CN110430892A - 肉毒神经毒素在治疗流涎中的改进的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及肉毒神经毒素在治疗流涎或与唾液产生增多有关的疾病或病状中的改进的用途。具体地是公开肉毒神经毒素，所述肉毒神经毒素以介于1.45:1与1.7:1之间的剂量比率施用到腮腺和颌下腺中。

Description

肉毒神经毒素在治疗流涎中的改进的用途

技术领域

本发明涉及肉毒神经毒素在治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状中的改进的用途。具体地是公开的肉毒神经毒素，所述肉毒神经毒素以介于1.45:1与1.7:1之间的剂量比率施用到腮腺和颌下腺中。

背景技术

流口水通常表现为各种各样的临床病状，所述临床病状导致唾液溢出唇缘(称为前路流口水)或无意中溢出咽部、不自觉地进入声门和气管(称为后路流口水)的症状。由于前路流口水主要是患者在社会交往方面的问题，后路流口水还可能引起咳嗽反射完整的受试者咳嗽和刺激或无意识受试者无声地渴望咳嗽和刺激。

根据临床病状、使用国家、医学专业，术语流口水经常用于医学术语流涎、多涎或涎产生过多(ptyalism)的非专业语言。根据定义，流涎是“唾液过度溢出唇缘”，多涎是“唾液过量产生”，涎产生过多是“孕妇多涎”。这些术语和定义在其不清楚的原因以及潜在病状和问题的病理机制方面不一致地使用。

流涎的原因可以是各种各样的并且通常涉及唾液过量产生或唾液管理或消除解剖结构或生理功能的表现不佳。当然，那些因素的组合使得不可能明确区分原因，因此如上所列的症状诊断的描述语的使用相互矛盾。在某些情况下，只有唾液腺和唾液管、嘴唇、口腔和牙齿的解剖学畸形(malformations)和畸形(deformities)(唇闭合缺陷、牙齿咬合不正)导致口腔与外部世界之间的局部旁路，从而使得产生的唾液不受控制地流出。

畸形、狭窄、疤痕、瘘管和旁路可以作为口腔癌或头颈癌的永久性后果、损伤以及其外科手术并发症发生。智力残疾患者可能会永久性张嘴，从而在有或没有畸形的情况下产生相同的效果。感觉运动能力降低、口腔神经肌肉控制无效、保护反射降低、吞咽肌肉运动能力低下、吞咽频率降低或吞咽无效或吞咽困难似乎是患有选自例如以下的神经系统病状的患者先天性流涎的最常见原因：帕金森病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、多系统萎缩、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、脑瘫、中风、创伤性脑损伤(TBI)、氯氮平诱导的多涎、瑞特综合征(Rett syndrome)、安格曼综合征(Angelman syndrome)、癫痫性脑病和脑肿瘤、全咽切除术(total pharyngolaryngectomy)、环状软骨上喉切除术(supracricoidlaryngectomy)和声门上喉切除术、痴呆、或智力残疾或任何其它引起流涎或多涎的原因。如果由于吞咽的运动控制受到扰乱而不经常吞咽，则产生的未受刺激或刺激的唾液被汇集在口腔中。不受控制的张嘴和头部的顺行姿势促进汇集的唾液溢出患者的唇缘。

唾液产生也可以通过刺激性因素永久性增加，例如大量龋齿或牙垢、唾液腺肥大、胃食管反流或通过药物或毒素诱导的作为副作用的多涎(例如氯氮平、苯二氮卓类药物、抗精神病药物)，从而引起唾液腺中的唾液核或神经末梢永久性活化。

可以在一定程度上以其它方式控制健康个体的唾液过量产生。在患有唾液管理障碍的患者中，控制口腔中汇集的唾液或吞咽过量产生的量的唾液的能力的上限阈值较低，因此更具挑战性。

吞咽问题的治疗选择集中在康复措施(吞咽训练、口腔运动控制训练)上，然而频繁吞咽的无意识机制很难在患有如帕金森病或ALS等进行性神经疾病的患者中进行训练和发展。因此，流涎的治疗通常集中在减少唾液产生。最早的方法使用熟知的抗胆碱能药物(例如，阿托品、异丙托溴铵、东莨菪碱、格隆溴铵、托吡卡胺)，其对毒蕈碱胆碱能神经起抑制作用，所述毒蕈碱胆碱能神经控制口腔中和周围的唾液腺产生的唾液量。还测试了抗胆碱能药的几种其它衍生物，并在此适应症中使用说明书标明以外的用途。最近，美国和欧盟仅批准格隆溴铵用于治疗儿童流口水。

另一种治疗替代物是肉毒毒素，所述肉毒毒素通过肌肉内注射施用到患者以减少经过治疗的肌肉的肌肉紧张和痉挛、或多汗症。在此类患者中检测到口干是不良药物反应，并且这促使医师直接用肉毒毒素A或B治疗唾液腺，即通过将肉毒毒素A或B腺体内或实质内注射到主要唾液腺腮腺和颌下腺中。

梭菌属是厌氧菌革兰氏阳性菌属，属于厚壁菌门。梭菌属由约100种物种组成，其中包含常见的自由生活细菌以及重要的病原体，如肉毒梭菌和破伤风梭菌。两种物种分别产生神经毒素、肉毒毒素和破伤风毒素。这些神经毒素是神经细胞的钙依赖性神经递质分泌的有效抑制剂，并且是人类已知的最强毒素之一。人体内的致死剂量介于每千克体重0.1ng与1ng之间。

通过受污染的食物口服摄入肉毒毒素或在伤口中产生肉毒毒素可能引起肉毒中毒，其特征在于各种肌肉麻痹。呼吸肌麻痹可能导致受影响的个体死亡。

虽然肉毒神经毒素(BoNT)和破伤风神经毒素(TeNT)通过类似的初始生理作用机制起作用，从而抑制神经递质从受影响的神经元的轴突释放到突触中，但它们的临床反应不同。虽然肉毒神经毒素作用在周围神经系统中的肌肉神经结点和其它胆碱能突触处，从而抑制神经递质乙酰胆碱的释放并且由此引起弛缓性麻痹，但是转录到中枢神经元上的破伤风神经毒素主要作用于中枢神经系统，从而通过降解蛋白质突触小泡素来阻止抑制性神经递质GABA(γ-氨基丁酸)和甘氨酸的释放。随后脊髓运动神经元的过度活动引起激动剂和拮抗剂肌肉组织普遍收缩，这称为强直性痉挛(刚性麻痹)。

虽然破伤风神经毒素以一种免疫学上不同的类型存在，但已知肉毒神经毒素发生在七种不同的免疫原性血清型(称为BoNT/A到BoNT/H，其具有另外的亚型)中。大多数肉毒梭菌菌株产生一种神经毒素，但还描述了产生多种神经毒素的菌株。

肉毒神经毒素和破伤风神经毒素具有高度同源的氨基酸序列并且示出类似的结构域结构。它们的生物活性形式包括两条通过二硫键连接的肽链，一条约50kDa的轻链和一条约100kDa的重链。不同梭菌神经毒素之间长度不同的接头或环区位于形成二硫键的两个半胱氨酸残基之间。所述环区被未知的梭菌内切蛋白酶蛋白水解切割，以获得生物活性神经毒素。

TeNT和BoNT中毒的分子机制似乎也是类似的：进入靶神经元是通过将重链的C端部分与特异性细胞表面受体结合来介导的；然后神经毒素被受体介导的内吞作用吸收。如此形成的内体中的低pH然后引发梭菌神经毒素的构象变化，这允许其将自身嵌入内体膜中并通过内体膜转移到细胞质中，其中连接重链和轻链的二硫键被减少。然后，轻链可以选择性地切割所谓的SNARE-蛋白，所述SNARE-蛋白对于神经递质释放到突触间隙中的不同步骤是必需的，例如含神经递质的囊泡与质膜的识别、对接和融合。TeNT、BoNT/B、BoNT/D、BoNT/F和BoNT/G引起突触小泡蛋白或VAMP(囊泡相关膜蛋白)的蛋白水解裂解，BoNT/A和BoNT/E切割质膜相关蛋白SNAP-25，并且BoNT/C1切割整合质膜蛋白合成素和SNAP-25。

在肉毒梭菌中，肉毒神经毒素形成为包括神经毒性组分和无毒蛋白的蛋白质复合物。辅助蛋白质嵌入神经毒性组分，从而在不增加任何毒性作用的情况下保护其免受胃肠道中消化酶的降解。因此，大多数血清型的肉毒神经毒素具有口服毒性。例如450kDa或900kDa的复合物可从肉毒梭菌培养物中获得。

近年来，肉毒神经毒素已被用作治疗剂，例如用于治疗肌张力障碍和痉挛，并且还用于化妆品应用中，如细纹治疗。包括肉毒神经毒素复合物的制剂是市售的，例如从易普森公司(Ipsen Ltd)索斯神经科学有限公司(Solstice Neurosciences LLC)/美国世界医学有限公司(US Worldmeds LLC)或爱力根公司(Allergan Inc)获得。无任何复杂蛋白质的肉毒神经毒素的高纯度的神经毒性组分例如可从德国法兰克福梅尔茨制药有限公司(Merz Pharmaceuticals GmbH)获得。

现有技术中有一些关于在由不同潜在疾病引起的流涎患者中使用肉毒神经毒素A和B的报道。例如，Breheret等人(Annales francaises -rhino-laryngologie et dePathologie Cervico-faciale,第128卷,第5期,2011,266-271)、Barbero等人(《神经病学杂志(J Neurol.》2015年12月；262(12):2662-7)、Suskind等人(《喉内视镜(Laryngoscope)》,2002年1月；112(1):73-81)、Porta等人(《神经外科学(J NeurolNeurosurg Psychiatry)》2001年4月；70(4):538-40)、Narayanaswami等人《帕金森病相关病症(Parkinsonism Relat Disord.)》2016年9月；30:73-7)以及Castelnovo等人(《运动病症(Movement Disorders)》2013,第28卷,摘要增刊)报告了根据几种不同方案使用不同的毒素，其中不同量的毒素施用到唾液腺以治疗各种医学病状中的流涎。尽管大量研究提供了关于将肉毒神经毒素用于流涎的安全性和功效的数据，但仍有许多正在进行的讨论，所述讨论没有给出关于剂量、施用部位和所用毒素类型的明确建议。

发明目的

本发明的目的之一是提供一种用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素，所述肉毒神经毒素长时间限制唾液腺的活性，其程度为受试者示出没有流口水，但所述肉毒神经毒素仍允许减少量的唾液产生足以用于正常的生理功能，例如作为润滑剂、作为离子储库、作为缓冲剂、作为清洁剂、用于抗微生物作用、用于凝集、用于薄膜形成、用于消化、用于品尝、用于排泄和/或水平衡。本发明的另一个目的是避免与用肉毒神经毒素治疗相关的副作用或至少减少治疗时其频率、严重性和/或持续时间。作为本发明的另外的目的，肉毒神经毒素应该在长期治疗中提供有利的治疗结果，因为潜在疾病将不受治疗的影响，因此长效疗法应该是有效且安全的，而不降低功效或损害延长的治疗的重复注射周期的安全性。

发明内容

令人惊讶的是，已经确定肉毒神经毒素可以解决这些异议中的一个或多个，如果其用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的话，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中来施用，并且其中施用到腮腺中的每一个和颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。

