KR20230059121A - 보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 통증개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 통증개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하는 조성물은 근육 마비 효과를 가지는 보툴리눔 독소 경쇄를 통증 부위에 빠르게 전달함으로써 효과적으로 근육 긴장을 완화시켜 통증을 감소시킬 수 있으므로 통증 예방, 개선, 또는 치료 물질로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 통증개선용 조성물 {Composition for alleviating pain comprising botulinum-derived peptide}

본 발명은 보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 통증개선용 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 통증은 위험에서 신체를 보호하고 손상받은 조직의 회복에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 바이러스나 박테리아의 감염, 말초신경 주변의 심각한 염증 반응, 또는 말초신경의 직접적인 손상 등에 의해서 발생하는 병증성 통증은 인체에 유해하며, 환자의 생활의 질에 지대한 영향을 미친다.

인류의 역사를 통틀어 오래 전부터 통증을 완화하거나 무감각하게 하기 위한 진통제가 개발되어 이용되어 왔는데, 이러한 진통제는 구강 투여가 일반적이다. 그러나, 구강 투여는 간손상, 신장손상 등의 문제점을 유발하는 경향이 있으며, 혈류에 진입하기 전에 소화계를 통하여 흡수되어야 하기 때문에, 효능을 발휘하는데 시간 지체가 발생한다.

이러한 구강 투여의 문제점을 해결하기 위해, 비경구 투여방법, 예를 들어, 혈관 내 주입 또는 근육 내 주입 방식들이 제안되었으나, 이들 방법은 편리하지 않고 비용이 많이 소요되는 문제점이 있으며, 병원 외에서는 실시하기가 매우 불편한 문제점이 있다.

따라서, 국소(topical) 투여, 특히, 경피(transdermal) 투여 방식으로 투여하려는 시도들이 이루어지고 있다.

한편, 보툴리눔 독소는 클로스트리디움 보툴리늄(Clostridium botulinum)에 의해 생성되는 신경독소 단백질이며, 신경세포의 신경전달물질인 아세트콜린 및 카테콜아민의 분비를 억제하는 것으로 보고 되고 있다. 보툴리늄 독소는 A, B, C, D, E, F, G 및 H 타입의 8종류가 있으며, A 및 B 타입이 상업적으로 이용된다.

보툴리눔 독소는 신경독 단백질로 인간의 반수 치사량은 정맥주사나 근육 주사 시 1.3 ∼2.1 ng/kg, 흡입할 경우 10 ∼13 ng/kg 로 독성이 매우 높은 물질이나, 적정한 양으로 조절 시 신경장애, 근육 질환, 다한증, 사각턱 등을 치료하는 약물로 사용될 수 있고, 주름, 종아리 근육 축소 등 미용 용도로 가장 많이 사용되고 있다.

이러한 보툴리눔 독소는 경쇄와 중쇄를 합쳐 150 kDa으로 매우 큰 분자이기 때문에 피부를 투과하기 어려워 주사제를 통해서만 활용되고 있으며, 독소 지속 시간은 3~6개월 이내로 정기적인 처치가 필요하므로, 이용 대상자에 대한 편의성을 제공할 수 있는 다른 효과적인 전달 수단을 찾기 위해 많은 연구가 이루어지고 있으나, 아직 미비한 실정이다.

대한민국 등록 특허 제10-1882461호

본 발명자들은 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)의 통증 개선 효과를 확인한 결과, 두통, 만성 통증 등의 통증 환자에 대하여 우수한 통증 감소 효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 약학적 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 약학적 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 피부외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 융합은 펩타이드 결합 또는 공유결합에 의해 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 근육 긴장을 완화시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 기계적 통증, 열 통증, 만성 통증, 급성 통증, 통각과민 통증, 체인성 통증, 신경병성 통증, 심인성 통증, 열 유도된 통증, 물리적 통증, 통각수용, 통각과민, 류마티스성 통증, 두통, 요통, 골반통, 근막통, 혈관성 통증, 편두통, 상처 연계된 통증, 염증성 통증, 관절염 통증, 당뇨병성 통증, 암 유래의 통증, 신체 내장 통증, 섬유근통, 수술 후 통증, 환상통, 삼차신경통, 포진 후 신경통, 통증이 있는 당뇨병성 신경병증, 통증이 있는 당뇨병성 말초 신경병증, 당뇨병성 다발성 신경증, 좌골 통증, 신경근병증, 척수 신경근통, 근육통, 및 요추 통증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 본 발명에 따른 조성물은 경피 투여용일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 통증개선 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물의 통증개선 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 통증개선용 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포투과성 펩타이드와의 융합을 통해 근육 마비 효과를 가지는 보툴리눔 독소 경쇄를 경피로 전달할 수 있는바, 간편하게 보툴리눔 독소 경쇄를 통증 부위에 빠르게 전달함으로써 효과적으로 근육 긴장을 완화시켜 통증을 감소시킬 수 있으므로 통증 예방, 개선, 또는 치료 물질로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하는 조성물 사용 후 피험자별/기간별 두통발생횟수를 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하는 조성물 사용 후 기간별 두통횟수 감소율을 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하는 조성물 사용 후 기간별 진통제 복용횟수를 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 통증 개선 효과를 확인하기 위하여 만성 통증 환자를 대상으로 보툴리눔 로션 적용 후 6일 동안 통증 변화를 확인한 결과를 나타낸 도면이다 (NRS: 숫자 통증 등급, 1-4점: 경도 통증, 5-6점: 중등도 통증, 7-10점: 중증 통증, 이하 동일).
도 5는 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 통증 개선 효과를 확인하기 위하여 섬유근통, 및 근육통 환자를 대상으로 보툴리눔 로션 적용 후 6 일동안 통증 감소 지속 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 통증 개선 효과를 확인하기 위하여 마약성 진통제를 이용하는 환자를 대상으로 보툴리눔 로션 적용 후 6일 동안 통증 감소 지속 여부를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 피부 투과 과정을 개략적으로 나타낸 도면이다.

본 발명자들은 보툴리눔 독소 경쇄에 세포투과성 펩타이드를 융합시킨 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)의 통증 개선 효과를 확인한 결과, 두통, 만성 통증 등의 통증 환자에 대하여 우수한 통증 감소 효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

보툴리눔 독소는 하나의 폴리펩타이드로 발현이 되지만 발현 후 재구성 과정에 의해 약 100 kDa의 중쇄(Heavy chain; H 사슬)와 약 50 kDa의 경쇄(Light chain; L 사슬)로 나뉘어 지게 되며 H 사슬과 L 사슬은 디설파이드 결합으로 연결되어 있다. H 사슬은 신경세포의 수용체와 결합하여 내포작용(endocytosis)을 통해 보툴리눔 독소가 내부로 들어갈 수 있도록 한다. 보툴리눔 독소의 L 사슬은 세포 안으로 들어간 후 엔도좀을 빠져나와 세포질로 들어가고, 세포질 내의 스네어 단백질(SNARE protein)을 절단하여 아세틸콜린 분비를 억제시켜 근육 마비 효과를 나타낸다. 따라서, 신경세포의 아세틸콜린 분비 억제는 L 사슬 단독으로도 가능하며 H 사슬과 L 사슬은 각각 독립적으로 기능할 수 있다.

