CN108030813A - 一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有延缓皮肤衰老作用的天然药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该药物由珍珠草、黄花水倒莲、仙鹤草3味药材组成，具体的澄清工艺是以II型ZTC 1+1天然澄清剂澄清药物组合物提取液，具体的质量控制方法是运用薄层色谱法对延缓皮肤衰老的药物组合物中珍珠草、黄花水倒莲、仙鹤草进行薄层鉴别，同时结合高效液相色谱法测定药物组合物中仙鹤草酚B的含量。本发明采用的澄清工艺和质量控制方法，具有设备投资少、操作工艺简单，克服了传统醇沉法耗醇量大，乙醇回收繁琐，药物多成分的复杂测定方法等缺陷，快速、有效地确保组合物的内在质量、疗效和稳定性，提高药物组合物质量标准的可控性。

Description

一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制 方法
技术领域
本发明采用天然澄清剂的澄清工艺和现代分析检测仪器检测中药制剂技术领域，涉及一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的质量控制方法。
背景技术
皮肤衰老是一种持续渐进性的生理过程，直接影响皮肤的外观和功能，其具体表现包括表皮更新、真皮对外来化学物清除力、真皮厚度和细胞组成、受伤后表皮化能力、免疫反应、感觉能力、温度调节、汗腺和皮脂腺分泌、维生素D合成能力和血管反应性等多方面功能降低。随着全球人口平均年龄的增加，抗皮肤衰老化妆品深受开发者的重视和消费者的喜爱。天然药物种类众多，对人体皮肤副作用小，早在三千多年前的《山海经》中，就有中草药美容的记载，现代的人们更愿意接受“安全、天然、有效”的美容方式。相对其它美容方法，如激光美肤、微晶磨削、化学换肤及外敷、口服化学药物，添加中草药提取物的抗皮肤衰老化妆品具有功效持久稳定、作用温和、副作用小等优点，更加“安全有效”，是现代“纯天然”理念下延缓皮肤衰老的实验研究、临床应用及药品、化妆品中活性添加剂的最佳选择。(李骏飞，等，皮肤衰老与中药抗皮肤衰老的研究进展，中国中医药资讯，2011年3卷6期)近年来，研究人员在中药延缓皮肤衰老的研究中积累了大量的实验资料。如专利申请号201010179686.7，该申请中公开了一种抗皮肤衰老的中药面膜，该面膜的有效成分包括由15％～50％党参、15％～50％黄芪、15％～60％茯苓制成的水提取液，。如专利申请号20101046039.6，该专利公开了一种具有抗皮肤衰老作用的中药提取物的组合物，由中药桑葚、牛膝、黄精、天竺葵、厚朴、山茱萸、白豆蔻、鹿衔草和当归的提取物组成，按重量百分比计，含量为桑葚1％～20％、牛膝1％～20％、黄精1％～20％、天竺葵1％～20％、厚朴1％～20％、山茱萸1％～20％、白豆蔻1％～20％、鹿衔草1％～20％和当归1％～20％，该组合物具有抑制黑色素和促进皮肤细胞新生的双重作用。
尽管目前国内外就中草药延缓皮肤衰老作用方面做了一定的、有限的工作，但还存在着许多问题，如研究的中药仅限于800多种常见的中药，而对数量庞大的天然药物研究不够；许多研究从宫廷秘方、古书所传作出的推论和假设的出发，只有少量的实验研究，科学依据不足。这样，尽管可以取得一些眼前的效益，但长久以往，必将失去竞争力。
中药复方制剂的制备经常包括提取过程，而得到的中药提取物是一个复杂的混合体系，包括活性成分和杂质，其中含有大量的微细粒子、淀粉、鞣质、蛋白质、多糖等物质(偶有药材残渣，泥沙等杂质)，共同形成1-100Knm是胶体分散体系，属于动力学及热力学不稳定体系，具有自发沉降的趋势。为保留活性成分，除去这些杂质，使固液迅速而完全地分离，就要设法破坏混合体系的稳定性。中药复方制剂多采用水提醇沉工艺，该工艺具有澄清药液、减少服用量等优点。但该工艺在澄清药液同时将中药中的一些醇不溶性的大分子如蛋白质及部分多糖作为杂质除去，而这些成分具有广泛的生理活性和药用价值。絮凝澄清法是在混悬的中药提取液中加入一种澄清剂以吸附架桥和电中和方式除去溶液中的粗粒子，以达到分离纯化目的的一种高效技术，ZTCl+1天然澄清剂是一种从食品中提取，以天然多糖等为原料制成的天然高分子物质，由A、B2种组分组成，其澄清原理是采用“l+1”澄清技术，其中1组分起主絮凝作用，另1组分起辅助絮凝作用，具有较好的澄清效果。
