CN109804749A - 一种翅果油树种子促进发芽生根的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种翅果油树种子促进发芽生根的方法，包括翅果油树种子的采集、处理和消毒，实验室及实验用品的消毒，培养基的制备以及种子的接种与培养等步骤。具体方法为：采集当年生种子，剥除种子外果皮、中果皮以及褐色种皮后消毒处理，接种到1/2MS+IBA 8‑12mg/L+NAA 0.5‑2mg/L或1/2MS+IBA 10‑15mg/L+2,4‑D 1‑2mg/L的培养基中培养，培养控制光照强度1200‑1500lx，光照时间10‑12小时/天，温度(23±2)℃。本发明将种子灭菌为无菌种子，使得无菌种子可以进一步发芽、生根，相对于传统育苗方法，具有增殖率高和成本低廉的优点。
Description
技术领域
本发明涉及植物种子萌发技术领域，具体涉及一种翅果油树种子促进发芽生根的方法。
背景技术
翅果油树(拉丁学名：Elaeagnus mollis Diels.)俗名泽绿旦、柴禾以及车勾子等，是胡颓子科、胡颓子属落叶直立乔木或灌木，是我国特有的一种优良木本油料树种，并含有丰富的多种不饱和脂酸，且出油率为35％，质量与花生油菜籽相近。翅果油树是一种药用价值、营养价值都很高的资源植物，已被用于生产防治心血管疾病药物的保健品。翅果油树的花含蜜量高，在早春是一种重要的蜜源之一。翅果油树有较高的抗旱能力、耐旱、耐瘠薄，起源于古老的第三纪时期，是经第四世纪冰川作用后残存下来的中国特有的古生物物种，国家二级保护植物，并编入世界自然和自然资源保护国同盟IUCN植物红皮书。原始种星散分布于山西和陕西局部地区，在陕北地区曾有零星分布。生于海拔800～1500m的山坡，多见于阴坡和半阴坡，阳坡也有分布。具有喜光、抗寒、抗风、耐干旱和贫瘠土壤的特性，适宜在干旱地区生长。翅果油树全身是宝，是特有的优良乡土树种，木材棕褐色，木质坚硬有光泽，纹理细致，是制作上等家具的好材料。翅果油树的叶子还可做饲料。该树种具有适应性强，抗早耐寒、根瘤固氮作用，其生长迅速，根系发达，是保持水土、绿化荒山的先锋树种及早春蜜源植物。据国家重点实验室分析研究，翅果油树翅果种仁含油量达45％以上，翅果油中含有95％以上的不饱和脂肪酸，其中油酸及亚油酸含量极为丰富，含88％以上，油酸与亚油酸含量丰富的油脂对预防动脉硬化及对抵御自由基氧化具有重要作用。翅果油还含有4％～6％的α-亚麻酸，因此它具有降血脂、降胆固醇、促进脂肪代谢、肝细胞再生以及促进大脑神经细胞发育等功效。翅果油中维生素E 的含量达到1558.1mg/100g，不仅为各种油料之冠，而且为维生素E 8 种异构体中质量最优的。采用高科技生物技术，可从翅果油树的种仁中分离提取出翅果油，具有较高的药用价值和经济价值。特别是依托资源优势做为产业发展，既挽救了濒危物种，又保护了珍稀树种资源，同时对山区农民脱贫致富具有重大的开发意义。
翅果油树于1899年在陕西省户县涝峪山首次发现。翅果油树起源于古老的第三世纪时期，是第四世纪冰川作用后现存的特有古生物植物，目前仅分布在我国的陕西、山西两地，为我国特有种。2018 年被列为国家一类保护树种。
翅果油树有两种繁殖方式：其一为种子繁殖，但种子发芽率较低，未经任何处理的种子，发芽率为5.93％，发芽后能正常发育成籽苗的仅为1.69％。经过沙积处理的种子其发芽率为45.76％，但发芽后能正常发育成苗的也仅为11.02％。另外，翅果油树种子的寿命也短，保存一年后其发芽率几乎为零，且自然状态下的种子苗很少；其二是通过植株根蘖苗繁殖，但根蘖苗自生根能力差，繁殖系数低，而且通过这种营养繁殖方法长成的苗木病害严重。因此利用组织培养方法，尤其用种子为材料进行快速繁殖生产的翅果油树苗木具有无病毒、无菌，且繁殖系数高等优点。
经过研究探索发现对翅果油树种子萌发前进行一系列处理后将其在无菌条件下接入特定的培养基中可以有效地促进其种子发芽生根产生幼苗。因此，我们提出一种内容简单，成本低廉的种子处理和种子萌发方法。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是解决翅果油种子发芽率低、浪费了种子以及加大了投资的问题，因此提供一种简单且成本低廉的种子处理并利用培养基促进种子发芽生根的方法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
一种翅果油树种子促进发芽生根的方法，包括以下步骤：
(1)种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与激素母液；
(3)种子的处理：将步骤(1)采集的种子外果皮、中果皮以及褐色种皮全部剥掉，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡；
(4)种子的接种与培养：接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在添加有琼脂和激素的1/2MS培养基中培养；
所述添加激素母液的1/2MS培养基的配方为：1/2MS+IBA 8-12mg/L+NAA0.5-2mg/L或1/2MS+IBA10-15mg/L+2,4-D 1-2mg/L。
作为本发明再进一步的方案：所述超净工作台在使用前需提前 30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
作为本发明再进一步的方案：所述添加激素母液的1/2MS培养基是1/2MS+IBA10mg/L+NAA1mg/L或1/2MS+IBA13mg/L+2,4-D 1.3mg/L。
作为本发明再进一步的方案：步骤(2)所述配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌15-20min。
