发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种从番茄中提取的以水溶性皂苷类化合物为主要成分的番茄水溶性皂苷提取物,以及这种提取物的制备方法及其在制备治疗高血脂症的药中的应用。
本发明的技术方案如下:
一种番茄水溶性皂苷提取物,它是取新鲜番茄洗净,打浆,酶解,酶解液过滤后经大孔树脂柱分离,体积浓度为80~100%的乙醇洗脱,洗脱液减压浓缩,干燥而制得,其中番茄皂苷A含量≥17%。
本发明所述的番茄水溶性皂苷提取物中,番茄皂苷A(Esculeosides A)为其中主要的水溶性皂苷成分,其化学结构式如下式所示:
申请人以番茄皂苷A纯品(99.0%)为对照,采用蒸发光散射-高效液相色谱法(ELSD-HPLC)进行检测,测得提取物中番茄皂苷A的含量≥17%。所采用的色谱条件为色谱柱:ZORBAX SB-C18柱(4.6mm×150mm,5μm);柱温:30℃;流动相:甲醇-水(梯度洗脱:0→5min:15%→30%甲醇;5→12min:30%→60%甲醇;12→20min:60%→80%甲醇);检测时间:20min;流速:0.8ml/min;进样量:10μl。ELSD检测器参数:漂移管温度:100℃;空气流速:2.7L/min。
上述番茄水溶性皂苷提取物的制备方法,包括以下步骤:
1)打浆、酶解:取新鲜番茄洗净,打碎成浆汁,加入相当于原料重量0.04~0.06%的果胶酶,于50~60℃条件下保温酶解1.5~2h;
2)过滤:酶解液先用80~100目滤布粗滤,所得滤液再经离心机离心分离,收集上清液;
3)吸附,洗脱:所得上清液过大孔树脂柱,水洗树脂柱直至流出液澄清,然后用体积浓度为80~100%的乙醇洗脱,收集洗脱液;
4)浓缩,干燥:洗脱液减压浓缩至浸膏状,所得浸膏于真空条件下干燥,即得。
其中:
步骤1)中,所述的番茄可为市售蔬菜用的大番茄和水果用的樱桃小番茄;所述的果胶酶可为市售食品添加剂用的果胶酶。
步骤2)中,离心机的转速优选为3000~5000r/min,时间为8~12min。
步骤3)中,大孔树脂的用量优选为原料重量的0.05~0.1倍;乙醇的用量为树脂柱体积的4~6倍。
步骤3)中,大孔树脂的型号可为D101型、AB-8型或Diaion HP20型。吸附流速优选为2~5倍柱体积/小时(BV/h),解吸的流速优选为8~10BV/h。
步骤4)中,洗脱液优选在旋转蒸发仪中在0.04~0.05Mpa、60℃以下条件下减压回收乙醇,然后进一步在0.06~0.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状;所得浸膏置于80℃以下,真空度为0.08~0.09Mpa条件下真空干燥。
本发明还提供所述番茄水溶性皂苷提取物在制备治疗高脂血症的药中的应用。
具体地说:
是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇水平的药中的应用。
是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中甘油三酯水平的药中的应用。
是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中低密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。
是番茄水溶性皂苷提取物在制备提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。
也可以是番茄水溶性皂苷提取物在制备降低血清中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇水平,同时提高血清中高密度脂蛋白胆固醇水平的药中的应用。
本发明所述的番茄水溶性皂苷提取物提取工艺简单,产品中的番茄皂苷A的重量含量≥17%,有很好的调节血脂的作用。
具体实施方式
下面以实施例对本发明作进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
以下实施例中,乙醇的浓度均为体积浓度。
实施例1:番茄水溶性皂苷提取物的制备
1)精选成熟、无腐烂的新鲜樱桃小番茄果实1000g,洗净,用搅碎机打碎成浆汁;加入相当于鲜果重量0.05%的果胶酶,搅拌均匀,60℃保温酶解澄清2小时;
2)酶解液先用100目滤布粗滤,粗滤液经离心机离心10min,转速为4000r/min,分离完毕后倾出上清液;
3)上清液上D101型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.05倍,吸附流速为3BV/h),然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清,再用5倍柱体积、100%的乙醇洗脱(流速为9BV/h),收集洗脱液;
4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中,在0.05Mpa、60℃条件下减压回收乙醇,并进一步在0.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状,浸膏转入真空干燥箱,在真空度为0.09Mpa,温度为60℃条件下真空干燥,粉碎,得到番茄总皂苷2.7g,得率为0.27%。
