CN113759022A - 一种评价地黄中物质量值传递规律的方法及筛选方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，包括：采用评价指标K值对地黄饮片制备获得的样品的各物质的量值传递规律进行评价；其中，K值的获取过程如下：获取采用地黄饮片制备得到的样品的干膏量；获取地黄饮片制备得到的饮片溶液的饮片浓度，样品制备得到的供试品溶液的供试品浓度，饮片溶液以及供试品溶液的指纹图谱或特征图谱，并根据获取的指纹图谱或特征图谱获得相应特征峰的饮片特征峰面积和供试品特征峰面积；采用干膏量、饮片特征峰面积、样品特征峰面积、饮片浓度、供试品浓度计算即得。本发明中K值能够科学地分析标准汤剂的物质量值传递规律，且该K值的获取无需成分对照品的引入，分析更加简便。

Description

一种评价地黄中物质量值传递规律的方法及筛选方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种评价地黄中物质量值传递规律的方法及筛选方法。

背景技术

众所周知，中药制剂保留了中药化学成分多样化的特性，其有效性是多种化学成分共同作用的结果，在中药制剂中各种化学成分应保持一定的相对比例，某些成分过低则难以发挥药效，某些成分过高则有可能产生毒副作用，具有安全隐患；因此应控制化学成分的传递，应描述化学成分传递的量值趋势及量值范围。在工艺过程中要关注各个成分是否存在转化、降解等现象，控制化学成分的传递。当物质成分的量值传递较低，说明该成分在中药制剂中转移较差或者发生分解(即负转化)，若为主要活性成分，在生产中则需要进行控制，保证其临床药效；当物质传递量值传递明显过高时，说明该成分在中药制剂中得到富集或存在物质的正转化过程，则应重点监控，控制富集或正转化程度，保证其临床应用的安全性。因此了解物质量值传递是指导中药制剂的关键通路。

地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的块根，性寒，味甘，归心、肝、肾经，具有清热凉血，养阴生津等功效。环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类成分是地黄主要活性成分及发挥疗效的物质基础，其极性普遍较大，易溶于水，受煎煮时间及温度影响，含量变化显著，且鲜地黄中不含异毛蕊花糖苷，通过一定温度及时间的加工炮制后，产生毛蕊花糖苷向异毛蕊花糖苷转化的现象。因此地黄标准汤剂中必然存在成分的转化。而如何描述饮片-标准汤剂的物质量值传递是标准汤剂研究的重点，也是指导中药配方颗粒及经典方制剂的关键通路。故需要阐明地黄各成分的变化规律，用于后续配方颗粒及经典方制剂的质控。

对于地黄中物质的量值传递规律，现有研究中通常是采用相似度、峰相对保留时间及峰数目等方式进行定性评价，或者采用传统的指标成分转移率进行定量评价。而采用指标成分转移率进行定量评价时需要具有对照品进行参照，对于无对照品参照的成分，并无法有效获取相应物质传递的量值情况，极大地限制物质传递规律的评价。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题在于：克服现有技术中在无对照品参照的情况下，现行方法不能够有效用于地黄中各种物质的量值传递规律的评价的问题；从而提供一种评价地黄中物质量值传递规律的方法；该评价指标无需对照品，也能够有效对地黄饮片制备得到的样品中的物质的量值传递规律进行评价，同时，本发明还公开了采用该评价方法对工艺参数进行筛选的方法。

一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，包括：

采用表示中药中物质量值传递规律的评价指标K值对地黄饮片制备获得的样品的各物质的量值传递规律进行评价；

其中，K值的获取过程如下：

获取采用地黄饮片制备得到的样品的干膏量；

获取地黄饮片制备得到的饮片溶液的饮片浓度，样品制备得到的供试品溶液的供试品浓度，饮片溶液以及供试品溶液的指纹图谱或特征图谱，并根据获取的指纹图谱或特征图谱获得相应特征峰的饮片特征峰面积和供试品特征峰面积；