그러나, 분리된 분자량 50 kDa의 보툴리눔 독소 경쇄는 세포막을 투과할 수 없어 그 자체로는 기능을 할 수 없다. 일반적으로 보툴리눔 독소 경쇄가 신경세포 내 세포질로 전달되어 보툴리눔 독소 특유의 활성을 나타내기 위해서는 약 100 kDa의 보툴리눔 독소 중쇄의 도움이 반드시 필요하다.

이에, 본 발명의 일 실시예에서는, 보툴리눔 독소 경쇄를 피부 내부 및 신경세포에 효율적으로 전달할 수 있도록 보툴리눔 독소 경쇄와 세포투과성 펩타이드(MTD; Macromolecule Transduction Domain)가 융합된 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물을 두통, 만성통증, 근육통, 섬유근통, 또는 근막통이 있는 환자의 통증이 있는 부위에 도포한 결과, 우수한 통증 감소 효과를 나타내는 것을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 세포 내로의 도입이 용이하지 않은 보툴리눔 독소 경쇄에 세포투과성 펩타이드를 융합시켜 세포투과성을 부여함으로써 보툴리눔 독소 경쇄가 세포 내로 고효율로 전달될 수 있는 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 약학적 조성물로서,

상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명에서 “보툴리눔 독소 재조합 단백질”이란 세포투과성 펩타이드와 보툴리눔 독소 경쇄(light chain)를 포함하며, 이들의 펩타이드 결합이나 공유결합과 같은 화학적 결합으로 형성된 결합체를 의미한다. 구체적으로, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포 내로의 도입이 용이하지 않은 거대분자인 보툴리눔 독소 경쇄에 특정한 세포투과성 펩타이드를 융합시켜 세포투과성을 부여함으로써 보툴리눔 독소 경쇄를 세포 내로 고효율로 전달할 수 있으며, 이때 상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합될 수 있다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄와 세포투과성 펩타이드의 융합을 통해 세포 내로 고효율로 전달될 수 있으며, 보툴리눔 독소 경쇄의 활성 및 안정성이 향상되어 생체 내에서 보툴리눔 독소의 고유의 효능이 극대화되는 것을 특징으로한다.

본 발명에서의 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)의 구성은 대한민국 등록특허 제10-1882461호와 동일하며, 상기 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 원용된다.

본 발명에 있어서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 근육 마비 효과가 있는 보툴리눔 독소 경쇄가 세포 내로 고효율로 전달됨으로써 근육 긴장을 완화하고 근육 회복을 촉진시킴으로써 통증을 감소시킬 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 피부를 투과하여 SNARE complex의 구성요소인 SNAP-25에 접근하고, 보툴리눔 독소 경쇄는 SNAP-25를 절단함으로써 아세틸콜린(acetylcholine)의 분비를 차단함으로써 통증을 개선할 수 있다.

본 발명에서, "보툴리눔 독소"는 세균에 의해 또는 재조합 기술에 의해 생성되거나 조작된 변이체들 또는 융합 단백질을 포함하여 뒤이어 발견될 수 있는 것인지 여부에 관계없이 임의의 공지된 종류의 보툴리눔 독소를 의미한다.

본 발명에서, 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 이때, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

또한, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

또한, 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 10 내지 16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단에 헥사히스티딘 태그를 더 포함한 형태는 서열번호 17 내지 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 서열번호 24 내지 서열번호 30으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, 보툴리눔 독소 경쇄는 대안적으로 보툴리눔 독소 유도체, 즉, 보툴리눔 독소 활성을 가지나 임의로 부분 또는 서열 상에 하나 이상의 변형을 갖는 화합물일 수 있다. 예를 들어, 7종의 혈청형의 보툴리눔 독소 경쇄 단백질에 대비해, 아미노산 서열 상의 결실(deletion), 수정(modification), 치환(replacement) 또는 키메라 융합(chimeric fusion) 등의 방법을 적용하여 경쇄의 endopeptidase의 활성이 유지됨과 동시에 특성을 강화하거나 부작용을 감소시키는 방법으로 변형된 형태일 수 있다. 또는 재조합 또는 화학적인 합성으로 제조된 보툴리눔 독소 경쇄 또는 보툴리눔 독소 경쇄의 일부분이 이용될 수 있다.