经蒸发光散射-高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为23.83%。
实施例2:番茄水溶性皂苷提取物的制备
1)精选成熟、无腐烂的新鲜樱桃小番茄果实1000g,洗净,用搅碎机打碎成浆汁;加入相当于鲜果重量0.05%的果胶酶,搅拌均匀,50℃保温酶解澄清1.5小时;
2)酶解液先用80目滤布粗滤,粗滤液经离心机离心10min,转速为4000r/min,分离完毕后倾出上清液;
3)上清液上AB-8型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.05倍,吸附流速为4BV/h),然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清,再用6倍柱体积、80%的乙醇洗脱(流速为10BV/h),收集洗脱液;
4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中,在0.05Mpa、60℃条件下减压回收乙醇,并进一步在0.07Mpa条件下减压浓缩至浸膏状,浸膏转入真空干燥箱,在真空度为0.09Mpa,温度为30℃条件下真空干燥,粉碎,得到番茄总皂苷2.1g,得率为0.21%。
经蒸发光散射-高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为23.43%。
实施例3:番茄水溶性皂苷提取物的制备
1)精选成熟、无腐烂的新鲜大番茄果实1000g,洗净,用搅碎机打碎成浆汁;加入相当于鲜果重量0.04%的果胶酶,搅拌均匀,60℃保温酶解澄清2小时;
2)酶解液先用100目滤布粗滤,粗滤液经离心机离心8min,转速为3000r/min,分离完毕后倾出上清液;
3)上清液上Diaion HP20型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.1倍,吸附流速为4BV/h),然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清,再用5倍柱体积、90%的乙醇洗脱(流速为8.5BV/h),收集洗脱液;
4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中,在0.04Mpa、50℃条件下减压回收乙醇,并进一步在0.06Mpa条件下减压浓缩至浸膏状,浸膏转入真空干燥箱,在真空度为0.08Mpa,温度为80℃条件下真空干燥,粉碎,得到番茄总皂苷1.9g,得率为0.19%。
经蒸发光散射-高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为18.81%。
实施例4:番茄水溶性皂苷提取物的制备
1)精选成熟、无腐烂的新鲜大番茄果实1000g,洗净,用搅碎机打碎成浆汁;加入相当于鲜果重量0.06%的果胶酶,搅拌均匀,55℃保温酶解1.8小时;
2)酶解液先用90目滤布粗滤,粗滤液经离心机离心12min,转速为5000r/min,分离完毕后倾出上清液;
3)上清液上Diaion HP20型大孔型吸附树脂(树脂用量为原料量的0.08倍,吸附流速为3.5BV/h),然后用去离子水洗树脂柱直至流出液澄清,再用4.5倍柱体积、85%的乙醇洗脱(流速为9BV/h),收集洗脱液;
4)将洗脱液置于旋转蒸发仪中,在0.04Mpa、60℃条件下减压回收乙醇,并进一步在0.06Mpa条件下减压浓缩至浸膏状,浸膏转入真空干燥箱,在真空度为0.08Mpa,温度为40℃条件下真空干燥,粉碎,得到番茄总皂苷1.6g,得率为0.16%。
经蒸发光散射-高效液相色法检测番茄水溶性皂苷提取物中皂苷单体番茄皂苷A的含量为17.43%。
实验例:番茄水溶性皂苷提取物调节血脂实验:
(1)实验动物
Wistar大鼠,SPF级,雄性,体重(150±20)g,由桂林医学院实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(桂)2007-0001。
(2)主要试剂及仪器
胆固醇:国药集团化学试剂有限公司,批号:F20090313;
猪胆盐:国药集团化学试剂有限公司,批号:20090813;
丙基硫氧嘧啶:上海蓝季科技发展有限公司,批号:091202;
总胆固醇(TC)测定试剂盒:四川省迈克科技有限责任公司,批号:0909081;
甘油三酯(TG)测定试剂盒:四川省迈克科技有限责任公司,批号:0709051;
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒:长春汇力生物技术有限公司,批号:2009046;
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定试剂盒:四川省迈克科技有限责任公司,批号:1009041;
辛伐他汀:广东彼迪药业有限公司,批号:20091001。
TGL-16R型高速台式离心机,珠海黑马公司;
RT-9100型半自动生化分析仪,深圳雷杜生命科学股份有限公司。
(3)番茄水溶性皂苷提取物(以下简称番茄总皂苷)的制备同上述实施例1。
(4)动物分组和模型建立
健康成年雄性Wistar大鼠60只,体重150±20g,随机分为6组(每组10只):正常对照组、高脂模型组、番茄总皂苷低、中、高剂量组(低0.3g/kg、中0.6g/kg、高1.2g/kg)、辛伐他汀阳性对照组(4mg/kg)。
