CN110612903B - 一种提高乌饭树组培继代生根的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高乌饭树组培继代生根的方法，所述方法包括：培养基的配制：在WPM培养基母液中加入吲哚丁酸、蔗糖和琼脂，得到改良WPM培养基；接种：将乌饭树无菌苗切成茎段，插入上述改良WPM培养基中；培养：将上述接种后的乌饭树无菌苗进行培养；培养的条件包括：温度为24‑26℃，光照强度为1900‑2100lx，光照周期为12h/d；移栽：培养60天之后，采用逐渐开瓶的方式炼苗3‑5天，之后分株移栽至混合基质中继续栽培。解决了当前乌饭树种苗的主要培育方式存在发芽率低、成活率低、繁殖系数小、周期长等缺点，难以满足市场对种苗生产的需求的问题。

Description

一种提高乌饭树组培继代生根的方法

技术领域

本发明涉及乌饭树培育领域，具体地，涉及一种提高乌饭树组培继代生根的方法。

背景技术

乌饭树，又名南烛、染菽等，为杜鹃花科越橘属常绿灌木或小乔木，是一种集观赏、保健、药用等价值于一身的野生树种。由于树叶中含有脂肪、氨基酸、微量元素、黄酮类物质，果实中含有丰富的维生素、蛋白质、多酚等物质，使其抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、抗菌、降血糖降血脂、预防眼疾等药用功能卓著。加之树叶鲜艳亮丽，四时而变，树姿优美，园林培育潜力大，商业前景广阔。近年来，新兴果树蓝莓的开发热度很高，但土壤酸碱性依然是其扩大种植的重要制约因子，用亲缘关系较近的乌饭树作砧木进行嫁接，不仅可以提高蓝莓土壤生境的适应性，还可促进蓝莓品质提升，对农林增产影响深远。随着乌饭树经济价值、药用价值、营养价值日益凸显，需求量也与日俱增。但作为一种难生根野生树种，其繁殖技术一直是生产上的一个的难点。因此，为了满足市场需求，实现乌饭树种质资源的保护及人工栽培的扩大是当前继续解决的问题。当前乌饭树种苗的主要培育方式有扦插、播种和组培繁育。在自然界，乌饭树种子体积小，质地坚硬，休眠特性显著，自然状况下发芽率很低，只有千分之一。扦插对水分的管理要求十分高，加之受时间的限制，且二者都存在发芽率低、成活率低、繁殖系数小、周期长等缺点，难以满足市场对种苗生产的需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种提高乌饭树组培继代生根的方法，解决了当前乌饭树种苗的主要培育方式存在发芽率低、成活率低、繁殖系数小、周期长等缺点，难以满足市场对种苗生产的需求的问题。

为了实现上述目的，本发明提供了一种提高乌饭树组培继代生根的方法，所述方法包括：

(1)培养基的配制：在WPM培养基母液中加入吲哚丁酸、蔗糖和琼脂，得到改良WPM培养基；

(2)接种：将乌饭树无菌苗切成茎段，插入上述改良WPM培养基中；

(3)培养：将上述接种后的乌饭树无菌苗进行培养；培养的条件包括：温度为24-26℃，光照强度为1900-2100lx，光照周期为12h/d；

(4)移栽：培养60天之后，采用逐渐开瓶的方式炼苗3-5天，之后分株移栽至混合基质中继续栽培。

根据上述技术方案，本发明提供了一种提高乌饭树组培继代生根的方法，所述方法包括：培养基的配制：在WPM培养基母液中加入吲哚丁酸、蔗糖和琼脂，得到改良WPM培养基；接种：将乌饭树无菌苗切成茎段，插入上述改良WPM培养基中；培养：将上述接种后的乌饭树无菌苗进行培养；培养的条件包括：温度为24-26℃，光照强度为1900-2100lx，光照周期为12h/d；移栽：培养60天之后，采用逐渐开瓶的方式炼苗3-5天，之后分株移栽至混合基质中继续栽培。本发明提供的方法具备发芽率高、成活率高、繁殖系数大、周期短等优点。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1不同浓度IBA对乌饭树生根率动态的影响；

图2不同浓度IBA对乌饭树单株根的鲜重与干重的影响；

图3不同浓度IBA对乌饭树根冠比的影响；

图4不同浓度IBA对乌饭树最长根长的影响；

图5 1.0mg/L IBA处理下乌饭树生根动态变化图片；

图6 1.0mg/L IBA乌饭树移栽混合基质后的生长图(2个月后)。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明提供了一种提高乌饭树组培继代生根的方法，所述方法包括：

