KR20230057931A - 보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 탈모개선용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 보툴리눔 유래 펩타이드(보툴리눔 독소 재조합 단백질)를 포함하는 탈모개선용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포투과성 펩타이드와의 융합을 통해 간편하게 경피로 전달될 수 있으며, 모유두세포의 증식을 촉진하고, 프로스타글란딘 F_2α 발현을 증가시킴으로써 탈모 부위에서 발모를 촉진하여 탈모를 개선할 수 있는바 화장품, 의약품 등의 분야에서 탈모의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다

Description

보툴리눔 유래 펩타이드를 포함하는 탈모개선용 조성물 {Composition for alleviating hair loss comprising peptide derived from Botulinum}

본 발명은 보툴리눔 유래 펩타이드(보툴리눔 독소 재조합 단백질)를 포함하는 탈모개선용 조성물에 관한 것이다.

인체 모발은 우리 생활에서 피부 및 두피를 보호하기 때문만이 아니라 사회적 및 성적 의사소통에 있어서도 매우 중요하다. 모발은 케라틴 단백질로 구성되어 있으며, 진피에 있는 모낭으로부터 성장한다. 모발 성장은 일정한 주기를 나타내며, 아나겐(성장기), 카타겐(퇴행기 또는 전이기) 및 텔로겐(휴지기)으로 분류된다. 두피 모낭은 모유두세포, 각질형성세포, 내측 및 외측 모근초 세포, 및 멜라노사이트로 구성된다. 인체의 모낭 모유두세포(HFDPC)는 특수 섬유모세포의 하나로, 모낭의 형태형성에 참여한다. HFDPC는 모발 성장과 관련되어 있으므로, HFDPC 전사인자 및 사이토카인의 변화가 중요하다. 케라틴 단백질은 인체 각질형성세포로부터 구성되고, 모발의 주요 조직이다. 최근에는 다양한 분자 분석 시스템에 의해, 아나겐 단계 동안 두피 모낭에서의 세포 성장(증식), 분해 및 세포자멸사 관련 인자가 밝혀졌다. 두피 모유두의 세포 증식에 ERK(Extracellular signal-regulated kinases) 및 AKT(a serine/threonine protein kinase) 경로가 관여한다고 알려져 있다. ERK 신호화 경로는 mitogenesis 또는 세포 성장에 일정 역할을 하는 것으로 잘 알려져 있으며, AKT는 생존 신호를 중재하는데 중요한 역할을 갖는 것으로 보고된 바 있다.

정상인 사람은 성장기 상태의 모발이 많은데 비해 탈모증(Alopecia)인 사람은 휴지기 상태의 모발이 많아 눈으로 보이는 탈모 현상이 나타나게 된다. 탈모가 진행될수록 성장기의 기간이 짧아지고, 이로 인해 모발은 점점 소형화된다. 따라서, 탈모의 치료를 위해서는 휴지기 상태의 모낭이 성장기로 빨리 갈 수 있도록 하고, 짧아진 성장기를 늘려주는 것이 중요하다.

현재 모발 성장 촉진제제로서 FDA에서 승인한 미녹시딜(minoxidil, 경피도포제)과 피나스테리드(finasteride, 경구복용제) 두 종류가 있다. 미녹시딜은 항고혈압용 경구약제로 사용되었으나, 이 약제를 복용한 환자에서 다모증이 나타나는 것이 관찰되어 현재 두피 도포용으로 남성형 탈모증에 사용되고 있다. 미녹시딜은 피리미딘 유도체로 두피의 혈관을 확장시켜 국소적으로 혈류를 증가시키고 모모세포를 활성화시켜 탈모진행을 더디게 하여, 솜털을 자라나게 하는 효과가 있어 현재 탈모치료제로 널리 사용되고 있다. 피나스테리드는 타입 Ⅱ5 α-환원효소(reductase)를 억제함으로써 탈모를 예방하고 모발의 성장을 증진시키는 남성형 안드로겐성 탈모증 치료의 최초의 경구치료제로서 1997년 FDA 승인 후 현재 전 세계 약 260만 명이 사용하고 있다.

그러나, 미녹시딜은 체중증가, 부종, 심장박동 증가, 협심증, 피부염 및 가려움증 등의 부작용이 보고되었고, 피나스테리드의 경우에는 남성 성기능 장애와 같은 부작용이 임상사례로 보고되고 있어, 사용이 제한적이거나 환자들 스스로가 약물에 대한 거부감을 나타내는 문제점이 있다. 이에 따라, 안전한 탈모 예방 및 발모 촉진 물질에 대한 소비자들의 관심이 높아지는 있고, 이에 대한 연구도 활발히 이루어지고 있는 추세이다.

한편, 보툴리눔 독소는 클로스트리디움 보툴리늄(Clostridium botulinum)에 의해 생성되는 신경독소 단백질이며, 신경세포의 신경전달물질인 아세트콜린 및 카테콜아민의 분비를 억제하는 것으로 보고 되고 있다. 보툴리늄 독소는 A, B, C, D, E, F, G 및 H 타입의 8종류가 있으며, A 및 B 타입이 상업적으로 이용된다.

보툴리눔 독소는 신경독 단백질로 인간의 반수 치사량은 정맥주사나 근육 주사 시 1.3 ∼ 2.1 ng/kg, 흡입할 경우 10 ∼ 13 ng/kg 로 독성이 매우 높은 물질이나, 적정한 양으로 조절 시 신경장애, 근육 질환, 다한증, 사각턱 등을 치료하는 약물로 사용될 수 있고, 주름, 종아리 근육 축소 등 미용 용도로 가장 많이 사용되고 있다.

이러한 보툴리눔 독소는 경쇄와 중쇄를 합쳐 150 kDa으로 매우 큰 분자이기 때문에 피부를 투과하기 어려워 주사제를 통해서만 활용되고 있으며, 독소 지속 시간은 3~6개월 이내로 정기적인 처치가 필요하므로, 이용 대상자에 대한 편의성을 제공할 수 있는 다른 효과적인 전달 수단을 찾기 위해 많은 연구가 이루어지고 있으나, 아직 미비한 실정이다.

대한민국 등록 특허 제10-1882461호

본 발명자들은 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)이 모유두세포의 증식 및 프로스타글란딘(prostaglandin) F_2α 발현을 촉진하며, 탈모 부위에 도포한 결과, 탈모가 개선되는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 약학적 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 피부외용제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 약학적 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 의약외품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 피부외용제 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합되는 것일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 융합은 펩타이드 결합 또는 공유결합에 의해 이루어질 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 모유두세포의 증식을 촉진시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 프로스타글란딘(prostaglandin) F_2α 발현을 촉진시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시킬 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 또 다른 구현예로 상기 조성물은 하기 특징 중 하나 이상을 만족할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다:

(a) 모발 굵기 증가; (b) 모발 밀도 증가(빠지는 모발 수의 감소); (c) 두피의 피지 분비 억제; (d) 두피 위생 상태 개선; 및 (e) 모발 가라앉음 감소.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 조성물은 경피 투여용일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 탈모개선 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물의 탈모개선 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 탈모개선용 약제 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포투과성 펩타이드와의 융합을 통해 간편하게 경피로 전달될 수 있으며, 모유두세포의 증식을 촉진하고, 프로스타글란딘 F_2α 발현을 증가시킴으로써 탈모 현상을 감소시키고 모발 성장을 촉진하여 탈모를 개선할 수 있는바 화장품, 의약품 등의 분야에서 탈모의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다