본 발명에서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59 내지 서열번호 86으로 구성된 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명에서 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 바람직하게는 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 73로 표시되는 염기서열일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드(MTD; Macromolecule Transduction Domain)는 생물학적 활성 분자의 세포 내 운반을 매개할 수 있는 펩타이드로서, 인간 피부 각질 형성 세포와 신경세포에 대한 투과성을 동시에 보유하고 있을 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 세포투과성 펩타이드는 바람직하게는 정의된 효소 또는 치료적 생물학적 활성을 갖지 않으나, 세포막을 통해 세포 내 전송을 가능하게 하는 전송체(carrier)로써 역할을 한다. 이는 세포 내로 전송하고자 하는 cargo의 N-말단 또는 C-말단 그리고, 양말단에 부착될 수 있으며, 각각의 말단에서 정방향 또는 역방향으로 부착될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 펩타이드는 바람직하게는 단위체(monomer)로 적용될 것이나, 이에 제한되지 않으며, 이합체(dimer) 또는 중합체(polymer) 형태의 구성으로도 이용될 수 있다. 더욱이, 본 발명에 따른 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 최소의 단위로 포함하는 펩타이드일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 세포투과성 펩타이드는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 명세서에서 “유효성분”은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 조성물이 통증개선 효과를 내기 위한 가장 적절한 투여 경로는 피부를 통해 흡수되는 것이므로, 바람직하게는 본 발명에 따른 조성물은 경피 투여용일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 본 발명에 따른 조성물은 경피흡수촉진제를 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 "경피흡수촉진제"는 유화제 중에서 피부투과에 영향을 주는 성분들로 통상적으로 경피 패치제에 사용되는 성분이다. 본 발명에서는 보툴리눔 독소 재조합 단백질의의 피부 투과 및 세포 침투를 증대시키는 역할을 하는 것으로, 레시틴(Lecithin), 라우릴 피롤리돈(Lauryl Pyrrolidone), 글리세롤 모노올리에이트(Glycerol Monooleate), 글리세롤 모노라우레이트(Glycerol Monolaurate), 프로필렌 글리콜 모노라우레이트(Propylene Glycol Monolaurate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monooleate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monostearate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate), 소르비탄 모노올리에이트(Sorbitan Monooleate), 소르비탄 모노스테아레이트(Sorbitan Monostearate), 소르비탄 모노라우레이트(Sorbitan Monolaurate)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, "통증"은 강한 자극이나 신체 손상으로 인하여 불쾌한 감정을 느끼는 것을 총칭하는 개념이다. 본 발명의 목적상 상기 통증은 신체적인 통증을 의미할 수 있다. 구체적으로, 상기 통증은 기계적 통증, 열 통증, 만성 통증, 급성 통증, 통각과민 통증, 체인성 통증, 신경병성 통증, 심인성 통증, 열 유도된 통증, 물리적 통증, 통각수용, 통각과민, 류마티스성 통증, 두통, 요통, 골반통, 근막통, 혈관성 통증, 편두통, 상처 연계된 통증, 염증성 통증, 관절염 통증, 당뇨병성 통증, 암 유래의 통증, 신체 내장 통증, 섬유근통, 수술 후 통증, 환상통, 삼차신경통, 포진 후 신경통, 통증이 있는 당뇨병성 신경병증, 통증이 있는 당뇨병성 말초 신경병증, 당뇨병성 다발성 신경증, 좌골 통증, 신경근병증, 척수 신경근통, 근육통, 및 요추 통증으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 통증은 두통, 만성 통증, 근육통, 섬유근통, 또는 근막통일 수 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, “만성 통증”은 통증의 기간과 강도가 환자의 기능이나 생활에 유해한 효과를 일으키거나 또는 정상적인 조직 치유기간, 보통 3개월을 넘어서 지속되는 경우를 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어, “섬유근통(fibromyalgia)”은 만성적으로 전신의 근골격계 통증, 뻣뻣함, 감각 이상, 수면 장애, 피로감을 일으키고, 신체 곳곳에 압통점(누르면 아픈 부분)이 나타나는 힘줄 및 인대 근막과 근육, 지방조직 등 연부조직의 통증 증후군을 의미한다.

본 발명에서 사용되는 용어 “근막통(myofascial pain syndrome)”은 근육이 딱딱하게 뭉쳐지면서 통증을 유발하는 질환으로 잘못된 자세와 스트레스에 의해 어깨나 뒷목 주변 근육이 쉬지 못하고 장시간 긴장함에 따라 근육에 영양분과 산소가 부족해져 발생하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, 특정 서열번호로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 단백질(펩타이드)에만 제한되지 않으며, 상기 특정 서열번호로 표시되는 아미노산 서열로 이루어진 단백질들의 기능적 동등물도 포함한다. "기능적 동등물"이란 아미노산의 부가, 치환 또는 결실의 결과, 상기 특정 서열번호로 표시되는 아미노산 서열과 적어도 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 것으로, 특정 서열번호로 표시되는 단백질과 실질적으로 동질의 생리활성을 나타내는 단백질을 말한다.

본 명세서에 기재된 특정 아미노산 서열은 기능적 동등성을 유지하는 한 특정 아미노산 서열번호로 표시되는 단백질(펩타이드)에 제한되지 않으며, 상기 아미노산 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 특정 서열번호의 아미노산 서열과 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 상동성을 갖는 단백질(펩타이드)를 포함한다. 특정 아미노산 서열에 대한 “서열 상동성의 %”는 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서 아미노산 서열의 일부는 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 특정 서열번호로 표시되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드는 해당 염기서열에만 제한되지 않으며, 상기 염기서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 염기서열의 핵산분자는 이를 구성하는 핵산 분자의 작용성 등가물, 예를 들어, 핵산 분자의 일부 염기서열이 결실 (deletion), 치환 (substitution) 또는 삽입 (insertion)에 의해 변형되었지만, 핵산 분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체 (variants)를 포함하는 개념이다. 구체적으로, 본 발명에 개시된 폴리뉴클레오티드는 특정 서열번호로 표시되는 염기서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 상동성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 폴리뉴클레오티드에 대한 “서열 상동성의 %”는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다..

본 발명에서 “약학적 조성물”은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨데, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화활 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 아황산수소나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 통증개선 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물의 통증개선 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 통증개선용 약제를 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 통증의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미할 수 있으며, 예방 또는 치료 행위도 포함될 수 있다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 의약외품 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 또는 양말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.

본 발명의 의약외품 조성물은 바디 클렌저, 폼, 비누, 마스크, 연고제, 크림, 로션, 에센스 및 스프레이로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상으로 제조할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 또한, 상기 조성물은 밴드, 생리대 등의 형태로 제조될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 피부외용제 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 또는 양말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 피부외용제 조성물을 제공한다.

본 발명의 피부외용제 조성물은 유효성분으로서 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하며 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 이외에도, 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

상기 피부외용제 조성물의 투여량은 투여 대상의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 투여 기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

상기 피부외용제 조성물의 제제 형태로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들면, 액상도포제, 분무제, 로션제, 겔제, 파스타제, 연고제, 에어로졸, 분말제, 패취, 크림, 롤온, 경피흡수제 등이 있다.

본 발명의 피부외용제 조성물에서 약학적으로 허용되는 담체로는 그의 제형에 따라 다르나, 바셀린, 유동 파라핀, 겔화 탄화수소(플라스티베이스) 등의 탄화수소류; 중쇄지방산트리글리세라이드, 돈지, 하드 팻, 카카오지 등의 동식물성 오일; 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아린산, 팔미틴산이소프로필 등의 고급지방산 알코올 및 지방산 및 그의 에스테르류; 폴리에틸렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세롤, 젤라틴, 백당, 당알코올 등의 수용성 기제; 글리세린 지방산 에스테르, 스테아린산폴리옥실, 폴리옥시에틸렌경화 피마자유 등의 유화제; 아크릴산에스테르, 알긴산나트륨 등의 점착제; 액화석유가스, 이산화탄소 등의 분사제; 파라옥시벤조산에스테르류 등의 방부제 등을 들 수 있다. 또한, 이들 외에도 안정제, 향료, 착색제, pH 조정제, 희석제, 계면활성제, 보존제, 항산화제 등을 필요에 따라 배합할 수 있다. 본 발명의 피부외용제 조성물의 사용은 통상의 방법에 의해 환부 또는 통증이 발현하는 부위의 피부에 도포하는 것이 바람직하다.

