CN110050997A - 一种复合蛋白组合物的制备工艺 - Google Patents

一种复合蛋白组合物的制备工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN110050997A
CN110050997A CN201910347950.4A CN201910347950A CN110050997A CN 110050997 A CN110050997 A CN 110050997A CN 201910347950 A CN201910347950 A CN 201910347950A CN 110050997 A CN110050997 A CN 110050997A
Authority
CN
China
Prior art keywords
jujube
protein composition
compound protein
concentrate
extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910347950.4A
Other languages
English (en)
Inventor
刘常青
刘乡乡
宋力飞
王露
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZELI MEDICINE TECH Co Ltd GUANGZHOU
Original Assignee
ZELI MEDICINE TECH Co Ltd GUANGZHOU
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZELI MEDICINE TECH Co Ltd GUANGZHOU filed Critical ZELI MEDICINE TECH Co Ltd GUANGZHOU
Priority to CN201910347950.4A priority Critical patent/CN110050997A/zh
Publication of CN110050997A publication Critical patent/CN110050997A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/175—Amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/19—Dairy proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明提供一种复合蛋白组合物的制备工艺，涉及药品、食品、保健食品技术领域。本发明复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：a.取蚕蛹，粉碎，过筛，用低温高压差连续提取，提取液离心，取上清液微滤；将清滤液浓缩，浓缩液灭菌，即得蚕蛹提取物；b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，低温高压差连续提取，提取液离心，上清液进行微滤，灭菌，得大枣提取物；c.按重量份比，取蚕蛹提取物15‑30份，大枣提取物5‑15份；d.将各原料混合均匀，即得。本发明方法制备工艺制备的蛋白组合物，适合企业连续化生产，高效节能省时，能最大程度的保留原料的营养成分，营养成分搭配合理，性质稳定，药理效果明显，具有很好的提高自身机体免疫能力。

Description

一种复合蛋白组合物的制备工艺
【技术领域】
本发明涉及药品、食品、保健食品加工技术领域，具体涉及一种复合蛋白组合物的制备工艺。
【背景技术】
根据中国膳食指南，研究者推算，一般成年人摄入250～300克以上主食、一个鸡蛋、150克瘦肉、100～150克豆类制品、300～500克牛奶，即可满足每日所需蛋白质。但我国目前每日摄入蛋白质水平低于世界平均水平，远低于FAO推荐的水平。消费人群在日常饮食中容易出现蛋白质摄入量不足，或摄入的蛋白质来源单一等问题，进而可能引发亚健康状态。随着人们对高质量生活、饮食的追求逐步提升、生活方式的高节奏运转，人们更倾向于能快速补充营养和解决上述问题的饮食方式。
免疫系统的构成都需要蛋白质，蛋白质对人体而言可以说是没有蛋白质就没有生命。缺乏蛋白质会导致：营养不良，进行性消瘦；内分泌失调，免疫力低下；儿童发育迟缓、智力发育障碍等问题。蛋白质与肠道健康也息息相关,缺乏蛋白质对肠道带来的影响、以至于对整个免疫系统的影响是巨大的。
目前很多消费者和企业强调蛋白质对人体的重要性，以为只要进食更多的蛋白质便可以强身健体、促进发育等，而忽视蛋白质的主要适用人群特征以及各种蛋白质本身的氨基酸组成特性，未科学地对蛋白产品在机能的影响上作细致的点评。常常造成的问题是，由于补充的蛋白质来源较单一，氨基酸组成及配比不合理，造成非但没有达到补充蛋白提高免疫力的功效，甚至还会由于补充不合理蛋白质，造成蛋白摄入过多，蛋白不合理后的肥胖还会导致各种健康问题。
市面上大多产品主要原料分别为大豆蛋白、乳清蛋白，蛋白质来源较单一，无法满足亟需补充蛋白质人群对大量、持续性氨基酸的需求。同时只强调蛋白质对人体的重要性，却忽视蛋白质的主要适用人群特征以及各种蛋白质本身的氨基酸组成特性，涉及并针对缺乏蛋白质人群、亟需补充优质蛋白质人群；同时，该类人群常伴随有肠道健康问题，而相关蛋白质食品较少关注到此方面。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对因蛋白不足引起的健康问题时，特别是免疫低下时只注重补充蛋白质的数量，不注重补充蛋白来源，不关注补充蛋白质的氨基酸组成和配比，从而造成补充效果不理想甚至反效果的问题，提供一种复合蛋白组合物的制备工，本发明方法制备工艺制备的蛋白组合物，适合企业连续化生产，高效节能省时，能最大程度的保留原料的营养成分，营养成分搭配合理，性质稳定，药理效果明显，具有很好的提高自身机体免疫能力。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物15-30份，大枣提取物5-15份，原料备用；
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
蚕蛹是一种动物蛋白，本方法采用低温高压差连续提取方法，可以有效提取出蚕蛹中的氨基酸和活性成分，同时克服了多工序操作耗时、耗能的问题，具备连续生产可行性，特有的低温物理提取技术充分保留了蚕蛹生物活性成分营养价值。相比于通过酸提取、碱提取、有机溶剂提取或直接脱脂得到的蚕蛹蛋白，该设备保留了蚕蛹本身具有的天然活性成分，具有快捷、高效的优势。并且根据蚕蛹性质，得到提取关键控制指标，在温度不超过40℃的条件下完成提取，同时得出较优的提取温度为20-30℃范围内，即25℃附近效果较佳；提取压力为20-30MPa时可达到提取要求。