具体实施方式

通过参考以下本发明的详细描述和本文所包含的实例，可以更容易地理解本发明。

在第一个实施例中，本发明涉及一种用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。在优选的实施例中，将本发明的肉毒神经毒素施用到腮腺和颌下腺中，其中施用到腮腺中的每一个和颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.50:1与1.6:1之间。在特别优选的实施例中，将本发明的肉毒神经毒素施用到腮腺和颌下腺中，其中施用到腮腺中的每一个和颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率为1.50:1。

在另外的实施例中，本发明涉及一种治疗患者的与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的方法，所述方法包括通过注射到腮腺和颌下腺中来施用治疗有效量的肉毒神经毒素，其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。在优选的实施例中，本发明的方法包括通过注射到腮腺和颌下腺中来施用治疗有效量的肉毒神经毒素，其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.50:1与1.6:1之间。在特别优选的实施例中，本发明的方法包括通过注射到腮腺和颌下腺中来施用治疗有效量的肉毒神经毒素，其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率为1.50:1。

在另外的方面，本发明总体上涉及用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素。在本发明的特定实施例中，与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状与例如以下相关：帕金森病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、多系统萎缩、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、脑瘫、中风、创伤性脑损伤(TBI)、氯氮平诱导的多涎、瑞特综合征、安格曼综合征、癫痫性脑病、脑肿瘤、全咽切除术、环状软骨上喉切除术和声门上喉切除术、痴呆、或智力残疾(例如，全面发育迟缓、严重学习障碍)或任何其它导致流涎或多涎的原因。根据本发明的与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状还可以是唐氏综合征(Down′s syndrome)、史-伦-奥三氏综合征(Smith-Lemli-Opitz syndrome)、莫比乌斯综合征(syndrome)、MEGDEL综合征、贝-维综合征(Beckwith-Wiedemann syndrome)、舌头的淋巴管畸形、前岛盖综合征(Foix-Chavany-Marie syndrome)、染色体异常和遗传性疾病(如17q21缺失、家族性自主神经功能障碍、22部分三体)、艾卡尔迪综合征(Aicardi syndrome)、SMA1型、GM1神经节苷脂病或阿佩尔综合征(Apert syndrome)、肝豆状核变性、先天性脑畸形(如脑积水、小头畸形、脑桥小脑发育不全、后颅窝肿块、神经元蜡样脂褐质沉积症、巴登病、异染性脑白质营养不良、多发性关节挛缩症、脑病(encephalopathy)、平脑症或脑回肥厚)、脑损伤(如脊髓损伤、缺氧缺血性脑病、先天性弓形虫病、先天性巨细胞病毒(CMV)感染、后脑膜脑炎或后疱疹脑炎)、神经运动病症(如口腔运用障碍、蝶鞍上麻痹、鳃盖综合征、肌病、婴儿痉挛、肌强直性营养不良、杜氏肌萎缩症、I型神经纤维瘤病或线粒体病、胎儿酒精综合征或孤独症)或少年格林-巴利综合征(juvenile Guillain-BarréSyndrome)。

在本发明的特定实施例中，与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状与中风相关，具体地与中风后(卒中后)发生的流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状相关。

在本发明的优选实施例中，与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状与例如创伤性脑损伤(TBI)、卒中后、帕金森病或非典型帕金森综合征(进行性核上性麻痹[PSP]、多系统萎缩)[MSA]、皮质基底节变性[CBD])相关。在本发明的另一个优选实施例中，与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状为创伤性脑损伤(TBI)、卒中后、帕金森病或非典型帕金森症(进行性核上性麻痹[PSP]、多系统萎缩)[MSA]、皮质基底节变性[CBD])，其中慢性流涎持续至少3个月，并且流涎严重度在流口水严重度分量表上为至少2分，并且频率在流口水频率分量表上为至少2分，并且在总分流口水严重度和频率量表上为至少6分。在本发明的另一个优选实施例中，与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状为创伤性脑损伤(TBI)、卒中后、帕金森病或非典型帕金森症(进行性核上性麻痹[PSP]、多系统萎缩)[MSA]、皮质基底节变性[CBD])，其中慢性流涎的未刺激的唾液流速为至少0.3g/min。

在另外的实施例中，本发明涉及一种药物组合物，所述药物组合物包括用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素和药学上可接受的载剂，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。

根据本发明的一个实施例，肉毒神经毒素以介于70U与110U之间的总剂量施用到腮腺和颌下腺中。在优选的实施例中，施用到腮腺和颌下腺中的肉毒神经毒素的总剂量介于75U与100U之间。

根据本发明的一个实施例，肉毒神经毒素以75U的总剂量施用到腮腺和颌下腺中。在替代性实施例中，施用到腮腺和颌下腺中的肉毒神经毒素的总剂量为100U。

通常，根据本发明，肉毒神经毒素可以以介于0.5U/Kg体重与2.35U/Kg体重之间的总剂量施用到腮腺和颌下腺中。在特别优选的实施例中，肉毒神经毒素以介于1U/Kg体重与1.25U/Kg体重之间的总剂量施用到腮腺和颌下腺中。由于体重轻，通常如剂量表8中所呈现的向儿童施用肉毒毒素。在另一个实施例中，将高达2.5U/kg的总剂量施用到儿童的腮腺和颌下腺中。

根据本发明的另外的方面，肉毒神经毒素在肉毒神经毒素浓度介于45U/mL与55U/mL之间的范围内的水性组合物中施用。在本发明的优选实施例中，肉毒神经毒素在肉毒神经毒素浓度为50U/mL的水性组合物中施用。在特别优选的实施例中，100U小瓶的内容物将用总共2.0mL的生理盐水重构，并且施用到腮腺和颌下腺的体积为：

-腮腺：每侧0.6ml，

-颌下腺：每侧0.4ml。

如果设想了几个连续的治疗周期，如果在先前的治疗周期中发生口干或吞咽困难，则可以减少注射体积。建议根据注射者的判断进行这种减少以避免此类副作用的进一步发生。如果设想减少肉毒神经毒素施用量，则施用到腮腺和颌下腺的注射体积为：

-腮腺：每侧0.45ml，

-颌下腺：每侧0.3ml。

生物活性通常以小鼠单位(U)表示。如本文所用，1U是肉毒神经毒素的神经毒性组分的量，其在腹膜内注射后杀死50％的特定小鼠群，即小鼠i.p.LD50。用于确定肉毒神经毒素的生物活性的另一个特别有用的方法是基于细胞的测定，如例如在WO 2009/114748、WO2013/049508或WO 2014/207109中公开的。用此类基于细胞的测定获得的活性结果对应于在小鼠i.p.LD50测定中获得的活性值。针对肉毒血清型A调配物(如市售的印考肉毒毒素A(Incobotulinumtoxin A)(肉毒毒素血清型A、无复合蛋白、梅尔茨制药有限公司)或奥那肉毒毒素A(Onabotulinumtoxin A)(肉毒毒素血清型A、含有复合蛋白、爱力根公司)获得的活性结果可以使用本领域技术人员已知的转化率将其转换为其它毒素的值。例如，必需剂量的A型阿波肉毒毒素A(AbobotulinumtoxinA A)(肉毒毒素血清型A、具有复合蛋白、易普森生物制药公司(Ipsen Biopharm Limited))可以通过将印考肉毒毒素A或奥那肉毒毒素A的剂量乘以2.5到5的因子来确定。瑞马肉毒毒素B(RimabotulinumtoxinB)(肉毒毒素血清型B、索斯神经科学有限公司/美国世界医学有限公司)的剂量可以通过将印考肉毒毒素A或奥那肉毒毒素A的剂量乘以20到40的因子来计算。

在本发明的另外的实施例中，肉毒神经毒素以每个注射部位介于0.3mL与0.5mL之间的体积施用到颌下腺中并且以每个注射部位介于0.5mL到0.7mL之间的体积施用到腮腺中。在本发明的特别优选的实施例中，肉毒神经毒素以每个注射部位0.4mL的体积施用到颌下腺中并且以每个注射部位0.6mL的体积施用到腮腺中。

在本发明的另外的实施例中，将肉毒神经毒素注射到患者两侧上的每一个颌下腺的一个部位中。根据腺的解剖程度，将注射应用于腺的几何中心中。

在本发明的另一个实施例中，肉毒神经毒素被注射到患者的两侧上的每一个腮腺的一个部位中。根据腺的解剖程度，将注射应用于腺的几何中心中。

在优选的实施例中，肉毒神经毒素的总剂量注射到每一个颌下腺的一个部位中并且注射到每一个腮腺的一个部位中。

本发明的一个实施例涉及一种用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间，其中与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状与中风相关，并且其中将总剂量为100U的肉毒神经毒素注射到每一个颌下腺的一个部位中并注射到每一个腮腺的一个部位中。

本发明的一个实施例涉及一种用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率为1.45:1，其中与流涎或唾液产生增加相关的疾病或病状与中风相关，其中将总剂量为100U的肉毒神经毒素分别注射到每一个颌下腺的一个部位中并且注射每一个腮腺的一个部位中，特别是注射到腺的几何中心中。

在本发明的特定实施例中，不使用超声引导将肉毒神经毒素注射到腮腺和颌下腺中。在这种情况下，腺内的目标部位通过使用如本领域技术人员所熟知的解剖学界标定向来确定。腮腺位于外耳道的下方和前方，并且位于下颌支的后方和颞骨的乳突前方。当从表面看时，腺大致呈楔形，并且当在水平剖面上看时，腺也是楔形的。腮腺很容易被触诊。为了找到腮腺可触知的标志，应该在下颌前支与胸锁乳突肌之间触诊。开始触诊每只耳朵前方，移到脸颊区域，并且然后下颌角下方。使用解剖学标志触诊腮腺表面边界，并且将肉毒神经毒素注射到腮腺中部。可以将注射剂注射到主要腺体的上半部或下半部。需要选择单个注射点。将相同的程序应用于受试者的另一侧。颌下腺位于下颌弓下方口腔底部下方，紧邻以下解剖结构。每个颌下腺位于二腹肌上方，分为由舌骨肌分开的浅叶和深叶。浅叶包括大部分腺，其中舌骨肌在其下面延伸。深叶是较小的部分。虽然颌下腺并不总是容易触诊，但其解剖位置已明确限定。注射平行于排泄管进行，尽管很少见。通过用两根手指将腺固定在下颌骨下方的位置来给颌下腺注射。针将从上向前插入口底方向，与下颌骨呈70-90度(Holsinger,2005,《唾液腺的解剖、功能和评估(Anatomy,Function,and Evaluation ofthe Salivary Glands)》)。

在其它实施例中，使用超声引导将肉毒神经毒素注射到腮腺和颌下腺中。本领域技术人员充分意识到应用超声成像技术来充分确定腺体内的目标区域的尺寸和定位。例如，可以使用>7.5MHz的高频线性换能器来识别和可视化腺。[Howlett,“腮腺的高分辨率超声评估(High resolution ultrasound assessment of the parotid gland)”(2003)《英国放射学杂志(British Journal of Radiology)》76,271-277]。

