CN110195029B - 一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用 - Google Patents
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明属于益生菌健康食品技术领域，公开了一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用，所述高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌保藏于中国典型培养物保藏中心，所述高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M2018889。本发明的优点在于，该高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌，其培养液对致龋变形链球菌具有明显的抑菌效果，抑菌效价高达8000U/ml以上，可在板式口香糖高温加工过程中存活，其菌粉可拮抗变形链球菌、具有防龋的保健功能。采用前述凝结芽孢杆菌和树胶基质等制备而成的板式口香糖，可有效清洁口腔、清新口气、拮抗变形链球菌。
Description
技术领域
本发明属于益生菌健康食品技术领域，具体涉及一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用。
背景技术
人类口腔中存在约700多种细菌。变形链球菌(Streptococcus mutans)为革兰氏阳性球菌，是一种链球菌，在口腔的天然菌群中所占比例最大，为牙菌斑的主要成分之一。变形链球菌一层一层地吸附在牙齿上，形成所谓的“生物膜”，即牙菌斑。它们消耗糖类，产生酸，腐蚀牙齿的釉层，造成牙洞，最终致龋。龋病是发生于牙硬组织的细菌感染性疾病，在口腔疾病中发病率最高。变形链球菌有强的致龋性，主要源于其产酸性和耐酸性。在牙菌斑中生存的变形链球菌能迅速发酵多种碳水化合物产生多量酸，可使局部pH下降至5.5以下；同时，变形链球菌耐酸性强，在pH为4.5时仍能继续生活并产酸。局部pH下降维持相当长时间，可避开唾液的缓冲作用，从而造成局部硬组织脱落，龋病病变过程开始。
板式口香糖是口香糖的一种是以天然树胶或甘油树脂为胶体的基础，加入糖浆、薄荷、甜味剂等调和压制而成的一种供人们放入口中嚼咬的糖。板式口香糖胶基能在口腔中咀嚼、吹泡，起到清洁口腔和牙齿的作用，可以暂时改善一下口腔内的不良气味，减少致龋因子，也有助于防龋。
板式口香糖的制作方法包括如下步骤：①树脂基质的调制：树脂基质是指把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶等各原料调制成为口香糖的基础物质，即基质。调制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，用80～120℃温度加以捏和，使其形成一个整体物质。②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等，均匀地加以搅拌。③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分应保持在3％以下，再用切块机切成8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压出，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持6～8小时以后才可包装。也可把切成片后的口香糖通过冷却隧道加以冷却，再切成为成品块，包装出厂。
益生菌具有拮抗致龋变形链球菌的作用。有文献报导，益生菌中具有拮抗变形链球菌的菌种如双歧杆菌和乳酸菌等，尤其是双歧杆菌中如乳双歧杆菌，乳杆菌中如罗伊氏乳杆菌等；由于板式口香糖制作过程需经过80～120℃的高温，一般乳酸菌类益生菌无法存活，只有芽孢才能存活；同时加入的芽孢类菌种必须与口香糖清洁口腔、防龋等功能相匹配。但益生菌中的凝结芽孢杆菌拮抗致龋变形链球菌和含凝结芽孢杆菌口香糖的报导几乎还未看到有资料报导。
由此可见，急需开发一种能克服上述缺陷的拮抗致龋变形链球菌的菌种或组方。
发明内容
为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用。
本发明所采用的技术方案为：
本发明提供了一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌，该凝结芽孢杆菌菌株号为PB-BC02，名称为Bacillus coagulans，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国·武汉·武汉大学，保藏日期为2018年12月12日，保藏号为 CCTCC NO：M2018889；该凝结芽孢杆菌菌株培养液对致龋变形链球菌 ATCC25175、ATCC35668、ATCC700610均具有明显的抑菌效果；以致龋变形链球菌国际标准菌株ATCC25175为指示菌检测其抑菌效价高达8000U/ml以上。
本发明还提供了一种前述的凝结芽孢杆菌菌粉的制备方法，包括如下步骤：
①培养液制备：将前述的凝结芽孢杆菌接种于改良LB或改良MRS液体培养基，培养，得到凝结芽孢杆菌培养液；
②菌粉制备：将步骤①中所述的凝结芽孢杆菌培养液离心，收集沉淀物，得到凝结芽孢杆菌菌泥；向所述菌泥中添加冻干保护剂，乳化，得到乳化液；将所述乳化液冷冻干燥后获得冷冻干燥菌粉。
优选的，上述制备方法，所述步骤①中培养温度为30～50℃，培养条件为兼性厌氧或好氧培养12～72h。
优选的，上述制备方法，所述凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为1.0×109～ 1.0×1010cfu/ml，所述凝结芽孢杆菌培养液的芽孢转化率为80％以上，所述凝结芽孢杆菌培养液的抑菌效价为8000U/ml以上。