通过本发明工艺制备的蚕蛹提取物，在药学实验中具有很好的改善免疫功能作用，通过对其氨酸酸组成分析发现，其含有成人6种、儿童7种必需氨基酸，氨酸酸种类达16种、种类丰富，同时工艺最大程度的保留了蚕蛹的活性成分，从而具有良好的改善去免疫功能的作用。通过制剂学知识，可在制备增强免疫调节药品、食品(含特殊医学用途食品)和/或保健食品、大健康养生产品中运用。
工艺可以有效提取出蚕蛹中的氨基酸和活性成分，同时克服了多工序操作耗时、耗能的问题，具备连续生产可行性，特有的低温物理提取技术充分保留了蚕蛹生物活性成分营养价值。
本发明大枣采用用低温高压差连续提取方法，相对于传统的水煎煮，可克服了多工序操作耗时、耗能的问题，具备连续生产可行性，同时有效提取出大枣中的营养成分和活性成分，效率高，提取压力大温度低，对成分破坏小。
进一步优化的，所述步骤c中，所取的原料还包括：浓缩乳清蛋白15-30份，鸡蛋白10-25份，L-谷氨酰胺10-15份，深度水解乳清蛋白5-10份，大米蛋白3-6份，小麦低聚肽1-3份。
进一步优化的，步骤a中浓缩液灭菌后，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入30-85％的麦芽糊精或阿拉伯胶作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物。
进一步优化的，步骤a中低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为20-40MPa，提取温度为20-35℃，提取次数为1-2次。
进一步优化的，步骤b中大枣浓缩液灭菌后，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入30-65％的麦芽糊精或阿拉伯胶作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物。
进一步优化的，步骤b中低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-50MP,提取温度为25-40℃，提取次数为1-2次。
进一步优化的，所述微滤的方法为:采用陶瓷膜过滤，所述陶瓷膜的过滤孔径为100-500nm。
进一步优化的，所述深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
进一步优化的，蚕蛹细碎物在用低温高压差连续提取前，先将蚕蛹细碎物采用超临界CO2萃取，萃取完成后再将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取。
进一步优化的，所述超临界CO2萃取的萃取压力为25-35MPa，萃取温度为25-45℃，萃取时间为2-3h，分离压力为4-10MPa，分离温度为15-40℃。
通过超临界CO2萃取步骤后，可有效的去除蚕蛹中的蚕蛹油，蚕蛹油是一种附加值高，可以单独开发的产品，超临界萃取可将蚕蛹原料细分从而更好的进行综合开发利用，提高附加值；更重要的是，本发明目的是改善免疫力，去除蚕蛹油对免疫调节能力更好，蚕蛹提取物中氨基酸的含量提高，配比更合理，同时可有效降低蚕蛹油带来的腥味，显著改善口感，脂肪油含量下降，补充蛋白同时减少血液脂肪含量增加风险。
任一项上述制备方法制备得到的复合蛋白组合物。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：
本发明的复合蛋白组合物各原料经过严格筛选，合理的搭配蛋白质的来源和数量，由多种动、植物蛋白原料组成，氨基酸种类丰富，含有多种人体必需和非必需氨基酸，特别补充了人体普通饮食中容易受限的限制性氨基酸；并且含有多种微量元素、活性成分，成分间相互配合，营养价值高，共同相互促进，提高组合物整体的提高免疫力功能。注重L-谷氨酰胺对肠道健康的重要影响；重要的蚕蛹和大枣提取得到的全天然生物活性成分，简化了普通工序的操作，可操作性强。本发明产品安全可靠，口感柔和，指标明确，适用于日常蛋白质缺乏人群，特别适合免疫力下降的人群或因脾细胞正常结构被破坏免疫细胞凋亡或想要提高巨噬细胞吞噬功能的人群。对比如加班，熬夜等生活不规律引起的免疫力低下，以及老年人等需补充蛋白质人群，都具有良好效果。本产品能稳定持续地为他们供给氨基酸，提高自身机体免疫能。
本发明中的重要活性成分之一的蚕蛹提取物来源于蚕蛹，蚕蛹是一种营养价值高，同时也是一种口感腥味重，如果直接粉碎加入组合物，会整体降低复合蛋白的口感；同时蚕蛹中本身营养物质极易受到破坏，采用本发明的处理工艺，特别通过超临界CO2萃取步骤，低温高压差连续提取，喷雾干燥后，可以很好的保留营养物质，浓缩营养物质，改善加工和储存特性，适合规模化生产。蛹提取物在组方中起到了补充多种人体所需的氨基酸，同时起到良好的改善免疫功能作用。
大枣同理，如果直接粉末加入，会降低整个复合蛋白的口感，颗粒感增强，杂质增多，不易溶解，经本发明方法提取后，保留了大枣口感、营养成分，制剂中可加工性和保存性提升。
蚕蛹提取物、大枣提取物加工后，可以整体改善复合组方在加工过程中的加工特性，降低吸潮、粘连的情况，提升加工工艺的操作性和储存性。在加工过程中，不添加任何食品添加剂，且口感柔和，具有自然奶香气味，容易被消费者所接受。
利用水解乳清蛋白的促吸收功能和良好的运载功能，可提高复合蛋白组合物中功能因子的生物利用度，达到提升功效的目的。乳清蛋白经水解后还会释放出一些具有特定活性的氨基酸序列，即活性肽，它们具有特殊的生理功能，如低致敏性、抗氧化性、维护心血脑健康等。在复合蛋白中添加小麦低聚肽有效增强巨噬细胞的吞噬功能方面，提高复合蛋白组合物的免疫调节能力。同时，按照地域饮食习惯，北方多以小麦为主食；此成分的添加有助于加大北方人的接受程度。大米蛋白在肠道消化阶段快速消化，10min内产生大量小肽，是良好的抗氧化肽来源，有利于提高复合组合物整体的免疫调节、提高免疫力作用。同时，按照地域饮食习惯，南方以大米为主食；此成分的添加加大南方人的接受程度。
【附图说明】
图1复合蛋白组合物和蚕蛹提取物对拘束应激小鼠脾脏指数影响的实验结果；
图2复合蛋白组合物和蚕蛹提取物对拘束应激小鼠T细胞亚群影响的实验结果；
图3复合蛋白组合物和蚕蛹提取物对拘束应激小鼠T细胞增殖率影响的实验结果；
图4复合蛋白组合物和蚕蛹提取物对拘束应激小鼠吞噬细胞吞噬功能影响的实验结果。
【具体实施方式】
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
除另有说明外，本发明超临界CO2萃取蚕蛹粉末采用的是现有技术装置--超临界液体萃取仪，包括放置待萃取物(蚕蛹粉末)的萃取罐、存放CO2的储罐、分离器、回收装置，储罐内还包括液化器、高压泵、预热器；蚕蛹粉末放置在萃取罐的萃取床上，萃取时储罐内CO2流向为依次经液化器、高压泵、预热器，CO2流体经加压至萃取压力、加热至萃取温度，输入至萃取罐，从萃取罐底部进入，流经蚕蛹床层，超临界CO2携带蚕蛹蛹油从萃取罐顶出来，萃取罐内超临界CO2调节CO2流体压力至分离压力、温度至分离温度，经分离器至回收装置，回收至储罐。实施例中各数值为仪器设备的设定值。