采用干膏量、饮片特征峰面积、样品特征峰面积、饮片浓度、供试品浓度采用以下计算公式计算即得；

同一物质在相同方法至少两个波长进行检测的情况下，选择最大吸收波长下的特征峰的峰面积进行K值的计算。

所述指纹图谱或特征图谱的色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈或含0.05-0.15％甲酸、0.05-0.15％醋酸或0.05-0.15％磷酸的乙腈溶液为流动相A，以水或含0.05-0.15％甲酸、0.05-0.15％醋酸或0.05-0.15％磷酸的水溶液为流动相B，按下表中规定的梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为250-360nm；柱温43-47℃；流速0.42-0.48ml/min；进样体积2-10μl；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应均不低于5000；

所述饮片溶液的制备过程为：取地黄饮片，精密称定，精密加入水，称重，加热回流或/和超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即可；

所述供试品溶液的制备过程为：取样品，精密称定，精密加入水，称重，加热回流或/和超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

当K值小于0.3时，表示该特征峰所代表的物质不易转移或者发生负转化；K值大于1时，表示该特征峰所代表的物质富集或发生正转化；

对K值小于0.3以及K值大于1的特征峰进行重点评价。

所述样品为中间产物、标准汤剂、中药配方颗粒或经方。

采用上述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法对工艺参数进行筛选的方法，包括：获取地黄饮片的标准汤剂，获取标准汤剂中各个物质所对应的特征峰的K值；获取地黄饮片的样品，获取样品中相应物质所对应的各个特征峰的K值，

筛选出样品中与标准汤剂相同物质所对应的特征峰的K值最为接近的K值，该K值所对应的工艺参数即为最佳工艺。

制备标准汤剂所用的地黄饮片与制备样品所用的地黄饮片为相同批次的地黄饮片。

所述物质包括洋地黄叶苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇中的至少一种。

所述地黄标准汤剂的制备工艺为：取地黄饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量9倍水，500w煮沸后，200w煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量7倍水，500w煮沸后，200w煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，50℃以下条件浓缩，浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥，即得。

所述样品为地黄的标准汤剂时，所述标准汤剂中洋地黄叶苷B的K值为0.28-0.60，毛蕊花糖苷的K值为0.22-0.49，异毛蕊花糖苷的K值为0.52-1.65，6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇的K值为0.23-0.40。

本发明技术方案，具有如下优点：

1.本发明提供了一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，具体为：采用K值对地黄饮片中各物质的量值传递规律进行评价，该K值的变化趋势与有效成分的转移率的变化趋势一致，当K值大于1，表明该类成分至标准汤剂中得到富集或存在物质的正转化过程；当K值小于0.3时，表明该类成分至标准汤剂中不易转移或发生分解(即负转化)；该K值的获取无需成分对照品的引入，在缺少成分对照品的前提下也能够进行多成分分析，同时降低了多因子对于结果分析的影响，由于K值能够科学地分析地黄饮片中的各物质的量值传递规律，因此，可以用于实现地黄中药配方颗粒或其中间产物，或者含地黄饮片的经方或者其中间产物中各类已知或未知物质的量值传递规律的评价，更好的保证地黄配方颗粒或经方的临床应用的安全性。

2.本发明进一步优化了色谱条件的筛选规则，具体的，同一物质在相同方法至少两个波长进行检测的情况下，选择最大吸收波长下的特征峰的峰面积进行K值的计算；并公开了具体的色谱条件，通过色谱条件的筛选，能够使地黄中各物质的K值更加准确的表示出其量值传递规律，检测结果更加准确。

3.本发明还提供了采用上述K值进行工艺参数质控的方法，具体包括：获取地黄饮片的标准汤剂，获取标准汤剂中各个特征峰的K值；获取地黄饮片制备得到的样品，获取样品中各个特征峰的K值，筛选出样品中与标准汤剂对应特征峰的K值最为接近的K值所对应的工艺参数即可；该方法可以有效筛选出与标准汤剂的物质基础更为接近的样品的工艺参数条件，使制备出的样品与标准汤剂的物质基础一致，进而能够保证样品与标准汤剂的一致性，提高临床应用的药效及安全性。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明中地黄饮片的标准汤剂的特征图谱。

