CN110470772A

CN110470772A - Waters hilic色谱柱的应用及食品中展青霉素的检测方法

Info

Publication number: CN110470772A
Application number: CN201910886600.5A
Authority: CN
Inventors: 熊刚; 游青; 陈儒梅; 陈高水; 李平
Original assignee: Xiamen Branch Detection Technology Co Ltd
Current assignee: Xiamen Branch Detection Technology Co Ltd
Priority date: 2019-09-19
Filing date: 2019-09-19
Publication date: 2019-11-19

Abstract

本发明公开了WATERS HILIC色谱柱的应用及食品中展青霉素的检测方法。具体是WATERS HILIC色谱柱在食品展青霉素的检测中的应用；食品中展青霉素的检测方法包括如下步骤：制备展青霉素标准溶液；在食品样品中加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液；将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将所述清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得待测液；将所述展青霉素标准溶液与所述待测液分别加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测。本发明所述的展青霉素的检测方法，应用WATERS HILIC色谱柱，目标物和色谱柱之间的分离效果好、灵敏度高。

Description

WATERS HILIC色谱柱的应用及食品中展青霉素的检测方法

技术领域

本发明涉及食品检测分析技术领域，具体涉及WATERS HILIC色谱柱的应用及食品中展青霉素的检测方法。

背景技术

展青霉素又叫棒曲霉素(patulin)，是由青霉属、曲霉属和根霉属等10多种真菌代谢产生的真菌毒素，化学名称为4-羟基-4H-呋[3，2-c]吡喃-2(6H)-酮(4-hydroxy-4H-furo[3，2-c]pyran-2(6H)-one)，分子式为C₇H₆O₄。该物质具有神经毒性、遗传毒性、致畸和潜在的免疫毒性，对部分动物的半致死量为6-1000mg/kg。自20世纪50年代开始，美国、欧洲及中国等对展青霉素污染状况进行的研究调查显示这种真菌毒素不仅大量污染粮食、饲料，而且对水果及其制品的污染程度相当严重。由于展青霉素对人类可能造成的潜在危害，世界上许多国家都把苹果产品中展青霉素的限量值规定为50μg/L，将果汁中展青霉素的最大残留量规定为20-50μg/L。

我国国家标准检测方法为GB5009.185，其中第一种方法是同位素内标液相色谱质谱法，第二种方法为液相色谱法。这两种方法中，采用C18色谱柱及与其配合的流动相，目标物和色谱柱之间的分离效果不高，则检测灵敏度不够。

发明内容

基于此，本发明有必要提供一种WATERS HILIC色谱柱安装在液质联用仪在食品展青霉素的检测中的应用，采用WATERS HILIC色谱柱，目标物和色谱柱之间的分离效果好、灵敏度高。

本发明还提供一种目标物和色谱柱之间的分离效果好、灵敏度高的食品中展青霉素的检测方法。

为了实现本发明的目的，本发明采用以下技术方案：

一种WATERS HILIC色谱柱在食品展青霉素的检测中的应用。

将WATERS HILIC色谱柱结合液质联用仪，该色谱柱的特点是流动相必须用高比例的有机相，且对展青霉素保留很强，可较好地分离展青霉素与杂质，由于流动相中有机相比例很高，离子化效率大大提高，加强了展青霉素在色谱柱上的保留，使展青霉素和杂质达到较好的分离效果，展青霉素的灵敏度大大提高。

其中一些实施例中，所述WATERS HILIC色谱柱安装在液质联用仪中使用。

其中一些实施例中，所述WATERS HILIC色谱柱的粒度为1.7μm，长度为100mm，内径为2.1mm。

本发明还提供一种食品中展青霉素的检测方法，包括如下步骤：

制备展青霉素标准溶液；

在食品样品中加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液；

将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将所述清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得待测液；

将所述展青霉素标准溶液与所述待测液分别加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测。

上述的食品中展青霉素的检测方法，将WATERS HILIC色谱柱结合液质联用仪，该色谱柱的特点是流动相必须用高比例的有机相，且对展青霉素保留很强，可较好地分离展青霉素与杂质，由于流动相中有机相比例很高，离子化效率大大提高，加强了展青霉素在色谱柱上的保留，使展青霉素和杂质达到较好的分离效果，展青霉素的灵敏度大大提高。

其中一些实施例中，当需要检测所述展青霉素的含量时，检测方法包括如下步骤：

制备不同浓度的展青霉素标准溶液；

将不同浓度的所述标准溶液加入所述装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中检测，以所述展青霉素标准溶液的浓度为横坐标，以所述液质联用仪的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线；