除另有说明外，低温高压差连续提取，收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液步骤，上述操作均在高效高压差低温连续式提取分离浓缩器中进行，该设备的结构可参见我公司已申报专利：专利号CN200920304058.X，一种连续式提取分离浓缩器,公开(公告)号CN201505465U。实施例中各数值为仪器设备的设定值或提取过程中设备的实时数值范围。
实施例1
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，低温高压差连续提取的压力为23-32MPa，提取温度为22-28℃，提取次数为2次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液，陶瓷膜的过滤孔径为100-200nm；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-35MP,提取温度为25-30℃，提取次数为2次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，陶瓷膜的过滤孔径为100-200nm；大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物20份，大枣提取物8份，原料备用；
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
实施例2
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为20-30MPa，提取温度为20-30℃，提取次数为1次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液，陶瓷膜的过滤孔径为400-500nm；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-30MP,提取温度为25-30℃，提取次数为1次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，陶瓷膜的过滤孔径为400-500nm；大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物25份，大枣提取物13份，原料备用；
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
实施例3
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，低温高压差连续提取的压力为30-40MPa，提取温度为30-35℃，提取次数为2次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液，陶瓷膜的过滤孔径为100-200nm；将清滤液真空浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入30％的阿拉伯胶作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为40-50MP,提取温度为25-30℃，提取次数为2次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，陶瓷膜的过滤孔径为100-200nm；大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入30％的阿拉伯胶作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物15份，大枣提取物5份，浓缩乳清蛋白15份，鸡蛋白10份，L-谷氨酰胺10份，深度水解乳清蛋白5份，大米蛋白3份，小麦低聚肽1份，原料备用；其中，深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
实施例4
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为25-35MPa，提取温度为25-33℃，提取次数为2次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液，陶瓷膜的过滤孔径为400-500nm；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入30％的麦芽糊精作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-30MP,提取温度为25-32℃，提取次数为2次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，陶瓷膜的过滤孔径为400-500nm；大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入65％的麦芽糊精作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物30份，大枣提取物15份，浓缩乳清蛋白30份，鸡蛋白25份，L-谷氨酰胺15份，深度水解乳清蛋白10份，大米蛋白6份，小麦低聚肽3份，原料备用；其中，深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
实施例5
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为20-30MPa，提取温度为20-30℃，提取次数为1次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液，陶瓷膜的过滤孔径为200-300nm；将清滤液反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入85％的麦芽糊精或阿拉伯胶作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-30MP,提取温度为30-40℃，提取次数为1次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，陶瓷膜的过滤孔径为200-300nm；大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入55％的麦芽糊精作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，蚕蛹提取物29份，浓缩乳清蛋白22份，鸡蛋白20份，大枣提取物10份，L-谷氨酰胺10份，深度水解乳清蛋白5份，大米蛋白3份，小麦低聚肽1份，原料备用；其中，深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
d.将c步骤中的各原料混合均匀，混合时，先将蚕蛹提取物和大枣提取物混合均匀，在不断搅拌下加入浓缩乳清蛋白，之后不断搅拌下加入其他原料，即得复合蛋白组合物。
实施例6