图2是本发明中实施例3的特征图谱。

图3是本发明中实施例4的特征图谱。

图4是本发明中实施例5的特征图谱。

图5是本发明中实施例6的特征图谱。

图6是本发明中实施例7的特征图谱。

具体实施方式

实施例1

一种评价中药配方颗粒物质量值传递规律的方法，中药配方颗粒为地黄配方颗粒，具体如下：

1.1特征图谱方法

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为10cm，柱内径为2.1mm，粒径为1.8μm)；以含0.1％甲酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.1％甲酸的水溶液为流动相B，按下表1中的规定进行洗脱；检测波长为334nm；柱温45℃；流速0.45ml/min；进样体积5μl；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应均不低于5000。

表1流动相梯度洗脱程序

参照物溶液的制备：对照品参照物溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加水制成每1ml含毛蕊花糖苷3μg的溶液，摇匀，作为对照品参照物溶液。

对照药材参照物溶液的制备：取地黄对照药材，该对照药材为中检所提供，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，作为对照药材参照物溶液。

供试品溶液的制备：取样品适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水20ml，密塞，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

饮片溶液的制备采用与供试品溶液同批次的中药材饮片，并采用对照药材参照物溶液的制备方法进行制备获得。

其中，供试品溶液中的样品的为标准汤剂，该地黄的标准汤剂制备工艺为：取地黄饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量9倍水，500w煮沸后，200w煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量7倍水，500w煮沸后，200w煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，浓缩(50℃)，浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥，即得。

测定法：精密吸取参照物溶液、饮片溶液、对照药材参照物溶液和供试品溶液各5μl，注入超高效液相色谱仪，测定，即得。

供试品特征图谱中应有9个特征峰，如图1所示，并应与对照药材参照物色谱峰中的9个特征峰相对应，且与毛蕊花糖苷参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5％之内。规定值为：0.44(峰1)、0.76(峰2)、1.00(峰3S)、1.19(峰4)、1.35(峰5)、1.61(峰6)、1.75(峰7)、2.24(峰8)、2.41(峰9)。其中，峰3为毛蕊花糖苷。

1.2K值与含量转移率对比

采用上述特征图谱方法对15批地黄饮片及标准汤剂进行测定并获得特征图谱数据，测定值包括特征峰峰面积、饮片浓度、供试品浓度及出膏率，并根据以下计算公式计算得到K值，并根据现有的对照品对相应特征峰进行含量转移率计算，检测结果如表2-表3所示。上述特征峰峰面积、饮片浓度、供试品浓度及出膏率的计算方法均为采用常规检测和计算方法，在此不再赘述。

表2地黄K值与转移率对比结果

表3

通过质谱分析，对9个特征峰进行结构推断，确定了4个特征峰包括：

环烯醚萜苷类：洋地黄叶苷B(峰1)、6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇(峰6)；苯乙醇苷类：毛蕊花糖苷(峰3)，异毛蕊花糖苷(峰4)。

由表2-3可知，洋地黄叶苷B的K值为0.28-0.60，毛蕊花糖苷的K值为0.22-0.49，异毛蕊花糖苷的K值为0.52-1.65，6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇的K值为0.23-0.40。其中，洋地黄叶苷B的转移率均值为0.43，K值均值为0.41；毛蕊花糖苷的转移率均值为0.36，K值均值为0.35；异毛蕊花糖苷的转移率均值为1.14，K值均值为1.08；6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇的转移率均值为0.30，K值均值为0.32。由于15批次标准汤剂与饮片检测条件存在一定差别，因此K值与含量转移率数值存在区别，但K值与含量转移率的趋势一致，表明在不需要使用对照品的前提下，K值能描述多种成分物质的变化趋势。