通常设想将肉毒神经毒素注射到腮腺和颌下腺中不止一次。在特定实施例中，根据本发明的肉毒神经毒素在连续的治疗周期中施用。根据本发明，治疗周期是两次施用肉毒神经毒素之间的时间间隔，即治疗周期由肉毒神经毒素的一次施用和随访期组成，直到施用下一次肉毒神经毒素注射。肉毒神经毒素优选地以至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个或至少8个治疗周期施用。在一个实施例中，肉毒神经毒素以2个到6个治疗周期施用，特别是以4个治疗周期施用。

肉毒神经毒素到腮腺和颌下腺中的连续两次施用之间的时间间隔可以在10周与20周之间或12周与20周之间变化。在另一个实施例中，肉毒神经毒素到腮腺和颌下腺中的连续两次施用之间的时间间隔可以在6周与10周之间变化。在优选的实施例中，肉毒神经毒素到腮腺和颌下腺中的连续两次施用之间的时间间隔可以在12周与18周之间或14周与18周之间变化。在最优选的实施例中，时间间隔为15周、16周或17周，特别是16周。

在本发明的一个实施例中，肉毒神经毒素到腮腺和颌下腺中的所有连续施用之间的时间间隔保持相同。

在本发明的一个实施例中，以至少4个连续治疗周期将肉毒神经毒素注射到腮腺和颌下腺中，其中连续施用肉毒神经毒素之间的时间间隔为16周。

通常，有几种方法可以确定用于治疗与本领域技术人员已知的流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素的功效。用于确定用于治疗流涎或与唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素的功效的测量和量表可以选自例如确定未刺激的唾液流速(uSFR)、平均总体变化印象量表(GICS)、流口水严重度和频率量表(DSFS)、改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)、改良教师流口水量表(mTDS)、流口水冲击量表(DIS)、流口水指数(DQ)流口水评定量表和(DRS)和/或UPDRS流口水量表。

在特定实施例中，可以组合这些测量和量表中的至少两个以确定用于治疗流涎或与唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素的功效。

在本发明的一个实施例中，用于治疗流涎或与唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素用于具有基线唾液产生的患者，即未刺激的唾液流速(uSFR)介于0.1g/min到1.6g/min之间。在优选的实施例中，用于治疗流涎或与唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素用于具有基线唾液产生的患者，即未刺激的唾液流速(uSFR)大于0.3g/min。在另一个实施例中，用于治疗流涎或与唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒毒素用于基线流口水严重度和频率量表(DSFS)总分≥6且严重度分项分数≥2且频率分项分数≥2的患者。通常，uSFR评分和DSFS评分的确定是本领域技术人员公知的。根据本发明，使用四个吸收性拭子收集5分钟所收集的唾液重量来确定uSFR。通过将吸收性材料(例如，四个牙科棉卷、或Salimetrics Oral)放入口腔中5分钟来进行唾液收集。吸收性材料从封闭的口腔吸附唾液，并且由于收集的唾液量而引起的吸收性材料的重量增加可以通过测量吸收性材料在放入口腔之前和之后的重量来确定。在30分钟暂停之后重复收集和测量产生的唾液量5分钟提供第二值。两个值的平均值保证了测量结果的可靠性(通过降低测量的个体内变异性)(Jongerius PH、van Limbeek J、Rotteveel JJ,“评估唾液流速：生物学变化和测量误差(Assessment of salivary flow rate:biologic variation andmeasure error)”《喉内视镜》,2004；114(10):1801-4)。

在本发明的另外的实施例中，与施用后4周内的基线相比，100U肉毒神经毒素的施用降低uSFR至少25％。在优选的实施例中，与注射后4周内的基线相比，100U肉毒神经毒素的施用降低uSFR至少30％(中值)。在本发明的另外的实施例中，与施用后8周内的基线相比，100U肉毒神经毒素的施用降低uSFR至少22％(中值)。在优选的实施例中，与注射后8周内的基线相比，100U肉毒神经毒素的施用降低uSFR至少28％(中值)。

在本发明的另一个实施例中，与施用后4周内的基线流口水相比，施用100U的肉毒神经毒素改善了患者所评估的流口水总体变化印象量表(GICS)得分，在7点李克特样量表(Likert like scale)上提高了至少+0.90分。在优选的实施例中，与注射后4周内的基线流口水相比，100U肉毒神经毒素的施用示出至少+1.00分的总体变化印象量表(GICS)改善。在本发明的另一个实施例中，与施用后8周内的基线流口水相比，施用100U的肉毒神经毒素改善了通过总体变化印象量表(GICS)测量的流口水至少+1.00分。在优选的实施例中，与注射后12周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素改善了通过总体变化印象量表(GICS)测量的流口水至少+0.90分。总体变化印象量表(GICS)由李克特样量表确定，其回答了问题“与您在最后一次注射到唾液腺中之前的情况相比，作为这种治疗的结果，您对现在如何运作的总体印象是什么？”量表答案在“-3非常差”到“+3改善非常大”的范围内(Likert,Rensis(1932),“态度衡量技巧”,《心理学档案(Archives of Psychology)》,140:1–55)。

在本发明的另外的实施例中，与施用后4周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低平均流口水严重度和频率量表(DSFS)总分至少0.90分。在优选的实施例中，与注射后4周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低平均流口水严重度和频率量表(DSFS)总分至少1.20分。在本发明的另一个实施例中，与施用后8周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低平均流口水严重度和频率量表(DSFS)总分至少1.50分。流口水严重度和频率量表(DSFS)由两个分量表确定，针对‘流口水频率’的4-点李克特量表和针对‘流口水严重度’的5-点李克特量表。DSFS是两个分量表的总和。评估指“过去一周”的时间段。可能的最高分为9分(Thomas-Stonell N、Greenberg J,“减少流口水的三种治疗方法和临床因素(Three treatment approaches and clinical factors in the reduction ofdrooling)”,《吞咽困难(Dysphagia)》,1988；3(2):73-8.)。

流口水严重度

流口水频率

在本发明的另外的实施例中，与施用后4周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低平均改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)唾液控制域总分至少3.50分。在优选的实施例中，与注射后4周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低平均改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)唾液控制域总分至少4.60分。在本发明的另一个实施例中，与施用后8周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)唾液控制域总分至少5.50分。在优选的实施例中，与注射后8周内的基线相比，施用100U的肉毒神经毒素降低改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)唾液控制域总分至少6.50分。改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)由原始ROMP清单确定[Kalf 2011,《物理医学与机能恢复集刊(Arch.Phys.Med.Rehabil.)》]这是一份关于说话、吞咽和唾液控制领域的5-点李克特量表的荷兰23-项问卷。对ROMP进行修改(mROMP)以便实施在语言验证到美国英语期间从患者访谈产生的较少的措辞变化。mROMP现在有24个项目，所述项目具有明显可区分的响应选项和过去7天的回忆期。

在本发明的一方面，肉毒神经毒素是肉毒神经毒素复合物。例如450kDa或900kDa的复合物可从肉毒梭菌培养物中获得。根据本发明的肉毒梭菌神经毒素复合物包括神经毒性组分和无毒蛋白。辅助蛋白质嵌入神经毒性组分，从而在不增加任何毒性作用的情况下保护其免受胃肠道中消化酶的降解。

在本发明的另一方面，肉毒神经毒素是肉毒神经毒素复合物的神经毒性组分。通常，神经毒性组分的分子量为150kDa。神经毒性组分缺乏肉毒梭菌神经毒素复合物的任何其它蛋白质组分。

根据本发明的肉毒神经毒素选自包含以下的不同血清型的组：肉毒神经毒素血清型A(BoNT/A)、肉毒神经毒素血清型B(BoNT/B)、肉毒神经毒素血清型C1(BoNT/C1)、肉毒神经毒素血清型(BoNT/D)、肉毒神经毒素血清型E(BoNT/E)、肉毒神经毒素血清型F(BoNT/F)或肉毒神经毒素血清型G(BoNT/G)。肉毒神经毒素以及具体地其轻链和重链可衍生自上文指出的肉毒神经毒素的抗原性不同的血清型之一。一方面，所述肉毒神经毒素的轻链和重链是选自由以下组成的组的肉毒神经毒素的轻链和重链：BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D、BoNT/E、BoNT/F或BoNT/G。另一方面，对本发明的所述肉毒神经毒素进行编码的多核苷酸包括如以下示出的核酸序列：SEQ ID NO:1(BoNT/A)、SEQ ID NO:3(BoNT/B)、SEQ ID NO:5(BoNT/C1)、SEQ ID NO:7(BoNT/D)、SEQ ID NO:9(BoNT/E)、SEQ ID NO:11(BoNT/F)或SEQID NO:13(BoNT/G)。此外，一方面，涵盖的是多核苷酸，所述多核苷酸包括对如以下中的任一个示出的氨基酸序列进行编码的核酸序列：SEQ ID NO:2(BoNT/A)、SEQ ID NO:4(BoNT/B)、SEQ ID NO:6(BoNT/C1)、SEQ ID NO:8(BoNT/D)、SEQ ID NO:10(BoNT/E)、SEQ ID NO:12(BoNT/F)或SEQ ID NO:14(BoNT/G)。在本发明的手段和方法的一方面，进一步涵盖的是肉毒神经毒素，所述肉毒神经毒素包括选自由以下组成的组的氨基酸序列或由所述氨基酸序列组成：SEQ ID NO:2(BoNT/A)、SEQ ID NO:4(BoNT/B)、SEQ ID NO:6(BoNT/C1)、SEQ IDNO:8(BoNT/D)、SEQ ID NO:10(BoNT/E)、SEQ ID NO:12(BoNT/F)以及SEQ ID NO:14(BoNT/G)。

另一方面，对本发明的肉毒神经毒素进行编码的所述多核苷酸是前述多核苷酸的变体，前述多核苷酸包括一个或多个核苷酸取代、缺失和/或添加，在仍另一方面，前述多核苷酸可以产生具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或添加的多肽。此外，另一方面，本发明的变体多核苷酸应包括：与如SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11或13中任一个所示出的核酸序列至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同的核酸序列变体；或对氨基酸序列进行编码的核酸序列变体，所述氨基酸序列与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或14中任一个所示出的氨基酸序列至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％相同。如本文所用的，术语“相同”是指序列一致性，所述序列一致性的特征在于确定两个核酸序列或两个氨基酸序列之间的相同氨基酸的数目，其中可以对序列进行比对，从而获得最高级顺序匹配。可以使用在计算机程序中编码的公开技术或方法计算，如例如BLASTP、BLASTN或FASTA(Altschul,1990,《分子生物杂志(J Mol Biol)》215,403)。一方面，百分比一致性是在整个氨基酸序列上计算的。基于各种算法的一系列程序可供技术人员使用以对不同的序列进行比较。在这种情况下，Needleman和Wunsch或Smith和Waterman的算法给出了特别可靠的结果。为了进行序列比对，可以使用程序PileUp(Higgins,1989，CABIOS 5,151)或程序Gap和BestFit(Needleman,1970，《分子生物杂志》48；443；Smith,1981,《高级应用数学2(Adv Appl Math2)》,482，所述程序为GCG软件包(遗传学计算机集团(Genetics Computer Group)1991,575,《科学驱动(Science Drive)》,麦迪逊，威斯康星州,美国,53711)。在本发明的另一方面，用以下设置在整个序列区域中使用程序GAP来确定以百分比(％)为单位的上述序列一致性值：间隙重量：50，长度重量：3，平均匹配：10.000和平均不匹配：0.000，除非另有说明，否则其应始终用作序列比对的标准设置。一方面，上述变体多核苷酸中的每一个对多肽进行编码，所述多肽保留相应的内毒神经毒素的生物学特性中的一个或多个，并且另一方面，所述多肽保留相应的内毒神经毒素的所有生物学特性，即BoNT/A、BoNT/B、BoNT/C1、BoNT/D，BoNT/E、BoNT/F或BoNT/G。本领域技术人员将理解，仅在蛋白水解活化后才维持完整的生物活性，即使可以想到未处理的前体可以发挥一些生物学功能或具有部分活性。如本文所用的“生物学特性”是指(a)受体结合、(b)内化、(c)跨内体膜转运到胞质溶胶中、和/或(d)参与突触囊泡膜融合的蛋白质的内蛋白水解酶裂解。用于评估生物活性的体内测定包含小鼠LD50测定和离体小鼠膈肌测定，如Pearce等人(Pearce,1994,《有毒物质药理学应用(Toxicol.Appl.Pharmacol.)》128:69-77)和Dressler等人(Dressler,2005,《运动障碍(Mov.Disord.)》20:1617-1619、Keller 2006,《神经系统科学(Neuroscience)》139:629-637)所述的或如WO 2009/114748、WO 2014/207109或WO 2013/049508中所述的。生物活性通常以小鼠单位(U)表示。如本文所用，1U是肉毒神经毒素的神经毒性组分的量，其在腹膜内注射后杀死50％的特定小鼠群，即小鼠i.p.LD50。另一方面，变体多核苷酸可以对肉毒神经毒素进行编码，所述肉毒神经毒素具有改善或改变的生物学特性，例如，所述肉毒神经毒素可以包括切割位点，所述切割位点针对酶识别而改善或者可以针对受体结合或上文指定的任何其它特性而改善。用于确定肉毒神经毒素的生物活性的特别有用的方法是基于细胞的测定，如例如WO 2009/114748、WO 2013/049508或WO 2014/207109中所公开的。

