CN104950068B - 补肾祛风更年合剂的质量检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了补肾祛风更年合剂的质量检测方法，它由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份；其质量检测方法包括如下各项：性状：本品为棕褐色的液体；气微香，味微苦；有少量沉淀；鉴别：包括山茱萸的薄层色谱鉴别；检查：相对密度为1.10~1.20；pH值为3.5~5；含量测定：包括淫羊藿的含量测定。以该方法为标准检测补肾祛风更年合剂，可以很好的保证制剂的稳定性，从而保证其疗效。

Description

补肾祛风更年合剂的质量检测方法

技术领域

本发明涉及一种治疗绝经综合征的药物，具体涉及一种用于治疗绝经综合征的补肾祛风更年合剂的质量检测方法。

背景技术

绝经综合征属中医绝经前后诸证范畴，是妇女在绝经前后，肾气渐衰，天葵渐竭，冲任二脉虚衰。以肾虚为主，可因偏于阴虚，偏于阳虚或阴阳俱虚而出现不同症候，并可累及心，肝，脾。

该病西医诊断标准符合1994年世界卫生组织提出的“围绝经期综合症”的妇女。围绝经期指围绕绝经的一段时期，包括从接近绝经出现与绝经有关的内分泌，生物学和临床特征起至最后一次月经后一年，即绝经过渡期至最后一次月经后一年。围绝经期综合征指妇女绝经前后由于性激素减少所致的一系列躯体及精神心理症状。

中医诊断标准参照《中药新药临床研究指导原则》第三辑“中药新药治疗女性更年期综合症临床研究指导原则”和符合全国高等医药院校第六版教科书，《中医妇科学》绝经前后诸证的肾阴阳两虚型主症见：症状形寒肢冷、潮热出汗、面色晦暗、易激动、失眠、疲乏、夜尿频数，骨关节、肌肉痛、舌淡、苔白滑、脉沉细；次症：面浮肢肿、眩晕，心悸、抑郁、性交痛；舌象舌淡、苔白滑；脉象脉沉细。

中医药治疗本病，重点在于整体调节，以补肾为主，兼调他脏，标本兼治，以达“阴平阳秘，精神乃至”的目的。在治疗上除了注重平调肾中阴阳（肾阴虚——滋养肾阴，佐以潜阳，肾阳虚——温肾扶阳，肾阴阳两虚——阴阳双补）。或滋补肝肾，交通心肾，温肾暖脾，或疏肝理气化痰。但通过长期的临床观察治疗，发现绝经前后诸证的根本仍然归结于肾虚，即肾气的虚衰。且对肾阳虚及阴阳俱虚之患者单以补肾温阳滋阴疗效不佳，临床观察发现肾阳虚衰则闭阻经络，使阳气不达出现风寒闭阻之症，且以补肾温阳，祛风散寒方法治疗每多见效。

补肾祛风更年合剂就是一种用于治疗妇女绝经综合征的中医药处方，地黄补肾祛风更年合剂由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份；其制备方法是：将组方中的十五味原料药，加水煎煮3次，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩，加入羟苯乙酯，混匀，加纯化水，搅匀，分装，即得。

补肾祛风更年合剂由十五味中药原料制成，但目前没有适用的质量检测方法，为了保证制剂的稳定性和疗效，发明人对该合剂的质量检测进行了研究。

发明内容

本发明所要解决的技术问题提供一种用于补肾祛风更年合剂的质量检测方法，以保证该补肾祛风更年合剂的稳定性和疗效。。

本发明的技术方案是这样的：

补肾祛风更年合剂的质量检测方法，补肾祛风更年合剂由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份；其质量检测方法包括如下各项：

性状：本品为棕褐色的液体；气微香，味微苦；有少量沉淀；

鉴别：包括山茱萸的薄层色谱鉴别；

检查：相对密度为1.10~1.20；pH值为3.5~4.5；

含量测定：包括淫羊藿的含量测定。

所述山茱萸的薄层色谱鉴别方法是：取本品8～12mL，加无水乙醇8～12mL混匀，过滤，取滤液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成1mg/mL对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

