于7.5×108 cfu/g。按照上述比例配置下，芽孢杆菌复配菌剂的防治效果较佳。
本发明实施例还提供了一种上述生物叶面肥的制备方法，其包括：
S1. 将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的保存液分别进行菌种活化、菌种纯化、扩大培养，得到贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
S2. 将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液混合得到芽孢杆菌复配菌剂。
S3. 将芽孢杆菌复配菌剂与黄原胶，EMA，600#磷酸酯胺盐，D425 ，OP-10，吐温-20，PEG600，尿素，七水硫酸锌，以及对羟基苯甲酸甲酯混合，得到生物叶面肥。
其中，菌种活化是将保存液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基，在33~37℃，150~180rpm的搅拌转速下，培养48~60 h，得到活化培养液；保存液与牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为1：90~120。其中，按照重量份数计，牛肉膏蛋白胨液体培养基包括：牛肉膏2~4份、蛋白胨8~11份、氯化钠4~6份、水900~1000份；牛肉膏蛋白胨液体培养基的pH为6~8。
菌种纯化是将活化培养液接种到牛肉膏蛋白胨固体平板进行划线培养，在33~37℃下培养72~80 h，选取菌落特征符合的单一较大菌落作为活化后的种子菌落。其中，按照重量份数计，牛肉膏蛋白胨固体平板包括：牛肉膏2~4份、蛋白胨8~11份、氯化钠4~6份、琼脂15~25份、水900~1000份；牛肉膏蛋白胨固体平板的pH为6~8。
扩大培养是将种子菌落接种到牛肉蛋白胨液体培养基中，在33~37℃，150~180rpm的搅拌转速下，培养60~72 h，得到种子液；再将种子液按照2~2.5‰的比例接种到发酵培养液中，在33~37℃，100~150 rpm的搅拌转速下，培养36~48 h，得到发酵液。其中，按照重量份数计，发酵培养液包括：黄豆粉2~4份、蔗糖0.5~1份、牛肉膏1~3份、玉米粉2~3份、碳酸钙0.8~1.5份、鱼粉1~2份、磷酸二氢钾0.05~0.1份、磷酸氢二钾0.05~0.1份、氯化钠1~5份、消泡剂0.1~0.3份；发酵培养液的pH为6.8~7.5。
上述制备方法的操作简单，可以快速高效地培养所需的发酵液。需要说明的是，为了避免引入杂菌，上述步骤中的所有转移操作均采用无菌接种环进行操作。此外，对于各培养基的pH调节采用盐酸和氢氧化钠来进行。
本发明实施例还提供了一种上述生物叶面肥在治疗烟草的白粉病和赤星病中的应用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂10份，黄原胶5份，EMA 5份、600#磷酸酯胺盐 15份，D425 3份，OP-103份，吐温-20 2份，PEG600 1份，尿素0.5份，七水硫酸锌0.5份，以及对羟基苯甲酸甲酯1份；
其制备步骤如下：
S1. 菌种活化：将-80℃条件下采用甘油保存的贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的保存液各取0.1 ml分别接种到10 ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为35℃、转速为160 rpm条件下活化培养48 h，得到四株菌种的活化培养液；
其中，牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成成分及其配比为：牛肉膏3.0 g、蛋白胨10.0 g、氯化钠5.0 g、水1000 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6~8之间。
S2. 菌种纯化：采用灭菌接种环将活化培养液中的菌种分别接种到牛肉膏蛋白胨固体平板上，进行纯化划线培养，在温度为35℃的培养箱中培养3天，选取菌落特征符合功能菌种菌落特征的单一较大菌落作为活化后的种子菌落；
其中，牛肉膏蛋白胨固体平板的组成成分及其配比为：牛肉膏3.0 g、蛋白胨10.0 g、氯化钠5.0 g、琼脂25 g、水1000 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6-8之间。