作为本发明再进一步的方案：步骤(2)所述配制的激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻。
作为本发明再进一步的方案：步骤(3)中所述种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮。
作为本发明再进一步的方案：所述1/2MS培养基灭菌完成后，在超净工作台上冷却至55℃±2℃，加入琼脂和激素后分装到培养瓶中，每瓶培养基50mL±5mL。
作为本发明再进一步的方案：步骤(4)所述种子的接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子夹住种子平放于培养基中并且使种子的1/3-1/2没入培养基中。
作为本发明再进一步的方案：步骤(4)所述每瓶培养基中接种 4-5颗种子。
作为本发明再进一步的方案：步骤(4)中所述的培养条件为：光照强度1200-1500lx，光照时间10-12小时/天，温度23℃±2℃。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)本发明采用常规消毒方法对翅果油树种子进行灭菌，即可以有效地杀死附着在种子表面的细菌及真菌芽孢，又能防止种子中毒，保持种子的生命力，获取优质的无菌种子。
(2)本发明将种子在含有植物生长激素的1/2MS培养基中培养，利用植物生长激素的促生根和促生长作用，从而促进翅果油树种子的发芽生根，因此，本发明具有安全性高和可持续性好的优点。
(3)工艺操作简单，成本低廉，重复性好，且能大幅度提高翅果油树种子的发芽率和生根率，具有较好的经济效益和社会效益。
(4)本发明对种子采用简单剥除种皮处理，大幅度的提高了其发芽率，因此，本发明简单相对操作，且取得了较高的效益。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚和完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1：
翅果油树种子促进发芽生根的方法，包括以下步骤：
(1)种子的采集，采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前给实验室紫外消毒30min，用高压锅灭菌培养瓶、镊子、自来水以及移液枪头；配制1/2MS培养基和所需的激素母液，配置好的培养基在使用前需要进行高压锅灭菌。配制好的激素需要用水溶性的针管过滤头进行过滤后放于冰箱中进行冷冻。其中高压锅的使用条件为121℃、15-20min；
(3)将采集的种子外果皮、坚硬的中果皮以及内部的褐色种皮用工具进行剥除，获得带革质种皮的种子，注意不要损伤到内部的种仁，种仁如果缺失会影响到种子的发芽率。如果在剥除坚硬的中果皮时较为困难，可将种子预先在常温自来水中浸泡2小时，浸泡过后剥除果皮时会较为简单一些。
种皮去除后进行常规的外植体消毒。即先将剥好的种子放在自来水下进行冲洗30min。将水龙头打开，把种子放在水口下面，直接进行冲洗，水不宜过大，过大会将里面包裹种仁的革质种皮冲破，导致种仁散开。冲洗完成后放入70％的酒精中进行浸泡冲洗8min，浸泡过程中可轻微摇荡，浸泡完成后用已灭菌好的无菌水冲洗3次，然后再用10％次氯酸钠溶液浸泡冲洗8min，冲洗过程中也需进行摇荡。冲洗完成后在超净工作台用无菌水冲洗五次。注意次氯酸钠浸泡消毒完成后一定要在超净工作台用无菌水冲洗，前面酒精浸泡冲洗可不在超净工作台进行。其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
(4)将配置好的培养基放入灭菌锅中灭菌完成后，将其放入超净工作台，待其冷却到55℃左右时，添加琼脂并用移液枪量取激素添加后将其分装到培养瓶中，每瓶培养基50mL左右。注意不可使培养基冷却的温度过低，因为温度过低时培养基会凝固，不能分装而进行后续的操作。注：以上所有操作必须在超净工作台完成。
在次氯酸钠溶液消毒并用无菌水冲洗5次后，将种子放入配制好的60mg/L的赤霉素溶液中浸泡30min，在赤霉素中浸泡完成后，可进行接种。待上述配制好的培养基冷却凝固完成后进行接种。接种时用镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定，每瓶中放4-5颗种子，放置均匀。在用镊子放置种子时要将镊子在酒精上用火消毒。接种完成后在培养瓶上做好记录，将培养瓶从超净工作台上取出，放在(23±2)℃、光照时间为10-12小时/天、光照强度为1200-1500lx的条件下进行培养。接种后4-5天就会出现白白的芽尖稍稍冒出。
本发明选择可促进翅果油树种子发芽生根的培养基激素组分有：
A、1/2MS+IBA10mg/L
B、1/2MS+IBA10mg/L+NAA1mg/L
C、1/2MS+IBA 8mg/L+NAA 2.5mg/L
D、1/2MS+IBA10mg/L+NAA0.2mg/L
E、1/2MS+IBA10mg/L+2,4-D 1mg/L
F、1/2MS+IBA8mg/L+2,4-D 0.5mg/L
G、1/2MS+IBA8mg/L+2,4-D 0.8mg/L
H、1/2MS+IBA8mg/L+2,4-D 1.3mg/L
I、1/2MS+IBA13mg/L+2,4-D 0.5mg/L
J、1/2MS+IBA13mg/L+2,4-D 1.3mg/L
其中培养基为1/2MS+IBA(吲哚丁酸)10mg/L+NAA(萘乙酸) 1mg/L和1/2MS+IBA(吲哚丁酸)13mg/L+2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)1.3mg/L的效果最好，发芽率达到86％左右，生根率到达81％左右。