其中，展开剂中乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸三者的重量比例为47～55:8～12:1，即其中，乙酸乙酯重量份数为47～55份，乙醇重量份数为8～12份，冰醋酸的重量份数为1份。

淫羊藿的含量测定的色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水按重量比28～33:66～77为流动相，即流动相中，乙腈重量份数为28～33份，水的重量份数为66～77份；检测波长为270nm。

淫羊藿的含量测定的供试品溶液的制备方法是：精密量取补肾祛风更年合剂2mL置15～25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

淫羊藿的含量测定的对照品溶液的制备方法是：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/mL的对照品溶液，即得；

淫羊藿的含量测定的测定法是：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8～12μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

淫羊藿的含量测定的质量合格标准是：每1mL补肾祛风更年合剂含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于0.6mg。

通过以上方法，能够制定出补肾祛风更年合剂的质量标准，从而实现对补肾祛风更年合剂的质量检测，经实验证明，以该方法为标准检测补肾祛风更年合剂，可以很好的保证制剂的稳定性，从而保证其疗效。

附图说明

图1是熟地黄薄层色谱的试验研究；

图2是盐巴戟天薄层色谱的试验研究；

图3是山药薄层色谱的试验研究；

图4是当归薄层色谱的试验研究一；

图5是当归薄层色谱的试验研究二；

图6是当归薄层色谱的试验研究三；

图7是山茱萸薄层色谱的试验研究；

图8是山茱萸耐用性薄层色谱的试验研究；

图9是毛蕊花糖苷对照品色谱图；

图10是供试品色谱图；

图11是仙茅苷对照品色谱图；

图12是供试品色谱图；

图13是最大吸收光谱图；

图14是供试品溶液处理方法试验；

图15是专属性实验（A、淫羊藿苷对照品溶液B、供试品溶液C、缺淫羊藿的阴性样品溶液；）

图16是线性关系考察色谱图；

图17是标准曲线；

图18是精密度试验色谱图；

图19是稳定性试验色谱图；

图20是重复性试验色谱图；

图21是加样回收率试验色谱图；

图22是样品测定色谱图；

图23是耐用性试验色谱图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但本发明的保护范围不受具体实施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。

一、补肾祛风更年合剂的原料（饮片）及辅料质量标准：

熟地黄：本品为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥块根的炮制加工品。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第116~117页熟地黄项规定。

仙茅：本品为石蒜科植物仙茅CurculigoorchioidesGaertn.的干燥根茎。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第94页仙茅项规定。

山药：本品为薯蓣科植物薯蓣DioscoreaoppositaThunb.的干燥根茎。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第27页山药项规定。

山茱萸：本品为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第26页山茱萸项规定。

淫羊藿：本品为小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鲜淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥叶。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第306~308页淫羊藿项规定。

盐巴戟天：本品为茜草科植物巴戟天MorindaofficinalisHow的干燥根的炮制品。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第75~76页盐巴戟天项规定。

桑寄生：本品为桑寄生科植物桑寄生Taxilluschinensis(DC.)Danser的干燥带叶茎枝。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第280~281页桑寄生项规定。

酒女贞子：本品为木犀科植物女贞LigustrumlucidumAit.的干燥成熟果实的炮制品。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第43页酒女贞子项规定。

墨旱莲：本品为菊科植物鳢肠EcliptaprostrataL.的干燥地上部分。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第351~352页墨旱莲项规定。

当归：本品为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第124~125页当归项规定。

桂枝：本品为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第259页桂枝项规定。

独活：本品为伞形科植物重齿毛当归AngelicapubescensMaxim.f.biserrataShanetYuan的干燥根。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第246~247页独活项规定。

防风：本品为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第140页防风项规定。

细辛：本品为马兜铃科植物北细辛AsarumheterotropoidesFr.Schmidtvar.mandsh-

uricum(Maxim.)Kitag.、汉城细辛AsarumsieboldiiMiq.var.seoulenseNakai或华细辛AsarumsieboldiiMiq.的干燥根和根茎。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第214~215页细辛项规定。