S3. 扩大培养：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的种子菌落接种到50 ml 牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为35℃、转速为160 rpm条件下活化培养72 h，得四株菌种的种子液；按照2‰的比例将菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为35℃，转速为120 rpm条件下培养36 h，得到四株菌种的发酵液；
其中，按重量份数计，发酵培养液的组成为：黄豆粉2份、蔗糖1份、牛肉膏1份、玉米粉3份、碳酸钙0.8份、鱼粉2份、磷酸二氢钾0.05份、磷酸氢二钾0.1份、氯化钠1份、消泡剂0.3份。采用盐酸、氢氧化钠调节pH至6.8~7.5。
S4：复配：将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液，按照活菌数比为1：1：1：1进行复配，得到芽孢杆菌复配菌剂。
S5：添加助剂：将上述芽孢杆菌复配菌剂与黄原胶，EMA，600#磷酸酯胺盐，D425 ，OP-10，吐温-20，PEG600，尿素，七水硫酸锌，以及对羟基苯甲酸甲酯混合，得到所需的生物叶面肥。
实施例2
本实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂25份，黄原胶3份，EMA 10份、600#磷酸酯胺盐 8份，D425 5份，OP-105份，吐温-20 1份，PEG600 0.5份，七水硫酸锌0~0.3份，以及对羟基苯甲酸甲酯0.5份；
其制备步骤如下：
S1. 菌种活化：将-80℃条件下采用甘油保存的贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的保存液各取0.1 ml分别接种到10 ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为37℃、转速为180 rpm条件下活化培养60 h，得到四株菌种的活化培养液；
其中，牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成成分及其配比为：牛肉膏4.0 g、蛋白胨8.0 g、氯化钠6.0 g、水900 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6~8之间。
S2. 菌种纯化：采用灭菌接种环将活化培养液中的菌种分别接种到牛肉膏蛋白胨固体平板上，进行纯化划线培养，在温度为37℃的培养箱中培养80 h，选取菌落特征符合功能菌种菌落特征的单一较大菌落作为活化后的种子菌落；
其中，牛肉膏蛋白胨固体平板的组成成分及其配比为：牛肉膏4.0 g、蛋白胨8.0 g、氯化钠6.0 g、琼脂20 g、水900 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6-8之间。
S3. 扩大培养：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的种子菌落接种到50 ml 牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为37℃、转速为180 rpm条件下活化培养60 h，得四株菌种的种子液；按照2.5‰的比例将菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为37℃，转速为150 rpm条件下培养48 h，得到四株菌种的发酵液；
其中，按重量份数计，发酵培养液的组成为：黄豆粉4份、蔗糖0.5份、牛肉膏3份、玉米粉2份、碳酸钙1.5份、鱼粉1份、磷酸二氢钾0.1份、磷酸氢二钾0.05份、氯化钠3份、消泡剂0.1份。采用盐酸、氢氧化钠调节pH至6.8~7.5。
S4：复配：将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液，按照活菌数比为1：0.5：0.5：1.5进行复配，得到芽孢杆菌复配菌剂。
S5：添加助剂：将上述芽孢杆菌复配菌剂与黄原胶，EMA，600#磷酸酯胺盐，D425 ，OP-10，吐温-20，PEG600，七水硫酸锌，以及对羟基苯甲酸甲酯混合，得到所需的生物叶面肥。
实施例3
本实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂20份，黄原胶4份，EMA 7份、600#磷酸酯胺盐 10份，D425 4份，OP-104份，吐温-20 2份，PEG600 1份，以及尿素0.3份；
其制备步骤如下：