优选的，上述制备方法，所述步骤②中冷冻干燥的时间为24～72h。
本发明还提供了一种前述的制备方法制得的菌粉，所述菌粉中活菌含量为 1.0×1010～1.0×1012cfu/g，所述菌粉的芽孢含量为80％以上。
本发明还提供了一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，包括如下重量百分数的组分：树胶基质20％～30％、辅料60％～80％和前述的凝结芽孢杆菌菌粉0.1％～10％。
优选的，所述板式口香糖中活菌数大于等于1.0×106cfu/g。
本发明还提供了一种前述的凝结芽孢杆菌在拮抗变形链球菌中的应用。
本发明还提供了一种前述的凝结芽孢杆菌菌粉在拮抗变形链球菌中的应用品，包括用于制备清洁口腔、清新口气、防龋等的食品或其他制品等。
本发明的有益效果为：
本发明提供的高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌，其培养液对致龋变形链球菌ATCC25175、ATCC35668、ATCC700610均具有明显的抑菌效果；以致龋变形链球菌国际标准菌株ATCC25175为指示菌检测其抑菌效价高达8000 U/ml以上，可在板式口香糖高温加工过程中存活，其菌粉可拮抗变形链球菌、具有防龋的保健功能。
本发明提供的板式口香糖：采用前述具有高效拮抗变形链球菌功能的凝结芽孢杆菌和树胶基质等制备而成，可有效清洁口腔、清新口气、拮抗变形链球菌。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。
实施例1：
本实施例的目的在于提供一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌。
本实施例提供了一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌，该凝结芽孢杆菌菌株号为PB-BC02，名称为Bacillus coagulans，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国·武汉·武汉大学，保藏日期为2018年12月12日，保藏号为CCTCC NO：M2018889。
本实施例提供的高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌的分离过程：
(1)本实施例提供的凝结芽孢杆菌分离自我国新疆传统自然发酵炼乳，经取样在MRS固体培养基上，37℃培养24～48h，多次划线分离获得单菌落，液体培养获得菌液，经用滤纸片法定性检测菌液对致龋变形链球菌ATCC25175、 ATCC35668、ATCC70061的抑菌效果进行菌株筛选，获得高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌纯菌种。
(2)用滤纸片法定性检测其菌液对致龋变形链球菌ATCC25175、ATCC35668、ATCC70061的抑菌效果进行菌株筛选的方法：①凝结芽孢杆菌菌液制备：取 15×150mm试管，装10mlMRS液体培养基，121℃灭菌处理20min(下同)，冷却接种1环斜面菌种，置37℃恒温箱培养24h；转接500mL装液量200mL 三角瓶，接种量5％，置37℃120rpm恒温振荡培养24h，获得凝结芽孢杆菌菌液。②指示菌平板制备：将变形链球菌ATCC25175、ATCC35668、ATCC70061 分别接种1环斜面菌种于盛有40mlMS或TPY液体培养基的50ml三角瓶中， 37℃厌氧培养48h；将培养好的菌液用无菌生理盐水稀释，调整菌悬液吸光值 OD600nm为1.0(用紫外分光光度计测定)。制备含2％纯琼脂粉的MS或TPY 固体培养基，置于室温，待其冷却至48～50℃时，在100mL固体培养基中加入100μl菌悬液(OD600nm＝1.0)迅速摇匀；吸取含菌固体培养基10mL，移至Φ90mm培养皿中，使其在培养皿底均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。③菌株筛选：在超静工作台上吸取上述凝结芽孢杆菌菌液20mL于Ф90mm无菌培养皿中，将Ф10mm灭菌滤纸片用无菌镊子放入到该培养皿中浸泡10分钟，用无菌镊子夹取含菌液纸片，将多余菌液在内培养皿边上擦掉，贴在含变形链球菌ATCC25175、ATCC35668、ATCC70061的不同平板培养基表面，轻轻按压，使纸片与培养皿密切接触，滤纸片距培养皿边缘15mm，每个培养皿均匀放置5 张滤纸片，置37℃恒温箱，培养24h后观察含菌液滤纸片周围有无抑菌圈，并测量抑菌圈大小，取平均值进行比较筛选。
(3)以致龋变形链球菌国际标准菌株ATCC25175为指示菌，定量检测该凝结芽孢杆菌菌株培养液抑菌效价的方法：①指示菌菌液制备：将变形链球菌 (ATCC25175)从刚培养好的新鲜试管斜面培养基上刮一环菌苔，转接于盛有液体培养基的50mL三角瓶中，液体培养基为MS或TPY，液体培养基的体积为40mL，37℃厌氧培养48h；将上述培养好的菌液用无菌生理盐水稀释，调整菌悬液吸光值OD600nm为1.0(用紫外分光光度计测定)；同时用无菌生理盐水做空白对照。②指示菌检测培养基制备：在MS或TPY液体培养基中加入2％纯琼脂粉，制备成固体培养基；将已灭菌的MS或TPY固体培养基置于室温，待其冷却至48～50℃时，按100ml上述无菌固体培养基加入100μl菌悬液 (OD600nm＝1.0)，迅速摇匀；吸取含菌固体培养基10mL，迅速移至Φ90mm培养皿中，使其在Φ90mm培养皿底内均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。③待测样除菌处理：吸取约10mL左右凝结芽孢杆菌培养液，将其移入离心管中，10000rpm/min离心15分钟，倒出上清液，用无菌针筒吸取上清液，过0.22μm细菌过滤器，作除菌处理。④抑菌效价测定：将上述制备好的指示菌检测培养基，用已经灭菌处理过的打孔器(孔径Φ2.7mm)打孔，取3个平板每板至少打1孔，重复3板；每孔中分别加入5μl的已作除菌处理待测样品溶液，置于37℃培养箱中，厌氧培养24～48小时后，用游标卡尺测定抑菌圈直径大小，计算平均值。计算公式如下：抑菌效价(U/ml)＝2x×1000×稀释倍数， x＝(y-2.7)/2.1。其中：y为抑菌圈直径(Φmm)，取平均值；2.7为孔穴直径 (Φmm)；2.1为培养液浓度与抑菌圈直径的比值常数。