도 1은 인간모유두세포에 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 처리한 후 흡광도를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 2는 인간모유두세포에 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 양성대조군으로 FBS를 처리한 후 흡광도를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 인간모유두세포에 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 처리한 후 세포생존율을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 인간모유두세포에 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 양성대조군으로 FBS를 처리한 후 세포생존율을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 각질형성세포에서 프로스타글란딘 F_2α의 발현양을 분석하기 위하여 표준 프로스타글란딘 F_2α 를 양에 따라 적용하여 구한 표준 곡선을 나타낸 도면이다.
도 6은 각질형성세포에서 측정한 프로스타글란딘 F_2α 발현 흡광도 값을 분석한 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 본 발명에 따른 조성물을 다양한 탈모 환자에게 투여한 후 시간 경과에 따라 피험자 및 평가자가 탈모개선 효과를 평가한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8 내지 도 11은 본 발명에 따른 조성물을 다양한 탈모 환자에게 투여한 후 시간 경과에 따른 탈모개선 효과를 확인한 결과를 나타낸 도면이다.

본 발명자들은 보툴리눔 독소 경쇄에 세포투과성 펩타이드를 융합시킨 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부 투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)이 모유두세포의 증식을 촉진하고, 프로스타글란딘 F_2α 발현을 증가시킴으로써 탈모 현상을 감소시키고 모발 성장을 촉진하여 탈모를 개선할 수 있는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포투과성 펩타이드와의 융합을 통해 간편하게 경피로 전달될 수 있으며, 모유두세포의 증식을 촉진하고, 프로스타글란딘 F_2α 발현을 증가시킴으로써 탈모 현상을 감소시키고 모발 성장을 촉진하여 탈모를 개선할 수 있는바 화장품, 의약품 등의 분야에서 탈모의 예방, 개선, 또는 치료에 유용하게 이용될 수 있다

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

보툴리눔 독소는 하나의 폴리펩타이드로 발현이 되지만 발현 후 재구성 과정에 의해 약 100 kDa의 중쇄(Heavy chain; H 사슬)와 약 50 kDa의 경쇄(Light chain; L 사슬)로 나뉘어 지게 되며 H 사슬과 L 사슬은 디설파이드 결합으로 연결되어 있다. H 사슬은 신경세포의 수용체와 결합하여 내포작용(endocytosis)을 통해 보툴리눔 독소가 내부로 들어갈 수 있도록 한다. 보툴리눔 독소의 L 사슬은 세포 안으로 들어간 후 엔도좀을 빠져나와 세포질로 들어가고, 세포질 내의 스네어 단백질(SNARE protein)을 절단하여 아세틸콜린 분비를 억제시켜 근육 마비 효과를 나타낸다. 따라서, 신경세포의 아세틸콜린 분비 억제는 L 사슬 단독으로도 가능하며 H 사슬과 L 사슬은 각각 독립적으로 기능할 수 있다.

그러나, 분리된 분자량 50 kDa의 보툴리눔 독소 경쇄는 세포막을 투과할 수 없어 그 자체로는 기능을 할 수 없다. 일반적으로 보툴리눔 독소 경쇄가 신경세포 내 세포질로 전달되어 보툴리눔 독소 특유의 활성을 나타내기 위해서는 약 100 kDa의 보툴리눔 독소 중쇄의 도움이 반드시 필요하다.

따라서, 본 발명은 세포 내로의 도입이 용이하지 않은 보툴리눔 독소 경쇄에 세포투과성 펩타이드를 융합시켜 세포투과성을 부여함으로써 보툴리눔 독소 경쇄가 세포 내로 고효율로 전달될 수 있는 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 약학적 조성물로서,

상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물을 제공한다.

본 명세서에서 "탈모(alopecia)"는 두피로부터 모발이 탈락하는 현상 또는 모발이 성기거나 가늘어지는 상태를 의미하며, 흉터(반흥성) 탈모증을 제외한 당업계에서 탈모로 분류되는 모든 탈모를 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 탈모는 원형 탈모증(alopecia areata), 안드로겐성 탈모증(androgenetic alopecia), 머리 백선(tinea capitis), 감모증(hypotrichosis), 유전성 단순 감모증(hereditary hypotrichosis simplex), 국한 탈모증(circumscribed alopecia), 선천 탈모증(alopecia congenitalis), 두덩탈모증(alopecia pubis), 지루 탈모증(alopecia seborrheica), 노년탈모증(alopecia senilis), 전두 탈모증(alopecia totalis), 전신 탈모증(alopecia universalis), 및 휴지기 탈모증(telogen effluvium)으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 모유두세포의 증식을 촉진할 수 있으며, 각질형성세포에서 프로스타글란딘(prostaglandin) F_2α 발현을 촉진할 수 있고, 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시킬 수 있는 것을 확인하였다 (실시예 1 내지 3).

또한, 본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하는 조성물은 하기의 특징 중 하나 이상을 만족함으로써, 탈모 전조 증상을 개선하여 탈모를 예방, 개선, 또는 치료할 수 있는 것을 확인하였다 (실시예 3 참조):

(a) 모발 굵기 증가;

(b) 모발 밀도 증가(빠지는 모발 수의 감소);

(c) 두피의 피지 분비 억제;

(d) 두피 위생 상태 개선; 및

(e) 모발 가라앉음 감소.

본 발명에서의 보툴리눔 독소 재조합 단백질(피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드)의 구성은 대한민국 등록특허 제10-1882461호와 동일하며, 상기 문헌에 개시된 모든 내용은 본 출원에 참조로 원용된다.

본 발명에서 “보툴리눔 독소 재조합 단백질”이란 세포투과성 펩타이드와 보툴리눔 독소 경쇄(light chain)를 포함하며, 이들의 펩타이드 결합이나 공유결합과 같은 화학적 결합으로 형성된 결합체를 의미한다. 구체적으로, 본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 세포 내로의 도입이 용이하지 않은 거대분자인 보툴리눔 독소 경쇄에 특정한 세포투과성 펩타이드를 융합시켜 세포투과성을 부여함으로써 보툴리눔 독소 경쇄를 세포 내로 고효율로 전달할 수 있으며, 이때 상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합될 수 있다.

본 발명에 따른 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄와 세포투과성 펩타이드의 융합을 통해 세포 내로 고효율로 전달될 수 있으며, 보툴리눔 독소 경쇄의 활성 및 안정성이 향상되어 생체 내에서 보툴리눔 독소의 고유의 효능이 극대화될 수 있다.

본 발명에서, "보툴리눔 독소"는 세균에 의해 또는 재조합 기술에 의해 생성되거나 조작된 변이체들 또는 융합 단백질을 포함하여 뒤이어 발견될 수 있는 것인지 여부에 관계없이 임의의 공지된 종류의 보툴리눔 독소를 의미한다.