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物采用超临界CO2萃取，超临界CO2萃取的萃取压力为25-30MPa，萃取温度为25-30℃，萃取时间为3h，分离压力为4-6MPa，分离温度为15-25℃；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为24-34MPa，提取温度为24-31℃，提取次数为2次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入55％的麦芽糊精作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为35-45MP,提取温度为28-38℃，提取次数为2次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入50％的阿拉伯胶作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物15份，大枣提取物5份，浓缩乳清蛋白15份，鸡蛋白10份，L-谷氨酰胺10份，深度水解乳清蛋白5份，大米蛋白3份，小麦低聚肽1份，原料备用；其中，深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
实施例7
一种复合蛋白组合物的制备工艺，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物采用超临界CO2萃取，超临界CO2萃取的萃取压力为30-35MPa，萃取温度为35-45℃，萃取时间为2h，分离压力为7-10MPa，分离温度为25-40℃；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为30-40MPa，提取温度为25-35℃，提取次数为1次；收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入40％的麦芽糊精作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为35-50MP,提取温度为30-40℃，提取次数为1次；提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入45％的阿拉伯胶作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物30份，大枣提取物15份，浓缩乳清蛋白30份，鸡蛋白25份，L-谷氨酰胺15份，深度水解乳清蛋白10份，大米蛋白6份，小麦低聚肽3份，原料备用；其中，深度水解乳清蛋白的水解度为20-30％。
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
本发明实施例1-7得到的蛋白组合物还可以根据需要制成药剂学上的各种制剂，如包括但不限于：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。本发明的中药组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。进一步开发成药品或保健食品或功能食品等。
实施例8
一、取实施例5复合蛋白组合物各原料进行混合均匀后得实施例5样品，对实施例5样品进行营养成分分析，数据如下：
表1复合蛋白组合物营养成分表
二、取实施例5样品，送自广州检验检测认证集团有限公司检验，检验依据：参照GB5009.124-2016《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》对本样品进行氨基酸种类及各氨基酸比例进行检测，检测结果如下：
表2复合蛋白氨基酸含量检测结果
序号 检验项目 单位 检验结果
1 天门冬氨酸 g/100g 4.52
2 苏氨酸 g/100g 2.49
3 丝氨酸 g/100g 2.56
4 谷氨酸 g/100g 17.2
5 脯氨酸 g/100g 2.38
6 甘氨酸 g/100g 1.23
7 丙氨酸 g/100g 2.55
8 缬氨酸 g/100g 3.23
9 蛋氨酸 g/100g 1.45
10 异亮氨酸 g/100g 2.39
11 酪氨酸 g/100g 3.91
12 亮氨酸 g/100g 0.85
13 苯丙氨酸 g/100g 2.03
14 组氨酸 g/100g 1.29
15 赖氨酸 g/100g 3.25
16 精氨酸 g/100g 1.51
本实施例中，按重量份比计，各氨基酸的比例如下：天门冬氨酸：苏氨酸：丝氨酸：谷氨酸：脯氨酸：甘氨酸：丙氨酸：缬氨酸：蛋氨酸：异亮氨酸：酪氨酸：亮氨酸：苯丙氨酸：组氨酸：赖氨酸：精氨酸为4.52：2.49：2.56：17.2：2.38：1.23：2.55：3.23：1.45：2.39：3.91：0.85：2.03：1.29：3.25：1.51。
该比例组成合理，含有成人人体所需要8种必需氨基酸中的6种，及含有儿童所额外必需氨基酸—组氨酸。成人人体必需氨酸与非必需氨酸的占比合理为36.89％，必需氨酸占总氨酸酸的比例为26.95％。儿童必需氨酸与非必需氨酸的占比合理为41.62％，必需氨酸占总氨酸酸的比例为29.39％。
三、为了一进步明确配方中活性成分，对按实施例5方法制备蚕蛹提取物同时送自广州检验检测认证集团有限公司检验，检验依据：参照GB5009.124-2016《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》对本样品进行氨基酸种类及各氨基酸比例进行检测，检测结果如下：
表3蚕蛹提取物氨基酸含量检测结果
序号 检验项目 单位 检验结果
1 天门冬氨酸 g/100g 0.21
2 苏氨酸 g/100g 0.26
3 丝氨酸 g/100g 0.35
4 谷氨酸 g/100g 0.54
5 脯氨酸 g/100g 0.61
6 甘氨酸 g/100g 0.23
7 丙氨酸 g/100g 0.36
8 缬氨酸 g/100g 0.24
9 蛋氨酸 g/100g 0.14
10 异亮氨酸 g/100g 0.17
11 酪氨酸 g/100g 0.19
12 亮氨酸 g/100g 0.03
13 苯丙氨酸 g/100g 0.12
14 组氨酸 g/100g 0.31
15 赖氨酸 g/100g 0.27
16 精氨酸 g/100g 0.25
本实施例中，按重量份比计，各氨基酸的比例如下：天门冬氨酸：苏氨酸：丝氨酸：谷氨酸：脯氨酸：甘氨酸：丙氨酸：缬氨酸：蛋氨酸：异亮氨酸：酪氨酸：亮氨酸：苯丙氨酸：组氨酸：赖氨酸：精氨酸为0.21：0.26：0.35：0.54：0.61：0.23：0.36：0.24：0.14：0.17：0.19：0.03：0.12：0.31：0.27：0.25。
该比例组成合理，含有成人人体所需要8种必需氨基酸中的6种，及含有儿童所额外必需氨基酸—组氨酸。成人人体必需氨酸与非必需氨酸的占比合理为34.17％，必需氨酸占总氨酸酸的比例为25.47％。儿童必需氨酸与非必需氨酸的占比合理为48.61％，必需氨酸占总氨酸酸的比例为32.71％。
