CN110448636A - 一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液制备方法及应用 - Google Patents

一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液制备方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于中药领域，具体涉及一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液的制备方法。首先查阅历代文献中有关经典名方百合地黄汤剂量、道地药材产地、经方制备方法的记载，制备出经典名方百合地黄汤“标准煎液”；百合地黄汤干预后增加了单胺类神经递质5‑HT、NE和DA含量、降低抑制性神经递质含量并增加兴奋性神经递质含量；最后，利用高效液相色谱仪分析其药效活性成分，为经典名方百合地黄汤治疗抑郁症功效机制及遣药组方提供现代科学依据，具有较高的理论意义和临床价值。

Description

一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液制备方法及应用
技术领域
本发明属于中药领域，具体涉及一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液的制备方法及应用。
背景技术
抑郁症是一种以情感消沉、思维迟钝、言语动作减少或迟缓为主要临床症状的精神类疾病，包括产后抑郁症、更年期抑郁症、精神性抑郁症等多种类型，严重影响着患者的生活。世界卫生组织的一项联合研究表明，抑郁症已经成为中国疾病负担的第二大病。抑郁症病因复杂，发病机制存在多种假说，据此研发的各类抗抑郁药物仅使部分患者受益，且存在临床症状改善缓慢、易复发及副作用多等缺陷，这提示现有的抑郁症发病机制不足以解释这种多病因异质性疾病。而辨证论治指导下的中药复方，以其多成分、多靶点、整体调节等特点，契合因机体复杂性而引发疾病的本质，在抑郁症防治方面显现出独特优势和良好前景。
中医学虽无抑郁症之名，但历代文献中可见较多与本病症状相近的描述，如《金匮要略》中所记载的百合病。百合病所表现出的饮食、精神、睡眠、行为异常等与抑郁症主要临床表现非常相似。本病多由热病余邪不解，熏灼心肺，或忧思不断，阴血暗耗而致心肺阴虚内热，虚热扰神所致诸症百出。治当清心润肺、滋阴安神，方用百合地黄汤。临床应用和基础研究发现百合地黄汤治疗抑郁症具有佳效。
发明内容
为了规范中医经典名方的制备，明确经方的作用机制及药效活性成分，加强中药质量标准研究显得尤为重要，因此本申请提供了一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液的制备方法，通过确定相关的古代计量单位，选用改良的LPS诱导的内热型抑郁模型，考察百合地黄汤“标准煎液”抗抑郁作用及其药理机制。
一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液的制备方法，包括以下步骤：
（1）参考仲景原方百合地黄汤用法用量：百合七枚/擘、生地黄汁一升，上以水洗百合，渍一宿，当白沫出，去其水，更以泉水二升，煎取一升，去滓，内地黄汁，煎取一升五合，分温再服，中病，勿更服，大便当如漆；
（2）标准：东汉一升认定为 200 ml；所用生地黄即现代所言鲜地黄，选取河南省焦作地区鲜地黄；湖北省神农架的百合鳞茎做为实测药材；
（3）按照（2）的标准，采用（1）的量，得到标准煎液。
上述的制备方法，具体步骤：
（1）河南省焦作地区鲜地黄，经过榨汁，得到鲜地黄榨汁；
（2）湖北省神农架的鲜百合鳞茎，水洗，渍一宿，以泉水煮取获得百合水煎液；
（3）将步骤（2）的煎液加入到步骤（1）中，煮取，获得百合地黄汤的标准煎液。
上述百合地黄汤标准煎液的具体成分分析，包括以下步骤：
（a）百合色谱条件及检测溶液的制备；
流动相为乙腈A－0．05%磷酸水B，洗脱梯度：0～6 min，5%A； 6～15 min，5% ～14%A；15～25 min，14%A；25～30 min，14%～21%A；30～35 min，21%A；35～45 min，21%～36%A；45～51 min，36%A；51～63 min，36%～66.3%A；63～70min，66.3%A；70～83min，663%～100%A；83～90min，90%A)，流速1.0mL/min，柱温30°C，阿魏酸成分检测波长为330 nm，薯蓣皂苷成分检测波长为205 nm。
