CN110064008A - 一种养颜美容祛斑组合物和膏滋及其制备工艺 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种养颜美容祛斑中药组合物，它是由含有下述重量配比的原料药制备而成：黄芪24‑35份、人参5‑7份、当归8‑12份、地黄16‑24份、白芍12‑18份、川芎10‑14份、红花10‑14份、白芷5‑7份、枸杞16‑24份、菟丝子16‑24份。本发明还提供了该组合物的制备方法和用途，本发明还提供了一种膏滋及其制备方法和用途。本发明的养颜美容祛斑中药组合物，具有补气养血，行气活血的功效，可用于治疗气血亏虚与气滞血瘀两个方面的气血失调的黄褐斑。以本发明组合物为基础制备的膏滋，疗效确切、使用方便、便于携带和保存，储藏稳定性好，口感舒适美味，为患者提供一种新的用药选择。

Description

一种养颜美容祛斑组合物和膏滋及其制备工艺
技术领域
本发明涉及一种养颜美容祛斑组合物和膏滋及其制备工艺，属于中药领域。
背景技术
黄褐斑(Chloasma)为褐色素沉着于面部而形成的斑块，中医称本病为“黧黑斑”、“面尘”等，表现为对称发生于面部，尤其是两颊、额部、鼻等处多见，皮损为淡褐色、深褐色、淡黑色斑片。数据显示，黄褐斑的发病率在白人中约为8.8％，在东南亚女性中发病率约40％，甚至在男性中的发病率也高达20％。近年来由于环境的不断恶化，以及人们生活压力不断增大，导致黄褐斑的发病率也有逐年上升的趋势。黄褐斑皮损本身很少给患者带来痛苦或不适，但因其常发生于面部而影响容貌，给患者的精神和生活上带来诸多烦恼和痛苦。
黄褐斑因祛除困难，病程顽固被称为“色斑之王”，其病因和发病机制至今尚不十分清楚。现代研究认为情绪因素、妊娠、环境因素、遗传因素、其他疾病、化妆品等均能诱导该病的发生。
西医治疗黄褐斑分为全身疗法和局部疗法，但采用VC、VE、黄酮醇类等天然植物提取物进行全.身治疗的疗效不佳，目前西医治疗此病多采用局部治疗法，虽有一定效果，但对皮肤均有一定的刺激性，易导致红斑、瘙痒、脱屑等副作用。此外，激光治疗也是治疗黄褐斑的常见疗法，但是该疗法存在治疗费用高昂、疗后易反弹等缺点，且存在对正常组织造成伤害的风险。
中医对黄褐斑的治疗历史悠久，中医治疗重在调节内分泌、治病治本，对治疗黄褐斑具有较大的开发潜力。另一方面，由于黄褐斑病程较长，较难治愈，患者需长期用药才能有所疗效，因此将中药制成便于携带的剂型，可帮助患者坚持用药，应用前景良好。
发明内容
本发明的目的在于提供一种养颜美容祛斑组合物和膏滋及其制备工艺。
本发明提供了一种养颜美容祛斑组合物，它是由含有下述重量配比的原料药制备而成：
黄芪24-35份、人参5-7份、当归8-12份、地黄16-24份、白芍12-18份、川芎10-14份、红花10-14份、白芷5-7份、枸杞16-24份、菟丝子16-24份。
其中，它是由下述重量配比的原料药制备而成：
黄芪30份、人参6份、当归10份、地黄20份、白芍15份、川芎12份、红花12份、白芷6份、枸杞20份、菟丝子20份。
其中，它是由所述原料药的原生粉、或水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂。