(4)本实施例提供的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌株的细胞呈杆状，革兰氏染色阳性，端生芽孢，无鞭毛；能分解糖类生成L-乳酸，为同型乳酸发酵菌；经16SrRNA 基因作为Marker片段，通用引物扩增出基因中16SrRNA序列，再进行电泳检测，使用3730XL测序仪进行一代双末端测序，获得abi测序峰图文件，通过软件组装后，与NT数据库进行比对，获得近源物信息，为凝结芽孢杆菌。
(5)本实施例提供的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌株的16SrRNA序列如SEQ ID NO.1所示：
TGGTATTCTGTCACTTCGGCGGCTGGCTCCGTAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAA CTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCG ATTACTAGCGATTCCGGCTTCATGCAGGCGGGTTGCAGCCTGCAATCCGAACTGGGAATGGTTTTCTG GGATTGGCTTAACCTCGCGGTCTCGCAGCCCTTTGTACCATCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGT CATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGA GTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGGTCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTC ACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGTCCCCCGAAGGGGAAGGCCCTGTCTC CAGGGAGGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTC CACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGCCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGAG TGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAAGGGCGGAAACCCTCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGG CGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCGCCTCAGCGTCAGTTACAGAC CAGAGAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTC CACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGCCTCCCAGTTTCCAATGACCGCTTGCGGTTGAGCCGCAAGATTTC ACATCAGACTTAAGAAGCCGCCTGCGCGCGCTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTA CGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCCGTGGCTTTCTGGCCGGGTACCGTCAGGCGCCGCC CCTGTTCGAACCGGCACTGTTCTCCCCAGGCAAC。
(6)用上述抑菌效价定量检测方法检验，该凝结芽孢杆菌PB-BC02菌株培养液对以致龋变形链球菌国际标准菌株ATCC25175为指示菌的抑菌效价高达 8000U/ml以上。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株为可用于食品的菌种，必须以芽孢的形式存在，具有高效拮抗致龋变形链球菌的抑菌效果，与口香糖清洁口腔、防龋等功能相匹配。
实施例2
本实施例的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌菌粉。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株PB-BC02菌粉的制备方法包括以下步骤：
①培养液制备：采用改良LB液体培养基，即1000mL液体培养基含胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、淀粉5g，pH 7.0；培养温度为30℃，兼性厌氧培养 36h，得到凝结芽孢杆菌培养液；该凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为5.6×109 cfu/ml，芽孢转化率85％，抑菌效价达到8973U/ml。
②菌粉制备：将上述凝结芽孢杆菌培养液进行离心处理，收集沉淀物，得到菌泥；向菌泥中添加冻干保护剂，按照固含量百分比即脱脂奶粉60％、麦芽糊精20％、海藻糖15％和乳糖5％，进行乳化处理，获得乳化液；将乳化液进行冷冻干燥处理46h，即预冻温度-35℃、冷阱温度-45℃开始抽真空，控制解析温度25～28℃，获得冷冻干燥菌粉；该菌粉活菌含量为3.2×1011cfu/g，芽孢含量82％。