甘草：本品为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch.、胀果甘草Glycyrrhizain-

flataBat.、或光果甘草GlycyrrhizaglabraL.的干燥根和根茎。

本品应符合《中国药典》2010年版一部第80~81页甘草项规定。

羟苯乙酯：本品为4-羟基苯甲酸丁酯，白色或类白色结晶或结晶性粉末。

应符合《中国药典》2010年版二部第1224页羟苯乙酯项规定。

二、补肾祛风更年合剂质量标准：

【处方】熟地黄120g、仙茅120g、山药120g、山茱萸120g、淫羊藿120g、

盐巴戟天120g、桑寄生120g、酒女贞子120g、墨旱莲120g、当归100g、桂枝90g、独活90g、防风90g、细辛30g、甘草60g，制成1000mL。

【制法】以上十五味药，加水煎煮3次，第一次加10.5倍水，第二、三次各加8倍量水，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩到约800mL，加入0.5g羟苯乙酯（用少量乙醇溶解），混匀，加纯化水至1000mL，搅匀，分装，即得。

【性状】本品为棕褐色的液体；气微香，味微苦；有少量沉淀。

【鉴别】取本品10mL，加无水乙醇10mL混匀，过滤，取滤液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成1mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸（50:10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【检查】相对密度应为1.10~1.20。pH值应为3.5~4.5。

其他：应符合合剂项下有关各项规定（《中国药典》2010年版一部附录ⅠJ）。

【含量测定】：

色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30:70）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3000。

供试品溶液的制备：精密量取本品2mL置20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/mL的对照品溶液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1mL含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于0.6mg。

【功能与主治】补肾温阳，祛风散寒。用于妇女绝经综合征肾阴阳两虚证，症见：绝经前后烘热汗出，烦躁易怒，潮热面红，目眩耳鸣，心悸失眠，腰背酸楚，目浮肢肿，皮肤蚁走感，情志不宁，性交痛等。

【用法与用量】口服，1次10mL（一瓶盖），1日2次。

三、成品的质量测定方法：

【性状】本品为棕褐色的液体；气微香，味微苦；有少量沉淀。

【鉴别】：

1仪器与试剂：

电子分析天平（METTLERTOLEDOAB204-S）；HH-4数显恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）YHG-600-S-Ⅱ型红外快速干燥箱(贺德试器有限公司)；三星DV150F数码相机；试剂甲醇、乙酸乙酯、甲苯、乙醇、甲酸、二氯甲烷、浓氨试液、乙醚、正己烷、环己烷、冰醋酸等为分析纯。

2试验结果：

2.1熟地黄薄层色谱鉴别的实验研究：

取本品20mL，置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取熟地黄对照药材1g，加水20mL煎煮1小时，放冷，滤过，滤液加乙酸乙酯20mL提取，取乙酸乙酯层置水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯（2:2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以0.1%的2,2-二苯基-1-苦肼基无水乙醇溶液。经检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色的斑点，不能建立熟地黄薄层色谱鉴别方法，见图1。

参考《中国药典》2010年版一部第116页在建立HPLC法测定熟地黄中毛蕊花糖苷含量测定方法时未能检出毛蕊花糖苷及上述薄层色谱鉴别实验情况，结合本发明处方【制法】中明确的生产工艺为主要水煎煮、浓缩生产工艺，不能建立熟地黄及熟地黄中毛蕊花糖苷的薄层色谱鉴别方法。

仙茅薄层色谱鉴别的实验研究：

参考龚珺发表的《更年安胶囊的薄层色谱鉴别研究》的方法，系同样对仙茅中仙茅苷进行薄层色谱鉴别，结合在依据《中国药典》2010年版一部第94页方法进行实验研究建立HPLC法测定仙茅中仙茅苷含量测定方法时未能检出的情况，以及处方【制法】中明确的生产工艺为主要水煎煮、浓缩生产工艺情况；鉴于HPLC法未检出仙茅苷，无需再进行仙茅及仙茅中仙茅苷薄层色谱鉴别实验。不能建立仙茅及仙茅中仙茅苷的薄层色谱鉴别方法。