본 발명에서, 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있으며, 이때, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 또한, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다. 또한, 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함할 수 있다. 또한, 상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 10 내지 16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단에 헥사히스티딘 태그를 더 포함한 형태는 서열번호 17 내지 서열번호 23으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 서열번호 24 내지 서열번호 30으로 이루어진 군으로부터 선택되는 염기서열에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서, 보툴리눔 독소 경쇄는 대안적으로 보툴리눔 독소 유도체, 즉, 보툴리눔 독소 활성을 가지나 임의로 부분 또는 서열 상에 하나 이상의 변형을 갖는 화합물일 수 있다. 예를 들어, 7종의 혈청형의 보툴리눔 독소 경쇄 단백질에 대비해, 아미노산 서열 상의 결실(deletion), 수정(modification), 치환(replacement) 또는 키메라 융합(chimeric fusion) 등의 방법을 적용하여 경쇄의 endopeptidase의 활성이 유지됨과 동시에 특성을 강화하거나 부작용을 감소시키는 방법으로 변형된 형태일 수 있다. 또는 재조합 또는 화학적인 합성으로 제조된 보툴리눔 독소 경쇄 또는 보툴리눔 독소 경쇄의 일부분이 이용될 수 있다.

본 발명에서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 59 내지 서열번호 86으로 구성된 군으로부터 선택되는 염기서열로 이루어질 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 발명에서 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 바람직하게는 서열번호 45로 표시되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있으며, 이들을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 73로 표시되는 염기서열일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 상기 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드(MTD; Macromolecule Transduction Domain)는 생물학적 활성 분자의 세포 내 운반을 매개할 수 있는 펩타이드로서, 인간 피부 각질형성세포와 신경세포에 대한 투과성을 동시에 보유하고 있을 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 세포투과성 펩타이드는 바람직하게는 정의된 효소 또는 치료적 생물학적 활성을 갖지 않으나, 세포막을 통해 세포 내 전송을 가능하게 하는 전송체(carrier)로써 역할을 한다. 이는 세포 내로 전송하고자 하는 cargo의 N-말단 또는 C-말단 그리고, 양말단에 부착될 수 있으며, 각각의 말단에서 정방향 또는 역방향으로 부착될 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 펩타이드는 바람직하게는 단위체(monomer)로 적용될 것이나, 이에 제한되지 않으며, 이합체(dimer) 또는 중합체(polymer) 형태의 구성으로도 이용될 수 있다. 더욱이, 본 발명에 따른 펩타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 최소의 단위로 포함하는 펩타이드일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 세포투과성 펩타이드는 서열번호 2의 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 명세서에서 “유효성분”은 단독으로 목적으로 하는 활성을 나타내거나 또는 그 자체는 활성이 없는 담체 등과 함께 목적으로 하는 활성을 나타낼 수 있는 성분을 의미한다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 조성물이 탈모개선 효과를 내기 위한 가장 적절한 투여 경로는 피부를 통해 흡수되는 것이므로, 바람직하게는 본 발명에 따른 조성물은 경피 투여용일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에 있어서, 본 발명에 따른 조성물은 경피흡수촉진제를 더 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

상기 "경피흡수촉진제"는 유화제 중에서 피부투과에 영향을 주는 성분들로 통상적으로 경피 패치제에 사용되는 성분이다. 본 발명에서는 보툴리눔 독소 재조합 단백질의의 피부 투과 및 세포 침투를 증대시키는 역할을 하는 것으로, 레시틴(Lecithin), 라우릴 피롤리돈(Lauryl Pyrrolidone), 글리세롤 모노올리에이트(Glycerol Monooleate), 글리세롤 모노라우레이트(Glycerol Monolaurate), 프로필렌 글리콜 모노라우레이트(Propylene Glycol Monolaurate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monooleate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monostearate), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트(Polyoxyethylene Sorbitan Monolaurate), 소르비탄 모노올리에이트(Sorbitan Monooleate), 소르비탄 모노스테아레이트(Sorbitan Monostearate), 소르비탄 모노라우레이트(Sorbitan Monolaurate)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 명세서에 기재된 특정 서열번호로 표시되는 아미노산 서열은 기능적 동등성을 유지하는 한 특정 서열번호로 표시되는 단백질(펩타이드)에 제한되지 않으며, 상기 아미노산 서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 구체적으로, 특정 서열번호의 아미노산 서열과 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 상동성을 갖는 단백질(펩타이드)를 포함한다. 특정 아미노산 서열에 대한 “서열 상동성의 %”는 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서 아미노산 서열의 일부는 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.

본 명세서에 기재된 특정 서열번호로 표시되는 염기서열로 이루어진 폴리뉴클레오티드는 해당 염기서열에만 제한되지 않으며, 상기 염기서열의 변이체가 본 발명의 범위 내에 포함된다. 본 발명의 염기서열의 핵산분자는 이를 구성하는 핵산 분자의 작용성 등가물, 예를 들어, 핵산 분자의 일부 염기서열이 결실 (deletion), 치환 (substitution) 또는 삽입 (insertion)에 의해 변형되었지만, 핵산 분자와 기능적으로 동일한 작용을 할 수 있는 변이체 (variants)를 포함하는 개념이다. 구체적으로, 본 발명에 개시된 폴리뉴클레오티드는 특정 서열번호로 표시되는 염기서열과 각각 70% 이상, 더욱 바람직하게는 80% 이상, 더 더욱 바람직하게는 90% 이상, 가장 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 가지는 염기서열을 포함할 수 있다. 예를 들면, 70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%의 서열 상동성을 갖는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 폴리뉴클레오티드에 대한 “서열 상동성의 %”는 두 개의 최적으로 배열된 서열과 비교 영역을 비교함으로써 확인되며, 비교 영역에서의 폴리뉴클레오티드 서열의 일부는 두 서열의 최적 배열에 대한 참고 서열(추가 또는 삭제를 포함하지 않음)에 비해 추가 또는 삭제(즉, 갭)를 포함할 수 있다.

본 발명에서 “약학적 조성물”은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예컨데, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽 등의 경구형 제형으로 제형화활 수 있고, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는 에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜(PEG) 4000, PEG 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC), HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 아황산수소나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16 (Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈 (Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입 (AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈 (N, Es), 웨코비 (W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제 (TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이를 필요로 하는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 탈모개선 방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 조성물의 탈모개선 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 탈모개선용 약제를 제조를 위한 용도를 제공한다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐 (mouse), 쥐 (rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류를 의미한다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 통증의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미할 수 있으며, 예방 또는 치료 행위도 포함될 수 있다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 의약외품 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 의약외품 조성물을 제공한다. 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.

본 발명의 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 개선, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 물품들 중 의약품보다 작용이 경미한 물품들을 의미하는 것으로, 예를 들어 약사법에 따르면 의약외품이란 의약품의 용도로 사용되는 물품을 제외한 것으로, 사람/동물의 질병 치료나 예방에 쓰이는 제품, 인체에 대한 작용이 경미하거나 직접 작용하지 않는 제품 등이 포함된다.

본 발명의 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 의약외품 조성물의 유효성분으로 사용할 경우, 탈모개선 효과를 나타내는 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 그대로 첨가하거나, 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.

본 발명의 탈모개선용 의약외품 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정하지 않으며, 탈모개선 효과를 나타내는 것으로 당업계에 공지된 의약외품의 형태로 다양하게 제형화될 수 있다. 상기 제형화된 의약외품은 헤어토닉, 헤어로션, 헤어크림, 헤어스프레이, 헤어무스, 헤어젤, 헤어컨디셔너, 헤어샴푸, 헤어 린스, 헤어팩, 헤어트리트먼트, 눈썹발모제, 속눈썹발모제, 속눈썹영양제, 애완동물용 샴푸, 애완동물용 린스, 손 세정제, 세제비누, 비누, 소독청결제, 물티슈, 마스크, 연고제, 패치 또는 필터 충진제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 의약외품을 모두 포함한다.