对照品溶液的制备：
取阿魏酸、薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇均制成浓度为0.0200 mg/mL的对照品溶液，摇匀，超声使之完全溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，取续滤液，即得；
供试品溶液的制备：
阿魏酸、薯蓣皂苷测定供试品溶液的制备：400g鲜百合，掰成片状，洗净擦干表面水分，精密称定，砂锅煎熬1.5 h，浓缩成200 ml，置蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2 g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
（b）地黄色谱条件及检测溶液的制备
流动相为1：99的乙腈-0.1%磷酸水溶液，检测波长为210nm，流速1.0mL/min，进样量10μL，柱温25℃；毛蕊花糖苷流动相为甲醇A-0.1%磷酸水溶液B，梯度洗脱程序为0～5min，40%～43% A；5min～10min，43%～56% A；10min～20min，56%～60%A；20min～25min，60%～40%A；检测波长334nm，流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温25℃；
对照品溶液的制备：
取梓醇对照品适量，精密称定，加流动相制成浓度为0.5mg/ml的溶液，摇匀，超声5分钟使之完全溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成浓度为0.06μg/ml的溶液，溶解过滤，即得。
供试品溶液的制备：
梓醇、毛蕊花糖苷测定供试品溶液的制备：400g鲜地黄药材，洗净擦干表面水分，去除须根后，切成小块，精密称定，置榨汁机榨汁，出汁200 ml，将汁置于蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
上述成分测定方法判定的百合地黄标准煎液的质量。
上述具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液作为治疗抑郁症的药物的应用。
首先查阅历代文献中有关经典名方百合地黄汤剂量、道地药材产地、经方制备方法的记载，制备出经典名方百合地黄汤“标准煎液”；其次选用LPS诱导的抑郁模型，探究经典名方百合地黄汤“标准煎液”抗抑郁作用及其药理机制；最后，利用高效液相色谱仪分析其药效活性成分，为经典名方百合地黄汤治疗抑郁症功效机制及遣药组方提供现代科学依据，具有较高的理论意义和临床价值。
与LPS模型组相比，百合地黄汤干预后增加了单胺类神经递质5-HT、NE和DA含量、降低抑制性神经递质含量并增加兴奋性神经递质含量，以双重调节恢复了GABA和谷氨酸平衡、降低促炎性细胞因子Il-1β、IL-6和TNF-α水平。高通量测序结合生物信息学初步分析显示，与模型组相比，百合地黄汤（仲景原方）干预后增加前额叶皮层中与GABA能神经元信息编码输出基因GAD-67、VGAT、GAT-3 mRNAs的表达（图4-5）。
我们利用高效液相色谱技术分析出鲜百合和鲜地黄汁中四四种抗抑郁药效活性成分，定性确定其含量之后，分别在同一中药混合液中测量四种物质的含量，我们发现薯蓣皂苷和阿魏酸含量在复方煎液中相比于鲜品中成分传递呈递减趋势，而毛蕊花糖苷和梓醇则呈递增趋势（表1-2）。
附图说明
图1 百合地黄汤标准煎液制备过程；
图2：百合地黄汤（仲景原方）干预后明显改善LPS诱导的抑郁样行为。百合地黄汤（仲景原方）和氟西汀组的治疗均明显增加糖水摄取量（A），缩短强迫游泳（B）和悬尾（C）不动时间及提升Y迷宫（D）中社交行为。*代表与Control组比较，*P<0.01，**P<0.01，***P<0.001；#代表与LPS+Saline比较，#P<0.01，##P<0.01，###P<0.001, (每组9-12只大鼠)，。LPS+Saline：LPS+生理盐水组；LPS+Flu：LPS+氟西汀组；LPS+LBRD：LPS+百合地黄汤（仲景原方）组；LPS+XDF：LPS+现代百合地黄汤组。
图3 造模及干预时间表。
