CN108070020B - 一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物，具体地，本发明提供了一种具有抗衰老、加速细胞新陈代谢功能的多肽，和包含该多肽的化妆品组合物。采用基因工程方法高效制备本发明的活性多肽，含有本发明多肽的化妆品组合物能显著地改善皮肤弹性，表现出了显著地抗皮肤衰老功效。

Description

一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体地本发明涉及一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物。
背景技术
胎盘(Placenta)，中医也称为“紫河车”，在远古时代既有应用。目前，已有确切的证明表明胎盘具有临床应用价值。胎盘对胎儿具有很强的保护和滋养作用，提供利于胎儿发育的生理环境。现代医学检测表明，胎盘中含有多种的激素、酶、多肽、细胞因子等具有治疗疾病、美容、健身的功能。现代胎盘制剂的研究，不仅用于治疗疾病，还被广泛应用到美容领域。因此，胎盘制剂用途包括了临床应用和美容及保健用途。
在我国胎盘有着悠久的药用历史，可用于妇女内分泌紊乱类妇科疾病治疗。在保健品方面也有应用，主要用于抗衰老、美容、增强免疫力等领域。研究认为，胎盘制品抗衰老、美容机制在于胎盘中的生理活性蛋白、细胞生长因子、多种酶和活性多肽等有效成分的抗细胞脂质过氧化作用、促进皮肤新陈代谢作用、细胞分裂促进作用、内分泌调节作用、抗炎作用、抗过敏作用、安眠作用以及保湿作用等。
胎盘的来源包括人胎盘和动物胎盘，如牛、羊、鹿、猪等动物的胎盘。人胎盘由于来源和传染性疾病等因素受到很大的限制。而动物胎盘，由于疯牛病等的原因也逐渐加大了法制管制。生理活性肽作为胎盘中的一类重要物质，具有优异的生物活性，在细胞生理及代谢功能的调节上具有重要的作用。因此，将胎盘中具有生理活性的多肽鉴定、分离出来，作为药物或功能性保健用品，具有明显的优势。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物，所述组合物中含有抗衰老、加速细胞新陈代谢的活性多肽。
本发明的第一方面提供了一种多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明的还提供了一种多核苷酸分子，所述多核苷酸分子编码本发明的第一方面所述的多肽。优选地，所述多核苷酸分子为编码如SEQ ID NO.1所示多肽的多核苷酸。
本发明的还提供了一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物，所述化妆品组合物包含本发明的第一方面所述的多肽。
优选地，所述化妆品组合物还包含化妆品用辅料，所述辅料为增稠剂、表面活性剂、助表面活性剂、皮肤调理剂、防腐剂、香精、润滑剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂和填充剂中的一种或多种。
优选地，所述化妆品组合物还包含助表面活性剂。
优选地，所述化妆品组合物还包含丙二醇。
优选地，所述化妆品组合物还包含甘油。
优选地，所述化妆品组合物还包含透明质酸钠。
优选地，所述化妆品组合物还包含黄原胶。
优选地，所述化妆品组合物包括：SEQ ID NO.1所示多肽0.5重量份，透明质酸钠0.25重量份，黄原胶0.25重量份，丙二醇3重量份，甘油6重量份，助表面活性剂10重量份，和水53重量份。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
下面结合具体实施例，阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明详细条件的实验方法，通常按照常规条件如美国Sambrook.J等著《分子克隆实验室指南》中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
实施例1活性多肽分离鉴定和生物活性的检测
1)取500g牛胎盘，去除筋膜，清洗后切成小块后经组织匀浆机粉碎，80目过滤获得匀浆液待用；
2)取100ml匀浆液，用稀盐酸调pH至2，加入0.5g胃蛋白酶(比活为3000U/g)，35-37℃反应2h；
3)将pH调至8.5，加入0.5g胰蛋白酶(比活为3000U/g)，40-45℃反应3-4h；加盐酸调pH至5.0终止消化，滤纸过滤后用0.4μm的滤膜再次过滤；
4)用截留分子量为4kD的超滤膜超滤，滤液中加入活性炭，室温低速搅拌1h后过滤除去活性炭，真空浓缩后冷冻干燥，得活性多肽粉末。
采用凝胶法对获得的多肽粉末进行分离鉴定，获得了8种纯度超过95％的活性多肽单体，分别命名为多肽1-多肽8。
生物活性检测
将正常成人成纤维细胞PCS-201-012(购自ATCC)以1×104细胞接种密度在24孔板内，DMEM培养基(GIBICO公司)加10％小牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素，实验组添加1％(w/v)的各活性多肽单体，每组接种24个孔进行平行试验，每3天换液一次。在37℃5％CO2培养箱中恒温进行，每天对每组6个孔进行胰酶-EDTA消化，记录生长的细胞数目。培养6天后的细胞数目如表1所示。
表1
Figure GDA0002972754750000031
Figure GDA0002972754750000041