其中，所述的口服制剂的剂型为膏滋，可开发剂型为：口服液、合剂、糖浆剂、胶囊、片剂、颗粒剂、水丸剂、蜜丸剂、袋泡茶。
其中，所述膏滋在制备时加入纽甜作为矫味剂。
本发明还提供了上述组合物的制备方法，它包括如下步骤：
a、称取各重量配比的原料药；
b、打粉，或加水或有机溶剂煎煮提取，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的外用制剂。
其中，它包括如下步骤：
a、称取各重量配比的原料药；
b、加水煎煮提取，浓缩至相对密度为1.3(60℃)的清膏，加入纽甜，混匀即可。
本发明还提供了上述组合物在制备具有养颜美容祛斑功效的药物或化妆品中的用途。
其中，所述药物或化妆品是治疗黄褐斑的药物或化妆品。
其中，所述药物或化妆品是治疗蝴蝶斑、面上部型色斑、面下部型色斑和/或泛发型色斑的药物或化妆品。
从中医而论，黄褐斑与肝脾肾三脏密切相关，气血不能上荣于面为主要病机。黄褐斑被认为是衰老的表现之一，衰老与肾相关，因此治疗上要从补肾精为基础，佐以活血化瘀。
本发明组方中，以人参大补元气，补益脾肾之气，为君药；黄芪健脾补中、升阳举陷、托毒生肌，当归、熟地补血滋阴，川芎、红花活血行气，白芷燥湿排脓，升阳明清气，白芍养血柔肝敛阴，共用为臣药。君臣相配，意在益气补血，活血理气化瘀，托毒排脓生肌，以荣养面表肌肤。另以枸杞、菟丝子滋补肝肾,为佐药，以增强补益精血，排毒生肌之效。纵观全方，以培补肺脾肾，益气补血治其本，以活血化瘀、排毒生肌以治其标，标本兼治，以达到消除色斑，美白养颜的效果。
本发明提供的组合物具有补气养血，行气活血的功效，可用于治疗气血亏虚与气滞血瘀两个方面的气血失调的黄褐斑。以本发明组合物为基础制备的膏滋，疗效确切、使用方便、便于携带和保存，储藏稳定性好，口感舒适美味，为患者提供一种新的用药选择。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1样品中黄芪薄层鉴别图，1、2为缺黄芪阴性样品溶液；3、4为黄芪对照药材样品溶液；5、6为黄褐斑样品溶液。
图2黄褐斑中人参薄层鉴别图，1、2为缺人参阴性样品溶液；3、4为人参对照药材溶液；5、6为全方样品溶液。
图3样品中川芎薄层鉴别图，1、2为缺川芎阴性样品溶液；3、4为川芎对照药材溶液；5、6为全方样品溶液。
图4样品中白芷薄层鉴别图，1、2为缺白芷阴性样品溶液；3、4为白芷对照药材溶液；5、6为全方样品溶液。
图5样品中红花薄层鉴别图，1、2为红花对照药材溶液；3、4为缺红花阴性样品溶液；5、6为全方样品溶液。
图6毛蕊花糖苷对照品溶液高效液相图谱。
图7熟地对照药材溶液高效液相图谱。
图8缺熟地阴性对照样品溶液高效液相图谱。
图9黄褐斑全方供试品溶液高效液相图谱。
图10黄褐斑全方供试品溶液高效液相图谱。
图11红花对照品羟基红花黄色素A高效液相色谱图。
图12红花对照药材高效液相色谱图。
图13缺红花阴性对照样品溶液高效液相图谱。
具体实施方式
下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。