不受理论束缚，此外设想，特别是不含复合蛋白(印考肉毒毒素A)的肉毒神经毒素的调配物，即相比于具有复合蛋白质的其它肉毒神经毒素(奥那肉毒毒素A，阿波肉毒毒素A，瑞马肉毒毒素B，或具有复合蛋白的其它毒素)，缺乏肉毒梭菌神经毒素复合物的任何其它蛋白质组分的肉毒神经毒素的神经毒性组分允许胆碱能神经传递的临床可逆的功能性失活而不破坏唾液腺和唾液管的细胞内结构。使用缺乏肉毒梭菌神经毒素复合物的任何其它蛋白质组分的肉毒神经毒素的神经毒性组分也不会引起腺泡细胞的任何物理损伤，如在肉毒毒素注射后儿童的切除的颌下腺唾液腺中所述[Mosseri,2016,耳鼻喉科-头颈外科]。

一般来说，肉毒神经毒素阻断神经末梢是不可逆的；然而，临床效果是暂时的，因为新的神经末梢会萌芽，从而产生新的连接。复合蛋白被认为是用于治疗的生物学上无活性的化合物，并且它们通常被认为对肌肉内注射中使用的用于治疗痉挛、肌张力障碍、多汗症、头痛、抑郁、尿逼尿肌痉挛或美学适应症(如眉间皱眉纹或皱纹)的肉毒神经毒素的功效不起任何作用。

复合蛋白质是梭菌蛋白质的残余物，其来源于细菌肉毒梭菌。这些蛋白质与肉毒神经毒素蛋白复合物的神经毒性组分一起产生，并且它们在侵袭性环境(例如，胃中的酸性条件)中起到保护毒素的基本作用，并且它们通过肠子上皮屏障帮助毒素内化。复合蛋白由血凝素和非血凝素组成，并且被认为是肉毒毒素蛋白复合物的无毒蛋白。血凝素(HA)被描述为通过直接结合E-钙粘蛋白来破坏肠中的细胞间上皮屏障[Fujinaga,2009,《毒素(Toxicon)》[][Sugawara等人,2010《细胞生物学(J.Cell Biol)》,[],[Lee,2014,《科学(Science)》[]。在唾液腺分泌上皮中，插入的导管上皮和条纹导管上皮从类似于肠上皮的外胚层的胚线发展而成。在唾液腺的紧密连接中特别关注的是钙粘蛋白家族的成员，其在唾液腺发育、组织组织化和细胞分化中起作用。上皮(E)-钙粘蛋白是上皮组织中的主要细胞-细胞粘附分子，并且被认为是上皮表型的主要组织者。[Davies,2006,《发育细胞(Development Cell)》]。在早期形态发生中，E-钙粘蛋白和β-连环蛋白可能参与唾液腺重塑，而在细胞分化过程中，它们形成稳定的细胞-细胞接触，并可以与Rho GTPases在唾液细胞极性的建立和维持中协作“[Baker,2010,《生物医学与生物技术杂志(Journal ofBiomedicine and Biotechnology)》。独特的细胞间结构(如E-钙粘蛋白)在肠道和唾液腺上皮细胞极化中起着基础作用。因此，E-钙粘蛋白与肉毒毒素的复合蛋白的干扰会干扰唾液腺的正常生物活性。例如，Xu和Shan证明，在BoNT/A(中国甘肃兰州生化公司(Biochemical Co.))(即含有复合蛋白的肉毒神经毒素)施用到大鼠颌下腺后，腺泡细胞膜上的水通道蛋白(AQP5)被下调，其可能是去神经的第二次效果(Xu等人,2015《牙科研究杂志(Journal of Dental Research)》；Shan等人,2013《国际口腔科学杂志(International Journal of Oral Science)》)。

为了制备包括肉毒神经毒素的药物制剂，神经毒素可以通过依赖于所期望的应用目的的本领域已知的各种技术来调配。例如，(生物活性的)肉毒神经毒素可以与一种或多种药学上可接受的载剂组合用作药物组合物。一种或多种药学上可接受的载剂必须是“可接受的”，意思是与调配物的其它成分相容并且对其接受者无害。所用的药物载剂可以包含固体、凝胶或液体。固体载剂的实例为乳糖、石膏粉、蔗糖、滑石粉、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载剂的实例为甘油、磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液、各种类型的润湿剂等。合适的载剂包括上文提到的那些载剂和本领域熟知的其它载剂，参见例如《雷明顿药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》,宾夕法尼亚州伊斯顿麦克出版公司(Mack Publishing Company)。一方面，药物组合物可以在施用之前溶解在稀释剂中。还选择稀释剂以便不影响肉毒神经毒素产品的生物活性。此类稀释剂的实例为蒸馏水或生理盐水。此外，药物组合物或调配物还可以包含其它载剂或无毒、非治疗性、非免疫原性稳定剂等。因此，一方面，调配的肉毒神经毒素产品可以以液体或冻干形式存在。一方面，其可以与甘油、蛋白质稳定剂(HSA)或非蛋白质稳定剂如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、透明质酸或游离氨基酸一起存在。一方面，合适的非蛋白质稳定剂公开于WO 2005/007185或WO 2006/020208中。包括根据本发明的肉毒神经毒素的针对HSA稳定的调配物的合适的调配物在例如US 8,398,998 B2中公开。调配的肉毒神经毒素产品可以以治疗有效量或用于美容目的用于治疗人或动物的各种疾病或病症。

实例

一般程序：进行临床试验，其中连续注射4次，随后各自观察16周，即连续4个治疗周期。在每个治疗周期结束时，检查受试者是否有资格进入下一个周期。与安慰剂相比，第一个治疗周期(主要期[MP])在NT 201的两个不同剂量水平(即不含复合蛋白的肉毒毒素血清型A，印考肉毒毒素A)(75U和100U)下进行。受试者以2:2:1(75U:100U:安慰剂)的比率随机分配到相应的治疗。将印考肉毒毒素A在生理盐水中以50U/mL的浓度重构，并且在100U剂量组中，患者分别在每个腮腺中接受30U毒素，并且在每个颌下腺中接受20U，并且在75U剂量组中，患者分别在每个腮腺中接受22.5U毒素并且在每个颌下腺中接受15U。在两个剂量组中，分配给每个腮腺和颌下腺的总剂量被注射到相应的腺的一个部位中。MP之后是剂量盲法延长期的3个连续治疗周期，其中受试者以与在MP中相同的方式接受75U或100U NT201。在MP期间，接受安慰剂的受试者在延长期期间以1:1随机化以接受75U或100U NT 201，因此总剂量随机化比率为1:1。试验MP的结果示出75U和100U剂量两者都达到临床有关性的治疗效果。它们被总结如下。

实例1：安慰剂对照主要期(uSFR)的结果

总体而言，在研究的MP期间治疗了184名患有慢性麻烦性流涎的受试者。所述研究有两个共同的主要疗效终点。共同主要疗效终点之一是未刺激的唾液流速(uSFR)从基线到第4周的变化(参见表1随时间的平均变化)。在所有时间点，在两个NT 201治疗组中uSFR有效地降低，其效果在NT 201 100U剂量组中更明显，如图1所示。在第4周，NT 201 100U组示出优于安慰剂的统计学上显著的优势(p＝0.004)。在第8周和第12周达到p-值小于0.05(表1)的NT 201 75U中的平均uSFR值(p-值分别为0.022和0.019)。在NT 201 100U和NT 20175U两组中观察到的治疗效果可以被认为是临床相关的。

表1：在基线处的平均uSFR[g/min]和从基线随时间推移(FAS)的平均uSFR变化

实例2：安慰剂对照主要期(GICS)的结果

另一个共同主要疗效终点是在第4周通过总体变化印象量表(GICS)测量的受试者的总体功能量表的改善。GICS是7-点李克特量表，由受试者回答问题“与您在最后一次注射到唾液腺中之前的情况相比，作为这种治疗的结果，您对现在如何运作的总体印象是什么？”两个剂量组都有所改善。在第4周看到了100U治疗组优于安慰剂组的统计学上显著的差异(p＝0.002，表2，图2)。在第4周，与安慰剂相比，75U组显示出数值上更好的结果，但差异很快错过了统计学显著性(p＝0.055)。然而，在第8周和第12周，两个剂量组中达到了小于0.05的p-值，并在第16周在100U的剂量组中达到如在图2所呈现的。

表2：随时间推移的平均受试者的GICS值(FAS)

实例3：安慰剂对照主要期(GICS)的结果

临床上认为有意义的流口水改善的针对GICS终点的预定义响应标准为量表上至少一个点的改善(最低限度地改善)。所有治疗组的响应者分析结果列于表3和图3中。

表3：受试者的GICS中的反应率(FAS)

在整个主要时期，安慰剂组的反应率低于两个NT 201治疗组的反应率。它从28.6％(第8周)变化到第2周的48.6％。在两个NT 201组中，在第8周达到最大受试者的GICS反应率，NT 201 75U组为68.1％，NT 201 100U组为76.4％。诸位发明人认为这些比率是NT201 75U和100U剂量组的临床有意义性的证据。

实例4：安慰剂对照主要期的结果(DSFS)

还评估了主观终点流口水严重度和频率量表(DSFS)。DSFS由两个分量表组成：针对“流口水频率”的4-点李克特量表和针对“流口水严重度”的5-点李克特量表。DSFS的描述性分析示出，与安慰剂组无相关改善相比，两个NT 201治疗组中有流涎的临床相关改善。从基线随时间推移的平均总和分变化在100U治疗组中在第8周最高，改善了-1.89，随后在75U治疗组中在第12周改善了-1.76，如表4和图4所呈现的。通过混合模型重复测量(MMRM)的治疗比较揭示，与第4周、第8周和第12周的安慰剂相比，两个NT 201组的p-值都<0.05。

