CN109912666A - 一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从枳壳中同时制备高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法。首先采用超临界CO2萃取技术提取枳壳中的挥发油，然后采用超临界CO2萃取技术提取柚皮苷和新橙皮粗提混合物。粗提混合物经大孔吸附树脂分离纯化后得到柚皮苷和新橙皮苷。本发明提供的方法具有提取率高，产品纯度高，环境友好，成本低廉的优点，适合高纯度柚皮苷和新橙皮苷的工业化生产。

Description

一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法

技术领域

本发明属于枳壳有效成分提取技术领域，具体涉及一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法。

背景技术

柚皮苷的结构式如图1所示(其中R：鼠李糖基)，所述柚皮苷具有抗炎、抗病毒、抗癌、抗突变、抗过敏、抗溃疡、镇痛、降血压活性，能降低胆固醇，减少血栓的形成，改善局部微循环和营养供给，可用于生产防治心脑血管疾病的药物。柚皮苷也是合成新橙皮苷和柚皮苷二氢查尔酮的原料。

新橙皮苷的结构式如图1所示(其中R：鼠李糖基)，所述新橙皮苷具有清除自由基、促进胃动力、降血脂、抗动脉粥样硬化、保护神经系统、抗过敏、抗癌等活性，在医学上有广泛用途。新橙皮苷也是甜味剂新橙皮苷二氢查尔酮的原料。

上述新橙皮苷的重要来源主要是从枳壳中提取得到；现有技术中对枳壳中新橙皮苷的提取方法包括以下几种方法：

1、瞿海滨等(CN1594344A)公开了一种从枳壳中分离高纯度新橙皮苷的方法。该方法以枳壳中药饮片为原料，乙醇为溶剂，通过多次回流提取得到粗黄酮提取物。粗黄酮提取物通过大孔吸附树脂分离，正丁醇多次萃取，甲醇多次重结晶，得到纯度>98％的新橙皮苷，提取率0.9％。

2、宋晚平等(CN101293906A)公开了一种从枳壳中提取高纯度新橙皮苷的方法。该方法采用溶剂回流提取法多次提取得到粗提取浓缩物，乙酸乙酯萃取除杂，盐析得到新橙皮苷粗品，乙醇重结晶得到纯度为95-97％的新橙皮苷。

柚皮苷主要存在于柚子、葡萄柚、酸橙及其变种的果皮中；而枳壳中的柚皮苷含量较低，较少受到关注。现有技术中对枳壳中的柚皮苷的提取方法包括以下几种：

1、苏薇薇等(CN1431216A)公开了一种枳壳柚皮苷的提取方法。该方法以水为溶剂，多次回流提取得到粗提物。粗提物经大孔吸附树脂分离、洗脱、浓缩，水重结晶得到柚皮苷，得率90.7％，但未提及柚皮苷纯度。

2、王桂花等(时珍国医国药，2009，20(11)，2712-2713)研究了枳壳中柚皮苷的微波辅助萃取方法。

而柚皮苷又是制得新橙皮苷的原材料，为实现对枳壳中有效成分的综合利用，需要提供一种能从枳壳中同时提取柚皮苷与新橙皮苷的方法。

现有技术中对枳壳中同时提取柚皮苷与新橙皮苷的方法有：刘学仁等(中成药，2013， 35(2)，420-423)对枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的微波辅助提取工艺进行了研究。提取条件为：80％乙醇作溶剂，微波萃取仪功率400W，提取时间10min，提取温度40℃。与回流提取法相比，提取时间大大缩短，效率明显提高。由于柚皮苷和新橙皮苷是含有酚羟基的黄酮类化合物，对热敏感，对枳壳中柚皮苷和新橙皮苷的微波辅助提取工艺进行了研究与索氏提取、超声辅助提取等方法相比，降低了提取温度，保证了黄酮成分热稳定性，提高了提取率，但是并没有预期提取率，并且该提取工艺针对提取物的纯度也没过多介绍，不能为为甜味剂柚皮苷二氢查尔酮和新橙皮苷二氢查尔酮的合成提供高纯度的原料。

为解决上述提取物纯度低的问题，胡昌盛等(临床合理用药，2013，6(11C)，58-60)采用高速逆流色谱法从枳壳中快速制备高纯度柚皮苷和新橙皮苷，纯度>99％，。采用此方法虽然可以得到高纯度的柚皮苷和新橙皮苷，但是目前的高速逆流色谱只能实现上百毫克甚至数十克级的制备分离，一次分离量较少，不利于小批量生成。

综上，有必要开发一种从枳壳提取柚皮苷与新橙皮苷的提取方法，使柚皮苷与新橙皮苷具有高提取率且具有高纯度，能实现枳壳的综合利用并为甜味剂柚皮苷二氢查尔酮和新橙皮苷二氢查尔酮的合成提供高纯度的原料。