盐巴戟天薄层色谱鉴别的实验研究：

取本品20mL，加甲醇20mL，离心，取上清液蒸干，残渣加乙醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取巴戟天对照药材2g，加乙醇回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8:2:0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。经检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，未显相同颜色荧光的斑点，不能建立巴戟天薄层色谱鉴别方法，见图2。

山药薄层色谱鉴别的实验研究：

取本品50mL，加二氯甲烷50mL，混匀，振摇提取，分取二氯甲烷层蒸干，残渣加二氯甲烷1mL使溶解，作为供试品溶液。另取山药对照药材5g，加二氯甲烷回流2小时，放冷，滤过，滤液浓缩至1mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（9:0.5:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。经检视，供试品及缺山药的阴性样品色谱中，与山药对照药材色谱相应的位置上，均出现相同颜色的斑点，缺山药阴性样品的其他成分有干扰，不能建立山药药材薄层色谱鉴别方法，见图3。

当归薄层色谱鉴别的实验研究：

①取本品10mL，加乙醚20mL提取，乙醚液挥干，滤渣加1mL乙醇溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，超声（功率250W，频率40kHz）10分钟，过滤，滤液挥干，制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，显色清晰。分别置紫外光灯（365nm）下检视。经检视，供试品色谱中，与当归对照药材对应位置上未显相同颜色的斑点及荧光斑点，不能建立当归的薄层色谱鉴别方法，见图4。

②取本品50mL，加1%碳酸氢钠溶液50mL，超声（功率250W，频率40kHz）处理10分钟，滤过，滤液用稀盐酸调pH至2~3，加乙醚提取两次，每次20mL，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取藁本内酯对照品，加甲醇制成1mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μL，对照品溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4:1:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。经检视，供试品色谱中，在与藁本内酯对照品色谱相应的位置上，未显相同颜色的荧光斑点，不能建立当归中藁本内酯的薄层色谱方法，见图5。

另取阿魏酸对照品，加甲醇制成1mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取②项下供试品溶液5μL，对照品溶液10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（4:1:1:0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。经检视，供试品及缺当归的阴性样品色谱中，与阿魏酸对照品色谱相应的位置上，均出现相同颜色的荧光斑点，缺当归的阴性样品的其他成分有干扰，不能建立当归中阿魏酸薄层色谱鉴别方法，见图6。

2.6山茱萸薄层色谱鉴别的实验研究：

取本品10mL，加无水乙醇10mL混匀，离心，取上清液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成1mg/mL对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸（50:10:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。经检视（见图7），供试品色谱中，与马钱苷对照品色谱相应的位置上，均出现相同颜色的斑点，缺山茱萸的阴性样品的其他成分无干扰，经耐用性实验（见图8），方法重现良好，可以建立山茱萸中马钱苷的薄层色谱鉴别方法，并将其作为本发明的补肾祛风更年合剂的质量检测方法之一。

【含量测定】：

1材料：

1.1仪器：

Agilenttechnolongies1260Infinity、岛津LC-2010A型高效液相色谱仪、G4212B1260DAD二极管阵列检测器；梅特勒MS105DU电子天平；舒美KQ-500DA型数控超声波清洗器（功率250W，频率40KHz）。

试剂与试药：

乙腈（色谱纯）、稀乙醇、甲醇（分析纯），水为重蒸水，淫羊藿苷对照品（中国食品药品检定研究院，国家药品标准物质，批号：110737-200415），更年益合剂（20140501、20140502、20140503），缺熟地黄、仙茅、淫羊藿的阴性样品。

熟地黄含量测定方法的实验研究：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（WatersC₁₈（4.6×250mm，5μm））；乙腈-0.1%醋酸溶液（16:84），334nm；流速1mL/min、柱温25℃。毛蕊花糖苷对照品10μg/mL流动相溶解，取更年益合剂样品滤过，直接测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定。