随着科学的发展，分析仪器的普及应用，使中药复方检测分析和质量控制不断提高和完善。薄层色谱法(TLC)，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法，是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术，也用于跟踪反应进程。高效液相色谱检测分析技术在中药质量控制中发挥越来越重要的作用。它是通过光谱色谱等分析手段对中药或复方进行成分检测，利用不同成分特有的化学图谱，反映中药或复方所含的内在化学成分的种类和含量。
本发明的具有延缓皮肤衰老的药物组合物由珍珠草、黄花水倒莲、仙鹤草3味药材组成，其活性成分较多，依据2015版中国药典，各组分药材的色谱条件与系统适用性试验方法各不相同，逐一测定复方中各药材的目标成分含量，不利于评价和控制复方中药的质量，且保证其药效成分的稳定性和数量。
本发明的具有延缓皮肤衰老作用的天然药物组合物，具有增加皮肤含水量、增加胶原蛋白的合成和抗氧化等多重作用，能够用于制备皮肤保养的化妆品和皮肤的治疗性药物，本发明根据中药理论，从大量的天然药物中，选用了珍珠草、黄花水倒莲和仙鹤草为原料，制备并澄清获得了所述的具有延缓皮肤衰老作用的组合物，其中，所述的珍珠草选用大戟科植物Phyllanthus urinaria L的全草；黄花水倒莲选用远志科植物PolygalafallaxHemsl.[P.aureocauda Dumn]的根；仙鹤草选用蔷薇科龙芽草属植物AgrimoniapilosaLedeb var.japomica(Miq.)Nakai的全草。
根据《中国药典》和文献记载：珍珠草为大戟科叶下珠属植物，又名叶下珠、关门草等，珍珠草最早收载于《生草药性备要》。珍珠草味苦，性凉，具有平肝清热，利水解毒之功效，我国民间主要用来治疗疳积、黄胆、肝炎、肠炎、痢疾、肾炎水肿等疾病。叶下珠主要含有黄酮类、木脂素类、生物碱类、有机酸等多种成分，具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抗衰老以及抗辐射等多种药理作用；
黄花水倒莲为远志科远志属植物，又名黄花远志.是一种使用悠久的民间草药。主产福建、江西、湖南、广西和云南等省区，生于海拔1150～1650m的山谷林下，水旁阴湿处。黄花水倒莲味甘，微苦，性平；全株可供药用，具有补益气血、健脾祛湿、活血化瘀和调经等功效。现代研究表明，其根中含有皂苷、多糖、酮类和有机酸等多种成分，其总提物具有抗应激、抗衰老、抗炎、抗病毒、增强免疫、降血脂、活血等作用，其中黄酮类物质有抗氧化、防衰老、对自由基有清除作用。
仙鹤草又名脱力草、马鞭草、龙牙草、石打穿等，始载于《图经本草》。仙鹤草性寒，味苦、涩，归肺、肝、脾经，其主要成分含有仙鹤草素、仙鹤草内酯、鞣质、甾醇、有机酸、酚性成分、皂苷、仙鹤草酚(A，B，C，D)、VC、VK等。现代药理研究证实。仙鹤草具有强壮、收敛止血、截疽、止痢、解毒等作用，主要用于咳血、吐血、崩漏下血、疟疾、血痢、脱力劳伤、痈肿疮毒、阴痒带下等。
采用上述原料制备的具有延缓皮肤衰老作用的组合物，具有良好延缓皮肤衰老作用的天然药物提取物的组合物，该组合物作用可靠，具有促进皮肤细胞新生、增加皮肤细胞胶原蛋白合成和抗氧化的三重作用。
综上所述，本发明的有益效果：本发明突破研发常规，以延缓皮肤衰老的功效为唯一标准，大量筛选天然药物，通过澄清工艺和质量控制方法得到的天然药物提取物的组合物具有增加皮肤含水量、增加胶原蛋白的合成和抗氧化等多重作用，能够用于皮肤保养的化妆品和治疗性药物；所涉及的成分具有效果明确、安全性好、无任何副作用和在化妆品配方中稳定的特点；与现有同类产品相比，具有效果显著的特点，是一种新型延缓皮肤衰老有效天然药物提取物的组合物。
发明内容
本发明目的在于根据现代技术，提供一种延缓皮肤衰老作用的中药药物组合物的快速、高效质量控制方法，从整体上评价和控制药物组合物质量，保证延缓皮肤衰老中药的疗效更加稳定、可靠。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺，取延缓皮肤衰老作用的中药制剂常规乙醇浸泡提取，浸泡液减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附，5％-95％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即为所述的延缓皮肤衰老作用的药物组合物，置于60℃水浴，先加入4％洗脱液体积的II型ZTCl+1天然澄清剂B组分，1h后加入2％体积的II型ZTCl+1天然澄清剂A组分，期间每半小时搅拌1分钟令杂质成分凝聚沉淀，然后在离心机中以4000r/min离心10min，取上清液；所述的II型ZTCl+1天然澄清剂：它是一种以天然多糖为原料制成的天然高分子物质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶，配成1％的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶的复合酶，用1％醋酸配成1％浓度的溶液使用。