또한, 각 제형에 있어서 탈모개선용 의약외품 조성물은 다른 성분들을 기타 의약외품의 제형 또는 사용목적 등에 따라 임의로 선정하여 배합할 수 있다. 유효 성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있고, 예를 들면 점증제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 및 담체 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 의약외품 조성물은 세포에 대한 독성 및 부작용이 거의 없어 의약외품 재료로서 유용하게 사용될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 피부외용제 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 피부외용제 조성물을 제공한다. 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.

본 발명의 피부외용제 조성물은 유효성분으로서 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 포함하며 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 이외에도, 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 피부외용제 조성물에서 약학적으로 허용되는 담체로는 그의 제형에 따라 다르나, 바셀린, 유동 파라핀, 겔화 탄화수소(플라스티베이스) 등의 탄화수소류; 중쇄지방산트리글리세라이드, 돈지, 하드 팻, 카카오지 등의 동식물성 오일; 세탄올, 스테아릴알코올, 스테아린산, 팔미틴산이소프로필 등의 고급지방산 알코올 및 지방산 및 그의 에스테르류; 폴리에틸렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세롤, 젤라틴, 백당, 당알코올 등의 수용성 기제; 글리세린 지방산 에스테르, 스테아린산폴리옥실, 폴리옥시에틸렌경화 피마자유 등의 유화제; 아크릴산에스테르, 알긴산나트륨 등의 점착제; 액화석유가스, 이산화탄소 등의 분사제; 파라옥시벤조산에스테르류 등의 방부제 등을 들 수 있다. 또한, 이들 외에도 안정제, 향료, 착색제, pH 조정제, 희석제, 계면활성제, 보존제, 항산화제 등을 필요에 따라 배합할 수 있다. 본 발명의 피부외용제 조성물의 사용은 통상의 방법에 의해 탈모 부위의 피부에 도포하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장품학 또는 피부과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유하여 제형화될 수 있다. 이는 경피 투여에 적합한 모든 제형으로서, 예를 들면, 용액, 겔, 고체, 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는, 이온형(리포좀) 및 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이, 팩, 콘실스틱, 헤어토닉, 모발 영양화장수, 헤어트리트먼트, 헤어린스, 헤어샴푸, 헤어로션 등의 형태로 제공될 수 있다. 포말(foam)의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.

상기 피부외용제 조성물의 투여량은 투여 대상의 체중, 연령, 성별, 건강 상태, 투여 기간, 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다.

또한, 본 발명은 본 발명의 다른 양태로 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 화장료 조성물로서, 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.

한편, 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 본 발명의 보툴리눔 독소 재조합 단백질 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 헤어 겔, 헤어 크림, 헤어 로션, 헤어 파우더, 비누, 계면활성제-함유 샴푸, 계면활성제-비함유 샴푸, 헤어 오일, 헤어팩, 헤어에센스, 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조 에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 제형이 계면활성제 함유 샴푸인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 샴푸 또는 계면활성제 비함유 샴푸 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1. 인간모유두세포(human follicle dermal papilla cell; HFDPC)에서의 세포독성 평가

1-1. 세포주 선택 및 세포배양

대한민국 등록 특허 제10-1882461호에 따라 제조한 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드(보툴리눔 독소 재조합 단백질)의 세포생존율을 평가하기 위해 인간모유두세포 HFDPC (human follicle dermal papilla cell, PromoCell, Germany) 세포를 구입하여 사용하였다. HFDPC는 100 mm² culture dish에 1×10⁶ cells/dish로 각각 접종한 후 페니실린 (100 IU/ml), 스트렙토마이신 (100 g/mL)과 supplement를 함유하는 Human Dermal Papilla Growth Medium을 넣어 37 ℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 (Sanyo, Japan) 내에서 배양하였다.

1-2. 세포생존율 평가 방법

MTT (Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide) 분석법은 세포의 탈수소 효소작용에 의하여 노란색을 띄는 수용성 기질인 MTT tetrazolium을 적자색을 띄는 formazan (3-(4,5-dimethylthizol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)으로 환원시키는 미토콘드리아의 능력을 측정하는 검사법이다. MTT의 환원은 대사가 활발한 세포에서 일어나므로 배양된 세포에서 세포독성 및 세포생존율을 평가하는데 널리 사용되고 있다.

상기 실시예 1-1에서 계대배양한 HFDPC 세포를 96-well plate에 1×10⁴ cells/well로 분주하고 37 ℃, 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드를 HFDPC 세포에 최종처리 농도가 0.0005, 0.005, 0.05, 0.5 ppm이 되도록 각각 처리하였으며, 양성대조군(FBS)은 최종 처리농도가 15, 20, 25, 30%가 되도록 희석한 FBS를 세포에 각각 처리하여 24시간 동안 세포배양 조건에서 배양하였다.

배양 후 MTT solution을 각 well에 넣고 차광상태에서 2시간 동안 반응시킨 다음 상등액을 제거하고, 생성된 formazan을 DMSO로 완전히 용해시켜 microplate reader (Biotek Synergy-HT, USA)로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.

세포생존율 시험은 3회 반복 실시하였으며, 그 결과값은 식 1로 계산하여 무처리군 대비 세포생존율로 나타내었으며 3회 실험의 평균±표준편차로 표시하였다.

[식 1]

실험 결과는 하기와 같이 분석하였다:

(1) 시험은 3회 반복 실시한 후 결과값을 평균 ± 표준편차로 나타내었다.

(2) 세포독성 시험 결과 측정된 값은 각각 Kruskal-Wallis test 후 Mann-Whitney U test를 이용하여 분석하였으며 Bonferroni correction 보정을 실시하였다 (p<0.0125).

(3) 시험 결과 측정된 값은 각각 IBM SPSS statistics version 21.0을 이용하여 유의성 여부를 가설평균 차 5% (p<0.05)로 확인하였다.

1-3. 결과

피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 0.0005, 0.005, 0.05, 0.5 ppm과 양성대조군인 FBS 15, 20, 25, 30%를 HFDPC 세포에 각각 처리하여 흡광도 및 세포생존율을 측정하여 표 1 내지 표 2 및 도 1 내지 도 4에 나타내었다.

시험결과 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 처리군은 무처리군 대비 0.0005 ppm 농도에서 103.96%, 0.005 ppm 농도에서 105.18%, 0.05 ppm 농도에서 107.83%, 0.5 ppm 농도에서 103.69%의 세포생존율을 각각 나타내었다. 양성대조군으로 사용한 FBS 처리군에서는 무처리군 대비 15% 농도에서 104.43%, 20% 농도에서 107.38%, 25% 농도에서 110.68%, 30% 농도에서 115.02%의 세포생존율을 각각 나타내었다.

즉, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드는 모든 농도에서 세포독성에 영향을 미치지 않았으며 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 0.05 ppm 농도에서는 무처리군 대비 통계적으로 유의하게 세포생존율이 증가하여 HFDPC 세포의 생존율을 증가시키는 것으로 판단되었다.