本发明提供的1/2MS配方为：大量元素：硝酸铵NH4NO3 825 mg/L、硝酸钾KNO3950mg/L、二水氯化钙CaCl2·2H2O 220mg/L、七水硫酸镁MgSO4·7H2O 185mg/L、磷酸二氢钾KH2PO4 85mg/L；
微量元素：碘化钾KI 0.415mg/L、硼酸H3BO3 3.1mg/L、四水硫酸锰MnSO4·4H2O11.15mg/L、七水硫酸锌ZnSO4·7H2O 4.3mg/L、二水钼酸钠Na2MoO4·2H2O 0.125mg/L、五水硫酸铜CuSO4·5H2O 0.0125mg/L、六水氯化钴CoCl2·6H2O 0.0125mg/L；
铁盐：七水硫酸亚铁FeSO4·7H2O 27.8mg/L、二水乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA·2H2O 37.3mg/L；
有机物质：肌醇100mg/L、烟酸VB5或VPP 0.5mg/L、盐酸吡哆醇VB6 0.5mg/L、盐酸硫胺素VB1 0.1mg/L、甘氨酸2.0mg/L；
蔗糖30g/L；
琼脂7g/L。
表1翅果油树种子的设计方案及发芽率、生根率
注：+，表示进行了此项操作；-，表示没有进行此项操作。
由上述的发芽率和生根率数据可以看出，进行正常处理的种子的发芽率和生根率远高于某一项未处理的种子，尤其是未灭菌、未消毒处理的种子。
实施例2：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、NAA激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌15min；配制的IBA、NAA激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 8mg/L+NAA 2mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1200lx，光照时间12小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
实施例3：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、NAA激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌20min；配制的IBA、NAA激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 12mg/L+NAA 0.5mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1500lx，光照时间10小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
实施例4：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、NAA激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌17min；配制的IBA、NAA激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 10mg/L+NAA 1mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1400lx，光照时间11小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
实施例5：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、2,4-D激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌15min；配制的IBA、2,4-D激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 10mg/L+2,4-D 1.5mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1500lx，光照时间12小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
实施例6：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、2,4-D激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌20min；配制的IBA、2,4-D激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 15mg/L+2,4-D 1.2mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1200lx，光照时间10小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
实施例7：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与IBA、2,4-D激素母液，配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌18min；配制的IBA、2,4-D激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻；