A组分，精密量取1.0g II型ZTCl+1天然澄清剂加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤；
B组分，精密量取1.0g II型ZTCl+1天然澄清剂加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤。
一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于，该质量控制方法包括以下步骤：
(1)用薄层色谱法鉴别该药物中药材珍珠草，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取珍珠草对照药材粉末2g，加乙醇20mL，浸渍2h，滤过，滤液浓缩至约2ml，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为珍珠草对照药材溶液；
c.珍珠草薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)用薄层色谱法鉴别该药物中药材黄花倒水莲，包括：
a.供试样品的制备：取本品提取物10mL倒入索氏提取器，加乙醚20mL，振摇提取2h，挥干乙醚，再用甲醇40ml，冷浸过夜，回流4h，，将提取物浓缩至干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：取远志皂苷对照品0.1g，加甲醇1mL，作为远志皂苷对照药材溶液；
c.黄花倒水莲薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-正己烷-乙酸的质量比例为9∶3∶0.30∶0.5作为展开剂，展开，取出，晾干，喷8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(7→10)比例为1∶10的溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，在白光下检视；
(3)用高效液相色谱法测定药物中仙鹤草酚B的含量，包括：
a.高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0～10min 30％A→35％A、10～45min 35％A→45％A、45～60min 45％A→75％A，平衡时间15min，流速0.8mL/min，进样量10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长290nm；
b.供试品溶液的配制：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
c.对照品溶液的制备：精密称取仙鹤草酚B对照品2mg，加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液；
d.线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到标准品的回归方程；
e.测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。
作为优选的，延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法的供试品溶液为醇浸泡液，具体方法为：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用。
优选的，所述的延缓皮肤衰老的药物组合物的质量控制方法用于提取方法相同的延缓皮肤衰老的药物组合物片剂，颗粒剂或药物组成含有珍珠草、黄花水倒莲、仙鹤草药材的复方。
优选的，在延缓皮肤衰老的药物组合物的质量控制方法的含量测定方法中：供试品稀释5倍，过0.22μm滤膜，10μL进液相色谱仪、仙鹤草酚B的含量为：14.21μg/ml。
优选的，所述的薄层色谱法鉴别珍珠草和黄花水倒莲中，珍珠草以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)作为展开剂，喷10％硫酸乙醇溶液显色；黄花倒水莲以氯仿-丙酮-正己烷-乙酸的质量比例为9∶3∶0.30∶0.5作为展开剂，喷8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(7→10)比例为1∶10的溶液显色。