실시예 2. 프로스타글란딘(prostaglandin) F _2α 발현 평가

프로스타글란딘은 현재까지 약 30 종의 아형이 알려져 있다. 특히, 피부에는 프로스타글란딘 E₂와 프로스타글란딘 F_2α가 주요하게 분포하는 것으로 알려져 있는데 프로스타글란딘 F_2α는 그 유도체가 주성분인 Latanoprost 안약을 녹내장 치료제로 사용하면서 속눈썹이 길어지고 모수가 증가하며 주변부에 색소가 과침착되는 부작용에 관해 연구하면서 관심을 받게 되었다. 이후 여러 연구를 통해 프로스타글란딘 F_2α는 모발의 성장을 유도하는 인자로 알려지게 되었으며, 따라서 시료의 처리에 따른 프로스타글란딘 F_2α의 발현 증감 여부를 확인함으로써 시료가 가지는 모발의 성장 조절 및 색소 침착 조절의 가능성을 판단하는 자료로 이용되고 있다.

이에, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드가 프로스타글란딘 F_2α의 양적인 변화를 유도할 수 있는지를 평가, 규명하고자 시료의 처리에 따라 각질형성세포(keratinocyte)에서 분비되는 프로스타글란딘 F_2α의 발현양 변화를 분석하였다.

2-1. 시료의 제조

완제(0.005ppm)의 2000배 고농도의 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 및/또는 완제(나이아신아마이드(0.1%) 및 덱사판테놀(0.2%))의 200배 고농도의 탈모완화 기능성 성분(나이아신아마이드+덱사판테놀)을 정제수에 희석하여 최종 세포 배양 배지에 완제의 0.2배, 0.5배, 1배, 2배의 농도로 처리하였으며, 대조군(control)은 정제수를 시료 처리양과 동일양으로 처리하였다.

2-2. 실험 방법

1) 각질형성세포(keratinocyte)를 3×10⁵/6 well 접종하여 2일간 배양한다.

2) Starvation 상태로 1일간 배양한다.

3) 시료 처리 하여 1일간 배양한다.

- 처리 시료:

ⅰ) 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드

ⅱ) 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드+탈모완화 기능성 성분

ⅲ) 음성 대조군(COX-2 억제제, NS-398)

4) 세포 배양 배지를 원심 분리한 후 프로스타글란딘 F_2α assay kit를 이용하여 프로스타글란딘 F_2α 발현양을 측정한다. 구체적으로, 프로스타글란딘 F_2α 시험법은 비색법으로 분광광도계를 이용한 흡광도를 측정하여 결과를 측정 분석한다. 프로스타글란딘 F_2α 의 발현은 세포의 상태와 처리의 방법에 따라 매우 민감하게 반응하기 때문에 적절한 세포 배양과 시료 처리 방법이 중요하며 매 시험마다 표준 프로스타글란딘 F_2α 를 농도별로 측정하여 비교 분석하여야 한다.

5) 세포는 MTT 방법으로 세포 활성 측정하여 프로스타글란딘 F_2α 값을 보정하고 분석한다.

2-3. 세포 독성 시험 결과

세포 독성 시험은 MTT 방법으로 측정하였다. 세포 독성의 판정은 대조군 대비 20% 이상의 세포 활성이 떨어질 때를 기준으로 한다.

각 시료는 세포 배양 배지에 최종 농도 0.2×, 0.5×, 1×, 2×, 4×로 처리하였다. 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 단독 처리군에서는 4×까지 독성이 관찰되지 않았으며, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드+탈모완화 기능성 성분 처리군에서는 2× 농도부터 강한 독성이 나타나 시험군에서 제외하였다. 세포 독성 시험 결과는 표 3에 나타내었다.

2-4. 분광광도계를 이용한 프로스타글란딘 F _2α 분석 결과

분광광도계를 이용한 프로스타글란딘 F_2α 분석은 표준 프로스타글란딘 F_2α의 농도별 측정 흡광도에서 보여지는 바 대로 프로스타글란딘 F_2α의 발현양이 높을수록 그 흡광값이 낮게 나오는 특징을 갖는 시험법으로, 구체적으로, 표 4 및 도 5에 나타낸 바와 같이 표준 프로스타글란딘 F_2α를 양에 따라 적용하여 표준 곡선을 구하였으며 이 표준 곡선을 이용하여 프로스타글란딘 F_2α의 양을 분석하였다. 이 흡광도 값은 세포 활성값으로 재보정하여 최종 분석하여 표 5 내지 표 6 및 도 6에 나타내었다.

분석 결과, 대조군의 프로스타글란딘 F_2α의 발현양을 100%로 볼 때, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 단독 처리군에서 처리 농도 0.2×에서 25.2%, 0.5×에서 25.8%, 1×에서 33.3%, 2×에서 40.2%의 발현 증가를 확인할 수 있었다. 다만, 4×에서는 대조군 수준으로 발현양이 떨어지는 양상이 관찰되었다. 피부투과형 보툴리눔 유래 성부 펩타이드와 탈모 완화 기능성 성분을 복합 처리 시에는 처리 농도 0.2×에서 25.1%, 0.5×에서 43.4%, 1×에서 44.3%의 발현 증가를 확인할 수 있었다.

이 때 시험의 n=4이며 통계 기법 Student's t-test 를 이용하여 분석한 결과 프로스타글란딘 F_2α 의 발현양이 증가하는 모든 구간에서 유의성을 가짐을 확인할 수 있었다.

상기 결과로부터, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드 단독 처리군 및 탈모 완화 기능성 성분과 복합 처리군 모두 각질형성세포에서 프로스타글란딘 F_2α 발현과 분비를 유도함을 확인할 수 있었다.

프로스타글란딘 F_2α 발현의 증가는 모발 성장과 관련있는바, 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드를 피부에 적용할 경우 모발 성장을 유도할 수 있을 것으로 판단되었다.

실시예 3. 탈모 개선 효과 평가

3-1. 실험재료 및 방법

탈모 증상이 있는 총 4명의 남성(42세~52세)에게 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드(보툴리눔 독소 재조합 단백질)를 함유한 용액 2.5cc를 매일 아침 탈모 부위에 직접 도포하도록 하였으며, 피험자의 두피상태를 사용 전, 사용 8주 후, 사용 16주 후 사진으로 촬영하여 확인하였다. 피험자들에게는 탈모 증상의 개선에 대해 효과없음(0)/양호(1)/만족(2)/매우 만족(3)으로 평가하도록 하였다.

또한, 실험 결과를 객관화하기 위해 2명의 평가자들에게 탈모 증상의 개선에 대해 개선없음(0)/약간개선(1)/개선(2)/개선우수(3)로 평가하도록 하였다.

나아가, 사용 16주 후 피험자들에게 모발 굵기, 빠지는 모발의 개수, 두피의 기름기 감소, 모근 주위의 청결도(피지감소 등), 오후의 모발 가라앉음의 변화에 대해 설문을 진행하였다.

3-2. 결과

피험자 및 평가자들에 의한 피부투과형 보툴리눔 유래 성분 펩타이드의 탈모 개선 효과를 평가한 결과, 표 7 및 도 7에 나타낸 바와 같이, 피험자들의 만족도는 사용기간이 길어짐에 따라 높아졌으며, 2명의 평가자 모두 피험자들의 탈모 증상이 유의미하게 개선된 것으로 평가하였다. 실험 기간 16주 동안 피험자 모두에서 특별한 부작용은 나타나지 않았다. 도 8 내지 도 11에 피험자들의 두피 변화를 나타내었다.