(1)培养基的配制：在WPM培养基母液中加入吲哚丁酸、蔗糖和琼脂，得到改良WPM培养基；

(2)接种：将乌饭树无菌苗切成茎段，插入上述改良WPM培养基中；在超净工作台上，从培养瓶中取出生长健壮的乌饭树无菌苗，切成2cm左右茎段，去除基部叶子，插入培养基中；

(3)培养：将上述接种后的乌饭树无菌苗进行培养；培养的条件包括：温度为24-26℃，光照强度为1900-2100lx，光照周期为12h/d；

(4)移栽：60天后采用逐渐开瓶的方式在组培室内炼苗3-5天，期间瓶口由开口逐渐增大至完全打开，炼苗结束后，移出组培苗，去除基质，分株后移栽于装有已灭菌的珍珠岩：蛭石：泥炭＝1:1:1混合基质的育苗杯中，去除培养基时注意不要伤到根部，移栽后在温室中培养至组培苗健壮成活，并在生长稳定后，移至温室外，进行正常栽培管理。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步提高生根率和成活率，吲哚丁酸的浓度为0.2-2mg/L，蔗糖的浓度为24-26g/L，琼脂的浓度为7.4-7.6g/L。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步提高生根率和成活率，改良WPM培养基的pH为5-6。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步提高生根率和成活率，所述改良WPM培养基在使用前需进行灭菌处理，灭菌处理的条件包括：温度为120-122℃，时间为18-22min。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步提高生根率和成活率，在步骤(2)中，茎段的长度为1.8-2.2cm。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步组培苗移栽成活率，混合基质的原料包括珍珠岩、蛭石和泥炭。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步组培苗移栽成活率，珍珠岩、蛭石和泥炭的质量比为1:1:1。

在本发明的一种优选的实施方式中，为了进一步增加发芽率和成活率，WPM培养基母液的成分包括：K₂SO₄ 490-500mg/L、MgSO₄·7H₂O 180-190mg/L、KH₂PO₄ 80-90mg/L、NH₄NO₃195-205mg/L、MnSO₄·4H₂O 11-12mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4-5mg/L、H₃BO₃ 3-3.2mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.12-0.13mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.12-0.13mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 270-280mg/L、FeSO₄·7H₂O 13-14mg/L、Na₂EDTA 18-19mg/L、肌醇45-55mg/L、甘氨酸0.8-1.2mg/L、VB₁0.4-0.6mg/L、VB₆ 0.2-0.3mg/L、VB₅ 0.2-0.3mg/L。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以1mm作为生根的标准，统计生根植株数，计算生根率，

记录生根高峰期间20天时的已生根植株的平均单株根数与单株平均根长。在60天后测量单株根与茎叶的鲜重、干重、根冠比、最长根长度。其中最长根长度：指同一浓度梯度中，3株生根植株最长的根长度平均值(3个重复)；/>

取其根与茎叶的鲜重比值作为其根冠比。移栽60天后统计成活率和株高增长量。

实施例1

(1)培养基的配制：选用WPM培养基，加吲哚丁酸0.2mg/L，蔗糖25g/L，琼脂7.5g/L，pH5.5；配制好的液体培养基盖好瓶盖，121℃灭菌20min待用；

(2)接种：在超净工作台上，从培养瓶中取出生长健壮的乌饭树无菌苗，切成2cm左右茎段，去除基部叶子，插入培养基中，每瓶接种4-6个茎段，每个处理接种10瓶；

(3)培养：将已接种茎段的培养瓶置于培养架上，培养条件为25℃，光照强度为2000lx，光照周期为12h/d；

(4)炼苗移栽：60天后采用逐渐开瓶的方式在组培室内炼苗4天，期间瓶口由开口逐渐增大至完全打开，炼苗结束后，移出组培苗，去除基质，分株后移栽于装有已灭菌的珍珠岩：蛭石：泥炭＝1:1:1混合基质的育苗杯中，去除培养基时注意不要伤到根部，移栽后在温室中培养至组培苗健壮成活，并在生长稳定后，移至温室外，进行正常栽培管理；