表4：在基线处的平均DSFS总分和从基线随时间推移的平均DSFS总分变化(FAS)

实例5：安慰剂对照主要期(mROMP)的结果

最后，使用流口水分量表(包含5-点李克特量表的9-项问卷)评估改良帕金森病Radboud口腔运动量表(mROMP)。与表5和图5中所呈现的安慰剂组相比，两个NT 201个治疗组在mROMP流口水方面都示出更好的功效结果。从基线随时间推移的平均变化在100U治疗组中在第8周达到最大改善-6.58并且在75U治疗组中在第12周达到最大改善-6.77。诸位发明人得出结论，在两个剂量组中观察到的治疗效果优于安慰剂的效果，并且NT 201效果在所有测量中是一致的并且在整个观察期间是稳健的以证实两种剂量的适当临床相关性。

表5：从研究基线到第4周MP、第8周MP、第12周MP和第16周MP的mROMP流口水分数变化(FAS，OC)

实例6：对安慰剂对照主要期(mROMP)的结果的子组分析

通过病因学的子组分析示出，在NT 201 100U组中，中风后患有流涎的受试者的uSFR平均下降比患有与帕金森病或非典型帕金森症相关的流涎的受试者更高(表6)。

表6：对从研究基线到第4周-MP的uSFR变化的子组分析(完整分析集FAS，观察到的病例OC)

实例7：16周间隔的3个连续治疗周期的功效

16周间隔的3个连续治疗周期的功效结果为流涎的进一步改善提供了证据。还评估了从研究基线到第二次注射后所有观察时间点的uSFR变化以及从每次注射(第一次注射后第16周、32周和48周)到相应的评估时间点(第一次注射后第20周、36周和52周)的变化以及从每次注射到周期结束/研究随访结束(第一次注射后第32、48和64周)的变化。

表7中展示了在没有安慰剂对照组的延长期(EP)的周期基线时的uSFR的汇总统计数据。(随机分配到处于MP的安慰剂组的受试者在相同的设置中以EP的1:1随机化比率随机分配到75U或100U剂量组，MP中的75U或100U剂量组中的受试者在EP中维持其剂量)。两个NT201治疗组中EP的平均uSFR在第2周期基线时最高并且在第4周期基线时最低。另外，NT 20175U组中每个周期基线的平均uSFR略高于NT 201 100U组。当在延长期内分析GICS、DSFS和mROMP的NT201 100U和NT201 75U时，观察到类似的流涎改善。

表7：所有周期基线-EP的平均uSFR(安全评估集SES-EP、观察到的案例OC)

表8：施用到儿童腮腺和颌下腺中的肉毒毒素的剂量表.

序列表

<110> 梅尔兹制药公司

<120> 肉毒神经毒素在治疗流涎中的改进的用途

<130> 2516-000-PCT

<150> EP17162719.3

<151> 2017-03-24

<160> 14

<170> BiSSAP 1.3.5

<210> 1

<211> 3891

<212> DNA

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<400> 1

atgccatttg ttaataaaca atttaattat aaagatcctg taaatggtgt tgatattgct 60

tatataaaaa ttccaaatgc aggacaaatg caaccagtaa aagcttttaa aattcataat 120

aaaatatggg ttattccaga aagagataca tttacaaatc ctgaagaagg agatttaaat 180

ccaccaccag aagcaaaaca agttccagtt tcatattatg attcaacata tttaagtaca 240

gataatgaaa aagataatta tttaaaggga gttacaaaat tatttgagag aatttattca 300

actgatcttg gaagaatgtt gttaacatca atagtaaggg gaataccatt ttggggtgga 360

agtacaatag atacagaatt aaaagttatt gatactaatt gtattaatgt gatacaacca 420

gatggtagtt atagatcaga agaacttaat ctagtaataa taggaccctc agctgatatt 480

atacagtttg aatgtaaaag ctttggacat gaagttttga atcttacgcg aaatggttat 540

ggctctactc aatacattag atttagccca gattttacat ttggttttga ggagtcactt 600

gaagttgata caaatcctct tttaggtgca ggcaaatttg ctacagatcc agcagtaaca 660

ttagcacatg aacttataca tgctggacat agattatatg gaatagcaat taatccaaat 720

agggttttta aagtaaatac taatgcctat tatgaaatga gtgggttaga agtaagcttt 780

gaggaactta gaacatttgg gggacatgat gcaaagttta tagatagttt acaggaaaac 840

gaatttcgtc tatattatta taataagttt aaagatatag caagtacact taataaagct 900

aaatcaatag taggtactac tgcttcatta cagtatatga aaaatgtttt taaagagaaa 960

tatctcctat ctgaagatac atctggaaaa ttttcggtag ataaattaaa atttgataag 1020

ttatacaaaa tgttaacaga gatttacaca gaggataatt ttgttaagtt ttttaaagta 1080

cttaacagaa aaacatattt gaattttgat aaagccgtat ttaagataaa tatagtacct 1140

aaggtaaatt acacaatata tgatggattt aatttaagaa atacaaattt agcagcaaac 1200

tttaatggtc aaaatacaga aattaataat atgaatttta ctaaactaaa aaattttact 1260

ggattgtttg aattttataa gttgctatgt gtaagaggga taataacttc taaaactaaa 1320

tcattagata aaggatacaa taaggcatta aatgatttat gtatcaaagt taataattgg 1380

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<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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Asn Gln Phe Lys Leu Thr Ser Ser Ala Asn Ser Lys Ile Arg Val Thr

900 905 910

Gln Asn Gln Asn Ile Ile Phe Asn Ser Val Phe Leu Asp Phe Ser Val

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Ser Phe Trp Ile Arg Ile Pro Lys Tyr Lys Asn Asp Gly Ile Gln Asn

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Tyr Ile His Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Lys Asn Asn Ser

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Gly Trp Lys Ile Ser Ile Arg Gly Asn Arg Ile Ile Trp Thr Leu Ile

965 970 975

Asp Ile Asn Gly Lys Thr Lys Ser Val Phe Phe Glu Tyr Asn Ile Arg

980 985 990

Glu Asp Ile Ser Glu Tyr Ile Asn Arg Trp Phe Phe Val Thr Ile Thr

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Asn Asn Leu Asn Asn Ala Lys Ile Tyr Ile Asn Gly Lys Leu Glu Ser

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Asn Thr Asp Ile Lys Asp Ile Arg Glu Val Ile Ala Asn Gly Glu Ile

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Ile Phe Lys Leu Asp Gly Asp Ile Asp Arg Thr Gln Phe Ile Trp Met

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Lys Tyr Phe Ser Ile Phe Asn Thr Glu Leu Ser Gln Ser Asn Ile Glu

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Glu Arg Tyr Lys Ile Gln Ser Tyr Ser Glu Tyr Leu Lys Asp Phe Trp

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Gly Asn Pro Leu Met Tyr Asn Lys Glu Tyr Tyr Met Phe Asn Ala Gly

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Asn Lys Asn Ser Tyr Ile Lys Leu Lys Lys Asp Ser Pro Val Gly Glu

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Ile Leu Thr Arg Ser Lys Tyr Asn Gln Asn Ser Lys Tyr Ile Asn Tyr

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Arg Asp Leu Tyr Ile Gly Glu Lys Phe Ile Ile Arg Arg Lys Ser Asn

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Ser Gln Ser Ile Asn Asp Asp Ile Val Arg Lys Glu Asp Tyr Ile Tyr

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Leu Asp Phe Phe Asn Leu Asn Gln Glu Trp Arg Val Tyr Thr Tyr Lys

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Tyr Phe Lys Lys Glu Glu Glu Lys Leu Phe Leu Ala Pro Ile Ser Asp

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Ser Asp Glu Phe Tyr Asn Thr Ile Gln Ile Lys Glu Tyr Asp Glu Gln

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<212> DNA

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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atagatggta gatcattata taataaaaca ttagattgta gagagctttt agttaaaaat 1380

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gatattaatg aagaaactga agttatagac tatccggaca atgtttcagt ggatcaagtt 1500

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<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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485 490 495

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885 890 895

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900 905 910

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915 920 925

Ser Ala Ile Tyr Glu Asn Ser Ser Val Ser Phe Trp Ile Lys Ile Ser

930 935 940

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945 950 955 960

Lys Gln Asn Ser Gly Trp Lys Leu Cys Ile Arg Asn Gly Asn Ile Glu

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Ile Leu Asn Gly Asp Asn Ile Met Phe His Met Leu Tyr Asn Ser Gly

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<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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gatttaagat atgataaaga atattacatg attaacgtaa attatatgaa tagatatatg 3360

tctaaaaaag gcaatggaat tgtttttaat acacgtaaaa ataataatga cttcaatgaa 3420

ggatataaaa ttataataaa aagaattaga ggaaatacaa atgatactag agtacgagga 3480

gaaaatgtat tatattttaa tactacaatt gataacaaac aatatagttt aggtatgtat 3540

aaaccttcta gaaatctagg gactgattta gttccactag gtgcattgga tcaaccaatg 3600

gatgagatac gtaaatatgg ttcgtttata atacaaccat gcaatacttt tgattactat 3660

gcatcacaat tatttttgtc aagtaatgca acaacaaata ggcttggaat actatcaatt 3720

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<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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Phe Thr Arg His Thr Thr Asn Ile Ala Val Glu Lys Phe Glu Asn Gly

130 135 140

Ser Trp Lys Val Thr Asn Ile Ile Thr Pro Ser Val Leu Ile Phe Gly

145 150 155 160

Pro Leu Pro Asn Ile Leu Asp Tyr Thr Ala Ser Leu Thr Leu Gln Gly

165 170 175

Gln Gln Ser Asn Pro Ser Phe Glu Gly Phe Gly Thr Leu Ser Ile Leu

180 185 190

Lys Val Ala Pro Glu Phe Leu Leu Thr Phe Ser Asp Val Thr Ser Asn

195 200 205

Gln Ser Ser Ala Val Leu Gly Lys Ser Ile Phe Cys Met Asp Pro Val

210 215 220

Ile Ala Leu Met His Glu Leu Thr His Ser Leu His Gln Leu Tyr Gly

225 230 235 240

Ile Asn Ile Pro Ser Asp Lys Arg Ile Arg Pro Gln Val Ser Glu Gly

245 250 255

Phe Phe Ser Gln Asp Gly Pro Asn Val Gln Phe Glu Glu Leu Tyr Thr

260 265 270

Phe Gly Gly Ser Asp Val Glu Ile Ile Pro Gln Ile Glu Arg Leu Gln

275 280 285

Leu Arg Glu Lys Ala Leu Gly His Tyr Lys Asp Ile Ala Lys Arg Leu

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Asn Asn Ile Asn Lys Thr Ile Pro Ser Ser Trp Ser Ser Asn Ile Asp