正常对照组给予普通饲料,其它各组给予高脂饲料(普通饲料82.3%,加2%胆固醇、10%猪油、0.5%胆盐、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%蔗糖),连续40d。给药40d后动物禁食不禁水12h,由尾静脉采血测定血清脂质含量。
正常对照组血清TC、TG含量与高脂模型组、番茄总皂苷低、中、高剂量组、辛伐他汀阳性对照组比较均有明显升高,差异显著(P<0.01)(见表1),说明高脂模型造模成功。
(5)动物灌胃给药治疗
高脂模型造模成功后开始灌胃给药,番茄皂苷低、中、高剂量组和辛伐他汀阳性对照组灌胃给予相应浓度药液,10mL/kg,正常对照组和高脂模型组均灌给予等体积生理盐水,1次/d,连续60d,正常对照组继续饲以普通饲料,高脂模型对照组、番茄总皂苷低、中、高剂量组、辛伐他汀阳性对照组继续饲以高脂饲料。每周称量体重1次,以便调整给药剂量。
分别在给药30d、45d、60d后,动物禁食不禁水12h,由尾静脉采血,离心制备血清,半自动生化分析仪检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。采用SPSS 11.5统计软件进行数据分析,实验数据均以
±s表示,两个独立样本均数比较采用t检验,多个样本之间的两两比较采用单因素方差分析,P<0.05为具有统计学意义。
(6)实验结果
造模40d后,给予高脂饲料的造模各组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量与正常对照组比较均有明显升高,差异显著(P<0.01),同时HDL-C含量均有明显降低,差异显著(P<0.01),说明高脂模型造模成功,结果见表1。
表1造模40d时大鼠血清脂质含量的变化(
±s,n=10)
与正常对照组比较,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01。
番茄总皂苷给药30d后,与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.01),同时HDL-C含量明显降低,差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明显降低,差异显著(P<0.05或P<0.01),同时HDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.05),结果见表2。
表2番茄总皂苷给药30d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(
±s,n=10)
与正常对照组比较,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01;与高脂模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
番茄总皂苷给药45d后,与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.01),同时HDL-C含量明显降低,差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均明显降低,差异显著(P<0.05或P<0.01),同时HDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.05),结果见表3。
表3番茄总皂苷给药45d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(±s,n=10)
与正常对照组比较,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01;与高脂模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
番茄总皂苷给药60d后,与正常对照组比较高脂模型组中大鼠的血清TC、TG、LDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.01),同时HDL-C含量明显降低,差异显著(P<0.01)。与高脂模型组比较番茄总皂苷中、高剂量和辛伐他汀组中大鼠血清TC、TG、LDL-C含量明显降低,差异显著(P<0.01),同时HDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.01),结果见表4。
表4番茄总皂苷给药60d对高脂血症大鼠血清脂质含量的影响(
±s,n=10)
与正常对照组比较,ΔP<0.05,ΔΔP<0.01;与高脂模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
.实验研究结果表明,番茄总皂苷中、高剂量在给药30d、45d、60d后大鼠血清中TC、TG、LDL-C含量与高脂模型组比较均明显降低,差异显著(P<0.05或P<0.01),同时HDL-C含量均明显升高,差异显著(P<0.05或P<0.01),从上述结果可看出,随着番茄总皂苷给药时间的延长其调节血脂的效果越明显,说明番茄总皂苷具有较好的调节血脂的作用。