图 4百合地黄汤（仲景原方）干预后改变LPS诱导抑郁样行为小鼠血清中神经递质及细胞因子。与LPS+Saline组相比，百合地黄汤（仲景原方）干预后显著增加模型鼠中5-HT（A）、NE（B）、DA（C）、GABA（D）神经递质含量，降低谷氨酸（E）、皮质酮（F）、Il-1β（G）、IL-6（H）及TNF-α（I）水平。*代表与Control组比较，*P<0.01，**P<0.01，***P<0.001；#代表与LPS+Saline比较，#P<0.01，##P<0.01，###P<0.001, （每组9-12只大鼠）。LPS+Saline：LPS+生理盐水组；LPS+Flu：LPS+氟西汀组；LPS+LBRD：LPS+百合地黄汤（仲景原方）组。
图 5：各组大鼠前额叶mRNAs表达情况。（A）利用高通量测序检测不同方式干预后小鼠前额叶 mRNA 的表达谱。筛选出任何每组间差异倍数≥1.5倍的基因进行聚类分析。（B）与LPS+Saline相比，百合地黄汤（仲景原方）干预后前额叶皮层中差异表达基因的热图，(每组四只大鼠)。
具体实施方式
实施例1
标准煎液的制备方法，包括以下步骤：
（1）选取河南焦作地区鲜地黄，经过多次榨汁，得出鲜地黄出汁率约为50%，即400 g 鲜地黄榨汁约200 ml。选取湖北省神农架的百合鳞茎做为实测药材。测量后得出，百合鳞茎鲜时7 枚（水洗，渍一宿）约400 g，晒干后约重175 g。
（2）七个湖北省神农架地区的鲜百合鳞茎，（水洗，渍一宿）约400 g，以400 ml泉水煮取获得 200 ml百合水煎液；
（3）加200 ml现榨河南省焦作的鲜地黄根 (约400g鲜地黄榨取获得)混合进一步煮取，获得300 ml百合地黄汤的标准煎液。
实施例2
1. 百合色谱条件及检测溶液的制备
流动相为乙腈( A)-0．05%磷酸水(B)，洗脱梯度(0～6 min，5%A; 6～15 min，5% ～14%A;15～25 min，14%A;25～30 min，14%～21%A;30～35 min，21%A;35～45 min，21%～36%A;45～51 min，36%A;51～63 min，36%～66．3%A;63～70min，66．3%A;70～83min，66．3%～100%A;83～90min，90%A)，流速1.0mL/min，柱温30°C，阿魏酸成分检测波长为330 nm，薯蓣皂苷成分检测波长为205 nm，进样20μL。
对照品溶液的制备：
取阿魏酸、薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇均制成浓度为0.0200 mg/mL的对照品溶液，摇匀，超声5分钟使之完全溶解，微孔滤膜（0.45 μm油膜）滤过，取续滤液，取续滤液，即得[27]。
供试品溶液的制备：
阿魏酸、薯蓣皂苷测定供试品溶液的制备：鲜百合(鲜百合药材掰成片状，洗净擦干表面水分)400g，精密称定，砂锅煎熬1.5 h，浓缩成200 ml，置蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2 g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜(0.45 μm油膜）滤过，取续滤液，即得。
2. 地黄色谱条件及检测溶液的制备
流动相为乙腈-0.1%磷酸（1：99）水溶液，检测波长为210nm，流速1.0mL/min，进样量10μL，柱温25℃；毛蕊花糖苷流动相为甲醇(A)－0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱程序为0～5min，40%～43% A;5min～10min，43%～56% A；10min～20min，56%～60%A；20 min～25min，60%～40%A。检测波长334 nm，流速1.0 mL/min，进样量20μL，柱温25℃。
对照品溶液的制备：
取梓醇对照品适量，精密称定，加流动相制成浓度为0.5mg/ml的溶液，摇匀，超声5分钟使之完全溶解，微孔滤膜（0.45μm水膜）滤过，取续滤液，即得；取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成浓度为0.06μg/ml的溶液，溶解过滤（同上述梓醇操作）即得。
供试品溶液的制备：
梓醇、毛蕊花糖苷测定供试品溶液的制备：鲜地黄(鲜地黄药材洗净擦干表面水分，去除须根后，切成小块) 400 g，精密称定，置榨汁机榨汁，出汁200 ml，将汁置于蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2 g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用
甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜(0.45 μm油膜）滤过，取续滤液，即得。
结果
取同一样品3份置于样品瓶中，按上述色谱条件进行测定，样品出峰时间与标准品大致吻合，在此条件下与其他物质能有效分离。利用外标法以峰面积计算，计算出薯蓣皂苷和阿魏酸含量，结果见表1。
表1 供试品中薯蓣皂苷和阿魏酸的含量
取同一样品3份置于样品瓶中，按上述色谱条件进行测定，测得样品出峰时间与标准品大致吻合，在此条件下与其他物质能有效地分离。利用外标法以峰面积计算，计算出梓醇和毛蕊花糖苷含量，结果见表2。
表2 供试品中梓醇和毛蕊花糖苷的含量
对比例1
现代百合地黄汤（XDF）的制备过程：百合45 g（干品），生地45g（干品），泉水煎煮2次，每次30 min，合并提取液300 ml，备用。
效果实施例1
按体表面积法换算成大鼠的等效剂量150 g·kg-1，按照每只大鼠 10 ml·kg-1每日行灌胃给药，采用改良脂多糖方法（Lipopolysaccharide，LPS）构建内热型抑郁模型，造模同时连续给药2周，氟西汀做阳性对照。实验结果如图 2所示百合地黄汤“标准煎液”能够改善LPS诱导的抑郁样行为。通过查阅历代医学古籍，我们团队对百合地黄汤的处方组成、剂量、药材产地进行考证，制备“标准煎液”，验证抗抑郁功效，为经典名方百合地黄汤复方制剂简化注册提供参考。
我们在第1天至第14天，给予LPS模型组、氟西汀阳性对照组、百合地黄汤组处理组的大鼠腹腔注射LPS，剂量为0.3mg/kg，每次注射0.5ml，空白对照组只做上述动作，不给予相应药物注射。
空白对照组：即Control组，常规饲养于如上实验室条件下，从实验第4天至17天，给予与百合地黄汤等剂量生理盐水灌胃。
LPS模型组即：LPS+Saline组，从实验第4天至第17天，给予与百合地黄汤等剂量生理盐水灌胃。
百合地黄汤处理组即：LPS +LBRD组，从实验第4天至第17天，给予百合地黄汤95g/kg剂量灌胃，按照体表面积法计算灌胃量。
现代百合地黄汤方处理组即：LPS+XDF组，从实验第4天至第17天，给予百合地黄汤95g/kg剂量灌胃，按照体表面积法计算灌胃量。
氟西汀阳性对照组：即LPS+Flu组，从实验第4天至第17天，给予氟西汀10 mg/kg剂量灌胃，按照体表面积法计算灌胃量。
造模及治疗时间表如图3所示。
糖水偏好测试（SPT）
每个笼子准备普通自来水和现配制的1%的蔗糖水各一瓶，瓶壁擦干，用电子天平称重后放置于RVC笼子里，大鼠自由饮水4小时后，轻轻将左右两瓶位置交换，大鼠正常活动4小时后，擦干瓶壁并再次称重，统计实验进行8小时内大鼠两种水的摄取量，并计算出糖水偏好度。
强迫游泳实验（FST）
将大鼠轻放入玻璃缸中，用摄像头记录下大鼠6 min内的挣扎情况。利用程序对进行后4 min大鼠维持不动的时间等指标进行统计。
悬尾实验（TST）
实验选取夜间进行，保证大鼠活动正常。将大鼠距尾部末端约5cm处固定，使其倒吊于距地面30cm左右的横杆上。固定后大鼠会因克服不舒服体位而挣扎，挣扎一段时间后会出现间断性不动，显示绝望状态。每只大鼠均悬尾6min，首先适应2min，因此只记录后4min内大鼠不动时间总和。
Y迷宫（Y-maze）
Y迷宫实验分为两步：第一步先将好奇臂隔离住，将实验大鼠放置在中央区，老鼠可在其他两个臂自由活动，适应5分钟后取出；第二步在新奇臂一侧放置大鼠，并用程序记录大鼠自由活动过程。每只大鼠结束后用酒精擦拭仪器，以避免上一只老鼠的干扰。实验完毕后，使用软件分析大鼠在新奇臂滞留的时间与三个臂时间总和的比例。
结果
与空白对照组相比，LPS模型组SD大鼠在糖水偏好（SPT）值显著降低，摄入量减少（p<0.01）；其次，与空白对照组相比，LPS模型组SD大鼠肛温升高（p<0.01），证明LPS有急性致热炎症反应，由此进一步实践说明LPS所诱导大鼠抑郁模型为内热型证候，结果见图4 A, E。
与LPS模型组相比，百合地黄汤（仲景原方）干预后显著增加糖水摄取量、缩短强迫游泳和悬尾不动时间及提高Y迷宫中社交行为时间，具有良好的抗抑郁功效，且功效优于百合地黄汤现代方，结果详见图4 A, B, C, D, E。
实施效果例2
1. 细胞因子检测方法
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，在小试管中进行稀释。