同时最大程度的保留了蚕蛹中活性成分。
送检样品中含有85％麦芽糊精，扣除辅料含量，蚕蛹提取物中的氨基酸占物质总量的比例高。
四、本发明采用的鸡蛋白(蛋清蛋白)原料，送自广州检验检测认证集团有限公司检验，检验依据：参照GB5009.124-2016《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》对本样品进行氨基酸种类及各氨基酸比例进行检测，检测结果如下：
表4鸡蛋白氨基酸含量检测结果
序号 检验项目 单位 检验结果
1 天门冬氨酸 g/100g 8.71
2 苏氨酸 g/100g 3.80
3 丝氨酸 g/100g 5.27
4 谷氨酸 g/100g 11.1
5 脯氨酸 g/100g 3.99
6 甘氨酸 g/100g 2.90
7 丙氨酸 g/100g 5.01
8 缬氨酸 g/100g 6.00
9 蛋氨酸 g/100g 3.56
10 异亮氨酸 g/100g 4.37
11 酪氨酸 g/100g 7.01
12 亮氨酸 g/100g 3.01
13 苯丙氨酸 g/100g 5.12
14 组氨酸 g/100g 2.18
15 赖氨酸 g/100g 5.68
16 精氨酸 g/100g 4.40
本发明采用的鸡蛋白是天然食品中最优质的完全蛋白质，其人体消化率为98％，生物价高达94％。含有丰富的人体必需氨基酸和非必需氨基酸，数量充足，必需氨基酸的含量及其相互间的比例与人体的需求十分相近。含有的支链氨基酸如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸既能作为能源物质提供能量，还是谷氨酸盐的前体物质之一；是含硫氨基酸(半胱氨酸、蛋氨酸)的良好来源，能维持体内的谷胱甘肽(GSH)水平，发挥抗氧化作用；是苏氨酸的极好来源，对肠细胞及肠道屏障连贯性提供保护；含大量的赖氨酸和精氨酸，能刺激代谢激素的分泌，促进肌肉生长；在复合蛋白中进行适量配比，可有效提高复合蛋白整体效果，有效提高动物或人体的免疫力。
四、本发明采用的大米蛋白原料，送自广州检验检测认证集团有限公司检验，检验依据：参照GB5009.124-2016《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》对本样品进行氨基酸种类及各氨基酸比例进行检测，检测结果如下：
表5大米蛋白氨基酸含量检测结果
序号 检验项目 单位 检验结果
1 天门冬氨酸 g/100g 7.20
2 苏氨酸 g/100g 2.88
3 丝氨酸 g/100g 3.85
4 谷氨酸 g/100g 14.4
5 脯氨酸 g/100g 3.66
6 甘氨酸 g/100g 3.50
7 丙氨酸 g/100g 4.53
8 缬氨酸 g/100g 5.25
9 蛋氨酸 g/100g 2.29
10 异亮氨酸 g/100g 3.38
11 酪氨酸 g/100g 6.97
12 亮氨酸 g/100g 4.15
13 苯丙氨酸 g/100g 4.67
14 组氨酸 g/100g 2.21
15 赖氨酸 g/100g 2.36
16 精氨酸 g/100g 6.43
本发明采用的大米蛋白，具有氨基酸组成合理和低过敏性特点，分析表明大米蛋白中不仅各种必需氨基酸含量充分，且各种必需氨基酸的比例十分接近完全蛋白。大豆蛋白等其他植物蛋白中缺少的蛋氨酸等，在大米蛋白中却含量较高。大米蛋白中蛋氨酸含量高达2.2％，这是其它植物蛋白质甚至很多动物蛋白质也无法比拟的。大米蛋白不易过敏，易缓解蛋白组合物对人体造成的过敏性，以及其易消化吸收的特性，添加一定比例的大米蛋白可调节复合蛋白组合物人体的消化性、降低过敏性，同时在组合物中起到了营养蛋白补充剂等重要作用，促进组合物整体效果更优。大米蛋白在肠道消化阶段快速消化，10min内产生大量小肽，是良好的抗氧化肽来源，有利于提高复合组合物整体的免疫调节、提高免疫力作用。同时，按照地域饮食习惯，南方以大米为主食；此成分的添加加大南方人的接受程度。
五、本发明采用的小麦低聚肽原料，送自广州检验检测认证集团有限公司检验，检验依据：参照GB5009.124-2016《食品安全国家标准食品中氨基酸的测定》对本样品进行氨基酸种类及各氨基酸比例进行检测，检测结果如下：
表6小麦低聚肽氨基酸含量检测结果
序号 检验项目 单位 检验结果
1 天门冬氨酸 g/100g 2.64
2 苏氨酸 g/100g 2.04
3 丝氨酸 g/100g 3.40
4 谷氨酸 g/100g 32.5
5 脯氨酸 g/100g 10.7
6 甘氨酸 g/100g 2.59
7 丙氨酸 g/100g 2.03
8 缬氨酸 g/100g 3.63
9 蛋氨酸 g/100g 1.50
10 异亮氨酸 g/100g 2.74
11 酪氨酸 g/100g 5.41
12 亮氨酸 g/100g 2.37
13 苯丙氨酸 g/100g 4.35
14 组氨酸 g/100g 2.03
15 赖氨酸 g/100g 1.09
16 精氨酸 g/100g 2.23
本发明采用的小麦低聚肽具有更好的溶解性，作为生物体有效谷氨酰胺的补充形式，从而被高效利用。同时，小麦低聚肽具有缓解心血管疾病功能的小麦低聚肽均具有较好的抗氧化能力，ORAC值(氧自由基吸收能力)高于谷氨酰胺，最高为谷氨酰胺的14.38倍，是一种优秀的抗氧化营养物质来源；本发明的小麦低聚肽的免疫活性强，可增强血清和肝脏SOD活性、增强血清和大脑的GSH-Px活性、升高血清溶血素含量，能够刺激机体淋巴细胞的增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，提高机体抗感染能力，有效提高机体免疫力。在复合蛋白中添加小麦低聚肽有效从增强巨噬细胞的吞噬功能方面，提高复合蛋白组合物的免疫调节能力。同时，按照地域饮食习惯，北方多以小麦为主食；此成分的添加有助于加大北方人的接受程度。
实施例9药理实验
按本实施例5方法制备的本药理实验样品，复合蛋白实验样品中，蚕蛹蛋白喷雾干燥时加入的麦芽糊精量调整为85％外，大枣提取物喷雾干燥时加入麦芽糊精的量为55％，其他参数与本实施例5相同，得到药理实验样品，标记为复合蛋白组合物样品；按实施例5的方法制备蚕蛹提取物，标记为蚕蛹提取物样品。实验为委托具有相应药理实验资质的单位完成，具有第三方单位为：暨南大学中药与天然药物研究院。
一、实验目的
采用拘束应激负荷小鼠模型考察复合蛋白组合物和蚕蛹提取物对小鼠免疫功能是否具有改善作用。
二、实验材料
BALB/C雄鼠48只，7周龄，购于广东省医学实验动物中心(许可证号SCXK(粤)
2018-0002)；饲养温度23±2℃，湿度50±10％。
8号和12号灌胃针；1ml注射器；蒸馏水；复合蛋白组合物和蚕蛹提取物；PBS溶液；2xPBS溶液；PE标记CD3单克隆抗体；FITC标记的CD4、CD8；红细胞裂解液(Tris-NH4Cl)；FBS胎牛血清；RPMI1640培养基。
三、实验步骤
1、分组编号
