CN110105464A - 一种银耳耳蒂多糖脱色方法 - Google Patents
一种银耳耳蒂多糖脱色方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种多糖，具体涉及一种银耳耳蒂多糖脱色方法,其包括以下步骤：S1耳蒂粗多糖提取备用；S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖经聚酰胺树脂层析柱层析，得到聚酰胺纯化多糖液；S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP‑20大孔树脂中吸附后，离心分离得耳蒂脱色多糖液；S4浓缩和干燥：将所得耳蒂脱色多糖液依次经减压浓缩和真空冷冻得到银耳耳蒂脱色多糖。本发明银耳耳蒂多糖脱色方法利用聚酰胺结合大孔树脂双重静置吸附方法，提高银耳耳蒂多糖脱色率。
Description
技术领域
本发明涉及一种多糖，具体涉及一种银耳耳蒂多糖脱色方法。
背景技术
银耳耳蒂分布在银耳子实体耳片与培养基交接处，呈黄色，是银耳商品菇采收后的副产物，占银耳生物量的10％以上，目前未得到有效利用。银耳耳蒂富含多糖类物质，利用银耳耳蒂提取多糖可有效利用耳蒂资源，开发功能食品、药品、化妆品等行业。然而银耳耳蒂呈黄色，在多糖提取过程中黄色素与多糖相结合，影响了多糖的纯度和色泽，制约产品应用。
多糖脱色的方法主要有活性炭吸附法、过氧化氢法脱色和大孔树脂吸附法等，目前针对银耳耳蒂多糖脱色方法尚未见报道。
在公开号为CN109400734A的中国发明专利中，公开了一种刺梨多糖的制备方法，其将脱蛋白后的刺梨多糖提取液，经过大孔树脂进行脱色。其中，提到大孔树脂为AB-8、大孔树脂D101或聚酰胺树脂。
本发明前期试验发现，浓度为0.2％以上的银耳耳蒂多糖在常温下，粘度大，给脱色带来了困难；采用活性炭吸附法脱色耳蒂多糖，活性炭粉与银耳耳蒂多糖溶液结合在一起，无法完全分离，反而使多糖变成黑色；采用过氧化氢脱色耳蒂多糖，容易使多糖氧化分解，从而破坏多糖结构，且存在安全问题；单一大孔树脂吸附耳蒂多糖，多糖脱色率小于85％，且不同极性和孔径的大孔树脂脱色效果存在显著差异。因此，现有技术中多糖脱色方法无法解决银耳耳蒂因其粘度过高等问题引起的其多糖不易脱色，且多糖脱色率低的问题。
发明内容
(一)要解决的技术问题
为了解决现有技术的上述问题，本发明提供一种吸附速度快、不破坏多糖结构和易操作的的脱色方法，多糖脱色率大于95％，多糖保留率大于80％，所制备的银耳耳蒂脱色多糖产品呈白色，多糖含量为30～70％，葡萄糖醛酸含量为15～30％。
(二)技术方案
为了达到上述目的，本发明采用的主要技术方案包括：
一种银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取备用；
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖经聚酰胺树脂层析柱层析，得到聚酰胺纯化多糖液；
S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得耳蒂脱色多糖液依次经减压浓缩和真空冷冻得到银耳耳蒂脱色多糖。
本方案将耳蒂粗多糖依次经过聚酰胺树脂层析柱和HP-20大孔树脂振荡吸附离心脱色后，有效解决耳蒂多糖粘度大不易脱色或脱色率不高的问题。
本发明方法优选的方案，步骤S1包括以下子步骤：
S11第一次水浸提：先将银耳耳蒂加水浸提得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液；
S13醇沉和冷冻干燥：将所得第一次滤液和第二次滤液混合后，加入乙醇沉淀后，冷冻干燥后得耳蒂粗多糖。
本方案先通过水浸提，提取银耳细胞内的多糖，再将滤渣在超声波下第二次水浸提，利用超声波空穴效应提取银耳细胞间和细胞壁多糖，以提高银耳耳蒂中多糖的提取率的同时最小限度的破坏银耳耳蒂多糖的结构；由于色素在滤渣中的含量较高，在第二次水浸提时，超声波的作用下有助于色素与多糖物质的分离，有助于后续多糖在纯化过程中色素分离。
本发明方法优选的方案，步骤S11中银耳耳蒂在加水浸提前，先将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的13～18倍；加入水后在温度为90～100℃下不断搅拌30～45min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣。
本发明方法优选的方案，步骤S12中，水的加入量为滤渣的3～6倍；加入水后在80～95℃水浴中功率400～600W超声波下提取10～25min，经200目筛过滤得第二次滤液。
本发明方法优选的方案，步骤S13中，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积1～4倍浓度为95％的乙醇，4℃静置8～15h后，3000～6000rpm下离心5～15min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
本发明方法优选的方案，步骤S2中，将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.2mg/mL～1.0mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3～4，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
本方案利用聚酰胺树脂脱除游离型色素和电荷型色素，同时具有脱蛋白效果，这可提高多糖纯度；此外，调控多糖液pH和流速，减少耳蒂多糖粘度过高的影响，提高脱色效果。
本发明方法优选的方案，步骤S3中，银耳耳蒂粗多糖液二次纯化：将10～30份聚酰胺纯化多糖液加入0.5～3份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1～2h，摇床转速180～250rpm、温度25～35℃，摇床之后在4000～6000rpm下离心5～15min，得到的上清液即为耳蒂脱色多糖液。
本方案采用大孔树脂主要吸附耳蒂多糖中的酮类、酚类和醌类等色素，具有吸附速度快、物理化学稳定性高、不破坏多糖原有结构、工艺简单、成本低等诸多优点。
