CN109970828A - 从橘红中提取柚皮苷的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从橘红中提取柚皮苷的方法，包括：将橘红制成粉末，按料液比为1:55～65g/ml加入体积分数为45～55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35～45min，水浴温度为50～60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液进行旋蒸蒸干。本发明的方法装置简单，操作简便，易于控制反应温度，提取时间短，提取效果较好，提取率高，同时选用乙醇做溶剂提取柚皮苷，具有价格低廉、无污染、可用于回收的优点。

Description

从橘红中提取柚皮苷的方法
技术领域
本发明涉及植物活性物质提取领域。更具体地说，本发明涉及一种从橘红中提取柚皮苷的方法。
背景技术
橘红为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥外层果皮，具有燥湿化痰，理气宽中的功效。橘红中包含大量黄酮类物质，其主要成分是柚皮苷及少量的枳属苷，其中柚皮苷含量最多，约占80％，而柚皮苷又具有抗氧化、抗肿瘤、降胆固醇、降血糖等多种作用，因此不少研究人员在考虑从橘红中提取出柚皮苷，现有的提取方法已有有机溶剂提取法、碱性溶液提取法、超声波辅助提取法、超临界流体萃取法、酶辅助提取法等，但是无一例外的，这些方法的提取率均不高。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种提取率较高的从橘红中提取柚皮苷的方法。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种从橘红中提取柚皮苷的方法，包括：将橘红制成粉末，按料液比为1:55～65g/ml加入体积分数为45～55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35～45min，水浴温度为50～60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液进行旋蒸蒸干。
优选的是，橘红粉末与乙醇溶液的料液比为1:60g/ml。
优选的是，乙醇溶液的体积分数为50％。
优选的是，水浴温度为55℃。
优选的是，水浴加热回流的时间为40min。
优选的是，橘红粉末与乙醇溶液的料液比为1:55g/ml，乙醇溶液的体积分数为55％，水浴温度为55℃，水浴加热回流的时间为35min。
优选的是，橘红粉末由以下方法制备而成：将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛。
优选的是，橘红粉末由以下方法制备而成：将橘红果实置于微波加热装置中进行微波预处理，微波处理功率为250W，处理时间为50min，再将橘红果实切成切片，置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-30℃，冷冻时间为2h，真空度为-0.08Mpa，升华干燥温度为55℃，升华干燥时间为3h，接着用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
所述橘红粉末在加入乙醇溶液前，还经过以下处理：将橘红粉末置于非金属密闭容器中，通入负离子浓度为5×104个/cm3的负离子气体至密闭容器中压力为0.2Mpa，再将该密闭容器置于交变磁场-电场联合处理1.5～2.5h，其中电场在水平方向设置，电场强度为12V/m，交变频率为30Hz，磁场在竖直方向设置，磁场强度为2A/m，交变频率为50Hz。
本发明至少包括以下有益效果：本发明采用加热回流的方法提取柚皮苷，方法装置简单，操作简便，易于控制反应温度，提取时间短，提取效果较好，提取率高，同时选用乙醇做溶剂提取柚皮苷，具有价格低廉、无污染、可用于回收的优点。另外，用微波预处理橘红果实能够活化橘红果实中的柚皮苷等成分，再用真空冷冻干燥处理去除橘红果实中的水分，还能够保持橘红果实中的柚皮苷等成分不被破坏和挥发出去，采用负离子气体高压处理橘红粉末后，再通过交变磁场-电场联合处理能够还原部分橘红粉末制备时部分被氧化的柚皮苷，进而提高柚皮苷的提取率。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为本发明所述柚皮苷标准品的标准曲线。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
<原料>广东化州产的橘红果实；
<试剂>柚皮苷标准品(批号为HN206558198宝鸡市辰光生物科技有限公司)、乙醇(分析纯)、甲醇(色谱纯)。
<实施例1>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:55g/ml加入体积分数为45％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35min，水浴温度为50℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例2>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:60g/ml加入体积分数为50％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35min，水浴温度为55℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例3>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:65g/ml加入体积分数为55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35min，水浴温度为60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例4>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:55g/ml加入体积分数为50％的乙醇溶液，水浴加热回流提取40min，水浴温度为60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例5>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:60g/ml加入体积分数为55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取40min，水浴温度为50℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例6>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:65g/ml加入体积分数为45％的乙醇溶液，水浴加热回流提取40min，水浴温度为55℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例7>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:55g/ml加入体积分数为55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取45min，水浴温度为55℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例8>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:60g/ml加入体积分数为45％的乙醇溶液，水浴加热回流提取45min，水浴温度为60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例9>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:65g/ml加入体积分数为50％的乙醇溶液，水浴加热回流提取45min，水浴温度为50℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例10>
步骤一、将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:55g/ml加入体积分数为55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35min，水浴温度为55℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<实施例11>
步骤一、将橘红果实置于微波加热装置中进行微波预处理，微波处理功率为250W，处理时间为50min，再将橘红果实切成切片，置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-30℃，冷冻时间为2h，真空度为-0.08Mpa，升华干燥温度为55℃，升华干燥时间为3h，接着用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
步骤二、将橘红粉末置于搪瓷反应釜中，通入负离子浓度为5×104个/cm3的负离子空气至密闭容器中压力为0.2Mpa，再将该密闭容器置于交变磁场-电场联合处理1.5～2.5h，其中电场在水平方向设置，电场强度为12V/m，交变频率为30Hz，磁场在竖直方向设置，磁场强度为2A/m，交变频率为50Hz；
步骤三、精密称取橘红粉末(40目)1.00g，按料液比为1:55g/ml加入体积分数为55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35min，水浴温度为55℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液转移至旋转蒸发仪蒸干。
<样品溶液制备>
加入50mL浓度为50％甲醇至实施例最后蒸干的容器中，充分溶解后，精密量取5mL转移至100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用1mL一次性注射器吸取该溶液过2μm滤膜至样品瓶，即得。
按上述方法分别配制实施例1～11的样品溶液。
<HPLC色谱条件>
参照2015版药典，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇-水(81:19)；流速0.8mL/min，柱温29℃，检测波长为283nm，进样量10μL，按橙皮苷峰计算理论板数不低于2000。
<建立标准曲线>
精密称取柚皮苷标准品15mg,加至50mL容量瓶中，加入甲醇到该容量瓶中直至刻度，充分摇匀即得浓度为300ug/ml的柚皮苷标准溶液，分别稀释至浓度为64、132、182、241ug/ml，即可配制得浓度梯度为64、132、182、241、300ug/ml的标准品溶液。参照<HPLC色谱条件>进行分析，进样体积为10uL。以样品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，如图1所示。
由图1可得：以柚皮苷标准品浓度为横坐标，HPLC色谱中峰面积为纵坐标，柚皮苷标准品浓度在0～300ug/ml范围内与HPLC色谱峰面积呈良好的线性相关，相关系数R2＝0.9999，回归方程为y＝22041x–24339。
<计算样品溶液浓度>
将实施例1～11的样品溶液分别参照<HPLC色谱条件>进行分析，分别获得实施例1～11的样品溶液中柚皮苷的图谱，再按照柚皮苷标准曲线方程分别计算实施例1～11的样品溶液浓度，结果见表1。
表1、样品溶液浓度(ug/ml)
实施例1 145.57±0.09 实施例5 125.00±0.03 实施例9 136.40±0.02
实施例2 136.69±0.04 实施例6 128.91±0.05 实施例10 147.36±0.03
实施例3 144.60±0.08 实施例7 141.62±0.03 实施例11 150.21±0.04
实施例4 128.08±0.05 实施例8 125.96±0.04
<计算柚皮苷提取率>
柚皮苷提取率(％)＝C×A×V/m×100％；
其中，C为供试品柚皮苷的浓度(mg/ml)；A为稀释倍数；V为提取液体积(mL)；m为样品质量(mg)，而稀释倍数为固定值20，提取液体积为固定值50ml；
所以，将实施例1～11的柚皮苷提取率结果如表2所示。
表2、柚皮苷提取率(％)
<对比例1>
授权公告号为CN107397223B公开的一种柚皮苷提取方法，具体步骤包括：
(1)称取柚子皮粉，加入6-8倍质量的水浸泡2-6小时；
(2)加入菠萝蛋白酶250U/g，调pH至6.5-8.0，在50-55℃下酶解反应10-60min，加热至100℃使酶灭活5-10分钟后冷却；
(3)加入纤维素酶50U/g，果胶酶100U/g，调pH至4.0-5.0，在45-60℃下酶解0.5-4h，加热至100℃使酶灭活10分钟后冷却；
(4)过滤得到柚皮苷提取液。
该方法的柚皮苷提取率为9.14％。
在这篇专利中还公开了其他几种提取方法的柚皮苷提取率，如专利号为ZL201510895047.3公开的提取方法的提取率为4.65％，贾东英等人发表在《中草药》期刊2002年第33卷第9期的“柚皮中柚皮苷的乙醇提取工艺研究”中的最高提取率为6.75％，闻永举等人发表在《江苏农业科学》期刊2008年第4期的“柚皮中柚皮苷提取工艺研究”中的最高提取率为2.64％。
通过对比实施例1～11提供的提取方法的提取率和对比例1中公开的提取方法的柚皮苷提取率，不难发现，本发明提供的提取方法的提取率明显要好于对比例1中的。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