将购得的48只小鼠随机分为6组，每组8只。组别分别为正常对照组(Control)，拘束应激模型组(Stress)，Stress+复合蛋白组合物高剂量(Stress+GP-H)，Stress+复合蛋白组合物中剂量(Stress+GP-M)，Stress+蚕蛹提取物高剂量(Stress+WP-H)，Stress+蚕蛹提取物中剂量(Stress+WP-M)。
2、剂量确定
复合蛋白组合物的服用参考量为20g/人(按人体体重70kg)，根据《人与动物间按体表面积折算的等效剂量比值表》可换算得小鼠的人体等效剂量约为0.052g/只(按小鼠体重20g)，即2.58g/kg；将此剂量设为中剂量；设置高剂量为中剂量的10倍，即25.8g/kg。
蚕蛹提取物在谷物蛋白复合物中的含量为2.9g/10g，即5.8g/20g，据《人与动物间按体表面积折算的等效剂量比值表》可换算得小鼠的人体等效剂量约为0.015g/只，即0.747g/kg；将此剂量设置为中剂量；设置高剂量为中剂量的10倍，即7.47g/kg。
复合蛋白组合物和蚕蛹提取物根据浓度设置采用蒸馏水溶解，小鼠灌胃量为0.5ml/只/次，每天每只早晚灌胃两次。Control组和Stress组每次给予等剂量的蒸馏水。连续给药21天。
3、拘束造模
从实验的第1天开始，除Control组外，其他组别小鼠每天拘束3小时(18:30～21:30)，给药后拘束。拘束装置为通风良好的50mL尖底聚丙烯塑料离心管，拘束期间小鼠不能进食饮水。control组小鼠同时禁食禁水。小鼠每日称重，最后一天灌胃给药后，异氟烷麻醉小鼠，取材继续下一步实验。
4、免疫功能指标测定：
a.免疫器官指数测定：
取小鼠脾脏，生理盐水清洗后吸干水分称重。按公式免疫器官指数＝免疫器官重(g)/小鼠体重(g)×100％，计算脾脏指数。
b.脾脏免疫细胞检测分析(PE/FITC双染色法分析脾脏T细胞亚群检测[4])：
原代提取脾脏淋巴细胞：置脾脏于玻璃匀浆器中添加1～2ml PBS研磨，再加1mlPBS冲洗玻璃匀浆器，200目筛网过滤。4℃1000rpm离心5min，弃上清液，加入红细胞裂解液(Tris-NH4Cl)2ml，混匀，2min后加2×PBS溶液4ml终止裂解反应，4℃1000rpm离心5min，弃上清液，用2ml PBS溶液洗两次后，加500μL RPMI1640完全培养基重悬，计数。(除裂解反应外，全程在冰上操作)
用完全RPMI1640培养基调整脾脏淋巴细胞浓度为1x107cells/ml[5]，取流式细胞分析专用管，每管加入细胞悬液100μL。每个样本制备2管，进行FITC/PE双色荧光抗体标记。第一管用1μL PE标记抗CD3抗体和0.5μL FITC标记抗CD4抗体，第二管用1μL PE标记抗CD3抗体和0.5μL FTIC标记抗CD8抗体，室温避光孵育20min后，以1000rpm离心5min，去上清，再加500μLPBS洗，以1000rpm离心5min，去上清，重复一次PBS洗涤和离心去上清操作后，各管加振荡混匀后500μL鞘液，震荡摇匀后上机分析，记录各管CD3+％，
CD3+CD4+％，CD3+CD8+％。
c.脾脏T淋巴细胞增殖率的测定[5](MTT法)
用完全RPMI1640培养基调脾细胞浓度为1×106/ml加入96孔板，100μl/孔，再加入100μl ConA(多克隆激活T细胞)，使其终浓度为5μg/ml。置37℃，5％CO2培养箱中孵育72小时，吸出培养基，并加入1ml 5mg/ml MTT和6ml不完全RPMI1640培养基混合液100μl。再置37℃，5％CO2培养箱中孵育4小时。孵育结束后，吸出MTT，加入二甲基亚砜150ul。振荡摇匀，10min后，酶标570nm波长测定各孔光吸收值。
d.腹腔巨噬细胞吞噬功能检测：
将麻醉好的小鼠，用75％乙醇消毒5min。消毒后腹腔注射7ml PBS，按摩腹腔2～3min。然后收集腹腔中的液体，在1000rpm转速下离心5min，根据红细胞残留情况适当加入或者不加红细胞裂解液(加红细胞裂解液的，捂2min左右，加两倍量2×PBS终止；1000rpm，5min离心，弃上清，再用PBS洗两次)。接下来，将提取的巨噬细胞重悬于RPMI-1640培养基，调整细胞浓度至5x106/mL，置于6孔板中孵育3h，每孔2mL。去上清，加入荧光标记的牛血清白蛋白处理的乳胶小珠后，继续孵育40min。40min后，放置于冰上终止吞噬，并收集巨噬细胞，用冰冻PBS洗去表面残留的荧光，再用流式细胞仪分析吞噬功能。
四、数据统计方法
数据以Mean±SD表示，采用SPSS19.0统计软件进行统计学分析，利用One-wayANOVA进行统计学检验，P<0.05表明有统计学差异。GraphPad制作图表。
五、实验结果
a.免疫器官指数
结果显示Stress组相较于Control组脾指数显著降低(P<0.001)，各给药组脾指数相较Stress组均显著上升(P<0.0001或P<0.01)，其中谷物复合蛋白高、中剂量组和蚕蛹提取物高剂量给药组作用更为明显。
b.脾脏T细胞亚群分析
结果显示Stress组CD3+CD4+T细胞(Th，辅助性T细胞)的比例和Control组相比显著降低(P<0.0001)；与Stress组相比，谷物复合蛋白高剂量给药组(P<0.05)、谷物复合蛋白中剂量和蚕蛹提取物高、中剂量给药组(P<0.01)比例均显著回升；而CD3+CD8+T细胞(Tc，细胞毒性T细胞)的比例在各组之间未出现显著性差异(P>0.05)。CD3+CD4+/CD3+CD8+的比值显示，Stress组的结果相较Control组显著降低(P<0.05)，谷物复合蛋白高剂量和蚕蛹提取物高剂量给药组(P<0.01)以及谷物复合蛋白中剂量给药组(P<0.0001)的比值相较Stress组显著回升，蚕蛹提取物中剂量给药组与Control组比较没有显著性差异(P＞0.05)，有回升趋势。
c.脾脏T淋巴细胞增殖率
结果显示，Stress组脾T淋巴细胞增殖率相较Control组显著降低(P<0.001)，谷物复合蛋白高剂量给药组(P<0.001)和蚕蛹提取物高剂量给药组(P<0.01)相比Stress组显著上升。谷物复合蛋白中剂量和蚕蛹蛋白中剂量给药组与Stress组相比没有显著性差异(P>0.05)，谷物复合蛋白中剂量组结果有上升趋势。
d.腹腔巨噬细胞吞噬功能
结果显示，Stress组腹腔吞噬细胞吞噬功能显著下降(P<0.05)，谷物复合蛋白高剂量给药组(P<0.05)、蚕蛹提取物高、中剂量给药组(P<0.01或P<0.05)可显著改善Stress导致的吞噬细胞吞噬功能降低，谷物复合蛋白中剂量给药组与Stress组比较没有显著性差异(P>0.05)，有上升趋势。
六、讨论：
脾脏为机体重要的免疫器官，对机体的体液免疫和细胞免疫起着重要的作用。研究表明拘束负荷导致的脾脏萎缩是由于在应激状态下脾细胞正常结构被破坏，免疫细胞凋亡，其机制可能与应激状态下过量产生的糖皮质激素破坏免疫功能有关。研究结果显示复合蛋白组合物及其主要成分蚕蛹提取物高中剂量组均能改善拘束应激导致的脾指数降低，改善免疫功能。