结果：在供试品色谱图中与毛蕊花糖苷对照品相同保留时间位置处未出现色谱峰，不能建立熟地黄中毛蕊花糖苷含量测定方法，见图9，图10。

仙茅含量测定方法的实验研究：

色谱条件：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(WatersC₁₈（4.6×250mm，5μm）)；乙腈-0.1%磷酸溶液（21：79），285nm；流速1ml/min、柱温25℃。仙茅苷对照品70μg/ml甲醇溶解，取更年益合剂样品滤过，直接测定。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

结果：在供试品色谱图中与仙茅苷对照品相同保留时间位置处未出现色谱峰，不能建立仙茅中仙茅苷含量测定方法，见图11，图12。

4淫羊藿含量测定方法的实验研究：

4.1溶液的配制：

4.1.1对照品储备液的配制：

精密称定淫羊藿苷对照品0.02028g置20mL量瓶中，加甲醇超声溶解并至刻度，摇匀，配成1.014mg/mL的储备液。

对照品溶液的配制：

精密量取对照品储备液1.0mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成0.1014mg/mL的对照品溶液；

4.1.3供试品溶液配制：

精密量取样品2mL置20mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

4.1.4阴性对照溶液的配制：

取缺淫羊藿的阴性样品，按“4.1.3供试品溶液配制”方法制备，即得缺淫羊藿的阴性空白对照溶液。

色谱条件：

4.2.1流动相的选择：

选择甲醇-水溶液（30:70）为流动相进行实验考察，检测结果表明，此比例流动相不能很好的分离样品中的淫羊藿苷峰和其他成分峰，对检测有干扰。经实验验证，将流动相选择为乙腈-水溶液（30:70）测定，样品中的淫羊藿苷峰和其他成分峰基线分离，峰纯度检测为纯峰，峰形对称，理论板数高于3000；同时检测缺淫羊藿的阴性空白对照溶液，不干扰测定，因此，本法选用乙腈-水溶液（30:70）为流动相。

检测波长的选择：

选择波长200nm~400nm处进行DAD二极管阵列扫描测定，样品中的淫羊藿苷峰在270nm处有最大吸收；与《中国药典》2010年版一部“淫羊藿”项下的270nm一致，故采用270nm为检测波长，见图13。

4.3系统适用性试验：

4.3.1供试品溶液处理方法试验：

分别精密量取样品置20mL量瓶1、2中，量瓶1中加水稀释至刻度，摇匀，0.45μm针筒式过滤器过滤，测定；量瓶2中加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm针筒式过滤器过滤，测定，结果见如下表4-1，见图14。

经实验上述考察，选用甲醇作为稀释溶剂。

4.3.2专属性试验：

取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液分别进样，进样量10μL，结果表明，缺淫羊藿阴性样品其他成分不干扰测定（见图15）。

线性与范围：

精密量取“4.1.2”中配制的对照品溶液，0.45μm针筒式过滤器过滤，分别按2μL、6μL、10μL、14μL、18μL进样，按“2.2”项下色谱条件测定，结果见下表4-2、图16，图17。

如图所示，以C为纵坐标（Y），以A为横坐标（X），绘制标准曲线。

线性回归得方程Y=1929.49X-17.82，r=0.9999；

结果表明，淫羊藿苷在0.2028~1.8252μg范围内线性关系良好。

设置强制过原点的线性回归得方程Y=1916.47X，r=0.9998；将重复性试验样品1的峰面积2158.1带入上述两个方程，分别计算含量为1.1277和1.1261mg/mL，相对平均偏差为0.073%，因此可以采用一点法测定含量。

精密度试验：

精密量取对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积，计算平均峰面积值和RSD值，结果见下表4-3，图18。

结果表明，RSD=0.11%，精密度良好。

稳定性试验：

精密量取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12h进样，记录峰面积，计算平均峰面积值和RSD值，结果见下表4-4，图19。