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl，待测样品孔中先加样品稀释液40µl，然后再加待测样品10µl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5次，拍干。
加酶：每孔加入酶标试剂50µl，空白孔除外。
温育：操作同温育。
洗涤：操作同洗涤。
显色：每孔先加入显色剂A50 µl，再加入显色剂B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。
终止：每孔加终止液50µl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行
2. 高通量测序及生物信息学分析
将大鼠麻醉后在冰上提取前额叶组织，置于-80℃冰箱，利用TRIzol TM LS Reagent提取组织RNA，并对组织RNA进行高通量基因测序。
选择质量＞10 μg，浓度＞200 ng/μl，RIN≥8，28/18s≥1的RNA用于构建转录组和小RNA文库。转录组测序实验步骤：提符合质量的Total RNA使用DNase I消化DNA后，用带有Oligo（dT）的磁珠富集真核生物mRNA，利用打断试剂在Thermomixer中适温中将mRNA随机打断成短小片段（约200 bp），以打断后的mRNA为模板合成一链cDNA，然后配制二链合成反应体系合成二链cDNA，并使用试剂盒纯化回收、粘性末端修复、cDNA的3’末端加上碱基“A”并连接接头，然后进行片段大小选择，最后进行PCR扩增（15 循环）；构建好的文库用Agilent2100 Bioanalyzer和ABI StepOnePlus Real-Time PCRSystem质检合格后，使用IlluminaHiSeqTM 2500测序仪进行测序，双端测序，测序长度100 bp，每个文库得到 4 G Cleandata。
测序得到的原始图像数据经base calling转化为序列数据，我们称之为raw data或raw reads。随后要对raw reads进行质控(QC)，以确定测序数据是否适用于后续分析。在SolexaQA包中实施的DynamicTrim Perl脚本被执行以基于以下标准控制原始测序数据的质量。数据过滤的具体步骤如下:1) 去除含adapter的reads；2) 去除含N（表示无法确定碱基信息）比例大于10%的reads；3) 去除低质量reads (质量值Q≤10的碱基数占整条read的50％以上)。过滤后，剩余的数据称为“Clean read”。然后，我们使用比对软件BWA将cleanreads比对到参考基因组（UCSC mm10），使用Bowtie将clean reads比对到参考基因。我们设定比对碱基错误配对是3。我们用RSEM（RNASeq by Expectation Maximization）工具进行基因以及转录本的表达定量。RSEM用Paired-end的关系、reads的长度、fragment的长度分布、质量值等，基于最大期望的算法建立最大似然的丰度估计模型，用以区分哪些转录本是同一个基因的不同亚型。表达定量的结果以FPKM为单位，具体计算公式如下:
差异表达分析旨在找出不同样本间差异表达的基因（Different expression gene，DEG），并对差异表达基因做后续更深入的功能挖掘，我们采用Noiseq软件包分析用于筛选两组间DEG，组内样品要求是生物学重复。我们筛选DEG的标准是大于1.5倍数的变化和差异检验的概率值（Diverge probability）大于0.8。随后，我们进行了DEGs与生理或生化过程的关联的途径富集分析。在这些富集分析中，我们使用WebGestalt（版本 2）中实现超几何测试并且数据库来源于KEGG数据库。该分析基于全基因组背景下比较DEG中富集的代谢途径或信号转导途径。通过Benjamini-Hochberg方法调整p值。经校正后p值小于0.05的被认为是显著富集。
结果见图4-5。百合地黄汤（仲景原方）干预后改变LPS诱导抑郁样行为大鼠血清中神经递质及细胞因子。与LPS+Saline组相比，百合地黄汤（仲景原方）干预后显著增加模型鼠中5-HT、NE、DA、GABA神经递质含量，降低谷氨酸、皮质酮、Il-1β、IL-6及TNF-α水平。百合地黄汤治疗后明显增加前额叶皮层中与GABA能神经元信息编码输出基因GAD-67、VGAT、GAT-3 mRNAs的表达。由此，百合地黄汤的抗抑郁功能与其恢复抑制性神经递质和兴奋性神经递质平衡，降低促炎性细胞因子水平密不可分。这一发现为百合地黄汤现代化的开发提供实验依据。