本发明以仙鹤草药材的鉴定成分仙鹤草酚B为指标，该方法避免了药物组成药材中药物成分在同一色谱条件下响应(峰)的重叠，以活性成分的含量测定为控制标准，更加合理、真实地反映一种延缓皮肤衰老的中药药物组合物的质量。
说明书附图
图1是珍珠草对照药材图。
图2是黄花倒水莲对照药材图。
图3是292nm波长下仙鹤草酚B对照品的色谱图。
图4是延缓皮肤衰老的药物组合物在292nm波长下HPLC色谱图。
具体实施方式
本发明一种具有延缓皮肤衰老作用的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该澄清工艺按如下步骤进行：
澄清工艺及各成分含量
(1)澄清剂的配制：II型ZTCl+1天然澄清剂由A，B两组分组成。A组分：精密量取1.0g A组分中加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤即得。B组分：精密量取1.0g B组分中加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤，即得。
(2)澄清剂A、B加入顺序：根据说明书，ZTC天然澄清剂主要是根据溶液的性质选择不同的添加顺序，一般中药复方相对于蛋白质等电点(pH＝4.8)为酸性环境，添加顺序为先B后A组分，B组分用量为A组分2倍。
(3)评价指标：分别选取仙鹤草酚B含量保留率(X1)、固形物去除率(X2)作为评价指标进行综合评分，将化合物保留率权重定为0.7，固形物去除率X2权重定为0.3，即OD％＝0.7X1+0.3X2。计算公式如下：
化合物保留率＝澄清后提取液化合物的含量/提取液中化合物的含量×100％
固形物去除率＝(澄清前固形物含量-澄清后固形物含量)/澄清前固形物含量×100％
(4)工艺考察：以澄清剂加入量，料液比，温度，时间为考察因素，各选取最佳的3水平，以L9(34)正交表进行试验，以化合物保留率和固形物去除率计算综合评分，进行方差分析，结果见表2。由正交试验的方差分析可以看出，澄清剂加入量及提取液料液比对综合评分有显著影响，温度和时间对提取液的澄清效果无统计学意义。试验中发现，澄清剂B组分为4％时延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清效果好，确定II型ZTC l+1天然澄清剂澄清延缓皮肤衰老的药物组合物提取液的最佳工艺条件为澄清剂加入量B组分4％，B组分为2％料液比为1∶5，温度为60℃，反应时间1h。
表2L9(34)正交试验结果
(5)各成分含量：以II型ZTC l+1天然澄清剂澄清延缓皮肤衰老的药物组合物提取液的最佳工艺条件：澄清剂加入量B组分4％，B组分为2％料液比为1∶5，温度为60℃，反应时间1h，制备样品。高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，流动相梯度见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长292nm，进样10μL。选择292nm波长测定仙鹤草酚B含量。样品连续进针3次，取平均值。按本发明质量控制方法测得每克生药，仙鹤草酚B的含量为：14.21μg/ml。
本发明一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该方法按如下步骤进行：
(1)供试品溶液的配制：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用。
(2)对照品溶液的制备：精密称取仙鹤草酚B对照品2mg，加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液。
(3)线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号(峰面积)和浓度进行线性回归，得到5种标准品的回归方程。仙鹤草酚BY＝2500000X+7340(R2＝0.9993)，浓度在0.8～4.0μg/mL范围线性良好。
(4)测定方法：照高效液相色谱条件测定，色谱条件和系统适用性和InertsilODS-3色谱柱，流动相见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，进样10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长292nm。
表1流动相梯度洗脱表
(5)对上述确定的测定方法进行有效性评价，其中包括精密度、重复性、稳定性等。