结果表明，RSD=0.53%，样品溶液在12h内稳定。

重复性试验：

精密量取同一批供试品溶液2mL置20mL量瓶，共6份，按“4.1.3”项下供试品溶液制备方法处理，测定，结果如下表4-5，图20。

结果表明，平均值为1.1322mg/mL，RSD=0.65%，重复性良好。

加样回收率

采用加样回收法，精密量取供试品溶液1mL置20mL量瓶，共6份，分别精密加入淫羊藿对照品溶液（0.1014mg/mL）1mL，用甲醇稀释至刻度，再按“4.1.3”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表4-6，图21。

结果表明，平均回收率为102.2%，RSD=1.81%，方法回收率良好。

样品测定

精密量取3批次的供试品溶液2mL置20mL量瓶，按“4.1.3项”下供试液制备方法处理，测定，结果如下表4-7，图22。

结果表明，供试品溶液中淫羊藿苷含量约为0.98~1.2mg/mL，考虑大生产实际情况，将淫羊藿苷含量限度暂定为不少于0.60mg/mL。

耐用性试验：

采用Agilenttechnolongies1260Infinity及AgilengtC₁₈（CAPCELLPAKC₁₈；5μm；4.6×250mm）和岛津LC-2010A型高效液相色谱仪及Waters（XBnridgeC₁₈；5μm；4.6×250mm）不同品牌的高效液相色谱仪和色谱柱，考察仪器和色谱柱的适用性色谱柱，保留时间见表4-8，图23。

结果：淫羊藿苷峰与相邻色谱峰基线分离，分离良好，保留时间均约在10分钟左右，理论板数均在4000左右，实验重现良好。样品中的淫羊藿苷峰和其他成分峰基线分离，峰形对称，理论板数均高于3000，故采用不同的仪器和色谱柱均可满足本法测定淫羊藿苷的要求。

当然，以上只是发明的具体应用范例，本发明还有其他的实施方式，凡采用等同替换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明所要求的保护范围之内。

Claims (5)

1.补肾祛风更年合剂的质量检测方法，补肾祛风更年合剂由以下重量份数的原料药制成：熟地黄114～132份、仙茅114～132份、山药114～132份、山茱萸114～132份、淫羊藿114～132份、盐巴戟天114～132份、桑寄生114～132份、酒女贞子114～132份、墨旱莲114～132份、当归95～110份、桂枝94.5～99份、独活94.5～99份、防风95～99份、细辛31.5～33份、甘草57～66份；其制备方法是：将组方中的十五味原料药，加水煎煮3次，每次煎煮0.5小时，滤过，合并滤液；滤液常压浓缩，加入羟苯乙酯，混匀，加纯化水，搅匀，分装，即得；

其质量检测方法包括如下各项：

性状：本品为棕褐色的液体；气微香，味微苦；有少量沉淀；

鉴别：包括山茱萸的薄层色谱鉴别；

检查：相对密度为1.10~1.20；pH值为3.5~5.0；

含量测定：包括淫羊藿的含量测定。

2.根据权利要求1所述的补肾祛风更年合剂的质量检测方法，其特征在于：所述山茱萸的薄层色谱鉴别方法是：取本品8～12mL，加无水乙醇8～12mL混匀，过滤，取滤液置水浴上蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解，作为供试品溶液；另取马钱苷对照品，加无水乙醇制成1mg/mL对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各4.5～5.5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求2所述的补肾祛风更年合剂的质量检测方法，其特征在于：展开剂中乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸三者的重量比例为47～55:8～12:1。

4.根据权利要求1所述的补肾祛风更年合剂的质量检测方法，其特征在于：淫羊藿的含量测定的色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水按重量比28～33:66～77为流动相；检测波长为270nm。

5.根据权利要求4所述的补肾祛风更年合剂的质量检测方法，其特征在于：

淫羊藿的含量测定的供试品溶液的制备方法是：精密量取补肾祛风更年合剂2mL置15～25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

淫羊藿的含量测定的对照品溶液的制备方法是：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.1mg/mL的对照品溶液，即得；

淫羊藿的含量测定的测定法是：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各8～12μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

淫羊藿的含量测定的质量合格标准是：每1mL补肾祛风更年合剂含淫羊藿以淫羊藿苷（C₃₃H₄₀O₁₅）计，不得少于0.6mg。