实施例1本发明膏滋的制备
处方：黄芪30g、人参6g、当归10g、地黄20g、白芍15g、川芎12g、红花12g、白芷6g、枸杞20g、菟丝子20g。
制备方法：
称取处方后，加水煎煮两次，第一次加10倍水量，第二次加8倍水量，每次1.5小时。两次煎液混匀，药液采取告诉离心(12000转/分钟)，离心后可降低收膏率约1.8％，而总多糖无明显变化。采用减压浓缩工艺，水提药液浓缩至相对密度为1.3(60℃)的清膏。矫味剂选择纽甜，用量为浸膏量的0.1％，加入搅拌均匀即可。
实施例2本发明美容养颜祛斑中药组合物的制备
处方：同实施例1。
制备方法：称取各原料药，加水浸泡煎煮，合并滤液，浓缩，灌封，灭菌，即得口服液。
以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。
试验例1本发明祛斑组合物治疗黄褐斑的效果验证
以实施例1药物组合物内服治疗黄褐斑患者58例，均获得了良好的疗效。其中分型：蝴蝶斑、面上部型色斑、面下部型色斑、泛发型色斑。治疗时间，根据各患者病情轻重、年龄大小、体质强弱等具体情况之不同而有所差异，一般在4周至6周左右可见较明显的效果，两月至五六个月左右可结束治疗，同时遵照一定的保养调理，即收全功。
具体如下：
治疗蝴蝶斑24例，治疗面上部型色斑12例，面下部型色斑7例，泛发型色斑15例。按上述治疗标准，24例蝴蝶斑患者中，有5例痊愈，治愈率为20.8％；8例效果显著，占33.4％；5例效果明显，占20.8％；4例有一定效果，占12.5％；3例效果不明显(无效)，占12.5％。总有效率为87.5％。
12例面上部型色斑患者中，有3例痊愈，治愈率为25％；5例效果显著，占41.6％；1例效果明显，占8.4％；1例有一定效果，占8.4％；2例效果不明显(无效)，占16.6％。总有效率达83.3％。
7例面下部型色斑患者中，有1例痊愈，治愈率为14.3％；3例效果显著，占42.8％；1例效果明显，占14.3％；1例有一定效果14.3％，1例效果不明显(无效)，占14.3％。总有效率达85.7％。
15例泛发型色斑患者中，有3例痊愈，治愈率为20％；5例效果显著，占33.4％；3例效果明显，占20％；2例有一定效果，占13.3％；2例效果不明显(无效)，占13.3％。总有效率达86.7％。
试验例2本发明膏滋的制备工艺筛选
本方由黄芪、人参、当归等10味中药组成，从处方药味分析，黄芪中主要含有黄芪甲苷、黄芪多糖等成分，当归主要含有藁本内酯、阿魏酸等成分。处方中主要药味均具有较好的水溶性，故考虑用水煎煮提取，故宜选用饮片投料。
1.1药材及辅料前处理
(1)原料前处理
人参饮片(批号：1206020)、黄芪饮片(批号：1301003)、白芷饮片(批号：1304003)等，均购于四川新荷花中药饮片有限公司，经过成都中医药大学卢先明教授鉴定，符合2010年版《中国药典》规定。
(2)辅料前处理
取N-[N-(3,3-二甲基丁基)-L-α-天门冬氨酰]-L-苯丙氨酸1-甲酯(甜味剂：纽甜)于100℃干燥3小时，过100目筛，备用。
1.2水煎煮提取的参数筛选
(1)考查加水量、提取时间、提取次数等因素对加水煎煮提取效果影响.