또한, 사용 16주 후 피험자들에게 진행한 설문에서 표 8에 나타낸 바와 같이, 피험자들은 전반적으로 모발 굵기, 빠지는 모발의 개수, 두피의 기름기 감소, 모근 주위의 청결도(피지감소 등), 오후의 모발 가라앉음이 개선된 것으로 나타났다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

<110> BPMed Co., Ltd. <120> Composition for alleviating hair loss comprising peptide derived from Botulinum <130> MP21-216P1 <150> KR 10-2021-0141684 <151> 2021-10-22 <160> 86 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> MTD Amino Acid Sequence <400> 1 Lys Ala Met Ile Asn Ile Asn Lys Phe Leu Asn Gln Cys 1 5 10 <210> 2 <211> 39 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MTD cDNA Sequence <400> 2 aaggcgatga taaacataaa caagttcctg aaccagtgc 39 <210> 3 <211> 448 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/A Light chain Amino Acid Sequence <400> 3 Met Pro Phe Val Asn Lys Gln Phe Asn Tyr Lys Asp Pro Val Asn Gly 1 5 10 15 Val Asp Ile Ala Tyr Ile Lys Ile Pro Asn Ala Gly Gln Met Gln Pro 20 25 30 Val Lys Ala Phe Lys Ile His Asn Lys Ile Trp Val Ile Pro Glu Arg 35 40 45 Asp Thr Phe Thr Asn Pro Glu Glu Gly Asp Leu Asn Pro Pro Pro Glu 50 55 60 Ala Lys Gln Val Pro Val Ser Tyr Tyr Asp Ser Thr Tyr Leu Ser Thr 65 70 75 80 Asp Asn Glu Lys Asp Asn Tyr 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Asp Leu Pro Ile Val Pro Asn Glu Lys Lys Phe 245 250 255 Phe Met Gln Ser Thr Asp Ala Ile Gln Ala Glu Glu Leu Tyr Thr Phe 260 265 270 Gly Gly Gln Asp Pro Ser Ile Ile Thr Pro Ser Thr Asp Lys Ser Ile 275 280 285 Tyr Asp Lys Val Leu Gln Asn Phe Arg Gly Ile Val Asp Arg Leu Asn 290 295 300 Lys Val Leu Val Cys Ile Ser Asp Pro Asn Ile Asn Ile Asn Ile Tyr 305 310 315 320 Lys Asn Lys Phe Lys Asp Lys Tyr Lys Phe Val Glu Asp Ser Glu Gly 325 330 335 Lys Tyr Ser Ile Asp Val Glu Ser Phe Asp Lys Leu Tyr Lys Ser Leu 340 345 350 Met Phe Gly Phe Thr Glu Thr Asn Ile Ala Glu Asn Tyr Lys Ile Lys 355 360 365 Thr Arg Ala Ser Tyr Phe Ser Asp Ser Leu Pro Pro Val Lys Ile Lys 370 375 380 Asn Leu Leu Asp Asn Glu Ile Tyr Thr Ile Glu Glu Gly Phe Asn Ile 385 390 395 400 Ser Asp Lys Asp Met Glu Lys Glu Tyr Arg Gly Gln Asn Lys Ala Ile 405 410 415 Asn Lys Gln Ala Tyr Glu Glu Ile Ser Lys Glu His Leu Ala Val Tyr 420 425 430 Lys Ile Gln Met Cys Lys Ser Val Lys 435 440 <210> 5 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/C Light chain Amino Acid Sequence <400> 5 Met Pro Ile Thr Ile Asn Asn Phe Asn Tyr Ser Asp Pro Val Asp Asn 1 5 10 15 Lys Asn Ile Leu Tyr Leu Asp Thr His Leu Asn Thr Leu Ala Asn Glu 20 25 30 Pro Glu Lys Ala Phe Arg Ile Thr Gly Asn Ile Trp Val Ile Pro Asp 35 40 45 Arg Phe Ser Arg Asn Ser Asn Pro Asn Leu Asn Lys Pro Pro Arg Val 50 55 60 Thr Ser Pro Lys Ser Gly Tyr Tyr Asp Pro Asn Tyr Leu Ser Thr Asp 65 70 75 80 Ser Asp Lys Asp Pro Phe Leu Lys Glu Ile Ile Lys Leu Phe Lys Arg 85 90 95 Ile Asn Ser Arg Glu Ile Gly Glu Glu Leu Ile Tyr Arg Leu Ser Thr 100 105 110 Asp Ile Pro Phe Pro Gly Asn Asn Asn Thr Pro Ile Asn Thr Phe Asp 115 120 125 Phe Asp Val Asp Phe Asn Ser Val Asp Val Lys Thr Arg Gln Gly Asn 130 135 140 Asn Trp Val Lys Thr Gly Ser Ile Asn Pro Ser Val Ile Ile Thr Gly 145 150 155 160 Pro Arg Glu Asn Ile Ile Asp Pro Glu Thr Ser Thr Phe Lys Leu Thr 165 170 175 Asn Asn Thr Phe Ala Ala Gln Glu Gly Phe Gly Ala Leu Ser Ile Ile 180 185 190 Ser Ile Ser Pro Arg Phe Met Leu Thr Tyr 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BoNT/A Light chain cDNA Sequence <400> 10 atgccctttg tcaacaaaca gttcaactac aaggacccag ttaatggagt agacatcgca 60 tatatcaaga ttcccaacgc tggccagatg caacccgtta aggcatttaa aatccataac 120 aaaatctggg ttatcccaga gcgggatacc ttcaccaacc ccgaggaggg cgatctgaac 180 cccccgccgg aggcgaagca ggtcccagtg agctactacg atagcaccta cctcagcacc 240 gacaacgaga aggacaacta cctcaaagga gtcacgaagt tgttcgagag aatctactcc 300 acagacctcg gccgcatgct tctaaccagc attgtgcgtg gcattccctt ttggggcggc 360 tctaccatcg acacagagct gaaggtgata gacaccaact gcatcaacgt aatccagcct 420 gacggcagct accgaagcga ggagcttaac ctggtgatca tcggcccttc cgccgatatc 480 atccaattcg agtgcaagag cttcggccac gaggtcctga acctcacccg gaacggctat 540 ggaagcaccc agtacataag attcagccct gacttcacct tcgggtttga ggagagcttg 600 gaggtcgaca caaaccccct gctgggagcc gggaagttcg ccactgaccc agccgtgact 660 ctggcacacg agctgatcca cgccggtcac cgcctgtacg gcatagctat aaacccaaac 720 agggtgttca aagtgaacac caacgcttac tatgaaatga gcggcctgga ggtgagcttc 780 gaggagctga gaacgttcgg gggacatgat gctaaattta 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ttacttaaat 240 actaatgata aaaagaatat atttttacaa acaatgatca agttatttaa tagaatcaaa 300 tcaaaaccat tgggtgaaaa gttattagag atgattataa atggtatacc ttatcttgga 360 gatagacgtg ttccactcga agagtttaac acaaacattg ctagtgtaac tgttaataaa 420 ttaatcagta atccaggaga agtggagcga aaaaaaggta ttttcgcaaa tttaataata 480 tttggacctg ggccagtttt aaatgaaaat gagactatag atataggtat acaaaatcat 540 tttgcatcaa gggaaggctt cgggggtata atgcaaatga agttttgccc agaatatgta 600 agcgtattta ataatgttca agaaaacaaa ggcgcaagta tatttaatag acgtggatat 660 ttttcagatc cagccttgat attaatgcat gaacttatac atgttttaca tggattatat 720 ggcattaaag tagatgattt accaattgta ccaaatgaaa aaaaattttt tatgcaatct 780 acagatgcta tacaggcaga agaactatat acatttggag gacaagatcc cagcatcata 840 actccttcta cggataaaag tatctatgat aaagttttgc aaaattttag agggatagtt 900 gatagactta acaaggtttt agtttgcata tcagatccta acattaatat taatatatat 960 aaaaataaat ttaaagataa atataaattc gttgaagatt ctgagggaaa atatagtata 1020 gatgtagaaa gttttgataa attatataaa agcttaatgt ttggttttac agaaactaat 1080 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tctacgttta aattaactaa caatactttt 540 gcggcacaag aaggatttgg tgctttatca ataatttcaa tatcacctag atttatgcta 600 acatatagta atgcaactaa tgatgtagga gagggtagat tttctaagtc tgaattttgc 660 atggatccaa tactaatttt aatgcatgaa cttaatcatg caatgcataa tttatatgga 720 atagctatac caaatgatca aacaatttca tctgtaacta gtaatatttt ttattctcaa 780 tataatgtga aattagagta tgcagaaata tatgcatttg gaggtccaac tatagacctt 840 attcctaaaa gtgcaaggaa atattttgag gaaaaggcat tggattatta tagatctata 900 gctaaaagac ttaatagtat aactactgca aatccttcaa gctttaataa atatataggg 960 gaatataaac agaaacttat tagaaagtat agattcgtag tagaatcttc aggtgaagtt 1020 acagtaaatc gtaataagtt tgttgagtta tataatgaac ttacacaaat atttacagaa 1080 tttaactacg ctaaaatata taatgtacaa aataggaaaa tatatctttc aaatgtatat 1140 actccggtta cggcgaatat attagacgat aatgtttatg atatacaaaa tggatttaat 1200 atacctaaaa gtaatttaaa tgtactattt atgggtcaaa atttatctcg aaatccagca 1260 ttaagaaaag tcaatcctga aaatatgctt tatttattta caaaattttg tcataaagca 1320 atagatggta gatcattata taataaa 1347 <210> 13 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gagatagtag ttattatgac cctaattatt tacaaagtga tcaagaaaag 240 gataaatttt taaaaatagt cacaaaaata tttaatagaa taaatgataa tctttcagga 300 aggattttat tagaagaact gtcaaaagct aatccatatt taggaaatga taatactcca 360 gatggtgact tcattattaa tgatgcatca gcagttccaa ttcaattctc aaatggtagc 420 caaagcatac tattacctaa tgttattata atgggagcag agcctgattt atttgaaact 480 aacagttcca atatttctct aagaaataat tatatgccaa gcaatcacgg ttttggatca 540 atagctatag taacattctc acctgaatat tcttttagat ttaaagataa tagtatgaat 600 gaatttattc aagatcctgc tcttacatta atgcatgaat taatacattc attacatgga 660 ctatatgggg ctaaagggat