实施例3
本实施例的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌菌粉。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株PB-BC02菌粉的制备方法包括以下步骤：
①培养液制备：采用改良TPY液体培养基，即在TPY液体培养基中加入莫匹罗星锂盐5mg/100mL；培养温度45℃，好氧培养24h，得到凝结芽孢杆菌培养液；该凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为6.5×109cfu/ml，芽孢转化率83％，抑菌效价达到10345U/ml。
②菌粉制备：将上述凝结芽孢杆菌培养液进行离心处理，收集沉淀物，得到菌泥；向菌泥中添加冻干保护剂，按照固含量百分比即脱脂奶粉50％、海藻糖30％、甘油15％和乳糖5％，进行乳化处理，获得乳化液；将乳化液进行冷冻干燥处理42h，即预冻温度-42℃、冷阱温度-55℃开始抽真空，控制解析温度 25～30℃，获得冷冻干燥菌粉；该菌粉活菌含量为5.1×1011cfu/g，芽孢含量85％。
实施例4
本实施例的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌菌粉。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株PB-BC02菌粉的制备方法包括以下步骤：
①培养液制备：采用改良LB液体培养基，即1000mL液体培养基含胰蛋白胨10g、酵母浸粉5g、淀粉5g，pH 7.0；培养温度50℃，兼性厌氧培养28h，得到凝结芽孢杆菌培养液；该凝结芽孢杆菌培养液中为3.8×109cfu/mL，芽孢转化率88％，抑菌效价达到9856U/ml。
②菌粉制备：将上述凝结芽孢杆菌培养液进行离心处理，收集沉淀物，得到菌泥；向菌泥中添加冻干保护剂，按照固含量百分比即脱脂奶粉70％、麦芽糊精20％、甘露聚糖10％，进行乳化处理，获得乳化液；将乳化液进行冷冻干燥处理48h，即预冻温度-40℃、冷阱温度-50℃开始抽真空，控制解析温度26～ 28℃，获得冷冻干燥菌粉；该菌粉活菌含量为1.8×1011cfu/g，芽孢含量81％。
实施例5
本实施例的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌菌粉。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株PB-BC02菌粉的制备方法包括以下步骤：
①培养液制备：采用LB液体培养基；培养温度为37℃，兼性厌氧培养12 h，得到凝结芽孢杆菌培养液；该凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为1.0×109cfu/ml，芽孢转化率80％，抑菌效价达到8000U/ml。
②菌粉制备：将上述凝结芽孢杆菌培养液进行离心处理，收集沉淀物，得到菌泥；向菌泥中添加冻干保护剂，按照固含量百分比即脱脂奶粉40％、麦芽糊精30％、低聚果糖15％，葡萄糖10％，L-半胱氨酸盐酸盐5％，进行乳化处理，获得乳化液；将乳化液进行冷冻干燥处理24h，即预冻温度-45℃、冷阱温度-60℃开始抽真空，控制解析温度28～30℃，获得冷冻干燥菌粉；该菌粉活菌含量为1.0×1010cfu/g，芽孢含量84％。
实施例6
本实施例的目的在于提供一种凝结芽孢杆菌菌粉。
本实施例提供的凝结芽孢杆菌菌株PB-BC02菌粉的制备方法包括以下步骤：
①培养液制备：采用TPY液体培养基；培养温度45℃，好氧培养72h，得到凝结芽孢杆菌培养液；该凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为1.0×1010cfu/ml，芽孢转化率88％，抑菌效价达到11000U/ml。
②菌粉制备：将上述凝结芽孢杆菌培养液进行离心处理，收集沉淀物，得到菌泥；向菌泥中添加冻干保护剂，按照固含量百分比即脱脂奶粉50％、麦芽糊精30％、低聚半乳糖10％，乳糖5％，L-半胱氨酸盐酸盐5％，进行乳化处理，获得乳化液；将乳化液进行冷冻干燥处理72h，即预冻温度-42℃、冷阱温度-65℃开始抽真空，控制解析温度28～30℃，获得冷冻干燥菌粉；该菌粉活菌含量为 1.0×1012cfu/g，芽孢含量85％。
实施例7
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉1％，树胶基质25％，糖和其它成分74％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；调制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌；
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.1％，再用切块机切成8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持6小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为5.0×108cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
实施例8
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉5％，树胶基质24％，糖和其它成分71％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；调制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌；