配制待测液，将所述待测液分别加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测；

按照如下公式计算所述食品样品中的展青霉素的含量：

X＝ρ×V/m

其中，X为所述食品样品中展青霉素的含量，ρ为所述食品样品中展青霉素的浓度，V为所述食品样品的最终定容体积，m为所述食品样品的质量。

其中一些实施例中，所述待测液检测完成后，计算所述展青霉素的含量之前，或在所述待测液检测之前，还具有如下步骤：采用空白样品加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液；将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将所述清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得空白待测液；将所述空白待测液加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测，得到空白样品色谱峰面积，将所述待测液的色谱峰面积与所述空白样品色谱峰面积相减，代入所述标准工作曲线计算所述展青霉素的含量。

其中一些实施例中，所述制备展青霉素标准溶液的步骤具体为：用乙腈溶液溶解展青霉素标准品，得储备溶液，取部分所述储备溶液，用乙酸溶液溶解。

其中一些实施例中，所述展青霉素同位素内标工作液的制备方法为：移取展青霉素同位素内标，用乙酸溶液溶解。

其中一些实施例中，所述离子交换柱为混合型阴离子交换柱。

其中一些实施例中，所述待测液的制备方法具体为：

将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后，依次采用加入乙酸铵溶液和水洗脱离子交换柱，弃去洗脱液，抽干离子交换柱，再用甲醇洗脱离子交换柱，收集洗脱液于离心管中，并加入乙酸混匀，得清洗液，将所述清洗液用氮气缓缓吹至近干或吹干，再用乙酸溶液溶解，然后过滤，取滤液得待测液。

其中一些实施例中，所述液质联用仪中，液相色谱条件为：流动相用乙腈和含0.1％甲酸的乙酸铵；色谱条件为：电喷雾离子源、负离子扫描、多反应监测、4000V电喷雾电压、100V毛细管电压、辅助器压力35psi以及11L/min的反吹气体流速。

其中一些实施例中，在食品样品中加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液的步骤具体是：所述将食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，然后加入水，制成待净化液；当所述食品样品为固体或半流体时，所述将食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液的步骤具体是：将所述食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，再加入水、果胶酶，混匀,室温避光保存预设时间，再加入乙酸乙酯混匀，静置后分层，移取上层浓缩至干，并加入乙酸溶液溶解，得待净化液。

附图说明

图1是采用WATERS HILIC色谱柱检测的展青霉素标准溶液的色谱图；

图2是采用WATERS HILIC色谱柱检测的苹果泥样品的色谱图；

图3是采用WATERS HILIC色谱柱检测的加标回收的色谱图；

图4是采用C18色谱柱检测的展青霉素标准溶液的色谱图；

图5是采用C18色谱柱检测的苹果泥样品的色谱图；

图6是采用C18色谱柱检测的加标回收的色谱图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

本发明提供一种WATERS HILIC色谱柱在食品展青霉素的检测中的应用。

其中的WATERS HILIC色谱柱是WATERS公司生产的亲水作用色谱柱HILIC。

该色谱柱的特点是必须用高比例的有机相(乙腈的比例一般要达到90％以上)，且对展青霉素保留很强，可很好的达到展青霉素与杂质的分离效果，由于流动相中有机相比例很高，离子化效率大大提高，加强了展青霉素在色谱柱上的保留，使展青霉素和杂质达到较好的分离效果，展青霉素的灵敏度大大提高。检测时，可以在较短的时间内出锋，更容易定性、定量检测出食品中的展青霉素。

进一步地，本发明提供一种WATERS HILIC色谱柱安装在液质联用仪在食品展青霉素的检测中的应用。采用WATERS HILIC色谱柱加上液相色谱和质谱联用，可以提升检测精度。

WATERS HILIC色谱柱的型号为WATERS HILIC1.7μm，100mm*2.1mm，即WATERSHILIC色谱柱的粒度为1.7μm，长度为100mm，内径为2.1mm。该型号的色谱柱，可以配合液质联用仪，其粒度匹配食品例如水果、酒等食品的粒度，可以较好地配合食品来检测其中的展青霉素。