또한, 본 발명에 따른 피부외용제 조성물은 통상적인 반창고의 창상 박리 커버 등과 같은 고체 지지체 상에 점착되어 사용될 수 있다. 점착은 본 발명의 조성물을 고체 지지체에 포화시킨 후 탈수시켜 달성할 수 있다. 바람직하게는 고체 지지체를 먼저 점착제로 피복하여 고체 지지체에 본 발명의 조성물의 부착을 향상시킬 수 있다. 점착제의 예로는 폴리아크릴레이트 및 시아노아크릴레이트 등이 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 화장료 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 또는 양말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 본 발명에 따른 조성물 이외에 피부과학적으로 허용 가능한 매질, 기제, 보조제, 부형제 등과 함께 피부과학 분야에서 통상적으로 제조되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다. 예를 들어, 기초 화장품 조성물(화장수, 크림, 에센스, 클렌징폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물(화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품 조성물(샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

상기 부형제로는 이에 한정되지는 않으나 예를 들어, 피부연화제, 피부 침투 증강제, 착색제, 방향제, 유화제, 연화제, 농화제, 농축제, 겔화제, 현택화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 계면활성제, 충전제 또는 용매를 포함할 수 있다. 또한 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보조제 및 보습제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 물성 개선을 목적으로 점증제, 무기염류, 합성 고분자 물질 등을 포함할 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 화장료 조성물로 세안제 및 비누를 제조하는 경우에는 통상의 세안제 및 비누 베이스에 본 발명의 추출물을 첨가하여 용이하게 제조할 수 있다. 크림을 제조하는 경우에는 일반적인 수중유적형(O/W)의 크림베이스에 본 발명의 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 첨가하여 제조할 수 있다. 여기에 향료, 킬레이트제, 색소, 산화방지제, 방부제 등과 물성 개선을 목적으로 한 단백질, 미네랄, 비타민 등 합성 또는 천연 소재를 추가로 첨가할 수 있다.

적합한 화장료 조성물의 제형으로는 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는 이에 한정되는 것은 아니나 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 바디크림, 마사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 트리트먼트, 미용액, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 멘톨(Menthol), 시어 버터(Shea Butter), 스카치 파인 잎(Scotch Pine Leaf), 알로에 베라(Aloe Vera), 박하(Peppermint), 로즈마리(Rosemary) 등의 추출물 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 두통개선 효과 확인

1-1. 실험 재료 및 실험 방법

두통으로 일상 생활에 불편함을 느끼며 진통제를 복용하고 있는 23 ~ 53세 성인 남녀 총 9명(여성 7명, 남성 2명, 평균 연령 36세)을 대상으로 대한민국 등록특허 제10-1882461호에 따라 제조한 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)이 함유된 용액 2.5 cc를 통증이 있는 두피 부위와 이마에 매일 아침마다 직접 도포하였다.

평가는 시험 전 피험자들에게 설문 조사 후 두통학회의 '두통일기 앱'을 통해 두통이 있는 날마다 피험자가 두통횟수 및 진통제 복용횟수를 직접 입력하도록 하였다. 시험기간은 총 12주로 피험자가 직접 입력한 정보로 두통횟수는 사용 전, 사용 후 1 ~ 4주, 사용 후 5 ~ 8주, 사용 후 9 ~ 12주로 4가지를 비교 평가하였다. 진통제 복용횟수는 사용 후 1 ~ 4주, 사용 후 5 ~ 8주, 사용 후 9 ~ 12주로 3가지를 비교 평가하였다.

1-2. 두통횟수

두통횟수를 비교 평가한 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 피험자 9명 모두 두통이 개선된 것을 확인할 수 있었다. 구체적으로, 사용 후 기간별 평균 두통발생횟수는 사용 전 4주간(14.3회), 사용 후 1 ~ 4주(8.5회), 사용 후 5 ~ 8주(6.9회), 사용 후 9 ~ 12주(2.5회)로 피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드가 함유된 용액을 사용하기 전 4주간에 비해 사용 후 9 ~ 12주 기간 동안 피험자들의 평균 두통발생횟수는 84% 감소한 것을 확인할 수 있었다.

또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 사용 후 기간별 두통횟수 감소율은 사용 초기인 1 ~ 4주와 사용 마지막인 9 ~ 12주를 비교한 결과, 20% 이상 개선된 피험자가 2명(7명 → 9명), 50% 이상 개선된 피험자가 4명(4명 → 8명), 70% 이상 개선된 피험자가 4명(1명 → 5명), 100% 개선된 피험자가 3명(0명 → 3명)으로 증가한 것을 확인할 수 있었다.

1-3. 진통제 복용횟수

사용 후 1 ~ 4주와 9 ~ 12주의 진통제 복용횟수를 비교 평가한 결과, 피험자 9명 중 8명에서 진통제 복용횟수가 감소하였으며, 1명은 1회 증가한 것으로 나타났다.

사용 후 기간별 진통제 복용횟수를 비교한 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 사용 후 1 ~ 4주 동안은 2회 3명, 1회 3명, 0회 3명이였으며, 사용 후 5 ~ 8주 동안은 3회 1명, 2회 1명, 1회 4명, 0 회 3명으로 복용횟수가 1회 증가한 사람이 1명, 복용횟수가 1회 감소한 사람이 1명이었다. 사용 후 9 ~ 12주 동안은 3회 1명, 2회 0명, 1회 2명, 0회 6명으로 사용 초기 1 ~ 4주에 비해 진통제 복용이 필요 없는 피험자가 3명 증가한 것을 확인할 수 있었다.

상기 결과로부터, 보툴리눔 독소 주사와 유사한 주름 개선 효과를 보이는 피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드를 두경부에 도포할 경우, 전반적으로 두통횟수와 진통제 복용횟수가 감소하였는바, 두통 개선효과가 있을 것으로 판단되었다.

실시예 2. 통증개선 효과 확인

2-1. 실험 재료 및 실험 방법

30 ~ 75세의 만성 통증, 섬유근통, 근막통, 또는 근육통 환자인 성인 24명을 대상으로 피부에 도포한 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드가 근육 긴장을 완화하여 통증을 감소시킬 수 있는지 여부 및 근육 경련성 통증을 감소시킬 수 있는지 여부, 및 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드의 반복적인 움직임, 기계적 충격으로 유발되는 만성 통증의 개선 정도를 확인하였다.

실험 대상은 하기 표 1의 3가지 조건 중 하나를 충족하도록 구성하였으며, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드가 함유된 보툴리눔 로션 적당량을 매일 2회 통증 부위에 직접 도포하도록 하였다.

실험 대상 24명을 다음과 같이 3개의 그룹으로 나누어 분석하였다:

Group A: 만성 통증 환자

Group B: 섬유근통, 및 근육통 환자

Group C: 마약성 진통제 사용 그룹(Group C의 경우, Group A, B와 표본 중복 있음).