305 310 315 320

Lys Tyr Lys Lys Ile Phe Ser Glu Lys Tyr Asn Phe Asp Lys Asp Asn

325 330 335

Thr Gly Asn Phe Val Val Asn Ile Asp Lys Phe Asn Ser Leu Tyr Ser

340 345 350

Asp Leu Thr Asn Val Met Ser Glu Val Val Tyr Ser Ser Gln Tyr Asn

355 360 365

Val Lys Asn Arg Thr His Tyr Phe Ser Lys His Tyr Leu Pro Val Phe

370 375 380

Ala Asn Ile Leu Asp Asp Asn Ile Tyr Thr Ile Ile Asn Gly Phe Asn

385 390 395 400

Leu Thr Thr Lys Gly Phe Asn Ile Glu Asn Ser Gly Gln Asn Ile Glu

405 410 415

Arg Asn Pro Ala Leu Gln Lys Leu Ser Ser Glu Ser Val Val Asp Leu

420 425 430

Phe Thr Lys Val Cys Leu Arg Leu Thr Arg Asn Ser Arg Asp Asp Ser

435 440 445

Thr Cys Ile Gln Val Lys Asn Asn Thr Leu Pro Tyr Val Ala Asp Lys

450 455 460

Asp Ser Ile Ser Gln Glu Ile Phe Glu Ser Gln Ile Ile Thr Asp Glu

465 470 475 480

Thr Asn Val Glu Asn Tyr Ser Asp Asn Phe Ser Leu Asp Glu Ser Ile

485 490 495

Leu Asp Ala Lys Val Pro Thr Asn Pro Glu Ala Val Asp Pro Leu Leu

500 505 510

Pro Asn Val Asn Met Glu Pro Leu Asn Val Pro Gly Glu Glu Glu Val

515 520 525

Phe Tyr Asp Asp Ile Thr Lys Asp Val Asp Tyr Leu Asn Ser Tyr Tyr

530 535 540

Tyr Leu Glu Ala Gln Lys Leu Ser Asn Asn Val Glu Asn Ile Thr Leu

545 550 555 560

Thr Thr Ser Val Glu Glu Ala Leu Gly Tyr Ser Asn Lys Ile Tyr Thr

565 570 575

Phe Leu Pro Ser Leu Ala Glu Lys Val Asn Lys Gly Val Gln Ala Gly

580 585 590

Leu Phe Leu Asn Trp Ala Asn Glu Val Val Glu Asp Phe Thr Thr Asn

595 600 605

Ile Met Lys Lys Asp Thr Leu Asp Lys Ile Ser Asp Val Ser Ala Ile

610 615 620

Ile Pro Tyr Ile Gly Pro Ala Leu Asn Ile Gly Asn Ser Ala Leu Arg

625 630 635 640

Gly Asn Phe Lys Gln Ala Phe Ala Thr Ala Gly Val Ala Phe Leu Leu

645 650 655

Glu Gly Phe Pro Glu Phe Thr Ile Pro Ala Leu Gly Val Phe Thr Phe

660 665 670

Tyr Ser Ser Ile Gln Glu Arg Glu Lys Ile Ile Lys Thr Ile Glu Asn

675 680 685

Cys Leu Glu Gln Arg Val Lys Arg Trp Lys Asp Ser Tyr Gln Trp Met

690 695 700

Val Ser Asn Trp Leu Ser Arg Ile Thr Thr Arg Phe Asn His Ile Ser

705 710 715 720

Tyr Gln Met Tyr Asp Ser Leu Ser Tyr Gln Ala Asp Ala Ile Lys Ala

725 730 735

Lys Ile Asp Leu Glu Tyr Lys Lys Tyr Ser Gly Ser Asp Lys Glu Asn

740 745 750

Ile Lys Ser Gln Val Glu Asn Leu Lys Asn Ser Leu Asp Val Lys Ile

755 760 765

Ser Glu Ala Met Asn Asn Ile Asn Lys Phe Ile Arg Glu Cys Ser Val

770 775 780

Thr Tyr Leu Phe Lys Asn Met Leu Pro Lys Val Ile Asp Glu Leu Asn

785 790 795 800

Lys Phe Asp Leu Lys Thr Lys Thr Glu Leu Ile Asn Leu Ile Asp Ser

805 810 815

His Asn Ile Ile Leu Val Gly Glu Val Asp Arg Leu Lys Ala Lys Val

820 825 830

Asn Glu Ser Phe Glu Asn Thr Ile Pro Phe Asn Ile Phe Ser Tyr Thr

835 840 845

Asn Asn Ser Leu Leu Lys Asp Met Ile Asn Glu Tyr Phe Asn Ser Ile

850 855 860

Asn Asp Ser Lys Ile Leu Ser Leu Gln Asn Lys Lys Asn Thr Leu Met

865 870 875 880

Asp Thr Ser Gly Tyr Asn Ala Glu Val Arg Val Glu Gly Asn Val Gln

885 890 895

Leu Asn Pro Ile Phe Pro Phe Asp Phe Lys Leu Gly Ser Ser Gly Asp

900 905 910

Asp Arg Gly Lys Val Ile Val Thr Gln Asn Glu Asn Ile Val Tyr Asn

915 920 925

Ala Met Tyr Glu Ser Phe Ser Ile Ser Phe Trp Ile Arg Ile Asn Lys

930 935 940

Trp Val Ser Asn Leu Pro Gly Tyr Thr Ile Ile Asp Ser Val Lys Asn

945 950 955 960

Asn Ser Gly Trp Ser Ile Gly Ile Ile Ser Asn Phe Leu Val Phe Thr

965 970 975

Leu Lys Gln Asn Glu Asn Ser Glu Gln Asp Ile Asn Phe Ser Tyr Asp

980 985 990

Ile Ser Lys Asn Ala Ala Gly Tyr Asn Lys Trp Phe Phe Val Thr Ile

995 1000 1005

Thr Thr Asn Met Met Gly Asn Met Met Ile Tyr Ile Asn Gly Lys Leu

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Ile Asp Thr Ile Lys Val Lys Glu Leu Thr Gly Ile Asn Phe Ser Lys

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Ser Asp Ser Asp Asn Ile Asn Met Trp Ile Arg Asp Phe Tyr Ile Phe

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Ala Lys Glu Leu Asp Asp Lys Asp Ile Asn Ile Leu Phe Asn Ser Leu

1075 1080 1085

Gln Tyr Thr Asn Val Val Lys Asp Tyr Trp Gly Asn Asp Leu Arg Tyr

1090 1095 1100

Asp Lys Glu Tyr Tyr Met Ile Asn Val Asn Tyr Met Asn Arg Tyr Met

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Ser Lys Lys Gly Asn Gly Ile Val Phe Asn Thr Arg Lys Asn Asn Asn

1125 1130 1135

Asp Phe Asn Glu Gly Tyr Lys Ile Ile Ile Lys Arg Ile Arg Gly Asn

1140 1145 1150

Thr Asn Asp Thr Arg Val Arg Gly Glu Asn Val Leu Tyr Phe Asn Thr

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Thr Ile Asp Asn Lys Gln Tyr Ser Leu Gly Met Tyr Lys Pro Ser Arg

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Asn Leu Gly Thr Asp Leu Val Pro Leu Gly Ala Leu Asp Gln Pro Met

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Asn Arg Leu Gly Ile Leu Ser Ile Gly Ser Tyr Ser Phe Lys Leu Gly

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Asp Asp Tyr Trp Phe Asn His Glu Tyr Leu Ile Pro Val Ile Lys Ile

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Val Pro Ala Ser Glu

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<210> 9

<211> 3756

<212> DNA

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<400> 9

atgccaaaaa ttaatagttt taattataat gatcctgtta atgatagaac aattttatat 60

attaaaccag gcggttgtca agaattttat aaatcattta atattatgaa aaatatttgg 120

ataattccag agagaaatgt aattggtaca accccccaag attttcatcc gcctacttca 180

ttaaaaaatg gagatagtag ttattatgac cctaattatt tacaaagtga tgaagaaaag 240

gatagatttt taaaaatagt cacaaaaata tttaatagaa taaataataa tctttcagga 300

gggattttat tagaagaact gtcaaaagct aatccatatt tagggaatga taatactcca 360

gataatcaat tccatattgg tgatgcatca gcagttgaga ttaaattctc aaatggtagc 420

caagacatac tattacctaa tgttattata atgggagcag agcctgattt atttgaaact 480

aacagttcca atatttctct aagaaataat tatatgccaa gcaatcaccg ttttggatca 540

atagctatag taacattctc acctgaatat tcttttagat ttaatgataa ttgtatgaat 600

gaatttattc aagatcctgc tcttacatta atgcatgaat taatacattc attacatgga 660

ctatatgggg ctaaagggat tactacaaag tatactataa cacaaaaaca aaatccccta 720

ataacaaata taagaggtac aaatattgaa gaattcttaa cttttggagg tactgattta 780

aacattatta ctagtgctca gtccaatgat atctatacta atcttctagc tgattataaa 840

aaaatagcgt ctaaacttag caaagtacaa gtatctaatc cactacttaa tccttataaa 900

gatgtttttg aagcaaagta tggattagat aaagatgcta gcggaattta ttcggtaaat 960

ataaacaaat ttaatgatat ttttaaaaaa ttatacagct ttacggaatt tgatttacga 1020

actaaatttc aagttaaatg taggcaaact tatattggac agtataaata cttcaaactt 1080

tcaaacttgt taaatgattc tatttataat atatcagaag gctataatat aaataattta 1140

aaggtaaatt ttagaggaca gaatgcaaat ttaaatccta gaattattac accaattaca 1200

ggtagaggac tagtaaaaaa aatcattaga ttttgtaaaa atattgtttc tgtaaaaggc 1260

ataaggaaat caatatgtat cgaaataaat aatggtgagt tattttttgt ggcttccgag 1320

aatagttata atgatgataa tataaatact cctaaagaaa ttgacgatac agtaacttca 1380

aataataatt atgaaaatga tttagatcag gttattttaa attttaatag tgaatcagca 1440

cctggacttt cagatgaaaa attaaattta actatccaaa atgatgctta tataccaaaa 1500

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ttctatttag atgcacagaa agtgcccgaa ggtgaaaata atgtcaatct cacctcttca 1620

attgatacag cattattaga acaacctaaa atatatacat ttttttcatc agaatttatt 1680

aataatgtca ataaacctgt gcaagcagca ttatttgtaa gctggataca acaagtgtta 1740

gtagatttta ctactgaagc taaccaaaaa agtactgttg ataaaattgc agatatttct 1800

atagttgttc catatatagg tcttgcttta aatataggaa atgaagcaca aaaaggaaat 1860

tttaaagatg cacttgaatt attaggagca ggtattttat tagaatttga acccgagctt 1920

ttaattccta caattttagt attcacgata aaatcttttt taggttcatc tgataataaa 1980

aataaagtta ttaaagcaat aaataatgca ttgaaagaaa gagatgaaaa atggaaagaa 2040

gtatatagtt ttatagtatc gaattggatg actaaaatta atacacaatt taataaaaga 2100

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tctaagtata atagttatac tttagaggaa aaaaatgagc ttacaaataa atatgatatt 2220

aagcaaatag aaaatgaact taatcaaaag gtttctatag caatgaataa tatagacagg 2280

ttcttaactg aaagttctat atcctattta atgaaaataa taaatgaagt aaaaattaat 2340

aaattaagag aatatgatga gaatgtcaaa acgtatttat tgaattatat tatacaacat 2400

ggatcaatct tgggagagag tcagcaagaa ctaaattcta tggtaactga taccctaaat 2460

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aataaattct ttaagagaat taaaagtagt tcagttttaa atatgagata taaaaatgat 2580

aaatacgtag atacttcagg atatgattca aatataaata ttaatggaga tgtatataaa 2640

tatccaacta ataaaaatca atttggaata tataatgata aacttagtga agttaatata 2700

tctcaaaatg attacattat atatgataat aaatataaaa attttagtat tagtttttgg 2760

gtaagaattc ctaactatga taataagata gtaaatgtta ataatgaata cactataata 2820

aattgtatga gagataataa ttcaggatgg aaagtatctc ttaatcataa tgaaataatt 2880

tggacattcg aagataatcg aggaattaat caaaaattag catttaacta tggtaacgca 2940

aatggtattt ctgattatat aaataagtgg atttttgtaa ctataactaa tgatagatta 3000

ggagattcta aactttatat taatggaaat ttaatagatc aaaaatcaat tttaaattta 3060

ggtaatattc atgttagtga caatatatta tttaaaatag ttaattgtag ttatacaaga 3120

tatattggta ttagatattt taatattttt gataaagaat tagatgaaac agaaattcaa 3180

actttatata gcaatgaacc taatacaaat attttgaagg atttttgggg aaattatttg 3240

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ttatatagtg gaataaaagt taaaatacaa agagttaata atagtagtac taacgataat 3420