通过K值分析，地黄饮片-标准汤剂过程中9个特征峰均进行了传递，除峰4、9外，其余各峰K值均小于1。有文献表明，环烯醚萜苷类成分在不同炮制品中含量有显著差异，结合的糖越多，分解速度越慢，由特征峰化学结构可知，地黄标准汤剂中成分多含双糖结构，表明结合二糖的环烯醚萜苷在汤剂中较为稳定，能够实现其有效的转移；而峰4中有9个批次K值大于1，地黄标准汤剂中同时含有毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷，根据文献报道毛蕊花糖苷与异毛蕊花糖苷在一定条件下可以相互转化，其峰4的K值大于1可能与毛蕊花糖苷在煎煮过程中动态转化为异毛蕊花糖苷有关；峰9未推断出化学结构，但其K大于1，表明有其它成分向其转化。由此可知，地黄标准汤剂中上述成分传递规律符合环烯醚萜苷类及苯乙醇苷类成分的特性，表明K值能够辅助分析饮片-标准汤剂的物质传递情况，利用该传递规律可更好的指导中药配方颗粒的生产和控制。

实施例2

利用实施例1中的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法进行工艺条件筛选的方法，具体如下：

由于标准汤剂是配方颗粒的物质基础，因此以标准汤剂的物质成分变化规律作为配方颗粒的关键工艺属性，能够保证配方颗粒与标准汤剂的一致性。

由实施例1中的表2和表3可知：地黄标准汤剂峰1的K值范围为0.28-0.60，峰2的K值范围为0.26-0.55，峰3的K值范围为0.22-0.49，峰4的K值范围为0.52-1.65，峰5的K值范围为0.22-0.62，峰6的K值范围为0.23-0.40，峰7的K值范围为0.27-0.59，峰8的K值范围为0.12-0.68，峰9的K值范围为0.32-2.74，各峰的K值范围较大。分析主要由于目前原料的质量差异较大导致，若以该范围值作为参照，会出现工艺偏差。鉴于原料质量差异问题不可避免，因此选择符合标准汤剂范围的同批次的中药材饮片制备得到的标准汤剂K值作为参照，对工艺的研究进行筛选，保证所得终产品与标准汤剂的一致性。

在标准汤剂中峰1、2、3、5、6、7的K值除个别批次外均在0.30-1.0范围内，峰4、9的K值除个别批次外均大于1.0。其中峰4(异毛蕊花糖苷)K值大于1，主要由峰3(毛蕊花糖苷)转化导致，而峰3为地黄主要药效成分，因此通过质控峰3可间接控制峰4的转化。故确定地黄的工艺关键控制成分为峰3、9所代表的成分。

以同批次地黄饮片制备得到标准汤剂中的K值作为可接受转化程度的标准，采用三批次的地黄饮片生产制备得到三批地黄配方颗粒，该三批次地黄配方颗粒的制备工艺过程中的各中间产物以及最终的地黄配方颗粒的K值结果如下表4所示：

表4地黄颗粒工艺控制前后的K值分析

由上述结果可知，通过K值确定的工艺关键控制点对颗粒制备过程进行质控后，峰3、峰9的K值均与相应批次标准汤剂K值接近，并均在标准汤剂范围内。可以确定制备得到的颗粒与标准汤剂药效物质基础一致性较好，因此，进一步确定上述三批次的工艺条件制备得到的颗粒均符合要求；综上可知：采用K值确定的工艺关键属性能够保证配方颗粒临床应用的药效及安全性。

实施例3

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

色谱柱柱温43℃；以含0.05％甲酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.05％甲酸的水溶液为流动相B；检测波长为250nm；流速0.42ml/min。

其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图2所示。

实施例4

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

色谱柱柱温47℃；以含0.15％甲酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.15％甲酸的水溶液为流动相B；检测波长为360nm；流速0.47ml/min。