2-2. Group A

만성 통증 환자 14명(표 1의 각 조건을 만족하는 환자를 적절하게 섞음)에서 보툴리눔 로션 사용 후 6일 간의 통증 변화를 확인한 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, 보툴리눔 로션 사용 후 78.57%의 환자에서 통증이 감소한 것을 확인할 수 있었다 (14명 중 11명이 통증이 감소함). 보툴리눔 로션을 사용하는 동안 통증은 감소된 상태를 유지하였다. 보툴리눔 로션 사용 직후 즉각적인 통증 감소 효과가 나타났으며, 전반적으로 로션을 바르는 동안 통증 감소 효과가 유지되는 것을 확인할 수 있었다.

2-3. Group B

섬유근통, 및 근육통 환자 7명(표 1의 각 조건을 만족하는 환자를 적절하게 섞음)에서 보툴리눔 로션 사용 후, 통증 감소 지속 여부 확인한 결과, 보툴리눔 로션 사용 직후 71.43%의 환자에서 통증이 감소하였으며(7명 중 5명이 통증이 감소한 것으로 나타남, 도면에 나타내지는 않음), 도 5에 나타낸 바와 같이, 57.14%의 환자에서 로션을 바르는 동안 통증 감소 상태가 유지되는 것으로 나타났다 (7명 중 4명이 통증 감소 상태가 유지됨). 전반적으로 보툴리눔 로션 사용 직후 즉각적인 통증 감소 효과를 경험했으며, 보툴리눔 로션을 바르는 동안 효과가 유지되는 것으로 나타났다.

2-4. Group C

마약성 진통제를 사용하는 환자 15명에서 보툴리눔 로션 사용 후, 통증 감소 지속 여부를 확인한 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, 80%의 환자가 즉각적으로 통증이 완화되었다고 응답하였으며(도면에 나타내지는 않음), 도 6에 나타낸 바와 같이, 66.67%의 환자가(15명 중 10명) 보툴리눔 로션을 사용하는 동안 지속적인 통증 개선 효과가 있었다고 응답하였다. 보툴리눔 로션 사용 직후, 전반적으로 즉각적인 통증 감소 효과를 경험했으며, 로션을 바르는 동안 효과가 유지되는 것으로 나타났다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