本发明还保护一种食品中展青霉素的检测方法，包括如下步骤：

制备展青霉素标准溶液；

将待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得待测液；

将展青霉素标准溶液与待测液分别加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测。

如果试样提取物中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过允许的相对偏差(相对丰度＞50％，允许±20％的偏差；相对丰度20％-50％，允许±25％偏差；相对丰度10％-20％，允许±30％的偏差；相对丰度＜10％，允许±50％偏差，则可判断样品中存在目标物展青霉素。

上述的检测方法，可以定性检测，也可以定量检测。

当需要检测展青霉素的含量时，上述的检测方法包括如下步骤：

制备不同浓度的展青霉素标准溶液；

按照上述方法配制待测液，将所述待测液分别加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测；

按照如下公式计算所述食品样品中的展青霉素的含量：

X＝ρ×V/m

按照该方法，可以定量检测出食品中的展青霉素的具体含量，以据此控制食品中的展青霉素含量，防止展青霉素对人体的污染。

其中的食品，可以是固体、半固体、流体等食品。例如，水果、果汁、果酒等用水果制成的各种食品。

定量检测时，还可以进行加标回收检测步骤，加标回收检测步骤所得的峰面积与样品检测步骤所得的峰面积相减，则为精确的含量。加标回收步骤具体是：采用空白样品按照前述方法制成待净化液和待测液，然后加入液质联用仪再次进行测定。即，采用空白样品加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液；将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将所述清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得空白待测液；将所述空白待测液加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测，得到空白样品色谱峰面积，将所述待测液的色谱峰面积与所述空白样品色谱峰面积相减，代入所述标准工作曲线计算所述展青霉素的含量。

一实施例中，制备展青霉素标准溶液的步骤具体为：用乙腈溶液溶解展青霉素标准品，得储备溶液，取部分储备溶液，用乙酸溶液溶解。该展青霉素标准溶液可在-20℃下冷冻保存备用，有效期6个月。用乙腈溶液溶解以及乙酸溶液溶解时均可采用定量的容器定容至刻度，这样可以根据体积计算出展青霉素标准溶液的溶度，以便于计算展青霉素的含量。展青霉素可以较好地溶解于乙腈溶液中，便于后期用色谱柱分析。

当然，除乙腈外，也可以采用其他的有机物来溶解展青霉素标准品，再用除乙酸外的其他的溶液来溶解储备溶液，只要能够达到溶解展青霉素的目的，与WATERS HILIC色谱柱能够较好地配合分离杂质即可。例如，该有机物是甲醇。

一实施例中，展青霉素同位素内标工作液的制备方法为：移取展青霉素同位素内标，用乙酸溶液溶解。该展青霉素同位素内标工作液可在4℃下避光保存,有效期3个月。当然，展青霉素同位素内标也可以采用除乙酸外的其他有机物溶解。该有机物最好与溶解储备溶液的有机物相同，从而不会影响分析结果。

一实施例中，在食品样品中加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液的步骤，可以提取出其中的展青霉素。具体是：将食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，然后加入水，制成待净化液。加入水后便于提取展青霉素。不同的食品样品，可采用不同的方法提取，从而制成待净化液。

例如，当食品样品为澄清的果汁时，粉碎后直接加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液。

当食品样品为果酒时，粉碎后直接加入展青霉素同位素内标工作液，然后加入水，制成待净化液。因果酒中大部分为酒精，而加入水后可以将水果成分溶解在水中，便于提取。

当食品样品为固体或半流体时，粉碎后加入展青霉素同位素内标工作液，再加入水、果胶酶，混匀,室温避光保存预设时间，再加入乙酸乙酯混匀，静置后分层，移取上层浓缩至干，并加入乙酸溶液溶解，得待净化液。当食品中加入果胶酶，可以酶解其中的有效组分，再加入乙酸乙酯可以溶解有效组分，除去其他杂质。

当食品为固体、半固体等性状时，需要预先进行粉碎。其中，低粘度样品用高速粉碎机粉碎。果丹皮等高粘度样品经液氮冻干后立即用高速粉碎机粉碎。

一实施例中，离子交换柱为混合型阴离子交换柱。该阴离子交换柱为预先活化好的阴离子交换柱，可以吸附洗脱其中的阴离子，除去其中的部分杂质。，离子交换柱洗脱时控制样液的流速在1mL/min-5mL/min。例如以约3mL/min的速度稳定过柱。