tactacaaag tatactataa cacaaaaaca aaatccccta 720 ataacaaata taagaggtac aaatattgaa gaattcttaa cttttggagg tactgattta 780 aacattatta ctagtgctca gtccaatgat atctatacta atcttctagc tgattataaa 840 aaaatagcgt ctaaacttag caaagtacaa gtatctaatc cactacttaa tccttataaa 900 gatgtttttg aagcaaagta tggattagat aaagatgcta gcggaattta ttcggtaaat 960 ataaacaaat ttaatgatat ttttaaaaaa ttatacagct ttacggaatt tgatttagca 1020 actaaatttc aagttaaatg taggcaaact tatattggac agtataaata cttcaaactt 1080 tcaaacttgt taaatgattc tatttataat atatcagaag gctataatat aaataattta 1140 aaggtaaatt ttagaggaca gaatgcaaat ttaaatccta gaattattac accaattaca 1200 ggtagaggac tagtaaaaaa aatcattaga ttttgtaaaa atattgtttc tgtaaaaggc 1260 ataagg 1266 <210> 15 <211> 1308 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/F Light chain cDNA Sequence <400> 15 atgccagttg caataaatag ttttaattat aatgaccctg ttaatgatga tacaatttta 60 tacatgcaga taccatatga agaaaaaagt aaaaaatatt ataaagcttt tgagattatg 120 cgtaatgttt ggataattcc tgagagaaat acaataggaa cgaatcctag tgattttgat 180 ccaccggctt cattaaagaa cggaagcagt gcttattatg atcctaatta tttaaccact 240 gatgctgaaa aagatagata tttaaaaaca acgataaaat tatttaagag aattaatagt 300 aatcctgcag ggaaagtttt gttacaagaa atatcatatg ctaaaccata tttaggaaat 360 gaccacacgc caattgatga attctctcca gttactagaa ctacaagtgt taatataaaa 420 ttatcaacta atgttgaaag ttcaatgtta ttgaatcttc ttgtattggg agcaggacct 480 gatatatttg aaagttgttg ttaccccgtt agaaaactaa tagatccaga tgtagtttat 540 gatccaagta attatggttt tggatcaatt aatatcgtga cattttcacc tgagtatgaa 600 tatactttta atgatattag tggagggcat aatagtagta cagaatcatt tattgcagat 660 cctgcaattt cactagctca tgaattgata catgcactgc atggattata cggggctagg 720 ggagttactt atgaagagac tatagaagta aagcaagcac ctcttatgat agccgaaaaa 780 cccataaggc tagaagaatt tttaaccttt ggaggtcagg atttaaatat tattactagt 840 gctatgaagg aaaaaatata taacaatctt ttagctaact atgaaaaaat agctactaga 900 cttagtgaag ttaatagtgc tcctcctgaa tatgatatta atgaatataa agattatttt 960 caatggaagt atgggctaga taaaaatgct gatggaagtt atactgtaaa tgaaaataaa 1020 tttaatgaaa tttataaaaa attatatagt tttacagaga gtgacttagc aaataaattt 1080 aaagtaaaat gtagaaatac ttattttatt aaatatgaat ttttaaaagt tccaaatttg 1140 ttagatgatg atatttatac tgtatcagag gggtttaata taggtaattt agcagtaaac 1200 aatcgcggac aaagtataaa gttaaatcct aaaattattg attccattcc agataaaggt 1260 ctagtagaaa agatcgttaa attttgtaag agcgttattc ctagaaaa 1308 <210> 16 <211> 1326 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/G Light 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tataaaaata aatttaaaga taaatataaa ttcgttgaag attctgaggg aaaatatagt 1080 atagatgtag aaagttttga taaattatat aaaagcttaa tgtttggttt tacagaaact 1140 aatatagcag aaaattataa aataaaaact agagcttctt attttagtga ttccttacca 1200 ccagtaaaaa taaaaaattt attagataat gaaatctata ctatagagga agggtttaat 1260 atatctgata aagatatgga aaaagaatat agaggtcaga ataaagctat aaataaacaa 1320 gcttatgaag aaattagcaa ggagcatttg gctgtatata agatacaaat gtgtaaaagt 1380 gttaaactcg agcaccacca ccaccaccac tga 1413 <210> 26 <211> 1437 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/C Light chain cDNA Sequence with hexahistidine <400> 26 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgatgccaa taacaattaa caactttaat tattcagatc ctgttgataa taaaaatatt 120 ttatatttag atactcattt aaatacacta gctaatgagc ctgaaaaagc ctttcgcatt 180 acaggaaata tatgggtaat acctgataga ttttcaagaa attctaatcc aaatttaaat 240 aaacctcctc gagttacaag ccctaaaagt ggttattatg atcctaatta tttgagtact 300 gattctgaca aagatacatt tttaaaagaa attataaagt tatttaaaag 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720 ggcattaaag tagatgattt accaattgta ccaaatgaaa aaaaattttt tatgcaatct 780 acagatgcta tacaggcaga agaactatat acatttggag gacaagatcc cagcatcata 840 actccttcta cggataaaag tatctatgat aaagttttgc aaaattttag agggatagtt 900 gatagactta acaaggtttt agtttgcata tcagatccta acattaatat taatatatat 960 aaaaataaat ttaaagataa atataaattc gttgaagatt ctgagggaaa atatagtata 1020 gatgtagaaa gttttgataa attatataaa agcttaatgt ttggttttac agaaactaat 1080 atagcagaaa attataaaat aaaaactaga gcttcttatt ttagtgattc cttaccacca 1140 gtaaaaataa aaaatttatt agataatgaa atctatacta tagaggaagg gtttaatata 1200 tctgataaag atatggaaaa agaatataga ggtcagaata aagctataaa taaacaagct 1260 tatgaagaaa ttagcaagga gcatttggct gtatataaga tacaaatgtg taaaagtgtt 1320 aaatgtcaaa atttattcaa gaacattaat atcatggcca ag 1362 <210> 68 <211> 1386 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> BoNT/C Light chain-MTDr cDNA Sequence <400> 68 atgccaataa caattaacaa ctttaattat tcagatcctg ttgataataa aaatatttta 60 tatttagata ctcatttaaa tacactagct aatgagcctg aaaaagcctt 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gagcttaacc tggtgatcat cggcccttcc gccgatatca tccaattcga gtgcaagagc 540 ttcggccacg aggtcctgaa cctcacccgg aacggctatg gaagcaccca gtacataaga 600 ttcagccctg acttcacctt cgggtttgag gagagcttgg aggtcgacac aaaccccctg 660 ctgggagccg ggaagttcgc cactgaccca gccgtgactc tggcacacga gctgatccac 720 gccggtcacc gcctgtacgg catagctata aacccaaaca gggtgttcaa agtgaacacc 780 aacgcttact atgaaatgag cggcctggag gtgagcttcg aggagctgag aacgttcggg 840 ggacatgatg ctaaatttat cgacagcctg caggagaacg agttcaggct gtactactac 900 aataagttca aggatatagc gagcactctg aacaaggcca agtccatcgt aggcactact 960 gcatccctcc agtatatgaa gaatgtgttc aaagagaaat acctgctgag cgaggatacc 1020 agcggtaagt tcagcgtgga taagcttaag ttcgacaagc tgtataagat gctcaccgaa 1080 atctacaccg aggataattt cgttaagttc ttcaaggtcc tgaaccggaa gacctacctg 1140 aacttcgaca aggccgtgtt caagatcaac atcgtgccta aagtgaacta caccatctac 1200 gacgggttta acctgaggaa caccaacctg gccgctaact tcaacgggca gaacacagag 1260 atcaacaaca tgaatttcac gaagttgaag aacttcaccg gactgtttga gttctacaaa 1320 ttgctgtgtg 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Artificial Sequence <220> <223> BoNT/E Light chain-MTDr cDNA Sequence with hexahistidine <400> 84 atgggcagca gccatcatca tcatcatcac agcagcggcc tggtgccgcg cggcagccat 60 atgccaacaa ttaatagttt taattataat gatcctgtta ataatagaac aattttatat 120 attaaaccag gcggttgtca acaattttat aaatcattta atattatgaa aaatatttgg 180 ataattccag agagaaatgt aattggtaca attccccaag attttcttcc gcctacttca 240 ttgaaaaatg gagatagtag ttattatgac cctaattatt tacaaagtga tcaagaaaag 300 gataaatttt taaaaatagt cacaaaaata tttaatagaa taaatgataa tctttcagga 360 aggattttat tagaagaact gtcaaaagct aatccatatt taggaaatga taatactcca 420 gatggtgact tcattattaa tgatgcatca gcagttccaa ttcaattctc aaatggtagc 480 caaagcatac tattacctaa tgttattata atgggagcag agcctgattt atttgaaact 540 aacagttcca atatttctct aagaaataat tatatgccaa gcaatcacgg ttttggatca 600 atagctatag taacattctc acctgaatat tcttttagat ttaaagataa tagtatgaat 660 gaatttattc aagatcctgc tcttacatta atgcatgaat taatacattc attacatgga 720 ctatatgggg ctaaagggat tactacaaag tatactataa cacaaaaaca 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aactaggtat tcttatttta gtgaatattt gccaccgata 1200 aaaactgaaa aattgttaga caatacaatt tatactcaaa atgaaggctt taacatagct 1260 agtaaaaatc tcaaaacgga atttaatggt cagaataagg cggtaaataa agaggcttat 1320 gaagaaatca gcctagaaca tctcgttata tatagaatag caatgtgcaa gcctgtaatg 1380 tacaaatgtc aaaatttatt caagaacatt aatatcatgg ccaag 1425