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agtccttcta cggatatgaa tatttataat aaagcgttac aaaattttca agatatagct 900 aataggctta atattgtttc aagtgcccaa gggagtggaa ttgatatttc cttatataaa 960 caaatatata aaaataaata tgattttgtt gaagatccta atggaaaata tagtgtagat 1020 aaggataagt ttgataaatt atataaggcc ttaatgtttg gctttactga aactaatcta 1080 gctggtgaat atggaataaa aactaggtat tcttatttta gtgaatattt gccaccgata 1140 aaaactgaaa aattgttaga caatacaatt tatactcaaa atgaaggctt taacatagct 1200 agtaaaaatc tcaaaacgga atttaatggt cagaataagg cggtaaataa agaggcttat 1260 gaagaaatca gcctagaaca tctcgttata tatagaatag caatgtgcaa gcctgtaatg 1320 tacaaa 1326 <210> 17 <211> 468 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/A Light chain Amino Acid Sequence with hexahistidine <400> 17 Met Gly Ser Ser His His His His His His Ser Ser Gly Leu Val Pro 1 5 10 15 Arg Gly Ser His Met Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp 20 25 30 Pro Val Asn Gly Val Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Ala Gly 35 40 45 Gln Met Gln Pro Val Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val 50 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tatttaaaaa ccgatgctga aaaagataaa 300 tttttaaaaa caatgattaa attatttaat agaattaatt caaaaccatc aggacagaga 360 ttactggata tgatagtaga tgctatacct tatcttggaa atgcatctac accgcccgac 420 aaatttgcag caaatgttgc aaatgtatct attaataaaa aaattatcca acctggagct 480 gaagatcaaa taaaaggttt aatgacaaat ttaataatat ttggaccagg accagttcta 540 agtgataatt ttactgatag tatgattatg aatggccatt ccccaatatc agaaggattt 600 ggtgcaagaa tgatgataag attttgtcct agttgtttaa atgtatttaa taatgttcag 660 gaaaataaag atacatctat atttagtaga cgcgcgtatt ttgcagatcc agctctaacg 720 ttaatgcatg aacttataca tgtgttacat ggattatatg gaattaagat aagtaattta 780 ccaattactc caaatacaaa agaatttttc atgcaacata gcgatcctgt acaagcagaa 840 gaactatata cattcggagg acatgatcct agtgttataa gtccttctac ggatatgaat 900 atttataata aagcgttaca aaattttcaa gatatagcta ataggcttaa tattgtttca 960 agtgcccaag ggagtggaat tgatatttcc ttatataaac aaatatataa aaataaatat 1020 gattttgttg aagatcctaa tggaaaatat agtgtagata aggataagtt tgataaatta 1080 tataaggcct taatgtttgg ctttactgaa actaatctag 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aattattaca ccaattacag gtagaggact agtaaaaaaa 1260 atcattagat tttgtaaaaa tattgtttct gtaaaaggca taaggctcga gcaccaccac 1320 caccaccact ga 1332 <210> 78 <211> 1374 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MTD-BoNT/F Light chain cDNA Sequence with hexahistidine <400> 78 atgaaggcca tgatcaatat taacaagttc ttaaatcaat gtccagttgc aataaatagt 60 tttaattata atgaccctgt taatgatgat acaattttat acatgcagat accatatgaa 120 gaaaaaagta aaaaatatta taaagctttt gagattatgc gtaatgtttg gataattcct 180 gagagaaata caataggaac gaatcctagt gattttgatc caccggcttc attaaagaac 240 ggaagcagtg cttattatga tcctaattat ttaaccactg atgctgaaaa agatagatat 300 ttaaaaacaa cgataaaatt atttaagaga attaatagta atcctgcagg gaaagttttg 360 ttacaagaaa tatcatatgc taaaccatat ttaggaaatg accacacgcc aattgatgaa 420 ttctctccag ttactagaac tacaagtgtt aatataaaat tatcaactaa tgttgaaagt 480 tcaatgttat tgaatcttct tgtattggga gcaggacctg atatatttga aagttgttgt 540 taccccgtta gaaaactaat agatccagat gtagtttatg atccaagtaa ttatggtttt 600 ggatcaatta atatcgtgac attttcacct gagtatgaat atacttttaa tgatattagt 660 ggagggcata atagtagtac agaatcattt attgcagatc ctgcaatttc actagctcat 720 gaattgatac atgcactgca tggattatac ggggctaggg gagttactta tgaagagact 780 atagaagtaa agcaagcacc tcttatgata gccgaaaaac ccataaggct agaagaattt 840 ttaacctttg gaggtcagga tttaaatatt attactagtg ctatgaagga aaaaatatat 900 aacaatcttt tagctaacta tgaaaaaata gctactagac ttagtgaagt taatagtgct 960 cctcctgaat atgatattaa tgaatataaa gattattttc aatggaagta tgggctagat 1020 aaaaatgctg atggaagtta tactgtaaat gaaaataaat ttaatgaaat ttataaaaaa 1080 ttatatagtt ttacagagag tgacttagca aataaattta aagtaaaatg tagaaatact 1140 tattttatta aatatgaatt tttaaaagtt ccaaatttgt tagatgatga tatttatact 1200 gtatcagagg ggtttaatat aggtaattta gcagtaaaca atcgcggaca aagtataaag 1260 ttaaatccta aaattattga ttccattcca gataaaggtc tagtagaaaa gatcgttaaa 1320 ttttgtaaga gcgttattcc tagaaaactc gagcaccacc accaccacca ctga 1374 <210> 79 <211> 1392 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MTD-BoNT/G Light chain cDNA Sequence with hexahistidine <400> 79 atgaaggcca tgatcaatat taacaagttc ttaaatcaat gtccagttaa tataaaaanc 60 tttaattata atgaccctat taataatgat gacattatta tgatggaacc attcaatgac 120 ccagggccag gaacatatta taaagctttt aggattatag atcgtatttg gatagtacca 180 gaaaggttta cttatggatt tcaacctgac caatttaatg ccagtacagg agtttttagt 240 aaagatgtct acgaatatta cgatccaact tatttaaaaa ccgatgctga aaaagataaa 300 tttttaaaaa caatgattaa attatttaat agaattaatt caaaaccatc aggacagaga 360 ttactggata tgatagtaga tgctatacct tatcttggaa atgcatctac accgcccgac 420 aaatttgcag caaatgttgc aaatgtatct attaataaaa aaattatcca acctggagct 480 gaagatcaaa taaaaggttt aatgacaaat ttaataatat ttggaccagg accagttcta 540 agtgataatt ttactgatag tatgattatg aatggccatt ccccaatatc agaaggattt 600 ggtgcaagaa tgatgataag attttgtcct agttgtttaa atgtatttaa taatgttcag 660 gaaaataaag atacatctat atttagtaga cgcgcgtatt ttgcagatcc agctctaacg 720 ttaatgcatg aacttataca tgtgttacat ggattatatg gaattaagat aagtaattta 780 ccaattactc caaatacaaa agaatttttc atgcaacata gcgatcctgt acaagcagaa 840 gaactatata cattcggagg acatgatcct agtgttataa gtccttctac ggatatgaat 900 atttataata aagcgttaca aaattttcaa gatatagcta ataggcttaa tattgtttca 960 agtgcccaag ggagtggaat tgatatttcc ttatataaac aaatatataa aaataaatat 1020 gattttgttg aagatcctaa tggaaaatat agtgtagata aggataagtt tgataaatta 1080 tataaggcct taatgtttgg ctttactgaa actaatctag ctggtgaata tggaataaaa 1140 actaggtatt cttattttag tgaatatttg ccaccgataa aaactgaaaa attgttagac 1200 aatacaattt atactcaaaa tgaaggcttt aacatagcta gtaaaaatct caaaacggaa 1260 tttaatggtc agaataaggc ggtaaataaa gaggcttatg aagaaatcag cctagaacat 1320 ctcgttatat atagaatagc aatgtgcaag cctgtaatgt acaaactcga gcaccaccac 1380 caccaccact ga 1392 <210> 80 <211> 1446 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/A Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 80 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccctttg tcaacaaaca gttcaactac aaggacccag ttaatggagt agacatcgca 120 tatatcaaga ttcccaacgc tggccagatg caacccgtta aggcatttaa aatccataac 180 aaaatctggg ttatcccaga gcgggatacc ttcaccaacc ccgaggaggg cgatctgaac 240 cccccgccgg aggcgaagca ggtcccagtg agctactacg atagcaccta cctcagcacc 300 gacaacgaga aggacaacta cctcaaagga gtcacgaagt tgttcgagag aatctactcc 360 acagacctcg gccgcatgct tctaaccagc attgtgcgtg gcattccctt ttggggcggc 420 tctaccatcg acacagagct gaaggtgata gacaccaact gcatcaacgt aatccagcct 480 gacggcagct accgaagcga ggagcttaac ctggtgatca tcggcccttc cgccgatatc 540 atccaattcg agtgcaagag cttcggccac gaggtcctga acctcacccg gaacggctat 600 ggaagcaccc agtacataag attcagccct gacttcacct tcgggtttga ggagagcttg 660 gaggtcgaca caaaccccct gctgggagcc gggaagttcg ccactgaccc agccgtgact 720 ctggcacacg agctgatcca cgccggtcac cgcctgtacg gcatagctat aaacccaaac 780 agggtgttca aagtgaacac caacgcttac tatgaaatga gcggcctgga ggtgagcttc 840 gaggagctga gaacgttcgg gggacatgat gctaaattta tcgacagcct gcaggagaac 900 gagttcaggc tgtactacta caataagttc aaggatatag cgagcactct gaacaaggcc 960 aagtccatcg taggcactac tgcatccctc cagtatatga agaatgtgtt caaagagaaa 1020 tacctgctga gcgaggatac cagcggtaag ttcagcgtgg ataagcttaa gttcgacaag 1080 ctgtataaga tgctcaccga aatctacacc gaggataatt tcgttaagtt cttcaaggtc 1140 ctgaaccgga agacctacct gaacttcgac aaggccgtgt tcaagatcaa catcgtgcct 1200 aaagtgaact acaccatcta cgacgggttt aacctgagga acaccaacct ggccgctaac 1260 ttcaacgggc agaacacaga gatcaacaac atgaatttca cgaagttgaa gaacttcacc 1320 ggactgtttg agttctacaa attgctgtgt gtgcgcggga tcatcactag caagaccaag 1380 agccttgaca aaggctacaa caagtgatgt caaaatttat tcaagaacat taatatcatg 1440 gccaag 1446 <210> 81 <211> 1422 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/B Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 81 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccagtta caataaataa ttttaattat aatgatccta ttgataataa taatattatt 120 atgatggagc ctccatttgc gagaggtacg gggagatatt ataaagcttt taaaatcaca 180 gatcgtattt ggataatacc ggaaagatat acttttggat ataaacctga ggattttaat 240 aaaagttccg gtatttttaa tagagatgtt tgtgaatatt atgatccaga ttacttaaat 300 actaatgata aaaagaatat atttttacaa acaatgatca agttatttaa tagaatcaaa 360 tcaaaaccat tgggtgaaaa gttattagag atgattataa atggtatacc ttatcttgga 420 gatagacgtg ttccactcga agagtttaac acaaacattg ctagtgtaac tgttaataaa 480 ttaatcagta atccaggaga agtggagcga aaaaaaggta ttttcgcaaa tttaataata 540 tttggacctg ggccagtttt aaatgaaaat gagactatag atataggtat acaaaatcat 600 tttgcatcaa gggaaggctt cgggggtata atgcaaatga agttttgccc agaatatgta 660 agcgtattta ataatgttca agaaaacaaa ggcgcaagta tatttaatag acgtggatat 720 ttttcagatc cagccttgat attaatgcat gaacttatac atgttttaca tggattatat 