S1. 菌种活化：将-80℃条件下采用甘油保存的贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的保存液各取0.1 ml分别接种到10 ml的牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为33℃、转速为150 rpm条件下活化培养48 h，得到四株菌种的活化培养液；
其中，牛肉膏蛋白胨液体培养基的组成成分及其配比为：牛肉膏2.0 g、蛋白胨11.0 g、氯化钠4.0 g、水1000 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6~8之间。
S2. 菌种纯化：采用灭菌接种环将活化培养液中的菌种分别接种到牛肉膏蛋白胨固体平板上，进行纯化划线培养，在温度为34℃的培养箱中培养72 h，选取菌落特征符合功能菌种菌落特征的单一较大菌落作为活化后的种子菌落；
其中，牛肉膏蛋白胨固体平板的组成成分及其配比为：牛肉膏2.0 g、蛋白胨11.0 g、氯化钠4.0 g、琼脂23 g、水1000 ml，采用盐酸和氢氧化钠调节pH在6-8之间。
S3. 扩大培养：用无菌接种环刮取一环第一步中活化的种子菌落接种到50 ml 牛肉膏蛋白胨液体培养基中，在温度为34℃、转速为150 rpm条件下活化培养72 h，得四株菌种的种子液；按照2‰的比例将菌种种子液接种到发酵罐中的发酵培养液中，在温度为34℃，转速为100 rpm条件下培养36 h，得到四株菌种的发酵液；
其中，按重量份数计，发酵培养液的组成为：黄豆粉2份、蔗糖1份、牛肉膏2份、玉米粉2份、碳酸钙1份、鱼粉1.5份、磷酸二氢钾0.08份、磷酸氢二钾0.06份、氯化钠5份、消泡剂0.2份。采用盐酸、氢氧化钠调节pH至6.8~7.5。
S4：复配：将贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液，按照活菌数比为1：1.5：0.5：1.5进行复配，得到芽孢杆菌复配菌剂。
S5：添加助剂：将上述芽孢杆菌复配菌剂与黄原胶，EMA，600#磷酸酯胺盐，D425 ，OP-10，吐温-20，PEG600，以及尿素混合，得到所需的生物叶面肥。
试验例1
采用实施例1所提供的生物叶面肥，测试其对于烟草白粉病和赤星病的抑制效果，具体的测试方法如下：
1.试验地点：
曲靖市烟区。
2.试验材料及方法
示范品种：当地常规主栽烟草
示范面积：40亩
供试肥料：云南省微生物发酵工程研究中心有限公司生产的具有防治烟草白粉病、赤星病功能的生物叶面肥。
示范设计：在曲靖市植烟区中任意选40亩作为示范地点，以3个不同稀释倍数的生物叶面肥作为对比，不添加菌剂的普通叶面肥作为对照，处理后隔5d，再进行处理，处理3次，隔20d调查，每株烟草去掉脚叶后，自下而上调查10片，管理方式按照当地推荐模式进行。
施用方式：叶面喷施
处理方案如下：
处理 具体方案
处理1 不添加菌剂叶面肥1000g/亩，稀释100倍使用
处理2 生物叶面肥1000g/亩，稀释100倍使用
处理3 生物叶面肥1000g/亩，稀释150倍使用
处理4 生物叶面肥1000g/亩，稀释200倍使用
对经过处理的区域，每处理区域采用5点取样法，每点20株，以叶片为单位分级调查，计算病叶率和病情指数。
白粉病以叶片为单位分级调查：
0级：无病斑。
1级：病斑面积占叶片面积的5%以下。
3级：病斑面积占叶片面积的6%~10%。
5级：病斑面积占叶片面积的11%~20%。
7级：病斑面积占叶片面积的21%~40%。
9级：病斑面积占叶片面积的41%以上。
赤星病：以叶片为单位分级调查。
0级：全叶无病。
1级：病斑面积占叶片面积的1%以下。
3级：病斑面积占叶片面积的2%~5%。
5级：病斑面积占叶片面积的6%~10%。
7级：病斑面积占叶片面积的11%~20%。
9级：病斑面积占叶片面积的21%以上。
病叶率（%）=发病叶片/全部叶片
病情指数=∑（各级病叶数×病级代表值）×100/（调查总叶数×9）
防治效果（%）＝［（对照病情指数－处理病情指数）/对照病情指数］×100。
调查结果如表1所示。
表1. 白粉病和赤星病防治效果
Figure RE-648460DEST_PATH_IMAGE001
由表1可以看出，采用本发明实施例所提供的生物叶面肥，对于白粉病的防治效果可以达到63.99%，随着稀释程度的增加，效果略有降低，但是整体保持在60%之上。同样地，其对于赤星病的防治效果可以达到31.8%，随着稀释程度的增加，效果略有降低，但是整体保持在25%之上。由此可见，本发明实施例所提供的生物叶面肥，对于烟草的白粉病和赤星病具有较佳的防治效果。
试验例2
采用本专利实施例1中的产品进行验证：针对大规模爆发的烟草白粉病、赤星病，化合农药与生物叶面肥配合使用对烟草白粉病、赤星病的防治效果.