具体地，待测液的制备方法为：将待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后，依次采用加入乙酸铵溶液和水洗脱离子交换柱，弃去洗脱液，抽干离子交换柱，再用甲醇洗脱离子交换柱，收集洗脱液于离心管中，并加入乙酸混匀，得清洗液，将所述清洗液用氮气缓缓吹至近干或吹干，再用乙酸溶液溶解，然后过滤，取滤液得待测液。采用乙酸铵、水及乙酸多次洗脱，可以较彻底地洗脱离子交换柱中除洗脱的阴离子外的其他物质，防止目标物被洗脱，提高定性和定量检测的精准度。

一实施例中，液质联用仪中，流动相为乙腈和含0.1％甲酸的乙酸铵，色谱条件为：电喷雾离子源、负离子扫描、多反应监测、4000V电喷雾电压、100V毛细管电压、辅助器压力35psi以及11L/min的反吹气体流速。流动相为乙腈和含0.1％甲酸的乙酸铵，其有机相含量较高，另可以与溶解样品的有机物相匹配，提高检测精度。其他的色谱条件可以匹配WATERSHILIC色谱柱，提升检测效率。流动相当然也可以是其他的有机物，其与前述溶解样品的有机物相同。

以下将通过实施例来进一步说明本发明的实施方式。

实施例

本实施例所述的展青霉素的检测方法，包括如下步骤：

制备标准溶液：用2mL乙腈溶解展青霉素标准品1.0mg后,移入10mL的容量瓶,乙腈定容至刻度。溶液转移至试剂瓶中后,在-20℃下冷冻保存,备用,有效期6个月。

制备标准工作液(1μg/mL)：准确吸取100μL展青霉素标准储备溶液至10mL容量瓶中,用乙酸溶液定容至刻度。溶液转移至试剂瓶中后,在4℃下避光保存,有效期3个月。

制备展青霉素同位素内标工作液(1μg/mL)：准确移取展青霉素同位素内标(25μg/mL)0.40mL至10mL容量瓶中,用乙酸溶液定容。在4℃下避光保存,备用,3个月内有效。

标准系列工作溶液:分别准确移取标准工作液适量至10mL容量瓶中，加入500μL1.0μg/mL的同位素内标工作液,用乙酸溶液定容至刻度,配制展青霉素浓度为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL及50ng/mL系列标准溶液。

试样制备：固体或半固体样品用高速粉碎机粉碎，混合均匀后取100g用于检测；液体样品直接取100g用于检测。

试样提取：称取2g澄清果汁(准确至0.01g),加入50μL同位素内标工作液混匀待净化；或称取1g苹果酒(准确至0.01g),加入50μL同位素内标工作液,加水至10mL混匀后待净化；或，称取1g固体、半流体试样(准确至0.01g)于50mL离心管中，加入50μL同位素内标工作液，静置片刻后，再加入10mL水与75μL果胶酶混匀，室温下避光放置过夜后，加入10mL乙酸乙酯,涡旋混合5min，在6000r/min下离心5min，移取乙酸乙酯层至100mL梨形烧瓶，再用10mL乙酸乙酯提取一次，合并两次乙酸乙酯提取液，在40℃水浴中用旋转蒸发仪浓缩至干,以5.0mL乙酸溶液溶解残留物，待净化处理。

试样净化：将待净化液转移至预先活化好的混合型阴离子交换柱中，控制样液以约3mL/min的速度稳定过柱。上样完毕后,依次加入3mL的乙酸铵溶液和3mL水淋洗，弃去洗脱液，抽干混合型阴离子交换柱，加入4mL甲醇洗脱，控制流速约3mL/min,收集洗脱液。在洗脱液中加入20μL乙酸，置于40℃下用氮气缓缓吹至近干，再用乙酸溶液定容至1.0mL,涡旋30s溶解残留物，0.22μm滤膜过滤，上机测定。标准溶液的色谱图参照图1，样品的色谱图参照图3。

上机测试：取2μL试样提取物注入液质联用仪检测，具体测试条件如下：

液相色谱条件：色谱柱：WATERS HILIC1.7μm,100*2.1mm；流动相：乙腈+5mmol/L乙酸铵(含0.1％甲酸)梯度洗脱；流速：0.3mL/min；进样量2μL

质谱条件：离子源：电喷雾离子源；扫描方式：负离子扫描；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：4000V；毛细管电压：100V；辅助器压力：35psi；反吹气：11L/min；展青霉素离子对：152.9/108.7(定量)152.9/65。展青霉素同位素内标离子对：159.9/114.9。

结果判定：如果试样提取物中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致；试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过允许的相对偏差(相对丰度＞50％，允许±20％的偏差；相对丰度20％-50％，允许±25％偏差；相对丰度10％-20％，允许±30％的偏差；相对丰度＜10％，允许±50％偏差)，则可判断样品中存在展青霉素。