780 ggcattaaag tagatgattt accaattgta ccaaatgaaa aaaaattttt tatgcaatct 840 acagatgcta tacaggcaga agaactatat acatttggag gacaagatcc cagcatcata 900 actccttcta cggataaaag tatctatgat aaagttttgc aaaattttag agggatagtt 960 gatagactta acaaggtttt agtttgcata tcagatccta acattaatat taatatatat 1020 aaaaataaat ttaaagataa atataaattc gttgaagatt ctgagggaaa atatagtata 1080 gatgtagaaa gttttgataa attatataaa agcttaatgt ttggttttac agaaactaat 1140 atagcagaaa attataaaat aaaaactaga gcttcttatt ttagtgattc cttaccacca 1200 gtaaaaataa aaaatttatt agataatgaa atctatacta tagaggaagg gtttaatata 1260 tctgataaag atatggaaaa agaatataga ggtcagaata aagctataaa taaacaagct 1320 tatgaagaaa ttagcaagga gcatttggct gtatataaga tacaaatgtg taaaagtgtt 1380 aaatgtcaaa atttattcaa gaacattaat atcatggcca ag 1422 <210> 82 <211> 1446 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/C Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 82 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccaataa caattaacaa ctttaattat tcagatcctg ttgataataa aaatatttta 120 tatttagata ctcatttaaa tacactagct aatgagcctg aaaaagcctt tcgcattaca 180 ggaaatatat gggtaatacc tgatagattt tcaagaaatt ctaatccaaa tttaaataaa 240 cctcctcgag ttacaagccc taaaagtggt tattatgatc ctaattattt gagtactgat 300 tctgacaaag atacattttt aaaagaaatt ataaagttat ttaaaagaat taattctaga 360 gaaataggag aagaattaat atatagactt tcgacagata taccctttcc tgggaataac 420 aatactccaa ttaatacttt tgattttgat gtagatttta acagtgttga 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ttaagaaaag tcaatcctga aaatatgctt tatttattta caaaattttg tcataaagca 1380 atagatggta gatcattata taataaatgt caaaatttat tcaagaacat taatatcatg 1440 gccaag 1446 <210> 83 <211> 1425 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/D Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 83 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgacatggc cagtaaaaga ttttaattat agtgatcctg ttaatgacaa tgatatatta 120 tatttaagaa taccacaaaa taagttaatt actacacctg taaaagcttt tatgattact 180 caaaatattt gggtaatacc agaaagattt tcatcagata ctaatccaag tttaagtaaa 240 ccgcccagac ctacttcaaa gtatcaaagt tattatgatc ctagttattt atctactgat 300 gaacaaaaag atacattttt aaaagggatt ataaaattat ttaaaagaat taatgaaaga 360 gatataggaa aaaaattaat aaattattta gtagttggtt caccttttat gggagattca 420 agtacgcctg aagatacatt tgattttaca cgtcatacta ctaatattgc agttgaaaag 480 tttgaaaatg gtagttggaa agtaacaaat attataacac caagtgtatt gatatttgga 540 ccacttccta atatattaga ctatacagca tcccttacat tgcaaggaca acaatcaaat 600 ccatcatttg aagggtttgg aacattatct atactaaaag tagcacctga atttttgtta 660 acatttagtg atgtaacatc taatcaaagt tcagctgtat taggcaaatc tatattttgt 720 atggatccag taatagcttt aatgcatgag ttaacacatt ctttgcatca attatatgga 780 ataaatatac catctgataa aaggattcgt ccacaagtta gcgagggatt tttctctcaa 840 gatggaccca acgtacaatt tgaggaatta tatacatttg gaggattaga tgttgaaata 900 atacctcaaa ttgaaagatc acaattaaga gaaaaagcat taggtcacta taaagatata 960 gcgaaaagac ttaataatat taataaaact attccttcta gttggattag taatatagat 1020 aaatataaaa aaatattttc tgaaaagtat aattttgata aagataatac aggaaatttt 1080 gttgtaaata ttgataaatt caatagctta tattcagact tgactaatgt tatgtcagaa 1140 gttgtttatt cttcgcaata taatgttaaa aacaggactc attatttttc aaggcattat 1200 ctacctgtat ttgcaaatat attagatgat aatatttata ctataagaga tggttttaat 1260 ttaacaaata aaggttttaa tatagaaaat tcgggtcaga atatagaaag gaatcctgca 1320 ctacaaaagc ttagttcaga aagtgtagta gatttattta caaaagtatg tttaagatta 1380 acaaaatgtc aaaatttatt caagaacatt aatatcatgg ccaag 1425 <210> 84 <211> 1365 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/E Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 84 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccaacaa ttaatagttt taattataat gatcctgtta ataatagaac aattttatat 120 attaaaccag gcggttgtca acaattttat aaatcattta atattatgaa aaatatttgg 180 ataattccag agagaaatgt aattggtaca attccccaag attttcttcc gcctacttca 240 ttgaaaaatg gagatagtag ttattatgac cctaattatt tacaaagtga tcaagaaaag 300 gataaatttt taaaaatagt cacaaaaata tttaatagaa taaatgataa tctttcagga 360 aggattttat tagaagaact gtcaaaagct aatccatatt taggaaatga taatactcca 420 gatggtgact tcattattaa tgatgcatca gcagttccaa ttcaattctc aaatggtagc 480 caaagcatac tattacctaa tgttattata atgggagcag agcctgattt atttgaaact 540 aacagttcca atatttctct aagaaataat tatatgccaa gcaatcacgg ttttggatca 600 atagctatag taacattctc acctgaatat tcttttagat ttaaagataa tagtatgaat 660 gaatttattc aagatcctgc tcttacatta atgcatgaat taatacattc attacatgga 720 ctatatgggg ctaaagggat tactacaaag tatactataa cacaaaaaca aaatccccta 780 ataacaaata taagaggtac aaatattgaa gaattcttaa cttttggagg tactgattta 840 aacattatta ctagtgctca gtccaatgat atctatacta atcttctagc tgattataaa 900 aaaatagcgt ctaaacttag caaagtacaa gtatctaatc cactacttaa tccttataaa 960 gatgtttttg aagcaaagta tggattagat aaagatgcta gcggaattta ttcggtaaat 1020 ataaacaaat ttaatgatat ttttaaaaaa ttatacagct ttacggaatt tgatttagca 1080 actaaatttc aagttaaatg taggcaaact tatattggac agtataaata cttcaaactt 1140 tcaaacttgt taaatgattc tatttataat atatcagaag gctataatat aaataattta 1200 aaggtaaatt ttagaggaca gaatgcaaat ttaaatccta gaattattac accaattaca 1260 ggtagaggac tagtaaaaaa aatcattaga ttttgtaaaa atattgtttc tgtaaaaggc 1320 ataaggtgtc aaaatttatt caagaacatt aatatcatgg ccaag 1365 <210> 85 <211> 1407 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/F Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 85 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccagttg caataaatag ttttaattat aatgaccctg ttaatgatga tacaatttta 120 tacatgcaga taccatatga agaaaaaagt aaaaaatatt ataaagcttt tgagattatg 180 cgtaatgttt ggataattcc tgagagaaat acaataggaa cgaatcctag tgattttgat 240 ccaccggctt cattaaagaa cggaagcagt gcttattatg atcctaatta tttaaccact 300 gatgctgaaa aagatagata tttaaaaaca acgataaaat tatttaagag aattaatagt 360 aatcctgcag ggaaagtttt gttacaagaa atatcatatg ctaaaccata tttaggaaat 420 gaccacacgc caattgatga attctctcca gttactagaa ctacaagtgt taatataaaa 480 ttatcaacta atgttgaaag ttcaatgtta ttgaatcttc ttgtattggg agcaggacct 540 gatatatttg aaagttgttg ttaccccgtt agaaaactaa tagatccaga tgtagtttat 600 gatccaagta attatggttt tggatcaatt aatatcgtga cattttcacc tgagtatgaa 660 tatactttta atgatattag tggagggcat aatagtagta cagaatcatt tattgcagat 720 cctgcaattt cactagctca tgaattgata catgcactgc atggattata cggggctagg 780 ggagttactt atgaagagac tatagaagta aagcaagcac ctcttatgat agccgaaaaa 840 cccataaggc tagaagaatt tttaaccttt ggaggtcagg atttaaatat tattactagt 900 gctatgaagg aaaaaatata taacaatctt ttagctaact atgaaaaaat agctactaga 960 cttagtgaag ttaatagtgc tcctcctgaa tatgatatta atgaatataa agattatttt 1020 caatggaagt atgggctaga taaaaatgct gatggaagtt atactgtaaa tgaaaataaa 1080 tttaatgaaa tttataaaaa attatatagt tttacagaga gtgacttagc aaataaattt 1140 aaagtaaaat gtagaaatac ttattttatt aaatatgaat ttttaaaagt tccaaatttg 1200 ttagatgatg atatttatac tgtatcagag gggtttaata taggtaattt agcagtaaac 1260 aatcgcggac aaagtataaa gttaaatcct aaaattattg attccattcc agataaaggt 1320 ctagtagaaa agatcgttaa attttgtaag agcgttattc ctagaaaatg tcaaaattta 1380 ttcaagaaca ttaatatcat ggccaag 1407 <210> 86 <211> 1425 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/G Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 86 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccagtta atataaaaan ctttaattat aatgacccta ttaataatga tgacattatt 120 atgatggaac cattcaatga cccagggcca ggaacatatt ataaagcttt taggattata 180 gatcgtattt ggatagtacc agaaaggttt acttatggat ttcaacctga ccaatttaat 240 gccagtacag gagtttttag taaagatgtc tacgaatatt acgatccaac ttatttaaaa 300 accgatgctg aaaaagataa atttttaaaa acaatgatta aattatttaa tagaattaat 360 tcaaaaccat caggacagag attactggat atgatagtag atgctatacc ttatcttgga 420 aatgcatcta caccgcccga caaatttgca gcaaatgttg caaatgtatc tattaataaa 480 aaaattatcc aacctggagc tgaagatcaa ataaaaggtt taatgacaaa tttaataata 540 tttggaccag gaccagttct aagtgataat tttactgata gtatgattat gaatggccat 600 tccccaatat cagaaggatt tggtgcaaga atgatgataa gattttgtcc tagttgttta 660 aatgtattta ataatgttca ggaaaataaa gatacatcta tatttagtag acgcgcgtat 720 tttgcagatc cagctctaac gttaatgcat gaacttatac atgtgttaca tggattatat 780 ggaattaaga taagtaattt accaattact ccaaatacaa aagaattttt catgcaacat 840 agcgatcctg tacaagcaga agaactatat acattcggag gacatgatcc tagtgttata 900 agtccttcta cggatatgaa tatttataat aaagcgttac aaaattttca agatatagct 960 aataggctta atattgtttc aagtgcccaa gggagtggaa ttgatatttc cttatataaa 1020 caaatatata aaaataaata tgattttgtt gaagatccta atggaaaata tagtgtagat 1080 aaggataagt ttgataaatt atataaggcc ttaatgtttg gctttactga aactaatcta 1140 gctggtgaat atggaataaa aactaggtat tcttatttta gtgaatattt gccaccgata 1200 aaaactgaaa aattgttaga caatacaatt tatactcaaa atgaaggctt taacatagct 1260 agtaaaaatc tcaaaacgga atttaatggt cagaataagg cggtaaataa agaggcttat 1320 gaagaaatca gcctagaaca tctcgttata tatagaatag caatgtgcaa gcctgtaatg 1380 tacaaatgtc aaaatttatt caagaacatt aatatcatgg ccaag 1425