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.5％，再用切块机切成 8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持8小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为2.0×107cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
实施例9
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉2％，树胶基质26％，糖和其它成分72％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌。
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.4％，再用切块机切成 8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持7小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为8.0×106cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
实施例10
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉0.1％，树胶基质29.9％，糖和其它成分70％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；调制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌；
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.5％，再用切块机切成 8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持8小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为2.0×106cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
实施例11
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉10％，树胶基质30％，糖和其它成分60％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌。
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.4％，再用切块机切成 8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持7小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为 8.0×108cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
实施例12
本实施例的目的在于提供一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，由实施例2～5所述的凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉与树胶基质、粉糖、饴糖、碳酸钙、葡萄糖、香料等成分共同组成，除树胶基质和菌粉外，板式口香糖制备过程中必需的组分均为辅料，与现有技术中相同，该组方包括如下重量百分比的组分：凝结芽孢杆菌PB-BC02菌粉0.1％，树胶基质20％，糖和其它成分79.9％。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖制备方法包括如下步骤：
①树脂基质的调制：把醋酸乙烯酯、酯树胶、丁酞酰丁基甘醇酯、糖胶树胶调制成口香糖基质；制时把各原料投入到捏和机中，同时加入乳化剂和可塑剂，捏和温度严格控制在80～120℃范围内，使其形成一个整体物质；
②混合：使用混合机，混合时依一定的顺序，先投入已加热溶解了的口香糖基质，再投进砂糖、葡萄糖、饴糖和香料等成分，均匀地加以搅拌。
③成型和包装：混合后的原料质地均匀，水分含量2.4％，再用切块机切成 8×25×5厘米的长方形小块，再装入挤压机中挤压，挤出后再通过多段式滚筒机压成一定厚度的板片，然后再用切断机切成适当的形状，再在温度为21～24℃、相对湿度为45～50％的调温室中保持7小时后进行包装。
本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖中，活菌数为 8.0×107cfu/g；该本实施例提供的含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖具有清洁口腔、清新口气，拮抗变形链球菌、防龋的保健功能。
本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。
序列表
<110> 郑州和合生物工程技术有限公司
<120> 一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌、该菌菌粉制作方法、含有该菌粉的口香糖及应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1050
<212> DNA
<213> 凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)
<400> 1