根据长期实践得知，中药浸出制剂疗效的发挥主要取决于提取，而提取效果受到提取溶剂、提取次数及时间等因素，以及因素不同水平的影响。故水提取考察时，选取加水量、提取时间、提取次数作为因素，考察对水煎提取效果的影响。取全方药味共151g各9份，试验安排及结果见表1。
(2)指标确定选择浸膏收得率及总多糖含量两项为评价指标，其原由及测定方法如下：
①浸膏收得率浸膏是固体制剂发挥疗效的物质基础，其收得率高低直接影响制剂工艺，故选择为提取指标是合理、有效的控制手段。测定方法：合并提取液，滤过，调整定容至1000ml，再从中取50ml，倾入已干燥称重的蒸发皿内，浓缩至干，移入105℃烘箱干燥3小时，取出，置干燥器中冷却30分钟后，取出称重，计算。
②总多糖含量浸膏收得率高低并不能完全反映有效成份提取情况，故同时用苯酚-硫酸法测定处方中黄芪、人参等重要药味所含的总多糖含量作为筛选指标。
总含量测定照紫外分光光度法(《中国药典》2010年版一部附录VA)测定。
对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖25mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水葡萄糖0.251mg)。
标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml，分别置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取上述各溶液2ml，置具塞试管中，分别加入15％的苯酚溶液1ml，混匀，迅速加入浓硫酸7ml，振摇5分钟，置沸水浴中加热15分钟，冷却30分钟。以第一份为空白，在490nm处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。计算得回归方程A＝12.514C-0.0092(γ＝0.9999)。
供试品溶液的制备取本品浸膏收得率项下的定容溶液，精密吸取2ml，加乙醇23ml，摇匀，静置4小时，离心，弃去上清液，沉淀物加水溶解并转移至50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
测定法分别精密吸取供试品溶液1ml置于带塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“加入15％的苯酚溶液1ml”起，依法操作；同法分别精密吸取阴性样品溶液1ml置于带塞试管中制备样品空白；另精密吸取15％的苯酚溶液1ml，和浓硫酸7ml置于带塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“振摇5分钟”起，依法操作，作为试剂空白。在波长490nm处，以试剂空白液校正基线，测定供试品液与样品空白液吸收度，用供试品液吸收度减去样品空白液吸收度的值代入回归方程计算供试品溶液中总多糖的含量。
综合评分方法：浸膏收率(％)平均值21.47计为40分，测定结果高于此值者亦同样仅计为40分；总多糖含量最高的为2.746mg/ml，计为60分。综合评分在此基础上折算而来。
(3)考察结果，见表1。
表1不同提取工艺及效果
可见，编号5、10的提取效果最佳，以编号10的工艺(煎煮二次，第一次加10倍量水，第二次加8倍量水，每次1.5小时)进行重复验证试验，考察量为151g，可见该条件下浸膏收率、总多糖含量波动不大，可见该提取工艺条件是合理、可行及稳定的。
1.3分离与纯化参数的筛选
本品原处方日服生药量大，因此应尽可能去粗取精。提取液中所含杂质较多，如蛋白质、粘液质等大分子物质和固体微粒。宜采用采用高速离心方法除杂。比较不同转速对除杂效果的影响，结果见表2。
表2高速离心除杂工艺考察结果
结果表明，水提部分采用高速离心(12000转/分钟)较好，离心后可降低浸膏收率约1.8％，而总多糖含量无明显变化。
1.4浓缩参数的筛选
由于中药水提液常用的常压浓缩使得热敏性有效成分破坏较多，从本品实际出发，为了便于生产操作控制和避免有效成分损失，采用减压浓缩工艺。水提药液浓缩至相对密度为1.30(60℃)的清膏。
水提药液减压浓缩的条件为：温度为70℃，真空度为-0.1～-0.12Mpa，以人参多糖含量为指标考察该工艺的合理可行性。结果见表3。
表3提取液减压浓缩工艺考察结果
注：由于浓缩前后药液密度、质量均发生变化，故统一转换成单位生药中总多糖含量计算。
由表3结果可知，水提药液减压浓缩前后成分含量无明显的变化，故该浓缩工艺合理可行。
2、成型工艺筛选
矫味剂选择纽甜，用量为浸膏量的0.1％，加入搅拌均匀即可。
试验例3本发明膏滋的质量检测
1实验仪器，试剂及材料
FW135型中草药粉碎机(上海隆拓仪器设备有限公司)；DL-720D数控超声波清洗器(上海之信仪器有限公司)；RJ-TGL-16C型高速离心机(无锡瑞江分析仪器有限公司)；UPH-I-10T优普超纯水器(成都超纯科技有限公司)；RE2000B旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；BS200S电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；HHS-8S电子恒温不锈钢水浴锅(上海宜昌仪器纱筛长)；SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)；岛津LC-20A高效液相色谱仪(二元梯度泵、柱温箱、PDA检测器、自动进样器、Labsolution工作站)；Diamonsil-C18(2)(5μm，4.6mm×250mm)；101-2型电热鼓风干燥箱(上海浦东跃欣科学仪器厂，温度范围：室温-300℃、灵敏度±1℃)；ZF-90多功能暗箱式紫外透射仪(上海宝山顾村电光仪器厂)；939薄层制板器(重庆市南岸贝尔德仪器技术长)；双槽展开缸。