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ccattatatg ctgatacagc taccacaaat aaagagaaaa caataaaaat atcatcatct 3540

ggcaatagat ttaatcaagt agtagttatg aattcagtag gaaattgtac aatgaatttt 3600

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<210> 10

<211> 1251

<212> PRT

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<400> 10

Met Pro Lys Ile Asn Ser Phe Asn Tyr Asn Asp Pro Val Asn Asp Arg

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Thr Ile Leu Tyr Ile Lys Pro Gly Gly Cys Gln Glu Phe Tyr Lys Ser

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Phe Asn Ile Met Lys Asn Ile Trp Ile Ile Pro Glu Arg Asn Val Ile

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Gly Thr Thr Pro Gln Asp Phe His Pro Pro Thr Ser Leu Lys Asn Gly

50 55 60

Asp Ser Ser Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Gln Ser Asp Glu Glu Lys

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Asp Arg Phe Leu Lys Ile Val Thr Lys Ile Phe Asn Arg Ile Asn Asn

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Asn Leu Ser Gly Gly Ile Leu Leu Glu Glu Leu Ser Lys Ala Asn Pro

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Tyr Leu Gly Asn Asp Asn Thr Pro Asp Asn Gln Phe His Ile Gly Asp

115 120 125

Ala Ser Ala Val Glu Ile Lys Phe Ser Asn Gly Ser Gln Asp Ile Leu

130 135 140

Leu Pro Asn Val Ile Ile Met Gly Ala Glu Pro Asp Leu Phe Glu Thr

145 150 155 160

Asn Ser Ser Asn Ile Ser Leu Arg Asn Asn Tyr Met Pro Ser Asn His

165 170 175

Arg Phe Gly Ser Ile Ala Ile Val Thr Phe Ser Pro Glu Tyr Ser Phe

180 185 190

Arg Phe Asn Asp Asn Cys Met Asn Glu Phe Ile Gln Asp Pro Ala Leu

195 200 205

Thr Leu Met His Glu Leu Ile His Ser Leu His Gly Leu Tyr Gly Ala

210 215 220

Lys Gly Ile Thr Thr Lys Tyr Thr Ile Thr Gln Lys Gln Asn Pro Leu

225 230 235 240

Ile Thr Asn Ile Arg Gly Thr Asn Ile Glu Glu Phe Leu Thr Phe Gly

245 250 255

Gly Thr Asp Leu Asn Ile Ile Thr Ser Ala Gln Ser Asn Asp Ile Tyr

260 265 270

Thr Asn Leu Leu Ala Asp Tyr Lys Lys Ile Ala Ser Lys Leu Ser Lys

275 280 285

Val Gln Val Ser Asn Pro Leu Leu Asn Pro Tyr Lys Asp Val Phe Glu

290 295 300

Ala Lys Tyr Gly Leu Asp Lys Asp Ala Ser Gly Ile Tyr Ser Val Asn

305 310 315 320

Ile Asn Lys Phe Asn Asp Ile Phe Lys Lys Leu Tyr Ser Phe Thr Glu

325 330 335

Phe Asp Leu Arg Thr Lys Phe Gln Val Lys Cys Arg Gln Thr Tyr Ile

340 345 350

Gly Gln Tyr Lys Tyr Phe Lys Leu Ser Asn Leu Leu Asn Asp Ser Ile

355 360 365

Tyr Asn Ile Ser Glu Gly Tyr Asn Ile Asn Asn Leu Lys Val Asn Phe

370 375 380

Arg Gly Gln Asn Ala Asn Leu Asn Pro Arg Ile Ile Thr Pro Ile Thr

385 390 395 400

Gly Arg Gly Leu Val Lys Lys Ile Ile Arg Phe Cys Lys Asn Ile Val

405 410 415

Ser Val Lys Gly Ile Arg Lys Ser Ile Cys Ile Glu Ile Asn Asn Gly

420 425 430

Glu Leu Phe Phe Val Ala Ser Glu Asn Ser Tyr Asn Asp Asp Asn Ile

435 440 445

Asn Thr Pro Lys Glu Ile Asp Asp Thr Val Thr Ser Asn Asn Asn Tyr

450 455 460

Glu Asn Asp Leu Asp Gln Val Ile Leu Asn Phe Asn Ser Glu Ser Ala

465 470 475 480

Pro Gly Leu Ser Asp Glu Lys Leu Asn Leu Thr Ile Gln Asn Asp Ala

485 490 495

Tyr Ile Pro Lys Tyr Asp Ser Asn Gly Thr Ser Asp Ile Glu Gln His

500 505 510

Asp Val Asn Glu Leu Asn Val Phe Phe Tyr Leu Asp Ala Gln Lys Val

515 520 525

Pro Glu Gly Glu Asn Asn Val Asn Leu Thr Ser Ser Ile Asp Thr Ala

530 535 540

Leu Leu Glu Gln Pro Lys Ile Tyr Thr Phe Phe Ser Ser Glu Phe Ile

545 550 555 560

Asn Asn Val Asn Lys Pro Val Gln Ala Ala Leu Phe Val Ser Trp Ile

565 570 575

Gln Gln Val Leu Val Asp Phe Thr Thr Glu Ala Asn Gln Lys Ser Thr

580 585 590

Val Asp Lys Ile Ala Asp Ile Ser Ile Val Val Pro Tyr Ile Gly Leu

595 600 605

Ala Leu Asn Ile Gly Asn Glu Ala Gln Lys Gly Asn Phe Lys Asp Ala

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Leu Glu Leu Leu Gly Ala Gly Ile Leu Leu Glu Phe Glu Pro Glu Leu

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Leu Ile Pro Thr Ile Leu Val Phe Thr Ile Lys Ser Phe Leu Gly Ser

645 650 655

Ser Asp Asn Lys Asn Lys Val Ile Lys Ala Ile Asn Asn Ala Leu Lys

660 665 670

Glu Arg Asp Glu Lys Trp Lys Glu Val Tyr Ser Phe Ile Val Ser Asn

675 680 685

Trp Met Thr Lys Ile Asn Thr Gln Phe Asn Lys Arg Lys Glu Gln Met

690 695 700

Tyr Gln Ala Leu Gln Asn Gln Val Asn Ala Ile Lys Thr Ile Ile Glu

705 710 715 720

Ser Lys Tyr Asn Ser Tyr Thr Leu Glu Glu Lys Asn Glu Leu Thr Asn

725 730 735

Lys Tyr Asp Ile Lys Gln Ile Glu Asn Glu Leu Asn Gln Lys Val Ser

740 745 750

Ile Ala Met Asn Asn Ile Asp Arg Phe Leu Thr Glu Ser Ser Ile Ser

755 760 765

Tyr Leu Met Lys Ile Ile Asn Glu Val Lys Ile Asn Lys Leu Arg Glu

770 775 780

Tyr Asp Glu Asn Val Lys Thr Tyr Leu Leu Asn Tyr Ile Ile Gln His

785 790 795 800

Gly Ser Ile Leu Gly Glu Ser Gln Gln Glu Leu Asn Ser Met Val Thr

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Asp Thr Leu Asn Asn Ser Ile Pro Phe Lys Leu Ser Ser Tyr Thr Asp

820 825 830

Asp Lys Ile Leu Ile Ser Tyr Phe Asn Lys Phe Phe Lys Arg Ile Lys

835 840 845

Ser Ser Ser Val Leu Asn Met Arg Tyr Lys Asn Asp Lys Tyr Val Asp

850 855 860

Thr Ser Gly Tyr Asp Ser Asn Ile Asn Ile Asn Gly Asp Val Tyr Lys

865 870 875 880

Tyr Pro Thr Asn Lys Asn Gln Phe Gly Ile Tyr Asn Asp Lys Leu Ser

885 890 895

Glu Val Asn Ile Ser Gln Asn Asp Tyr Ile Ile Tyr Asp Asn Lys Tyr

900 905 910

Lys Asn Phe Ser Ile Ser Phe Trp Val Arg Ile Pro Asn Tyr Asp Asn

915 920 925

Lys Ile Val Asn Val Asn Asn Glu Tyr Thr Ile Ile Asn Cys Met Arg

930 935 940

Asp Asn Asn Ser Gly Trp Lys Val Ser Leu Asn His Asn Glu Ile Ile

945 950 955 960

Trp Thr Phe Glu Asp Asn Arg Gly Ile Asn Gln Lys Leu Ala Phe Asn

965 970 975

Tyr Gly Asn Ala Asn Gly Ile Ser Asp Tyr Ile Asn Lys Trp Ile Phe

980 985 990

Val Thr Ile Thr Asn Asp Arg Leu Gly Asp Ser Lys Leu Tyr Ile Asn

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Gly Asn Leu Ile Asp Gln Lys Ser Ile Leu Asn Leu Gly Asn Ile His

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Val Ser Asp Asn Ile Leu Phe Lys Ile Val Asn Cys Ser Tyr Thr Arg