Claims (5)

1.一种具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）参考仲景原方百合地黄汤用法用量：百合七枚/擘、生地黄汁一升，上以水洗百合，渍一宿，当白沫出，去其水，更以泉水二升，煎取一升，去滓，内地黄汁，煎取一升五合，分温再服，中病，勿更服，大便当如漆；
（2）标准：东汉一升认定为 200 ml；所用生地黄即现代所言鲜地黄，选取河南省焦作地区鲜地黄；湖北省神农架的百合鳞茎做为实测药材；
（3）按照（2）的标准，采用（1）的量，得到标准煎液。
2.根据权利要1所述的制备方法，其特征在于，具体步骤：
（1）河南省焦作地区鲜地黄，经过榨汁，得到鲜地黄榨汁；
（2）湖北省神农架的鲜百合鳞茎，水洗，渍一宿，以泉水煮取获得百合水煎液；
（3）将步骤（2）的煎液加入到步骤（1）中，煮取，获得百合地黄汤的标准煎液。
3.权利要求1或2所述的百合地黄汤标准煎液的具体成分分析，其特征在于，包括以下步骤：
（a）百合色谱条件及检测溶液的制备；
流动相为乙腈A－0．05%磷酸水B，洗脱梯度：0～6 min，5%A； 6～15 min，5% ～14%A；15～25 min，14%A；25～30 min，14%～21%A；30～35 min，21%A；35～45 min，21%～36%A；45～51 min，36%A；51～63 min，36%～66.3%A；63～70min，66.3%A；70～83min，663%～100%A；83～90min，90%A)，流速1.0mL/min，柱温30°C，阿魏酸成分检测波长为330 nm，薯蓣皂苷成分检测波长为205 nm；
对照品溶液的制备：
取阿魏酸、薯蓣皂苷对照品适量，精密称定，加80%甲醇均制成浓度为0.0200 mg/mL的对照品溶液，摇匀，超声使之完全溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，取续滤液，即得；
供试品溶液的制备：
阿魏酸、薯蓣皂苷测定供试品溶液的制备：400g鲜百合，掰成片状，洗净擦干表面水分，精密称定，砂锅煎熬1.5 h，浓缩成200 ml，置蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2 g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；
（b）地黄色谱条件及检测溶液的制备
流动相为1：99的乙腈-0.1%磷酸水溶液，检测波长为210nm，流速1.0mL/min，进样量10μL，柱温25℃；毛蕊花糖苷流动相为甲醇A-0.1%磷酸水溶液B，梯度洗脱程序为0～5min，40%～43% A；5min～10min，43%～56% A；10min～20min，56%～60%A；20min～25min，60%～40%A；检测波长334nm，流速1.0mL/min，进样量20μL，柱温25℃；
对照品溶液的制备：
取梓醇对照品适量，精密称定，加流动相制成浓度为0.5mg/ml的溶液，摇匀，超声5分钟使之完全溶解，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得；取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成浓度为0.06μg/ml的溶液，溶解过滤，即得；
供试品溶液的制备：
梓醇、毛蕊花糖苷测定供试品溶液的制备：400g鲜地黄药材，洗净擦干表面水分，去除须根后，切成小块，精密称定，置榨汁机榨汁，出汁200 ml，将汁置于蒸发皿中，放水浴锅蒸干，残渣先用研钵磨成粉末，精密称取2g，置于具塞三角瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理，放冷，再称定重量，用甲醇补足所失重量，摇匀，先过滤漏斗滤过，继微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
4.采用权利要求3所述的成分测定方法判定权利要求1所述的百合地黄煎液的质量。
5.权利要求1所述的具有抗抑郁功效的百合地黄汤标准煎液作为治疗抑郁症的药物的应用。
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