毛蕊花糖苷(批号：150401)、羟基红花黄色素A(批号：150420)由成都普菲德生物技术有限公司。
色谱甲醇、色谱乙腈、超纯水(UP水)，其余的正丁醇、甲醇、醋酸、氯仿、二甲苯、乙酸乙酯、环己烷、甲酸、苯、正己烷、石油醚、乙醚、丙酮、氨等，均为分析纯。
2样品制备
2.1供试品溶液的制备
取本品适量，加纯化水稀释至0.5g生药/ml药液。取本品溶液25ml，用水饱和的正丁醇溶液萃取2次，每次25ml，合并萃取液，旋干，加2ml甲醇溶解，离心备用。
2.2阴性对照样品溶液的制备
参考处方制备工艺，同法处理各药物的阴性样品。取阴性样品溶液25ml，用水饱和的正丁醇溶液萃取2次，每次25ml，合并萃取液，旋干，加2ml甲醇溶解，离心备用。
2.3对照药材样品溶液的制备
分别称取黄褐斑处方药材饮片粉末2g，精密称定，放置于洁净锥形瓶中，精密量取甲醇25ml，称重，超声30分钟，再称重，补足重量，过滤，旋干，加甲醇2ml，溶解，离心，备用。
2.4对照品溶液的制备
取毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，加地熟地高效液相色谱法流动相制成每1ml含0.22mg的溶液，即得。
取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加25％甲醇制成每1ml含0.226mg的溶液，即得。
3薄层色谱鉴别研究
3.1样品中黄芪的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、却黄芪阴性对照样品溶液和黄芪对照药材样品溶液，作为黄芪薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对乙酸乙酯-甲苯-甲酸(1:4:0.1)、石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯(3:3:4)、氯仿-甲酸(10:1)、氯仿-甲醇(10:1)、石油醚-乙酸乙酯(1:1)、二甲苯-乙酸乙酯(1:1)、苯-乙醚(5:2)、环己烷-丙酮(3:2)、石油醚-丙酮-乙酸乙酯(7:1:1)等9种展开剂中筛选，其中氯仿-甲醇(10:1)、石油醚-乙酸乙酯(1:1)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑处方中黄芪鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ氯仿-甲醇(10:1)或展开系统Ⅱ石油醚-乙酸乙酯(1:1)为展开剂，分别置于用氨和展开系统I预平衡的15分钟的展开缸内和展开系统2预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，在302nm紫外下观察，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在氯仿-甲醇(10:1)、石油醚-乙酸乙酯(1:1)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，黄芪对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有黄芪药材。
3.2样品中人参的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、缺人参阴性对照样品溶液和人参对照药材样品溶液，作为人参薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对乙酸乙酯-甲苯-甲酸(1:4:0.1)、石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯(3:3:4)、正丁醇-冰醋酸-水(7:1:0.5)、丙酮-无水乙醇-盐酸(10:6:1)、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)、甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20:5:0.5)、甲醇-冰醋酸-水(4:1:5)、二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(80:1:1)、氯仿-乙酸乙酯-甲酸(2:3:1)等9种展开剂中筛选，其中乙酸乙酯-甲苯-甲酸(1:4:0.1)、石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯(3:3:4)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑全方中人参鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ乙酸乙酯-甲苯-甲酸(1:4:0.1)或展开系统Ⅱ石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯(3:3:4)为展开剂，置于用展开剂预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷二硝基苯肼显色剂，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在乙酸乙酯-甲苯-甲酸(1:4:0.1)、石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯(3:3:4)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，人参对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有人参药材。
3.3样品中川芎的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、缺川芎阴性对照样品溶液和川芎对照药材样品溶液，作为川芎薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对环己烷-乙酸乙酯-氯仿-甲酸(16:1:1:0.1)、苯-乙酸乙酯-冰醋酸(18:1:1)、正己烷-乙酸乙酯(3:1)、氯仿-甲醇(7:1)、石油醚-乙酸乙酯(4:1)、甲苯-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-乙酸乙酯-甲醇(8:1:4)、环己烷-乙酸乙酯(3:1)、石油醚-环己烷-乙酸乙酯(3：2:1)等9种展开剂中筛选，其中环己烷-乙酸乙酯-氯仿-甲酸(16:1:1:0.1)、苯-乙酸乙酯-冰醋酸(18:1:1)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑处方川芎鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ环己烷-乙酸乙酯-氯仿-甲酸(16:1:1:0.1)或展开系统Ⅱ苯-乙酸乙酯-冰醋酸(18:1:1)为展开剂，分别置展开剂预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，在302nm紫外下观察，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在环己烷-乙酸乙酯-氯仿-甲酸(16:1:1:0.1)、苯-乙酸乙酯-冰醋酸(18:1:1)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，川芎对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有川芎药材。
3.4样品中白芷的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、缺白芷阴性对照样品溶液和白芷对照药材样品溶液，作为白芷薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对二甲苯-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-甲醇(7:1)、石油醚-乙醚(3:2)、石油醚-乙酸乙酯(4:1)、环己烷-乙酸乙酯(3:1)、二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸(80:1:1)、环己烷-丙酮(3:2)、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16:0.5:2)、苯-乙酸乙酯-冰醋酸(18:1:1)等9种展开剂中筛选，其中二甲苯-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-甲醇(7:1)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑处方白芷鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ二甲苯-乙酸乙酯(1:1)或展开系统Ⅱ氯仿-甲醇(7:1)为展开剂，分别置展开剂预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，在302nm紫外下观察，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在二甲苯-乙酸乙酯(1:1)、氯仿-甲醇(7:1)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，白芷对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有白芷药材。