Claims (8)

1.从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，将橘红制成粉末，按料液比为1:55～65g/ml加入体积分数为45～55％的乙醇溶液，水浴加热回流提取35～45min，水浴温度为50～60℃，再将乙醇溶液过滤，将滤液进行旋蒸蒸干。
2.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，橘红粉末与乙醇溶液的料液比为1:60g/ml。
3.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，乙醇溶液的体积分数为50％。
4.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，水浴温度为55℃。
5.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，水浴加热回流的时间为40min。
6.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，橘红粉末与乙醇溶液的料液比为1:55g/ml，乙醇溶液的体积分数为55％，水浴温度为55℃，水浴加热回流的时间为35min。
7.如权利要求1所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，橘红粉末由以下方法制备而成：将橘红果实切片，于55℃烘干至恒重，再用粉碎机粉碎，过40目筛。
8.如权利要求7所述的从橘红中提取柚皮苷的方法，其特征在于，橘红粉末由以下方法制备而成：将橘红果实置于微波加热装置中进行微波预处理，微波处理功率为250W，处理时间为50min，再将橘红果实切成切片，置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，冷冻温度为-30℃，冷冻时间为2h，真空度为-0.08Mpa，升华干燥温度为55℃，升华干燥时间为3h，接着用粉碎机粉碎，过40目筛，得橘红粉末；
所述橘红粉末在加入乙醇溶液前，还经过以下处理：将橘红粉末置于非金属密闭容器中，通入负离子浓度为5×104个/cm3的负离子气体至密闭容器中压力为0.2Mpa，再将该密闭容器置于交变磁场-电场联合处理1.5～2.5h，其中电场在水平方向设置，电场强度为12V/m，交变频率为30Hz，磁场在竖直方向设置，磁场强度为2A/m，交变频率为50Hz。
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