其中，WPM培养基母液的成分包括：K₂SO₄ 495mg/L、MgSO₄·7H₂O 185mg/L、KH₂PO₄85mg/L、NH₄NO₃ 200mg/L、MnSO₄·4H₂O 12mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4.5mg/L、H₃BO₃ 3.1mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.13mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.13mg/L、Ca(NO₃)₂·4H₂O 275mg/L、FeSO₄·7H₂O13.5mg/L、Na₂EDTA 18.5mg/L、肌醇50mg/L、甘氨酸1mg/L、VB₁ 0.5mg/L、VB₆ 0.2mg/L、VB₅0.2mg/L。

实施例2

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为0.4mg/L。

实施例3

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为0.6mg/L。

实施例4

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为0.8mg/L。

实施例5

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为1.0mg/L。

实施例6

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为1.5mg/L。

实施例7

按照实施例1的方法进行，不同的是，加吲哚丁酸的浓度为2.0mg/L。

对比例1

按照实施例1的方法进行，不同的是，不加入吲哚丁酸。

表1

注：表1为20天时生根乌饭树平均单株生根数与根长。

从表1以及图1-6的结果显示：在温度25℃，光照为强度2000lx，光照周期为12h/d的培养条件下，接种后第12天到第24天期间内为乌饭树生根高峰期；与对比例相比，IBA(吲哚丁酸)提高了生根率，接种20天后0.8、1.0、1.5、2.0mg/L IBA处理的植株生根率可达到70％以上，生根数在5-6根左右，平均每株根长在0.3-0.4cm之间，32天后，4个高浓度IBA处理组的生根率均达到90％以上，并且2.0mg/L IBA处理的生根率最先达到100％；此时1.0、1.5mg/L IBA处理趋同，且没有显著差异；60天后植株的根系已经很多，分叉多，毛状根多，难以数清，但通过最大根长，鲜干重、根冠比，大致可发现：在7个IBA浓度梯度处理下，低浓度根系长，生根数目相对较少，植株地上部分长势好，茎叶鲜重、干重大；高浓度正好相反，根的长度变短，根系变多，根的鲜重、干重大，植株芽苗生长变缓；其中，1.5、2.0mg/L IBA处理组虽然植株根系较多，但明显变短，变细，并且愈伤组织增多，植株的地上营养生长变缓；而对比例生根率低，根系与地上植株的生长都缓慢。综合评价：1.0mg/L IBA在根系生长上最优，并且移栽后发现，以珍珠岩：蛭石：泥炭＝1:1:1配比的混合基质其2个月后成活率可以达到100％，株高增长量可达6.3cm左右。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (6)

1.一种提高乌饭树组培继代生根的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）培养基的配制：在WPM培养基母液中加入吲哚丁酸、蔗糖和琼脂，得到改良WPM培养基；

（2）接种：将乌饭树无菌苗切成茎段，插入上述改良WPM培养基中；

（3）培养：将上述接种后的乌饭树无菌苗进行培养；培养的条件包括：温度为24-26℃，光照强度为1900-2100lx，光照周期为12h/d；

（4）移栽：培养60天之后，采用逐渐开瓶的方式炼苗3-5天，之后分株移栽至混合基质中继续栽培；

其中，所述吲哚丁酸的浓度为0.8-2mg/L，所述蔗糖的浓度为24-26g/L，所述琼脂的浓度为7.4-7.6g/L；

所述WPM培养基母液的成分包括：K₂SO₄ 490-500mg/L、MgSO₄·7H₂O 180-190mg/L、KH₂PO₄ 80-90mg/L、NH₄NO₃ 195-205mg/L、MnSO₄·4H₂O 11-12mg/L、ZnSO₄·7H₂O 4-5mg/L、H₃BO₃ 3-3.2mg/L、CuSO₄·5H₂O 0.12-0.13mg/L、Na₂MoO₄·2H₂O 0.12-0.13mg/L、Ca（NO₃）₂·4H₂O 270-280mg/L、FeSO₄·7H₂O 13-14mg/L、Na₂EDTA 18-19mg/L、肌醇45-55mg/L、甘氨酸0.8-1.2mg/L、VB₁ 0.4-0.6mg/L、VB₆ 0.2-0.3mg/L、VB₅ 0.2-0.3mg/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，改良WPM培养基的pH为5-6。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述改良WPM培养基在使用前需进行灭菌处理，灭菌处理的条件包括：温度为120-122℃，时间为18-22min。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，在步骤（2）中，茎段的长度为1.8-2.2cm。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，混合基质的原料包括珍珠岩、蛭石和泥炭。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，珍珠岩、蛭石和泥炭的质量比为1:1:1。

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