1试验地点
曲靖市植烟区
2供试材料
生物叶面肥、10%多抗霉素WP
3供试作物
当地常用品种烟草
4试验设计与方法
在曲靖市植烟区中任意选40亩作为处理地，分别在处理前和处理后5天进行统计，每处理区采用5点取样法，每点取样20株烟草，每株烟草去掉脚叶后，自下而上调查10片，管理方式按照当地推荐模式进行。具体处理如下：
处理1：10%多抗霉素WP（稀释300倍）和生物叶面肥（稀释150倍）
处理2：10%多抗霉素WP（稀释300倍）
处理3：生物叶面肥（稀释150倍）
处理4：空白对照
2.5调查方法
白粉病以叶片为单位分级调查：
0级：无病斑
1级：病斑面积占叶片面积的5%以下。
3级：病斑面积占叶片面积的6%~10%。
5级：病斑面积占叶片面积的11%~20%。
7级：病斑面积占叶片面积的21%~40%。
9级：病斑面积占叶片面积的41%以上。
赤星病：以叶片为单位分级调查。
0级：全叶无病
1级：病斑面积占叶片面积的1%以下。
3级：病斑面积占叶片面积的2%~5%。
5级：病斑面积占叶片面积的6%~10%。
7级：病斑面积占叶片面积的11%~20%。
9级：病斑面积占叶片面积的21%以上。
病情指数=∑（各级病叶数×病级代表值）×100/（调查总叶数×9）
防治效果（%）＝［（对照病情指数－处理病情指数）/对照病情指数］×100
试验结果如表2所示。
表2. 白粉病和赤星病防治效果
Figure RE-693776DEST_PATH_IMAGE002
控制病害是保证烟草产量和质量的重要措施之一，由表2可以看出，本试验针对大规模爆发的白粉病、赤星病，以生物叶面肥与10%多抗霉素WP共同进行病害防控，具有较好的防控效果，可以有效控制白粉病、赤星病的爆发，对烟草行业提质增产具有良好的效果。
综上所述，本发明实施例提供了一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥及其制备方法和应用，该生物叶面肥由复配菌剂和助剂混合制成。其中，复配菌剂是由发明人精心挑选的芽孢杆菌菌株按照特定比例配置而成，对白粉病、赤星病具有较佳的防治效果，可成为植物内生菌，长期具有防控效果。该生物叶面肥在施用追肥的同时对病害进行防控，部分替代化学农药的使用，减少环境污染，提高作物安全性。并且，该生物叶面肥的制备方法简单方便，可以进行规模化的生产，适合进行大面积推广应用。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种具有防治白粉病、赤星病功能的生物叶面肥，其特征在于，按照重量份数计，其包括：
芽孢杆菌复配菌剂10~25份，黄原胶3~5份，EMA 5~10份、600#磷酸酯胺盐 8~15份，D4253~5份，OP-10 3~5份，吐温-20 1~2份，PEG600 0.5~1份，尿素0~0.5份，七水硫酸锌0~0.5份，以及对羟基苯甲酸甲酯0~1份；
其中，所述芽孢杆菌复配菌剂包括贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、第一解淀粉芽孢杆菌、以及第二解淀粉芽孢杆菌；
所述贝莱斯芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19886；
所述枯草芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19887；
所述第一解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19888；
所述第二解淀粉芽孢杆菌在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.19889。
2. 根据权利要求1所述的生物叶面肥，其特征在于，所述芽孢杆菌复配菌剂中，所述贝莱斯芽孢杆菌、所述枯草芽孢杆菌、所述第一解淀粉芽孢杆菌、以及所述第二解淀粉芽孢杆菌的活菌数比为1：0.5~1.5：0.5~1.5：0.5~1.5；优选地，所述贝莱斯芽孢杆菌、所述枯草芽孢杆菌、所述第一解淀粉芽孢杆菌、以及所述第二解淀粉芽孢杆菌的活菌数比为1：1：1：1；优选地，所述芽孢杆菌复配菌剂的有效活菌数为7.0×108~8.0×108 cfu/g。
3.一种如权利要求1或2所述的生物叶面肥的制备方法，其特征在于，包括：
将所述贝莱斯芽孢杆菌、所述枯草芽孢杆菌、所述第一解淀粉芽孢杆菌、以及所述第二解淀粉芽孢杆菌的保存液分别进行菌种活化、菌种纯化、扩大培养，得到所述贝莱斯芽孢杆菌、所述枯草芽孢杆菌、所述第一解淀粉芽孢杆菌、以及所述第二解淀粉芽孢杆菌的发酵液；
将所述贝莱斯芽孢杆菌、所述枯草芽孢杆菌、所述第一解淀粉芽孢杆菌、以及所述第二解淀粉芽孢杆菌的所述发酵液混合得到所述芽孢杆菌复配菌剂；
将所述芽孢杆菌复配菌剂与所述黄原胶，所述EMA，所述600#磷酸酯胺盐，所述D425 ，所述OP-10，所述吐温-20，所述PEG600，所述尿素，所述七水硫酸锌，以及所述对羟基苯甲酸甲酯混合，得到所述生物叶面肥。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，菌种活化是将所述保存液接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基，在33~37℃，150~180 rpm的搅拌转速下，培养48~60 h，得到活化培养液；所述保存液与所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的体积比为1：90~120。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，按照重量份数计，所述牛肉膏蛋白胨液体培养基包括：牛肉膏2~4份、蛋白胨8~11份、氯化钠4~6份、水900~1000份；所述牛肉膏蛋白胨液体培养基的pH为6~8。
6. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，菌种纯化是将所述活化培养液接种到牛肉膏蛋白胨固体平板进行划线培养，在33~37℃下培养72~80 h，选取菌落特征符合的单一较大菌落作为活化后的种子菌落。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，按照重量份数计，所述牛肉膏蛋白胨固体平板包括：牛肉膏2~4份、蛋白胨8~11份、氯化钠4~6份、琼脂15~25份、水900~1000份；所述牛肉膏蛋白胨固体平板的pH为6~8。
8. 根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，扩大培养是将所述种子菌落接种到所述牛肉蛋白胨液体培养基中，在33~37℃，150~180 rpm的搅拌转速下，培养60~72 h，得到种子液；再将所述种子液按照2~2.5‰的比例接种到发酵培养液中，在33~37℃，100~150rpm的搅拌转速下，培养36~48 h，得到所述发酵液。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，按照重量份数计，所述发酵培养液包括：黄豆粉2~4份、蔗糖0.5~1份、牛肉膏1~3份、玉米粉2~3份、碳酸钙0.8~1.5份、鱼粉1~2份、磷酸二氢钾0.05~0.1份、磷酸氢二钾0.05~0.1份、氯化钠1~5份、消泡剂0.1~0.3份；所述发酵培养液的pH为6.8~7.5。
10.一种如权利要求1或2所述的生物叶面肥在治疗烟草的白粉病和赤星病中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111748498A (zh) * 2020-07-08 2020-10-09 云南省烟草公司曲靖市公司 一种具有防治白粉病、赤星病功能的芽孢杆菌复配菌剂及其制备方法和应用
CN114478109A (zh) * 2021-12-27 2022-05-13 云南云叶化肥股份有限公司 一种生物叶面肥及其制备方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105733991A (zh) * 2016-03-30 2016-07-06 贵州大学 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治烟草白粉病中的应用
CN107827630A (zh) * 2017-11-28 2018-03-23 陈德鑫 促生和防治烟草叶部病虫害的叶面肥及其制备方法
CN108641981A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 十堰市农业科学院 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用
CN108658681A (zh) * 2018-08-01 2018-10-16 贵州大学 一种烟草高效叶面菌肥及其制备方法与应用
CN108707012A (zh) * 2018-06-30 2018-10-26 贵州大学 一种烟草叶面菌肥及其制备方法与应用
CN108753664A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 广东省农业科学院农业资源与环境研究所 一种生物防治剂、生物有机肥及其应用
CN110564655A (zh) * 2019-10-17 2019-12-13 中国烟草总公司陕西省公司 烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌sl-19菌剂制备及应用
CN111100820A (zh) * 2020-01-15 2020-05-05 河北省农林科学院植物保护研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌hmb28023及其应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105733991A (zh) * 2016-03-30 2016-07-06 贵州大学 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其在防治烟草白粉病中的应用
CN107827630A (zh) * 2017-11-28 2018-03-23 陈德鑫 促生和防治烟草叶部病虫害的叶面肥及其制备方法
CN108641981A (zh) * 2018-05-17 2018-10-12 十堰市农业科学院 一株生防芽孢杆菌鉴定及应用
CN108753664A (zh) * 2018-06-28 2018-11-06 广东省农业科学院农业资源与环境研究所 一种生物防治剂、生物有机肥及其应用
CN108707012A (zh) * 2018-06-30 2018-10-26 贵州大学 一种烟草叶面菌肥及其制备方法与应用
CN108658681A (zh) * 2018-08-01 2018-10-16 贵州大学 一种烟草高效叶面菌肥及其制备方法与应用
CN110564655A (zh) * 2019-10-17 2019-12-13 中国烟草总公司陕西省公司 烟草赤星病生物防治的枯草芽孢杆菌sl-19菌剂制备及应用
CN111100820A (zh) * 2020-01-15 2020-05-05 河北省农林科学院植物保护研究所 一种贝莱斯芽孢杆菌hmb28023及其应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111748498A (zh) * 2020-07-08 2020-10-09 云南省烟草公司曲靖市公司 一种具有防治白粉病、赤星病功能的芽孢杆菌复配菌剂及其制备方法和应用
CN114478109A (zh) * 2021-12-27 2022-05-13 云南云叶化肥股份有限公司 一种生物叶面肥及其制备方法

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