BALB/c小鼠的免疫以体液免疫为主，故T细胞中的Th亚型(辅助性T细胞)活化通过分泌细胞因子(如：IL-4，IL-5)使得B细胞分化成浆细胞进行体液免疫的功能显得尤为重要；同时，其分泌的IL-2，IFN-γ等细胞因子在抗感染抗肿瘤等免疫反应过程中也发挥着重要的作用[。复合蛋白组合物及其主要成分蚕蛹提取物高中剂量组均能改善拘束应激造成的免疫细胞凋亡，显著增加Th淋巴细胞的数目，增强免疫功能。CD3+CD4+/CD3+CD8+(即Th/Tc)作为免疫系统稳定性的重要指数，对于稳定和调节免疫功能有重要的指示作用[3]。复合蛋白组合物高、中剂量组及蚕蛹提取物高剂量组能显著改善拘束应激造成的CD4+/CD8+T细胞下降，蚕蛹提取物中剂量组虽未能显著改善CD4+/CD8+T细胞，显示一定的回升作用。脾T淋巴细胞的增殖率作为T细胞活化分型的基础，复合蛋白组合物及其主要成分蚕蛹提取物高剂量组能显著提高拘束应激导致的脾T细胞增殖率下降，改善免疫功能。
研究表明，拘束应激能通过诱导ROS等自由基产生，造成免疫功能的紊乱和损伤，而巨噬细胞对自由基敏感，过量的自由基会影响其吞噬功能，影响机体免疫[8]。复合蛋白组合物组及蚕蛹提取物组均能显著改善的巨噬细胞吞噬功能，进而改善免疫功能；复合蛋白组合物中剂量组虽未能显著提高吞噬细胞的吞噬功能，但也有一定程度的提升，对免疫功能有一定改善作用。其可能的机制是通过抗氧化保护免疫防御系统免受自由基损伤，进而改善免疫功能。
七、结论：
复合蛋白组合物及其主要成分蚕蛹提取物均能在一定程度上改善拘束应激造成的免疫功能下降，其作用存在一定的量效关系。在改善免疫功能的效果上，T细胞亚群分布(CD4+/CD8+)结果显示谷物蛋白复合组件中剂量给药组显著高于蚕蛹提取物中剂量给药组(P<0.01)；有部分结果显示，复合蛋白组合物相较于蚕蛹提取物有更好的免疫改善作用。原因可能是谷物蛋白配方起到协同增效作用，对免疫功能的改善作用更有保障。
实施例10
实施例13运用效果试验
样品制备：选择实施例3、4、5方法分别制备得到实验样品，标记为样品3、4、5。上述样品分别制成胶囊剂，制剂卫生符合保健食品标准，制备同样口感的空白安慰剂，标记为空白样品。
实验中使用禁忌：孕妇及蛋白过敏者忌用。
服用方法及剂量：按药物重量计，每次服用标准为20g/人(按人体体重70kg，体重轻者服用量根据体重调增或减，用淀粉为辅料配成同一服用总量)。每天服用2次，分别服用时间为早上和晚上；连续服用30天，未发明明显不良反应。疗效见表7。
病例选择标准：临床经中经诊断为脾虚或脾气虚者或脾胃虚弱，同时临床表现为：不思饮食，营养不良、消瘦或者虚胖；精神不振，形体消瘦，肢体倦怠，少气懒言，面色萎黄或白；容易被病毒感染；生病时间长、易反复。
分组：选择符合病例选择标准的20人，随机分成4组，分别服用样品3、4、5、空白样品，选择病例年龄从26-64岁不等。
疗效判断：
(1)治愈：脾胃功能恢复，临床之前不良反应基本消除，抵抗力好，并有持续好转趋势。
(2)显效：脾胃功能改善，抵抗力增强，并有持续好转趋势。
(3)无效：与用药前一样无改善，或持续恶化。
临床效果观察：
供试人数(例) 治愈(例) 显效(例) 无效(例) 显效率(％)
样品3 5 1 3 1 80
样品4 5 0 4 1 80
样品5 5 1 4 0 100
空白样品 5 0 1 4 20
由上述实验结果可知，本样品的显效率平均达到80％(治愈+显效)，因为个体存在差异，不排队个别病例入选时病征相符性差，且试用的人群基数较小，可能存在一定的误差，但是总体可以改善临床病人脾胃虚弱，不思饮食，导致形体虚弱，蛋白质缺乏，免疫力低下的情况，与空白样品组比，具有显著性差异。制剂上的一点差异，在人体试验中，没有显著性差异，即本发明制备工艺参数内制备的样品疗效相关不大。空白样品显示有一例显效，可能根受试者本身身体基础好，后期在精神方面得到放松，或者受到安慰试剂的心里暗示等，产生了显效结果。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (10)

1.一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤：
a.取蚕蛹，粉碎，过筛，得蚕蛹细碎物；将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取，收集提取液进行离心，取上清液进行微滤得清滤液；将清滤液真空或反渗透浓缩得浓缩液，浓缩液灭菌，即得蚕蛹提取物，备用；
b.取大枣，洗净，湿法粉碎，过筛，得大枣细碎浆；取大枣细碎浆采用低温高压差连续提取，提取液离心，取大枣上清液进行微滤得大枣清液，大枣清液反渗透浓缩得大枣浓缩液，大枣浓缩液灭菌，得大枣提取物，备用；
c.按重量份比，取蚕蛹提取物15-30份，大枣提取物5-15份，原料备用；
d.将c步骤中的各原料混合均匀，即得复合蛋白组合物。
2.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，所述步骤c中，所取的原料还包括：浓缩乳清蛋白15-30份，鸡蛋白10-25份，L-谷氨酰胺10-15份，深度水解乳清蛋白5-10份，大米蛋白3-6份，小麦低聚肽1-3份。
3.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，步骤a中浓缩液灭菌后，按重量百分比计，以浓缩液为底物，加入30-85％的麦芽糊精或阿拉伯胶作为粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得蚕蛹提取物。
4.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，步骤a中低温高压差连续提取溶剂为纯净水，所述低温高压差连续提取的压力为20-40MPa，提取温度为20-35℃，提取次数为1-2次。
5.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，步骤b中大枣浓缩液灭菌后，按重量百分比计，以大枣浓缩液为底物，加入30-65％的麦芽糊精或阿拉伯胶作为底料粘合剂，混合均匀后进行喷雾干燥，即得大枣提取物。
6.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，步骤b中低温高压差连续提取溶剂为纯净水，提取的为20-50MP,提取温度为25-40℃，提取次数为1-2次。
7.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，所述微滤的方法为:采用陶瓷膜过滤，所述陶瓷膜的过滤孔径为100-500nm。
8.根据权利要求1所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，蚕蛹细碎物在用低温高压差连续提取前，先将蚕蛹细碎物采用超临界CO2萃取，萃取完成后再将蚕蛹细碎物用低温高压差连续提取。
9.根据权利要求8所述的一种复合蛋白组合物的制备工艺，其特征在于，所述超临界CO2萃取的萃取压力为25-35MPa，萃取温度为25-45℃，萃取时间为2-3h，分离压力为4-10 MPa，分离温度为15-40℃。
10.权利要求1-9任一项制备方法得到的复合蛋白组合物。