Claims (13)

1. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 약학적 조성물로서,
   상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합되는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 융합은 펩타이드 결합 또는 공유결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 근육 긴장을 완화시키는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
9. 제1항에 있어서,
   상기 통증은 기계적 통증, 열 통증, 만성 통증, 급성 통증, 통각과민 통증, 체인성 통증, 신경병성 통증, 심인성 통증, 열 유도된 통증, 물리적 통증, 통각수용, 통각과민, 류마티스성 통증, 두통, 요통, 골반통, 근막통, 혈관성 통증, 편두통, 상처 연계된 통증, 염증성 통증, 관절염 통증, 당뇨병성 통증, 암 유래의 통증, 신체 내장 통증, 섬유근통, 수술 후 통증, 환상통, 삼차신경통, 포진 후 신경통, 통증이 있는 당뇨병성 신경병증, 통증이 있는 당뇨병성 말초 신경병증, 당뇨병성 다발성 신경증, 좌골 통증, 신경근병증, 척수 신경근통, 근육통, 및 요추 통증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
   
10. 제1항에 있어서,
    상기 통증개선용 약학적 조성물은 경피 투여용인 것을 특징으로 하는, 통증개선용 약학적 조성물.
    
11. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 의약외품 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 의약외품 조성물.
    
12. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 피부외용제 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 피부외용제 조성물.
    
13. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 통증개선용 화장료 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 통증개선용 화장료 조성물.

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