2.药物组合物中珍珠草和黄花倒水莲用薄层色谱法鉴别：
(1)珍珠草薄层色谱法鉴别
供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照药材溶液的制备：取珍珠草对照药材粉末2g，加乙醇20mL，浸渍2h，滤过，滤液浓缩至约2ml，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为珍珠草对照药材溶液；
珍珠草薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)黄花倒水莲薄层色谱法鉴别
供试样品的制备：取本品提取物10mL倒入索氏提取器，加乙醚20mL，振摇提取2h，挥干乙醚，再用甲醇40ml，冷浸过夜，回流4h，，将提取物浓缩至干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取远志皂苷对照品0.1g，加甲醇1mL，作为远志皂苷对照药材溶液；
黄花倒水莲薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-正己烷-乙酸的质量比例为9∶3∶0.30∶0.5作为展开剂，展开，取出，晾干，喷8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(7→10)比例为1∶10的溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，在白光下检视；
本发明一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，优选的供试品溶液的制备：该方法公示品溶液的制备：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药。
本发明一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法中，优选的测定方法：高效液相色谱条件测定，色谱条件和系统适用性试验：Inertsil ODS-3色谱柱，流动相梯度见表1，平衡时间15min，流速0.8mL/min，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长292nm，进样10μL。
本发明所述的质量控制方法，由于仙鹤草酚B的最大吸收波长为292nm，故选择292nm波长分别测定仙鹤草酚B含量。
本申请发明人经考察获知，当采用乙腈-水，乙腈-甲酸水，甲醇-水体系作为流动相梯度洗脱时，药物成分分离不理想，运用甲醇-甲酸水体系洗脱，药物各成分没有重叠，且峰形优异。本实验方案通过对药物活性成分含量的质量控制，从整体上评价和控制药物组合物质量，更加合理、真实地反映一种延缓皮肤衰老的中药药物组合物的质量。

Claims (6)

1.一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺，其特征在于：取延缓皮肤衰老的中药制剂常规乙醇浸泡提取，浸泡液减压浓缩，浓缩液用大孔树脂吸附，用5％-95％的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，即为所述的延缓皮肤衰老的药物组合物，置于60℃水浴，先加入4％洗脱液体积的II型ZTC1+1天然澄清剂B组分，1h后加入2％体积的II型ZTC1+1天然澄清剂A组分，期间每半小时搅拌1分钟令杂质成分凝聚沉淀，然后在离心机中以4000r/min离心10min，取上清液；所述的II型ZTC1+1天然澄清剂：它是一种以天然多糖为原料制成的天然高分子物质，由A、B两个组分组成，A组分为黄褐色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶，配成1％的水溶液使用；B组分为浅黄色可溶性固体粉末或浅褐色液体，主要含淀粉酶的复合酶，用1％醋酸配成1％浓度的溶液使用。
A组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量在蒸馏水，搅拌成糊状，再加入蒸馏水配制至100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤；
B组分，精密量取1.0g II型ZTC1+1天然澄清剂加入少量体积分数为1％的醋酸溶液，搅拌成糊状，再加体积分数为1％的醋酸溶液配制成100mL的粘胶液，溶胀24h，用双层纱布过滤。
2.一种延缓皮肤衰老的药物组合物的质量控制方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)用薄层色谱法鉴别该药物中药材珍珠草，包括：