1025 1030 1035 1040

Tyr Ile Gly Ile Arg Tyr Phe Asn Ile Phe Asp Lys Glu Leu Asp Glu

1045 1050 1055

Thr Glu Ile Gln Thr Leu Tyr Ser Asn Glu Pro Asn Thr Asn Ile Leu

1060 1065 1070

Lys Asp Phe Trp Gly Asn Tyr Leu Leu Tyr Asp Lys Glu Tyr Tyr Leu

1075 1080 1085

Leu Asn Val Leu Lys Pro Asn Asn Phe Ile Asp Arg Arg Lys Asp Ser

1090 1095 1100

Thr Leu Ser Ile Asn Asn Ile Arg Ser Thr Ile Leu Leu Ala Asn Arg

1105 1110 1115 1120

Leu Tyr Ser Gly Ile Lys Val Lys Ile Gln Arg Val Asn Asn Ser Ser

1125 1130 1135

Thr Asn Asp Asn Leu Val Arg Lys Asn Asp Gln Val Tyr Ile Asn Phe

1140 1145 1150

Val Ala Ser Lys Thr His Leu Phe Pro Leu Tyr Ala Asp Thr Ala Thr

1155 1160 1165

Thr Asn Lys Glu Lys Thr Ile Lys Ile Ser Ser Ser Gly Asn Arg Phe

1170 1175 1180

Asn Gln Val Val Val Met Asn Ser Val Gly Asn Cys Thr Met Asn Phe

1185 1190 1195 1200

Lys Asn Asn Asn Gly Asn Asn Ile Gly Leu Leu Gly Phe Lys Ala Asp

1205 1210 1215

Thr Val Val Ala Ser Thr Trp Tyr Tyr Thr His Met Arg Asp His Thr

1220 1225 1230

Asn Ser Asn Gly Cys Phe Trp Asn Phe Ile Ser Glu Glu His Gly Trp

1235 1240 1245

Gln Glu Lys

1250

<210> 11

<211> 3843

<212> DNA

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<400> 11

atgccagttg taataaatag ttttaattat aatgaccctg ttaatgatga gacaatttta 60

tacatgcaga aaccatatga agaaagaagt agaaaatatt ataaagcttt tgagattatg 120

cctaatgttt ggataatgcc tgagagagat acaataggaa ctaagcctga tgagtttcag 180

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aatcctacag ggaaagtttt gttagaagaa gtatcaaatg ctagaccata tttaggagat 360

gatgacacgc taattaatga attccttcca gttaatgtaa ctacaagtgt taatataaaa 420

ttttcaactg atgttgaaag ttcaataata tcgaatcttc ttgtattggg agcaggacct 480

gatatattta aagcttactg tacccccctt gtaaggttta ataagtcaga taaattaatt 540

gaaccaagta atcatggttt tggatcaatt aatatcttga cattttcacc tgagtatgaa 600

catattttta atgatattag tggagggaat cataatagta cagaatcatt tattgcagat 660

cctgcaattt cactagctca tgaattgata catgcactac atggattata cggggctaag 720

gcagttactc ataaagagtc tctagtagca gagcgaggac ctcttatgat agccgaaaag 780

cccataaggc tagaagaatt tttaactttt ggaggtgagg atttaaatat cattcctagt 840

gctatgaagg aaaaaatata taacgatctt ttagctaact atgaaaaaat agctactaga 900

cttagagaag ttaatacggc tcctcctgga tatgatatta atgaatataa agattatttt 960

caatggaagt atggactaga tagaaatgca gatggaagtt atactgtgaa tagaaataaa 1020

tttaatgaaa tttataaaaa attatatagc tttacagaga ttgacttagc aaataaattt 1080

aaagtaaaat gtagaaatac ttattttatt aaatatggat ttgtaaaagt tccaaatttg 1140

ttagatgatg atatttatac tgtatcagag gggtttaata taggtaattt agcagtaaac 1200

aatcgcggac aaaatataaa tttaaatcct aaaattattg attccattcc agataaaggt 1260

ttagtggaaa agattattaa attttgtaag agcattattc ctagaaaagg tacgaagcag 1320

tcaccgtcac tatgcattag agtaaataat agggagttat tttttgtagc ttcagaaagt 1380

agctataatg aaagtgatat taatacacct aaagaaattg acgatacaac aaatctaaat 1440

aataattata gaaataattt agatgaagtt attttagatt ataatagtga gacaatacct 1500

caaatatcaa atcgaacatt aaatacactt gtacaagaca atagttatgt gccaagatat 1560

gattctaatg gaacaagtga aatagaggaa tatgatgttg ttgactttaa tgtatttttc 1620

tatttacatg cacaaaaagt accagaaggt gaaaccaata taagtttaac ttcttcaatt 1680

gatacagcat tattagaaga atccaaagta tatacatttt tttcttcaga gtttatcgat 1740

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<212> PRT

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

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<210> 13

<211> 3894

<212> DNA

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<223> “n为a、c、g或t”

<220>

<223> n为a、c、g或t

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aaagaaaatt ttaaaaatgc ttttgaaata ggtggagccg ctatcttaat ggagtttatt 1980

ccagaactta ttgtacctat agttggattt tttacattag aatcatatgt aggaaataaa 2040

gggcatatta ttatgacgat atccaatgct ttaaagaaaa gggatcaaaa atggacagat 2100

atgtatggtt tgatagtatc gcagtggctc tcaacggtta atactcaatt ttatacaata 2160

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tatttacttg atgaagtaaa tattctaaaa tcaaaagtaa atagacacct aaaagacagt 2520

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agatacgata cacaatacta tctgtttaat caaggtatgc aaaatatcta tataaagtat 3360

tttagtaaag cttctatggg ggaaactgca ccacgtacaa actttaataa tgcagcaata 3420

aattatcaaa atttatatct tggtttacga tttattataa aaaaagcatc aaattctcgg 3480

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<210> 14

<211> 1297

<212> PRT

<213> 肉毒梭菌（Clostridium botulinum）

<223> “Xaa可以是任何天然存在的氨基酸”

<220>

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<220>

<221> 不确定的

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Met Phe Asp Asn Phe Ser Ile Asn Phe Trp Val Arg Thr Pro Lys Tyr

930 935 940

Asn Asn Asn Asp Ile Gln Thr Tyr Leu Gln Asn Glu Tyr Thr Ile Ile

945 950 955 960

Ser Cys Ile Lys Asn Asp Ser Gly Trp Lys Val Ser Ile Lys Gly Asn

965 970 975

Arg Ile Ile Trp Thr Leu Ile Asp Val Asn Ala Lys Ser Lys Ser Ile

980 985 990

Phe Phe Glu Tyr Ser Ile Lys Asp Asn Ile Ser Asp Tyr Ile Asn Lys

995 1000 1005

Trp Phe Ser Ile Thr Ile Thr Asn Asp Arg Leu Gly Asn Ala Asn Ile

1010 1015 1020

Tyr Ile Asn Gly Ser Leu Lys Lys Ser Glu Lys Ile Leu Asn Leu Asp

1025 1030 1035 1040

Arg Ile Asn Ser Ser Asn Asp Ile Asp Phe Lys Leu Ile Asn Cys Thr

1045 1050 1055

Asp Thr Thr Lys Phe Val Trp Ile Lys Asp Phe Asn Ile Phe Gly Arg

1060 1065 1070

Glu Leu Asn Ala Thr Glu Val Ser Ser Leu Tyr Trp Ile Gln Ser Ser

1075 1080 1085

Thr Asn Thr Leu Lys Asp Phe Trp Gly Asn Pro Leu Arg Tyr Asp Thr

1090 1095 1100

Gln Tyr Tyr Leu Phe Asn Gln Gly Met Gln Asn Ile Tyr Ile Lys Tyr

1105 1110 1115 1120

Phe Ser Lys Ala Ser Met Gly Glu Thr Ala Pro Arg Thr Asn Phe Asn

1125 1130 1135

Asn Ala Ala Ile Asn Tyr Gln Asn Leu Tyr Leu Gly Leu Arg Phe Ile

1140 1145 1150

Ile Lys Lys Ala Ser Asn Ser Arg Asn Ile Asn Asn Asp Asn Ile Val

1155 1160 1165

Arg Glu Gly Asp Tyr Ile Tyr Leu Asn Ile Asp Asn Ile Ser Asp Glu

1170 1175 1180

Ser Tyr Arg Val Tyr Val Leu Val Asn Ser Lys Glu Ile Gln Thr Gln

1185 1190 1195 1200

Leu Phe Leu Ala Pro Ile Asn Asp Asp Pro Thr Phe Tyr Asp Val Leu

1205 1210 1215

Gln Ile Lys Lys Tyr Tyr Glu Lys Thr Thr Tyr Asn Cys Gln Ile Leu

1220 1225 1230

Cys Glu Lys Asp Thr Lys Thr Phe Gly Leu Phe Gly Ile Gly Lys Phe

1235 1240 1245

Val Lys Asp Tyr Gly Tyr Val Trp Asp Thr Tyr Asp Asn Tyr Phe Cys

1250 1255 1260

Ile Ser Gln Trp Tyr Leu Arg Arg Ile Ser Glu Asn Ile Asn Lys Leu

1265 1270 1275 1280

Arg Leu Gly Cys Asn Trp Gln Phe Ile Pro Val Asp Glu Gly Trp Thr

1285 1290 1295

Glu

Claims (15)

1.一种用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。

2.根据权利要求1所述的供使用的肉毒神经毒素，其中施用到腮腺和颌下腺中的所述肉毒神经毒素的总剂量介于70 U与110 U之间。

3.根据权利要求1或2中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素在肉毒神经毒素浓度介于45 U/mL与55 U/mL之间的范围内的水性组合物中施用。

4.根据权利要求1到3中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素以每一个注射部位0.3到0.5mL施用到所述颌下腺中并且以每一个注射部位0.5到0.7mL施用到所述腮腺中。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素注射到每一个颌下腺的一个部位中和/或注射到每一个腮腺的一个部位中。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中通过使用超声引导或不使用超声引导将所述肉毒神经毒素注射到腮腺和颌下腺中。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中以至少两个连续的治疗周期，优选地以至少2个、至少3个或至少4个治疗周期将所述肉毒神经毒素施用到腮腺和颌下腺中。

8.根据权利要求7所述的供使用的肉毒神经毒素，其中将所述肉毒神经毒素施用到腮腺和颌下腺中的两个连续治疗周期之间存在时间间隔，其中所述时间间隔介于10周与20周之间或介于12周与20周之间，具体地介于14周与18周之间，更具体地15周、16周或17周。

9.根据权利要求1到8中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素是肉毒神经毒素复合物。

10.根据权利要求1到9中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素是肉毒神经毒素复合物的神经毒性组分，其中所述神经毒性组分缺乏肉毒梭菌神经毒素复合物的任何其它蛋白质组分。

11.根据权利要求1到10中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述肉毒神经毒素选自包含以下的血清型的组：肉毒神经毒素血清型A、肉毒神经毒素血清型B、肉毒神经毒素血清型C1、肉毒神经毒素血清型D、肉毒神经毒素血清型E、肉毒神经毒素血清型F或肉毒神经毒素血清型G。

12.根据权利要求1到11中任一项所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述疾病或病状与帕金森病、进行性核上性麻痹、皮质基底节变性、多系统萎缩、肌萎缩侧索硬化症(ALS)、脑瘫、中风、创伤性脑损伤(TBI)、氯氮平诱导的多涎、瑞特综合征(Rett syndrome)、安格曼综合征(Angelman syndrome)、癫痫性脑病和脑肿瘤、全咽切除术(totalpharyngolaryngectomy)、环状软骨上喉切除术(supracricoidlaryngectomy)和声门上喉切除术、痴呆、或智力残疾相关。

13.根据权利要求12所述的供使用的肉毒神经毒素，其中所述疾病或病状与中风相关。

14.一种药物组合物，其包括用于治疗与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的肉毒神经毒素和药学上可接受的载剂，其中所述肉毒神经毒素通过注射到腮腺和颌下腺中施用，并且其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的剂量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。

15.一种治疗患者的与流涎或唾液产生增多相关的疾病或病状的方法，所述方法包括通过注射到腮腺和颌下腺中来施用治疗有效量的肉毒神经毒素，其中施用到所述腮腺中的每一个和所述颌下腺中的每一个中的肉毒神经毒素的量之间的比率介于1.45:1与1.7:1之间。