本发明方法优选的方案，步骤S4中，将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心5～15min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心15min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
本发明的技术原理为：经过两次水浸提多糖，并在第二次水浸提中通过超声波处理滤渣，促使色素从滤渣中分离成游离型色素和电荷型色素，促使多糖分子带电荷的变化，并通过调节所得多糖液pH为3-4，在氢离子的作用下使多糖分子之间的作用力下降，在不破坏多糖分子的前提下，使多糖液的粘度降低，通过聚酰胺树脂层析柱，提高游离型色素和电荷型色素的脱除率，由于粘度的下降，多糖分子的损失率相应的减少，经过聚酰胺树脂层析柱的多糖液粘度进一步下降，再经过HP-20大孔树脂，脱除酮类、酚类和醌类等色素，提高多糖的脱色率。
(三)有益效果
本发明的有益效果是：
1、本发明方法通过降低多糖的粘度以提高多糖脱色率，并利用聚酰胺结合大孔树脂双重静置吸附方法在提高多糖多色率的同时，具有较高的多糖保留率，有效的解决了耳蒂多糖粘度大不易脱色或脱色率不高的问题。本发明多糖脱色率大于95％，多糖保留率大于80％以上，高于单一吸附脱色等其它脱色方法。
2、本发明采用物理吸附的方法，减少对耳蒂多糖结构的破坏，所制备的银耳耳蒂脱色多糖产品呈白色，多糖含量为30-70％，葡萄糖醛酸含量为15-30％，而葡萄糖醛酸是耳蒂多糖保湿和抗氧化功效的主要影响因子；同时聚酰胺具有同时脱色和脱蛋白的效果，提高耳蒂多糖纯度。
3、本发明脱色方法吸附速度快、不破坏多糖结构和易操作。
附图说明
图1为本发明实施例3和对比例2所得到的多糖脱色液的颜色对比图。
具体实施方式
为了更好的解释本发明，以便于理解，下面通过具体实施方式，对本发明作详细描述。
实施例1
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的13倍；加入水后在温度为90℃下不断搅拌30min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的3倍；加入水后在80℃水浴中功率400W超声波下提取10min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5，加入浓缩液2倍体积95％乙醇，4℃静置8h后，3000rpm下离心5min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.2mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将10份聚酰胺纯化多糖液加入0.5份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1h，摇床转速180rpm、温度35℃，摇床之后在4000rpm下离心5min，得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心5min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例2
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的18倍；加入水后在温度为100℃下不断搅拌45min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的6倍；加入水后在95℃水浴中功率600W超声波下提取25min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积4倍浓度为95％的乙醇，4℃静置15h后，6000rpm下离心15min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度1.0mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH4，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将30份聚酰胺纯化多糖液加入3份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡2h，摇床转速250rpm、温度25℃，摇床之后在6000rpm下离心15min，得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心15min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例3
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的15倍；加入水后在温度为95℃下不断搅拌40min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的5倍；加入水后在90℃水浴中功率500W超声波下提取18min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积3倍浓度为95％的乙醇，4℃静置10h后，5000rpm下离心10min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.5g/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3.5，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将20份聚酰胺纯化多糖液加入2份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1.5h，摇床转速200rpm、温度30℃，摇床之后在5000rpm下离心10min，将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心10min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
经实验表明，本发明多糖脱色率大于95％，多糖保留率大于80％，所制备的银耳耳蒂脱色多糖产品呈白色，多糖含量为30～70％，葡萄糖醛酸含量为15～30％。
实施例1