a.供试样品的制备：取本品药物组合物2mL，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
b.对照药材溶液的制备：取珍珠草对照药材粉末2g，加乙醇20mL，浸渍2h，滤过，滤液浓缩至约2ml，加2g硅胶(100-200目)，搅匀，挥干，装柱(内径10-15mm)中，以乙醚8ml洗脱，弃去乙醚液，再用乙醇8ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为珍珠草对照药材溶液；
c.珍珠草薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)作为展开剂，展开，取出，晾干，喷10％硫酸乙醇溶液显色，在105℃加热至斑点显色清晰，白光下检视；
(2)用薄层色谱法鉴别该药物中药材黄花倒水莲，包括：
a.供试样品的制备：取本品提取物10mL倒入索氏提取器，加乙醚20mL，振摇提取2h，挥干乙醚，再用甲醇40ml，冷浸过夜，回流4h，，将提取物浓缩至干，残渣加甲醇1mL使溶解，取上清液作为供试品溶液；
b.对照品溶液的制备：取远志皂苷对照品0.1g，加甲醇1mL，作为远志皂苷对照药材溶液；
c.黄花倒水莲薄层色谱鉴别：照薄层色谱法试验，分别吸取对照药材溶液和样品溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-正己烷-乙酸的质量比例为9∶3∶0.30∶0.5作为展开剂，展开，取出，晾干，喷8％香草醛无水乙醇溶液-10％硫酸无水乙醇溶液的混合液(1∶10)显色，在105℃加热至斑点显色清晰，在白光下检视；
(3)用高效液相色谱法测定药物中仙鹤草酚B的含量，包括：
a.高效液相色谱条件：Inertsil ODS-3色谱柱，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇A-甲酸水，梯度洗脱为0～10min 30％A→35％A、10～45min 35％A→45％A、45～60min 45％A→75％A，平衡时间15min，流速0.8mL/min，进样量10μL，柱温24℃，PDA检测器采集范围：190～400nm；检测波长290nm；
b.供试品溶液的配制：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍备用；
c.对照品溶液的制备：精密称取仙鹤草酚B对照品2mg，加甲醇配制不同倍数质量浓度的对照品溶液；
d.线性关系考察：分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液，高效液相色谱仪进样10μL，以测得的响应信号和浓度进行线性回归，得到标准品的回归方程；
e.测定法：分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪测定。
3.根据权利要求1，2所述的一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，该方法供试品溶液为乙醇浸泡液，具体方法为：取延缓皮肤衰老的中药制剂，常规乙醇浸泡提取24小时，用纱布过滤，减压浓缩为原重量的2％-5％，浓缩液上大孔树脂吸附，5％-95％乙醇洗脱，浓缩洗脱液，加甲醇定容至即每毫升药液含1g原药，用甲醇稀释5、10、15倍。
4.根据权利要求1，2所述的一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于：该方法用于提取方法相同的延缓皮肤衰老的药物组合物片剂，颗粒剂或药物组成含有珍珠草、黄花水倒莲、仙鹤草药材的复方。
5.根据权利要求1，2述的一种延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于，含量测定方法中：供试品稀释5倍，过0.22μm滤膜，10μL进液相色谱仪、仙鹤草酚B的含量为：14.21μg/ml。
6.根据权利要求1，2所述的一种具有延缓皮肤衰老的药物组合物的澄清工艺和质量控制方法，其特征在于：所述的薄层色谱法鉴别珍珠草和黄花倒水莲中，珍珠草以三氯甲烷-甲醇(7.5∶1)作为展开剂，喷10％硫酸乙醇溶液显色；黄花倒水莲以氯仿-丙酮-正己烷-乙酸的质量比例为9∶3∶0.30∶0.5作为展开剂，喷8％香草醛无水乙醇溶液与硫酸乙醇液(710)比例为1∶10的溶液显色。
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