CN201910347950.4A 2019-04-28 2019-04-28 一种复合蛋白组合物的制备工艺 Pending CN110050997A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910347950.4A CN110050997A (zh) 2019-04-28 2019-04-28 一种复合蛋白组合物的制备工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910347950.4A CN110050997A (zh) 2019-04-28 2019-04-28 一种复合蛋白组合物的制备工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110050997A true CN110050997A (zh) 2019-07-26

Family

ID=67321206

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910347950.4A Pending CN110050997A (zh) 2019-04-28 2019-04-28 一种复合蛋白组合物的制备工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110050997A (zh)

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1231844A (zh) * 1998-04-10 1999-10-20 杭州生宝保健食品有限公司 含蚕蛹复合氨基酸口服液及其制备方法
CN1763091A (zh) * 2005-02-28 2006-04-26 成都市裕邑丝绸有限责任公司 蛹蛋白及其生产工艺
CN1788822A (zh) * 2004-12-15 2006-06-21 刘乡乡 低温差压式提取技术
CN105124131A (zh) * 2015-10-27 2015-12-09 武汉科技大学 一种浅黄色无臭脱脂蚕蛹蛋白粉及其制备方法
CN105286022A (zh) * 2015-10-12 2016-02-03 十堰天翔生物科技股份有限公司 一种必需氨基酸含量丰富、构成合理的复合蛋白粉及其制备方法
CN107440085A (zh) * 2017-07-11 2017-12-08 四川省蚕业科技开发总公司 一种食用蚕蛹的生产工艺
CN108813627A (zh) * 2018-07-09 2018-11-16 哈尔滨拜仑斯特临床营养有限公司 一种具有消化道免疫调节功能的特殊医学用途配方食品组合物及其制备方法
CN109170118A (zh) * 2018-09-26 2019-01-11 十堰天翔生物科技股份有限公司 一种蚕蛹蛋白粉的制备方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1231844A (zh) * 1998-04-10 1999-10-20 杭州生宝保健食品有限公司 含蚕蛹复合氨基酸口服液及其制备方法
CN1788822A (zh) * 2004-12-15 2006-06-21 刘乡乡 低温差压式提取技术
CN1763091A (zh) * 2005-02-28 2006-04-26 成都市裕邑丝绸有限责任公司 蛹蛋白及其生产工艺
CN105286022A (zh) * 2015-10-12 2016-02-03 十堰天翔生物科技股份有限公司 一种必需氨基酸含量丰富、构成合理的复合蛋白粉及其制备方法
CN105124131A (zh) * 2015-10-27 2015-12-09 武汉科技大学 一种浅黄色无臭脱脂蚕蛹蛋白粉及其制备方法
CN107440085A (zh) * 2017-07-11 2017-12-08 四川省蚕业科技开发总公司 一种食用蚕蛹的生产工艺
CN108813627A (zh) * 2018-07-09 2018-11-16 哈尔滨拜仑斯特临床营养有限公司 一种具有消化道免疫调节功能的特殊医学用途配方食品组合物及其制备方法
CN109170118A (zh) * 2018-09-26 2019-01-11 十堰天翔生物科技股份有限公司 一种蚕蛹蛋白粉的制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
崔新颖等: "新型蚕蛹虫草对小鼠免疫增强作用的实验研究", 《北华大学学报(自然科学版)》 *
秦伟佳等: "蚕蛹蛋白精制及其氨基酸成分分析", 《食品工业科技》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101696444B (zh) 多肽提取物及其制备方法和应用
CN109757732A (zh) 一种口服流质多肽粉及其制备方法
CN102613567B (zh) 一种大豆多肽营养液及其制备方法和应用
CN107616402A (zh) 一种黑米小分子肽复配的固体饮料及其制备方法
CN107348365A (zh) 一种新型纳豆多肽保健食品
CN110013489A (zh) 一种蚕蛹提取物及其制备工艺和应用
CN106174484A (zh) 具有止咳平喘功效的酵素组合物、泡腾颗粒及制法
CN102028230B (zh) 一种保健品辅料及其应用
CN107439787A (zh) 一种具有抗pm2.5颗粒物功效的核桃低聚肽
CN110050997A (zh) 一种复合蛋白组合物的制备工艺
CN101647816A (zh) 一种动物皮类的酶解产物及其用途
CN101574145B (zh) 一种营养强化补剂
CN109497470A (zh) 一种蛋白核小球藻多肽缓解增肥组合物及其制备方法
CN110604295A (zh) 一种复合骨肽及其制备方法
CN105687480A (zh) 一种免疫调节的中药组合物及制剂
CN110050998A (zh) 一种具有免疫调节作用的复合蛋白组合物及其应用
CN104939098B (zh) 一种增强骨免疫力、补钙锁钙的保健食品及其制备方法
CN112617197A (zh) 一种抗缺氧的食品、保健品或药物组合物及其制备方法和用途
CN106214844A (zh) 一种具有减肥和免疫调节作用的组合物及其制备方法
CN1411838A (zh) 一种治疗糖尿病的药
CN105770133A (zh) 一种具有补血和调节免疫功能的药品或者保健食品
CN111227229A (zh) 一种植物源营养粉及其制备方法和食用方法
CN100404044C (zh) 一种含鹿胎的祛黄褐斑药物和功能食品及其制备方法
CN109549217A (zh) 一种以白桦茸多肽、舞茸多肽等多种成分复配制备的特膳食品
CN109349647A (zh) 一种基于肠胃保健的复方氨基酸口服液及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190726