其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图3所示。

实施例5

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

以含0.1％醋酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.1％醋酸的水溶液为流动相B。

其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图4所示。

实施例6

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

以含0.1％磷酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.1％磷酸的水溶液为流动相B。

其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图5所示。

实施例7

本实施例与实施例1的区别在于，色谱条件不同，具体如下：

以含乙腈为流动相A，以水为流动相B。

其他检测条件与实施例1完全相同，检测结果如图6所示。

采用上述实施例3-7的检测条件检测得到特征图谱，根据该特征图谱采用本发明的计算方法计算得到K值，根据对比可知：实施例3-7获取的K值与实施例1的K值差异不超过5％，因此，上述实施例3-7的检测条件也满足检测要求。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，包括：

采用表示中药中物质量值传递规律的评价指标K值对地黄饮片制备获得的样品的各物质的量值传递规律进行评价；

其中，K值的获取过程如下：

获取采用地黄饮片制备得到的样品的干膏量；

获取地黄饮片制备得到的饮片溶液的饮片浓度，样品制备得到的供试品溶液的供试品浓度，饮片溶液以及供试品溶液的指纹图谱或特征图谱，并根据获取的指纹图谱或特征图谱获得相应特征峰的饮片特征峰面积和供试品特征峰面积；

采用干膏量、饮片特征峰面积、样品特征峰面积、饮片浓度、供试品浓度采用以下计算公式计算即得；

2.根据权利要求1所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，同一物质在相同方法至少两个波长进行检测的情况下，选择最大吸收波长下的特征峰的峰面积进行K值的计算。

3.根据权利要求1或2所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，所述指纹图谱或特征图谱的色谱条件为：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈或含0.05-0.15％甲酸、0.05-0.15％醋酸或0.05-0.15％磷酸的乙腈溶液为流动相A，以水或含0.05-0.15％甲酸、0.05-0.15％醋酸或0.05-0.15％磷酸的水溶液为流动相B，按下表中规定的梯度洗脱程序进行梯度洗脱；检测波长为250-360nm；柱温43-47℃；流速0.42-0.48ml/min；进样体积2-10μl；理论板数按毛蕊花糖苷峰计算应均不低于5000；

4.根据权利要求3所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，所述饮片溶液的制备过程为：取地黄饮片，精密称定，精密加入水，称重，加热回流或/和超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液即可；

所述供试品溶液的制备过程为：取样品，精密称定，精密加入水，称重，加热回流或/和超声处理，放冷，摇匀，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

5.根据权利要求1-4任一所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，当K值小于0.3时，表示该特征峰所代表的物质不易转移或者发生负转化；K值大于1时，表示该特征峰所代表的物质富集或发生正转化；

对K值小于0.3以及K值大于1的特征峰进行重点评价。

6.根据权利要求1-5任一所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法，其特征在于，所述样品为中间产物、标准汤剂、中药配方颗粒或经方。

7.采用权利要求1-6任一所述的一种评价地黄中物质量值传递规律的方法对工艺参数进行筛选的方法，其特征在于，包括：获取地黄饮片的标准汤剂，获取标准汤剂中各个物质所对应的特征峰的K值；获取地黄饮片的样品，获取样品中相应物质所对应的各个特征峰的K值，

筛选出样品中与标准汤剂相同物质所对应的特征峰的K值最为接近的K值，该K值所对应的工艺参数即为最佳工艺。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，制备标准汤剂所用的地黄饮片与制备样品所用的地黄饮片为相同批次的地黄饮片。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述物质包括洋地黄叶苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和6-O-E-阿魏酰基筋骨草醇中的至少一种。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述地黄标准汤剂的制备工艺为：取地黄饮片，置于砂锅中，浸泡30分钟，一煎加入饮片量9倍水，500w煮沸后，200w煎煮20分钟，趁热过滤，迅速冷却，备用；二煎加饮片量7倍水，500w煮沸后，200w煎煮15分钟，趁热过滤，迅速冷却备用；合并滤液，50℃以下条件浓缩，浓缩至料液比约为1:1，冷冻干燥，即得。

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