定量测量：分别用90％乙腈水稀释标准工作液，配置标液曲线5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、40ng/mL及50ng/mL，各含展青霉素内标50ng/mL(该溶液临用现配)，以标准工作溶液进样，以工作溶液浓度为横坐标，面积为纵坐标绘制标准工作曲线，待测样液等体积进样测定，内标法定量；样品溶液中的展青霉素含量应在标准曲线浓度范围之内。

加标回收：采用空白样品进行加标，其它步骤同相对应类型的样品前处理方法；空白样品除不称取样品外，其它步骤同相对应类型的样品处理方法。色谱图参照图5。

结果计算，采用上述公式计算，计算结果保留三位有效数字。

以下将采用苹果泥为例子，分别采用WATERS HILIC色谱柱和C18色谱柱配合液质联用仪对相同量的样品进行检测，其他检测条件不变，将检测结果进行对比，结果见表一。WATERS HILIC色谱柱检测的标准溶液检测色谱图参照图1，样品色谱图参照图2，加标回收色谱图参照图3；C18色谱柱的标准溶液检测色谱图参照图4，样品色谱图参照图5，加标回收色谱图参照图6。

表一

从表一可以看出，用HILIC色谱柱替代C18色谱柱，展青霉素在WATERSHILIC色谱柱上的响应值：展青霉素在C18色谱柱上的响应值＝256，用WATERSHILIC色谱柱代替C18色谱柱分析展青霉素，响应值可以提高200倍以上，且苹果泥中添加10μg/kg水平时，回收率接近100％，且通过保留时间对比可以看出，展青霉素在C18柱上保留很弱，目标物会和杂质共流出，杂质会影响目标物的离子化效率，在WATERSHILIC色谱柱上保留较强，目标物和杂质达到了较好的分离，可以提高目标物的离子化效率。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims

1.一种WATERS HILIC色谱柱在食品展青霉素的检测中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述WATERS HILIC色谱柱安装在液质联用仪中使用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述WATERS HILIC色谱柱的粒度为1.7μm，长度为100mm，内径为2.1mm。

4.一种食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

制备展青霉素标准溶液；

5.根据权利要求4所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，当需要检测所述展青霉素的含量时，检测方法包括如下步骤：

制备不同浓度的展青霉素标准溶液；

按照如下公式计算所述食品样品中的展青霉素的含量：

X＝ρ×V/m

6.根据权利要求5所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，所述待测液检测完成后，计算所述展青霉素的含量之前，或在所述待测液检测之前，还具有如下步骤：采用空白样品加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液；将所述待净化液转移至离子交换柱中，离子交换后洗脱离子交换柱，得清洗液，将所述清洗液吹至近干或吹干，再次溶解后过滤，取滤液得空白待测液；将所述空白待测液加入装有WATERS HILIC色谱柱的液质联用仪中进行检测，得到空白样品色谱峰面积，将所述待测液的色谱峰面积与所述空白样品色谱峰面积相减，代入所述标准工作曲线计算所述展青霉素的含量。

7.根据权利要求4所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，所述制备展青霉素标准溶液的步骤具体为：用乙腈溶液溶解展青霉素标准品，得储备溶液，取部分所述储备溶液，用乙酸溶液溶解；所述展青霉素同位素内标工作液的制备方法为：移取展青霉素同位素内标，用乙酸溶液溶解。

8.根据权利要求4所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，所述待测液的制备方法具体为：

9.根据权利要求4-8任一项所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，所述液质联用仪中，液相色谱条件为：流动相用乙腈和含0.1％甲酸的乙酸铵；色谱条件为：电喷雾离子源、负离子扫描、多反应监测、4000V电喷雾电压、100V毛细管电压、辅助器压力35psi以及11L/min的反吹气体流速。

10.根据权利要求4-8任一项所述的食品中展青霉素的检测方法，其特征在于，所述在食品样品中加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液的步骤具体是：将食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，然后加入水，制成待净化液；当所述食品样品为固体或半流体时，所述将食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，制成待净化液的步骤具体是：将所述食品样品粉碎，加入展青霉素同位素内标工作液，再加入水、果胶酶，混匀,室温避光保存预设时间，再加入乙酸乙酯混匀，静置后分层，移取上层浓缩至干，并加入乙酸溶液溶解，得待净化液。