Claims (14)

1. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 약학적 조성물로서,
   상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 서열번호 31 내지 서열번호 58로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 서열번호 3 내지 서열번호 9으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아미노산 서열로 이루어진 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 일측 말단에 헥사히스티딘(hexahistidine) 태그(tag)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 보툴리눔 독소 경쇄는 보툴리눔 독소 혈청형(serotype) A, B, C, D, E, F 및 G로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
6. 제1항에 있어서,
   상기 융합은 상기 보툴리눔 독소 경쇄의 카복시 말단, 아미노 말단 또는 이들 모두에 상기 세포투과성 펩타이드가 융합되는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
7. 제1항에 있어서,
   상기 융합은 펩타이드 결합 또는 공유결합에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
8. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 모유두세포의 증식을 촉진시키는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
9. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 프로스타글란딘(prostaglandin) F_2α 발현을 촉진하는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
   
10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 모발 성장을 촉진하고 탈모를 감소시키는 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
    
11. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 경피 투여용인 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 약학적 조성물.
    
12. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 의약외품 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 의약외품 조성물.
    
13. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 피부외용제 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 피부외용제 조성물.
    
14. 보툴리눔 독소 재조합 단백질을 유효성분으로 포함하는 탈모개선용 화장료 조성물로서,
    상기 보툴리눔 독소 재조합 단백질은 보툴리눔 독소 경쇄의 일측 말단 또는 양측 말단에 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 세포투과성 펩타이드가 융합된 것을 특징으로 하는, 탈모개선용 화장료 조성물.

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