发明内容

针对现有技术中所存在的不足，本发明提供了一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，该方法能提高枳壳中柚皮苷与新橙皮苷的提取率，同时还能制得高纯度的柚皮苷与新橙皮苷单品。

为实现上述目的，本发明采用了如下的技术方案：一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，具体包括如下步骤：

1)选取枳壳烘干、粉碎、过筛，将过筛后的物料装入超临界CO2萃取仪的萃取釜中；

2)对步骤1)中的萃取釜进行参数设定，选定萃取温度为20～40℃、萃取压力20～40MPa、萃取时间1～3h、CO2流速速50～80kg/h，静态提取挥发油，收集一次萃取液；

3)将步骤2)中萃取挥发油后的枳壳渣保留在萃取釜中，加入乙醇夹带剂，选定萃取温度40～60℃、萃取压力40～60MPa、萃取时间1～3h以及CO2流速20～40kg/h，静态提取柚皮苷和新橙皮苷，收集二次萃取液；

4)将步骤3)中的二次萃取液在50℃下减压浓缩至干得到柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物；

5)将步骤4)中的粗提混合物采用大孔吸附树脂进行层析分离，采用乙醇作为洗脱剂进行洗脱，并分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液；

6)将步骤5)中含有柚皮苷的洗脱液与含有新橙皮苷的洗脱液分别进行减压浓缩、干燥，得到对应的柚皮苷与新橙皮苷。

相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、柚皮苷和新橙皮苷是含有酚羟基的黄酮类物质，在高温下易氧化形成醌类物质，本发明采用的超临界CO2萃取法的萃取温度较低，能够保留柚皮苷和新橙皮苷的天然结构，减少杂质的形成，从而具有高的提取率。

2、枳壳挥发油的先期提取减轻了柚皮苷和新橙皮苷后续分离纯化的压力。

3、提取的粗提混合物通过大孔吸附树脂分离纯化，能够以高的收率同时得到高纯度的柚皮苷和新橙皮苷。

4、本发明提供的方法具有提取率高，产品纯度高，环境友好，成本低廉的优点，适合高纯度柚皮苷和新橙皮苷的工业化生产。

具体实施方式

本发明涉及了一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，具体包括如下步骤：

下列实施例中选择的原料均为“渝枳1号”枳壳。枳壳烘干、粉碎，过60目筛网。HPLC法测定其中柚皮苷和新橙皮苷含量分别为7.3％和7.1％。

实施例1

1)选取枳壳烘干、粉碎、过60目筛网；HPLC法测定其中柚皮苷和新橙皮苷含量分别为7.3％和7.1％；取500g过筛后的物料装入超临界CO2萃取仪的萃取釜中。

2)对步骤1)中的萃取釜进行参数设定，选定萃取温度为20℃、萃取压力20MPa、萃取时间1h、CO2流速速50kg/h，静态提取挥发油，固液分离后，减压得到7.0ml一次萃取液。

3)将步骤2)中萃取挥发油后的枳壳渣保留在萃取釜中，按液固比5：1(ml：g)加入2.5L 80％乙醇作夹带剂，选定萃取温度40℃、萃取压力40MPa、萃取时间1h以及CO2 流速20kg/h，静态提取柚皮苷和新橙皮苷，通过固液分离后，收集二次萃取液。

4)将步骤3)中的二次萃取液在50℃下减压浓缩至干得到柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物；HPLC法测定其中柚皮苷和新橙皮苷含量分别为33％和31％。

5)取20g步骤4)中的粗提的混合物，制备浓度为0.4g/ml的上样溶液，用盐酸调整上样溶液pH为4，以1.6BV/h的速度上样于装填AB-8的大孔吸附树脂柱上，用体积分数 60％的乙醇洗脱，洗脱流速为0.5V/h，分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液。

6)将步骤5)中含有柚皮苷的洗脱液与含有新橙皮苷的洗脱液分别进行减压浓缩、干燥，得到柚皮苷6.4g，新橙皮苷5.8g，计算得：柚皮苷和新橙皮苷的提取率法分别为91％和86％。并采用HPLC法测定柚皮苷和新橙皮苷含量分别为94％和88％。

实施例2

1)选取枳壳烘干、粉碎、过60目筛网，取500g过筛后的物料装入超临界CO2萃取仪的萃取釜中；

2)对步骤1)中的萃取釜进行参数设定，选定萃取温度为30℃、萃取压力35MPa、萃取时间2h、CO2流速速60kg/h，静态提取挥发油，固液分离后，减压得到8.0ml一次萃取液；

3)将步骤2)中萃取挥发油后的枳壳渣保留在萃取釜中，按液固比5：1(ml：g)加入2.5L 80％乙醇作夹带剂，选定萃取温度50℃、萃取压力50MPa、萃取时间2h以及CO2 流速30kg/h，静态提取柚皮苷和新橙皮苷，通过固液分离后，收集二次萃取液；