tggtattctg tcacttcggc ggctggctcc gtaaggttac ctcaccgact tcgggtgtta 60
caaactctcg tggtgtgacg ggcggtgtgt acaaggcccg ggaacgtatt caccgcggca 120
tgctgatccg cgattactag cgattccggc ttcatgcagg cgggttgcag cctgcaatcc 180
gaactgggaa tggttttctg ggattggctt aacctcgcgg tctcgcagcc ctttgtacca 240
tccattgtag cacgtgtgta gcccaggtca taaggggcat gatgatttga cgtcatcccc 300
accttcctcc ggtttgtcac cggcagtcac cttagagtgc ccaactgaat gctggcaact 360
aaggtcaagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg 420
acaaccatgc accacctgtc actctgtccc ccgaagggga aggccctgtc tccagggagg 480
tcagaggatg tcaagacctg gtaaggttct tcgcgttgct tcgaattaaa ccacatgctc 540
caccgcttgt gcgggccccc gtcaattcct ttgagtttca gccttgcggc cgtactcccc 600
aggcggagtg cttaatgcgt tagctgcagc actaaagggc ggaaaccctc taacacttag 660
cactcatcgt ttacggcgtg gactaccagg gtatctaatc ctgtttgctc cccacgcttt 720
cgcgcctcag cgtcagttac agaccagaga gccgccttcg ccactggtgt tcctccacat 780
ctctacgcat ttcaccgcta cacgtggaat tccactctcc tcttctgcac tcaagcctcc 840
cagtttccaa tgaccgcttg cggttgagcc gcaagatttc acatcagact taagaagccg 900
cctgcgcgcg ctttacgccc aataattccg gacaacgctt gccacctacg tattaccgcg 960
gctgctggca cgtagttagc ccgtggcttt ctggccgggt accgtcaggc gccgcccctg 1020
ttcgaaccgg cactgttctc cccaggcaac 1050
Claims (10)
1. 一种高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌，其特征在于：所述高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）保藏于中国典型培养物保藏中心，所述高效拮抗变形链球菌的凝结芽孢杆菌的保藏号为CCTCC NO：M2018889。
2.一种凝结芽孢杆菌菌粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
①培养液制备：将权利要求1所述的凝结芽孢杆菌接种于改良LB或改良MRS液体培养基，培养，得到凝结芽孢杆菌培养液；
②菌粉制备：将步骤①中所述的凝结芽孢杆菌培养液离心，收集沉淀物，得到凝结芽孢杆菌菌泥；向所述菌泥中添加冻干保护剂，乳化，得到乳化液；将所述乳化液冷冻干燥后获得冷冻干燥菌粉。
3. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤①中培养温度为30～50℃，培养条件为兼性厌氧或好氧培养12～72 h。
4. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述凝结芽孢杆菌培养液中活菌数为1.0×109～1.0×1010 cfu/ml，所述凝结芽孢杆菌培养液的芽孢转化率为80%以上，所述凝结芽孢杆菌培养液的抑菌效价为8000 U/ml以上。
5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：所述步骤②中冷冻干燥的时间为24～72 h。
6. 一种凝结芽孢杆菌菌粉，其特征在于：所述凝结芽孢杆菌菌粉采用权利要求2~5任意一项所述的制备方法制得，所述凝结芽孢杆菌菌粉中活菌含量为1.0×1010～1.0×1012cfu/g，所述凝结芽孢杆菌菌粉中芽孢的重量含量为80wt%以上。
7.一种含高活性凝结芽孢杆菌的板式口香糖，其特征在于，包括如下重量百分数的组分：树胶基质20%～30%、辅料60%～80%和权利要求6所述的凝结芽孢杆菌菌粉0.1%～10%。
8. 根据权利要求7所述的板式口香糖，其特征在于：所述板式口香糖中活菌数大于等于1.0×106 cfu/g。
9.一种权利要求1所述的凝结芽孢杆菌在制备拮抗变形链球菌产品中的应用。
10.一种权利要求6所述的凝结芽孢杆菌菌粉在制备拮抗变形链球菌产品中的应用。
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| Comparison of the effect of regular and probiotic cake (Bacillus coagulans) on salivary pH and Streptococcus mutans count;Maryam Koopaie等;《Dent Med Probl》;20190315;第56卷(第1期);第1-7页 * |
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