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的13倍；加入水后在温度为90℃下不断搅拌30min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的3倍；加入水后在80℃水浴中功率400W超声波下提取10min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5，加入浓缩液2倍体积95％乙醇，4℃静置8h后，3000rpm下离心5min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.2mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将10份聚酰胺纯化多糖液加入0.5份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1h，摇床转速180rpm、温度35℃，摇床之后在4000rpm下离心5min，得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心5min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例2
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的18倍；加入水后在温度为100℃下不断搅拌45min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的6倍；加入水后在95℃水浴中功率600W超声波下提取25min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积4倍浓度为95％的乙醇，4℃静置15h后，6000rpm下离心15min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度1.0mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH4，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将30份聚酰胺纯化多糖液加入3份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡2h，摇床转速250rpm、温度25℃，摇床之后在6000rpm下离心15min，得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心15min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例3
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的15倍；加入水后在温度为95℃下不断搅拌40min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的5倍；加入水后在90℃水浴中功率500W超声波下提取18min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积3倍浓度为95％的乙醇，4℃静置10h后，5000rpm下离心10min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.5g/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3.5，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将20份聚酰胺纯化多糖液加入2份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1.5h，摇床转速200rpm、温度30℃，摇床之后在5000rpm下离心10min，将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心10min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
经实验表明，本发明多糖脱色率大于95％，多糖保留率大于80％，所制备的银耳耳蒂脱色多糖产品呈白色，多糖含量为30～70％，葡萄糖醛酸含量为15～30％。
实施例4
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的17倍；加入水后在温度为95℃下不断搅拌31min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的6倍；加入水后在90℃水浴中功率400W超声波下提取24min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5，在浓缩液中加入其体积2倍浓度为95％的乙醇，4℃静置9h后，6000rpm下离心8min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.3mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH4，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心12min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例5
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的14倍；加入水后在温度为100℃下不断搅拌35min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的4倍；加入水后在95℃水浴中功率500W超声波下提取12min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5，在浓缩液中加入其体积3倍浓度为95％的乙醇，4℃静置13h后，3000rpm下离心14min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.5mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心14min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