3.5样品中当归的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、缺当归阴性对照样品溶液和当归对照药材样品溶液，作为当归薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对正己烷-乙酸乙酯(3:1)、石油醚-乙醚(3:2)、环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(4:1:1:0.1)、石油醚-乙酸乙酯(1:1)、乙酸乙酯-甲酸-甲醇(16:0.5:2)、氯仿-甲醇-水(13:7:2)、氯仿-甲酸(10:1)、正丁醇-水-甲醇(6:1:5)、二甲苯-乙酸乙酯(1:1)等9种展开剂中筛选，其中正己烷-乙酸乙酯(3:1)、石油醚-乙醚(3:2)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑处方当归鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ正己烷-乙酸乙酯(3:1)或展开系统Ⅱ石油醚-乙醚(3:2)为展开剂，分别置展开剂预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，在302nm紫外下观察，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在正己烷-乙酸乙酯(3:1)、石油醚-乙醚(3:2)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，当归对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有当归药材。
3.5样品中红花的薄层鉴别
(1)样品溶液的制备
取上述黄褐斑处方样品溶液、缺红花阴性对照样品溶液和红花对照药材样品溶液，作为红花薄层色谱鉴别的主要样品溶液。
(2)展开剂的选择
通过对苯-乙醚(5:2)、环己烷-丙酮(3:2)、乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇(7:2:3:0.4)、正丁醇-冰醋酸-水(6:2.4:1)、石油醚-乙酸乙酯(9:1)、乙酸乙酯-甲醇-甲酸(16:0.5:2)、甲苯-乙酸乙酯(1:1)、环己烷-乙酸乙酯(1:1)、二甲苯-甲酸-乙酸乙酯(4:1:2)等9种展开剂中筛选，其中苯-乙醚(5:2)、环己烷-丙酮(3:2)两种展开系统效果好，重现性和重复性较好，显色明显且稳定，可以作为黄褐斑处方红花鉴别的展开剂。
(3)点样
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
(4)展开及显色结果
以展开系统Ⅰ苯-乙醚(5:2)或展开系统Ⅱ环己烷-丙酮(3:2)为展开剂，分别置展开剂预平衡的15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，在302nm紫外下观察，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(5)结果分析
通过以上两种展开系统，可以看出黄褐斑全方在苯-乙醚(5:2)、环己烷-丙酮(3:2)两种展开系统效果好，稳定性、重复性较好，红花对照药材与黄褐斑处方样品溶液有唯一且显色明显的点与其对应，鉴别出黄褐斑处方中含有红花药材。
4含量测定研究
4.1样品中熟地的含量测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％醋酸溶液(16:84)为流动相；检测波长为334nm。理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。
供试品溶液的制备黄褐斑全方样品溶液、熟地对照药材样品溶液、缺熟地阴性对照样品溶液、毛蕊花糖苷对照品溶液按照“二、样品溶液制备”项下制备。
结果见表4。
表4样品中熟地含量测定结果
由表4可见，熟地药材中毛蕊花糖苷含量为0.065％大于《中国药典》2010年版中规定的0.020％，熟地对照药材达标。而黄褐斑处方中毛蕊花糖苷百分含量为0.013％。
4.2样品中红花的含量测定
羟基红花黄色素A照高效液相色谱法(附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-0.7％磷酸溶液(26:2:72)为流动相；检测波长为403nm。理论塔板数按羟基红花黄色素A峰计算应不低于3000。
供试品溶液制备黄褐斑全方样品溶液、缺红花阴性对照样品溶液、羟基红花黄色素A对照品溶液按照“二、样品溶液制备”项下制备。
对照药材的制备取红花饮片粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25％甲醇25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
结果见表5。
表5样品中红花含量测定结果
由表5可见，红花药材中羟基红花黄色素A含量为1.72％，大于《中国药典》2010年版中规定的1.0％，红花对照药材达标。而黄褐斑处方中羟基红花黄色素A百分含量仅为0.005％，含量差距较大，说明该成分在提取过程中溶解较少。
4.3方法学考察
4.3.1专属性试验
分别精密吸取毛蕊花糖苷对照品溶液、熟地对照药材溶液、缺熟地阴性样品溶液和黄褐斑处方供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