(3)将采集的种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮、中果皮以及褐色种皮，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理：首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗 8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡冲洗过程中要轻微震荡；
(4)接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在配方为1/2MS+IBA 13mg/L+2,4-D 1.3mg/L的培养基中培养，接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子轻轻夹住种子平放于培养基中并且使种子1/3-1/2没入培养基中固定。培养条件为：光照强度1300lx，光照时间11小时/天，温度(23±2)℃。
注：其中超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
对比例：
(1)采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)从翅果油树所在地区采集足够数量的原生壤土，与细沙按照1:1的比例进行混合并分装在花盆中；
(3)保证种子萌发所需的土壤环境，给其适宜的温度、湿度和所需的养分。
利用上述实施例2-7和对比例的方法，对翅果油树种子进行培养，从下表的结果可以看出，实施例的技术指标远超过对比例。
表2实施例设计方案与对比例效果的比较
| 实施例 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 对比例 |
| 发芽率％ | 84.2 | 84.8 | 86.3 | 85.7 | 83.9 | 86.1 | 6.4 |
| 生根率％ | 81.6 | 81.7 | 81.6 | 80.9 | 80.5 | 81.2 | 6.4 |
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)种子采集：采集当年生种子，挑选大小一致饱满无病害的种子；
(2)实验前实验室和实验用具的消毒与准备，并配制1/2MS培养基与激素母液；
(3)种子的处理：将步骤(1)采集的种子外果皮、中果皮以及褐色种皮全部剥掉，获得带革质种皮的种子，然后进行常规消毒处理，首先自来水冲洗30min，再用70％酒精浸泡冲洗8min，用无菌水冲洗3次，最后用10％次氯酸钠浸泡冲洗8min，在超净工作台上用无菌水冲洗5次，浸泡和冲洗过程中要轻微震荡；
(4)种子的接种与培养：接种前在超净工作台用60mg/L的赤霉素溶液浸泡30min，然后接种在添加有琼脂和激素的1/2MS培养基中培养；
所述添加激素母液的1/2MS培养基的配方为：1/2MS+IBA 8-12mg/L+NAA 0.5-2mg/L或1/2MS+IBA 10-15mg/L+2,4-D 1-2mg/L。
2.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，所述超净工作台在使用前需提前30min开紫外灯进行灭菌，操作时关闭紫外灯，打开风扇并在所述超净工作台里面放置酒精灯。
3.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，所述添加激素母液的1/2MS培养基是1/2MS+IBA 10mg/L+NAA 1mg/L或1/2MS+IBA 13mg/L+2,4-D1.3mg/L。
4.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(2)所述配制的1/2MS培养基使用前在121℃高压锅灭菌15-20min。
5.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(2)所述配制的激素母液用水溶性的针管过滤头过滤后放于冰箱中冷冻。
6.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(3)中所述种子预先在常温自来水中浸泡2小时，再剥除种子的外果皮。
7.根据权利要求4所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，所述1/2MS培养基灭菌完成后，在超净工作台上冷却至55℃±2℃，加入琼脂和激素后分装到培养瓶中，每瓶培养基50mL±5mL。
8.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(4)所述种子的接种操作是用已在酒精灯上消毒的镊子夹住种子平放于培养基中并且使种子的1/3-1/2没入培养基中。
9.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(4)所述每瓶培养基中接种4-5颗种子。
10.根据权利要求1所述的翅果油树种子促进发芽生根的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的培养条件为：光照强度1200-1500lx，光照时间10-12小时/天，温度23℃±2℃。
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| CN104261972A (zh) * | 2014-09-10 | 2015-01-07 | 广西壮族自治区农业科学院生物技术研究所 | 一种促进荸荠种子发芽的方法及所用培养基 |
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