实施例6
银耳耳蒂多糖脱色方法，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取：
S11第一次水浸提：将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块，水的加入量为银耳耳蒂的16倍；加入水后在温度为92℃下不断搅拌43min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液，水的加入量为滤渣的4倍；加入水后在85℃水浴中功率600W超声波下提取20min，经200目筛过滤得第二次滤液。
S13醇沉和冷冻干燥：将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5，在浓缩液中加入其体积3倍浓度为95％的乙醇，4℃静置15h后，4000rpm下离心6min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度1.0mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3.5，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂振荡离心后得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心7min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
对比例1：
在S2中聚酰胺树脂层析柱替换为HP-20大孔树脂层析柱，其他与实施例3相同。
对比例2：
不经过聚酰胺树脂层析柱层析，其他与实施例3相同。
对比例3：
不经过聚酰胺树脂层析柱和大孔树脂吸附，步骤S2中耳蒂粗多糖经过活性炭脱色，其他与实施例3相同。
为验证本发明相对于现有技术具有更好的脱色效果、多糖保留率等，对上述描述的实施例脱色方法所得的样品进行测定，并得到如下结果：
表1不同脱色方法对银耳耳蒂多糖的脱色效果
图1中，左边样品为本发明实施例3在经过二次纯化后所得到的耳蒂脱色多糖液，右边样品为对比例2所得到的耳蒂脱色多糖液。图1表明，本发明方法的效果；
表1和图1数据表明，本发明实施例采用聚酰胺树脂层析柱具有较好的脱色效果，在大孔树脂的协同作用下，其特色率显著增高，均在95％以上，且多糖保留率达到80％以上，多糖含量高于55％，葡萄糖醛酸含量在21％以上，显著大于对比例1、对比例2和对比例3，其具有不可预料的脱色效果。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (9)
1.一种银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于，其包括以下步骤：
S1耳蒂粗多糖提取备用；
S2耳蒂粗多糖纯化：将所得耳蒂粗多糖经聚酰胺树脂层析柱层析，得到聚酰胺纯化多糖液；
S3二次纯化：将所得聚酰胺纯化多糖液加入HP-20大孔树脂中吸附后，离心分离得耳蒂脱色多糖液；
S4浓缩和干燥：将所得耳蒂脱色多糖液依次经减压浓缩和真空冷冻得到银耳耳蒂脱色多糖。
2.如权利要求1所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于，步骤S1包括以下子步骤：
S11第一次水浸提：先将银耳耳蒂加水浸提得第一次滤液和滤渣；
S12第二次水浸提：将所得滤渣加入水并在超声波下浸提，得第二次滤液；
S13醇沉和冷冻干燥：将所得第一次滤液和第二次滤液混合后，加入乙醇沉淀后，冷冻干燥得耳蒂粗多糖。
3.如权利要求2所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S11中银耳耳蒂在加水浸提前，先将银耳耳蒂清洗后，切成0.8cm×0.8cm的丁块。
4.如权利要求2所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S11中，水的加入量为银耳耳蒂的13～18倍；加入水后在温度为90～100℃下不断搅拌30～45min，经200目筛过滤得第一次滤液和滤渣。
5.如权利要求2所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S12中，水的加入量为滤渣的3～6倍；加入水后在80～95℃水浴中功率400～600W超声波下提取10～25min，经200目筛过滤得第二次滤液。
6.如权利要求2所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S13中，将第一次滤液和第二次滤液合并为混合液后，真空减压浓缩至原混合液体积1/5得到浓缩液，在浓缩液中加入其体积1～4倍浓度为95％的乙醇，4℃静置8～15h，3000～6000rpm下离心5～15min，取沉淀物冷冻干燥得到耳蒂粗多糖。
7.如权利要求1所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：将所得耳蒂粗多糖配制成浓度0.2mg/mL～1.0mg/mL耳蒂粗多糖液，调节多糖液pH3～4，过聚酰胺树脂层析柱，上样体积4BV，流速2BV/h，得到聚酰胺纯化多糖液。
8.如权利要求1所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S3中，将10～30份聚酰胺纯化多糖液加入0.5～3份的HP-20大孔树脂，在摇床振荡1～2h，摇床转速180～250rpm、温度25～35℃，摇床之后在4000～6000rpm下离心5～15min，得到的上清液即为耳蒂脱色多糖液。
9.如权利要求1所述的银耳耳蒂多糖脱色方法，其特征在于：步骤S4中，将所得脱色耳蒂多糖液在80℃、0.01MPa下减压浓缩后，加入95％乙醇沉淀，乙醇加入量为浓缩后脱色耳蒂多糖液体积的3倍；加入乙醇沉淀后，在5000r/min下离心5～15min，所得沉淀物经真空冷冻干燥，得到银耳耳蒂脱色多糖。
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