为考察黄褐斑处方的专属性，进样毛蕊花糖苷对照品溶液、熟地对照药材溶液、缺熟地阴性对照溶液以及黄褐斑处方供试品溶液，并且进样羟基红花黄色素A对照品溶液、红花对照药材溶液、缺红花阴性对照溶液以及黄褐斑处方供试品溶液，根据上述图谱显示，黄褐斑处方供试品溶液与毛蕊花糖苷、羟基红花黄色素A对照品溶液图谱有唯一性，并且与熟地、红花对照药材溶液相同的保留时间分别出现和毛蕊花糖苷、羟基红花黄色素A对照品溶液相同的峰，而缺熟地、缺红花阴性对照溶液在此保留时间无峰出现。由此证明，黄褐斑处方的专属性强且唯一。
4.3.2稳定性试验
取同一份黄褐斑处方供试品溶液，分别在0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时等6个时间点吸取黄褐斑处方供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，检测，即得黄褐斑处方供试品溶液的稳定性考察。直观观察高效液相色谱图谱的全貌没有明显的变化，为了进一步对黄褐斑全方稳定性进行考察，采用对黄褐斑处方供试品溶液高效液相色谱图中毛蕊花糖苷色谱峰的保留时间以及峰面积的相对标准偏差进行计算，观察其RSD值是否在规定范围内。
表6黄褐斑全方稳定性考察
根据上述结果得知，黄褐斑全方供试品溶液分别在0小时、2小时、4小时、6小时、8小时、12小时检测，其色谱图的毛蕊花糖苷峰的保留时间相对标准偏差都是小于3％的，即RSD％＜3％，以及峰面积的相对标准偏差都是小于3％的，即RSD％＜3％，证明黄褐斑全方稳定性较好。
4.3.3精密度考察
为了考察仪器的精密度，进行精密度实验。取毛蕊花糖苷对照品溶液，连续进样6次，计算毛蕊花糖苷对照品峰的保留时间以及峰面积的相对标准偏差。通过直观观察毛蕊花糖苷对照品峰，表面液相图谱全貌没有明显的变化。经实验结果，计算出相对标准偏差如下：
表7黄褐斑处方精密度考察
从上述结果得知，毛蕊花糖苷对照品峰的保留时间以及峰面积的相对标准偏差小于3％，即RSD％＜3％。由此，证明高效液相色谱仪的精密度较高，实验设备较好。
4.3.4重复性
按照黄褐斑全方供试品溶液的制备方法，制得6份供试品，同时按照黄褐斑全方供试品高效液相色谱法的方法进行检测。6份黄褐斑全方供试品溶液测得的色谱图谱直观观察，表明指纹图谱的全貌无明显变化，为了进一步的考察其重复性，在黄褐斑全方的色谱图上确定毛蕊花糖苷峰，考察此色谱峰的保留时间的一致性，算出各次色谱峰中此峰保留时间以及色谱峰的峰面积相对标准偏差。
表8黄褐斑全方重复性考察
根据上述结果得知，各批次的黄褐斑全方中某一个峰的保留时间以及峰面积的相对标准偏差都是小于3％的，即RSD％＜3％。证明黄褐斑全方制备方法重复性好。
可见，本发明建立了黄芪、当归、川红花、熟地等的含量测定方法，规定了成品中君药和臣药有效成分的限度，以多个指标控制制剂质量。建立了可行的评价模式，有效地控制了中药浸膏的质量。

Claims (10)

1.一种养颜美容祛斑中药组合物，其特征在于：它是由含有下述重量配比的原料药制备而成：
黄芪24-35份、人参5-7份、当归8-12份、地黄16-24份、白芍12-18份、川芎10-14份、红花10-14份、白芷5-7份、枸杞16-24份、菟丝子16-24份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：它是由下述重量配比的原料药制备而成：
黄芪30份、人参6份、当归10份、地黄20份、白芍15份、川芎12份、红花12份、白芷6份、枸杞20份、菟丝子20份。
3.根据权利要求1或2任意一项所述的组合物，其特征在于：它是由所述原料药的原生粉、或水或有机溶剂提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的口服制剂。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述的口服制剂的剂型为膏滋，可开发剂型：口服液、合剂、糖浆剂、胶囊、片剂、颗粒剂、水丸剂、蜜丸剂、袋泡茶。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于：所述膏滋在制备时加入纽甜作为矫味剂。
6.权利要求1～4任意一项所述组合物的制备方法，它包括如下步骤：
a、称取各重量配比的原料药；
b、打粉，或加水或有机溶剂煎煮提取，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的外用制剂。
7.权利要求5所述组合物的制备方法，它包括如下步骤：
a、称取各重量配比的原料药；
b、加水煎煮提取，浓缩至相对密度为1.3(60℃)的清膏，加入纽甜，混匀即可。
8.权利要求1～5任意一项所述组合物在制备具有养颜美容祛斑功效的药物或化妆品中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述药物或化妆品是治疗黄褐斑的药物或化妆品。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述药物或化妆品是治疗蝴蝶斑、面上部型色斑、面下部型色斑和/或泛发型色斑的药物或化妆品。
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