从结果看出(Prism5统计分析，t-test)，多肽2可以显著刺激成纤维细胞的增殖，生长曲线表明加多肽2的实验组，成纤维细胞在对数期生长速度较快，培养6天后获得的活细胞数量比未加多肽的对照组提高了一倍以上，因此多肽2具有明显的促进细胞新陈代谢的作用。
对纯化的多肽2进行氨基酸测序(北京诺禾致源)，测得多肽2的氨基酸序列为QDRHATHLD(SEQ ID NO.1)。
实施例2活性多肽的基因工程制备
人工合成编码多肽2的DNA序列，连入使用核酸内切酶Nde I和Xho I双酶切的pET28a载体(购自宝生物工程(大连)有限公司)，构建得到重组表达多肽2的质粒p2-pET28a。使用Nde I和Xho I双酶切验证所构建的质粒，电泳检测酶切产物，与预期相符。将p2-pET28a转化入E.coli BL21(DE3)，得到多肽2表达菌株E.coli BL21-p2。
将表达菌株E.coli BL21-p2接入LB培养基(含Kan 100mg/ml)中37℃培养。当D600值达到0.6～0.8时，加入IPTG至终浓度分别为0.02mmol/L，22℃诱导16h，SDS-PAGE电泳检测可溶性蛋白的表达。结果表明加入IPTG后，多肽2有明显表达，条带大小与预期大小相符。大部分目的蛋白存在于上清液中，少部分以包涵体形式存在于沉淀中。
采用实施例1中的生物活性检测方法对获得的多肽2进行活性检测，其生物活性与胎盘中提取的活性一致。
实施例3抗衰老测试
妆品组合物：将实施例2制得的多肽2配制成化妆品组合物，多肽0.5g，透明质酸钠0.25g，丙二醇3g，甘油6g，助表面活性剂10g，黄原胶0.25g，水53g。对照品中不含多肽2。
测试方法：采用设备公司建议方法，进行皮肤弹性测试，检测抗衰老效果。本实施例中，选取30位健康志愿者，随机分为三组，每日早晚使用相应的样品或对照品，分别0周、1周、2周、3周、4周后，测试区域皮肤弹性R2、R5、R7值，数值越接近1，皮肤弹性越好(Reviscometer RV600弹性纤维组织测试探头，Courage+Khazaka electronic GmbH(CK)公司)。
试验区域为面部左右颧骨、鼻尖与瞳孔交线处左右脸颊、太阳穴与嘴角交线处左右侧；其中R2＝Ua/Uf，R5＝Ur/Ue，R7＝Ur/Uf；Uf为皮肤最大拉伸量；Ue为恒定负压加到皮肤上后，0.1秒钟时皮肤的拉伸量，定位弹性部分拉伸量；Ur为取消负压后，皮肤就会迅速恢复原状态，同样分为弹性部分值Ur，即取消负压0.1秒后，皮肤的恢复值和粘弹性部分值，或称塑性部分值；Ua为从取消负压到下一次连续测试皮肤表面再加负压时皮肤的恢复值。检测结果如表2所示。
表2
Figure GDA0002972754750000051
由表2的检测结果可以看出，含有多肽2的化妆品组合物能显著地改善皮肤弹性，表现出了显著地抗皮肤衰老功效。
在使用过程中，通过美容仪器的微频震动和正、负离子的超导入功能，将化妆品组合物中的核心精华成分：活性多肽，快速导入皮肤基底层，通过活性多肽成分在皮肤中的作用功效，快速有效实现皮肤抗衰及加速皮肤的新陈代谢。5分钟即可有效实现去除眼部干纹、细纹以及淡化眼部真性皱纹、眼袋和黑眼圈。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 上海莱妃化妆品有限公司
<120> 一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Gln Asp Arg His Ala Thr His Leu Asp
1 5

Claims (9)

1.一种多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种多核苷酸分子，其特征在于，所述多核苷酸分子编码权利要求1所述的多肽。
3.一种抗衰老、加速细胞新陈代谢的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物包含权利要求1所述的多肽。
4.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物还包含化妆品用辅料，所述辅料为增稠剂、表面活性剂、助表面活性剂、皮肤调理剂、防腐剂、香精、润滑剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂和填充剂中的一种或多种。
5.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物还包含助表面活性剂。
6.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物还包含黄原胶。
7.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物还包含甘油。
8.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物还包含透明质酸钠。
9.如权利要求3所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物包含SEQ IDNO.1所示多肽0.5重量份，透明质酸钠0.25重量份，黄原胶0.25重量份，丙二醇3重量份，甘油6重量份，助表面活性剂10重量份，和水53重量份。
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