4)将步骤3)中的二次萃取液在50℃下减压浓缩至干得到柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物；

5)取20g步骤4)中的粗提混合物，制备浓度为0.4g/ml的上样溶液，用盐酸调整上样溶液pH4为，以1.2BV/h的速度上样于装填AB-8的大孔吸附树脂柱上，以体积分数70％的乙醇洗脱，洗脱流速为1.0V/h，分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液；

6)将步骤5)中含有柚皮苷的洗脱液与含有新橙皮苷的洗脱液分别进行减压浓缩、干燥，得到柚皮苷6.8g，新橙皮苷6.2g，计算得：柚皮苷和新橙皮苷的提取率法分别为92％和87％。并采用HPLC法测定柚皮苷和性橙皮苷的纯度分别为97.2％和98.5％。

实施例3

1)选取枳壳烘干、粉碎、过60目筛网，取500g过筛后的物料装入超临界CO2萃取仪的萃取釜中；

2)对步骤1)中的萃取釜进行参数设定，选定萃取温度为40℃、萃取压力40MPa、萃取时间3h、CO2流速速80kg/h，静态提取挥发油，固液分离后，减压得到8.0ml一次萃取液；

3)将步骤2)中萃取挥发油后的枳壳渣保留在萃取釜中，按液固比5：1(ml：g)加入2.5L 80％乙醇作夹带剂，选定萃取温度60℃、萃取压力60MPa、萃取时间3h以及CO2 流速40kg/h，静态提取柚皮苷和新橙皮苷，通过固液分离后，收集二次萃取液；

4)将步骤3)中的二次萃取液在50℃下减压浓缩至干得到柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物；

5)取20g步骤4)中的粗提的混合物，制备浓度为0.5g/ml的上样溶液，用盐酸调整上样溶液pH为4，以2BV/h的速度上样于装填AB-8的大孔吸附树脂柱上，用体积分数 90％的乙醇洗脱，洗脱流速为1.5V/h，分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液。

6)将步骤5)中含有柚皮苷的洗脱液与含有新橙皮苷的洗脱液分别进行减压浓缩、干燥，得到柚皮苷6.6g，新橙皮苷6.4g，计算得：柚皮苷和新橙皮苷的提取率法分别为92％和89％。并采用HPLC法测定柚皮苷和新橙皮苷含量分别为94％和91％。

实施例4

取实施例2中步骤4)中的柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物固体物20g，制备浓度为0.5g/ml的上样溶液，用盐酸调整pH5，以1.5BV/h的速度上样于装填D-101的大孔吸附树脂柱上，以体积分数80％的乙醇洗脱，洗脱流速为1.2V/h。分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液。洗脱液分别减压浓缩得到柚皮苷6.6g，新橙皮苷6.0g，计算得：柚皮苷和新橙皮苷的提取率法分别为94％和89％。HPLC法测定柚皮苷和性橙皮苷的纯度分别为 97.8％和98.2％。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明保护的范围内。

Claims (5)

1.一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

1)选取枳壳烘干、粉碎、过筛，将过筛后的物料装入超临界CO2萃取仪的萃取釜中；

2)对步骤1)中的萃取釜进行参数设定，选定萃取温度为20～40℃、萃取压力20～40MPa、萃取时间1～3h、CO2流速速50～80kg/h，静态提取挥发油，收集一次萃取液；

3)将步骤2)中萃取挥发油后的枳壳渣保留在萃取釜中，加入乙醇夹带剂，选定萃取温度40～60℃、萃取压力40～60MPa、萃取时间1～3h以及CO2流速20～40kg/h，静态提取柚皮苷和新橙皮苷，收集二次萃取液；

4)将步骤3)中的二次萃取液在50℃下减压浓缩至干得到柚皮苷和新橙皮苷的粗提混合物；

5)将步骤4)中的粗提混合物采用大孔吸附树脂进行层析分离，采用乙醇作为洗脱剂进行洗脱，并分别收集含有柚皮苷和新橙皮苷的洗脱液；

6)将步骤5)中含有柚皮苷的洗脱液与含有新橙皮苷的洗脱液分别进行减压浓缩、干燥，得到对应的柚皮苷与新橙皮苷。

2.根据权利要求1所述的一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，其特征在于：所述步骤3)中的乙醇浓度为80％、液固比为5ml：1g。

3.根据权利要求1所述的一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，其特征在于：所述步骤5)中的大孔吸附树脂采用弱极性或非极性大孔吸附树脂。

4.根据权利要求3所述的一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，其特征在于：所述大孔吸附树脂为AB-8或D101。

5.根据权利要求1所述的一种从枳壳中同时提取高纯度柚皮苷与新橙皮苷的方法，其特征在于：所述步骤5)中乙醇的体积分数60～90％。