CN103621405A - 一种诸葛菜人工种子制作方法 - Google Patents

一种诸葛菜人工种子制作方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103621405A
CN103621405A CN201310618848.6A CN201310618848A CN103621405A CN 103621405 A CN103621405 A CN 103621405A CN 201310618848 A CN201310618848 A CN 201310618848A CN 103621405 A CN103621405 A CN 103621405A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bud
silkworms
straw
artificial seed
orychophragmus violaceus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201310618848.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103621405B (zh
Inventor
吴沿友
乔韡轶
赵玉国
赵宽
邢德科
王宗林
刘汉玄
李美清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Dongtai Haibin Science And Technology Pioneer Park Management Co ltd
Jiangsu Huizhi Intellectual Property Services Co ltd
Original Assignee
Jiangsu University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangsu University filed Critical Jiangsu University
Priority to CN201310618848.6A priority Critical patent/CN103621405B/zh
Publication of CN103621405A publication Critical patent/CN103621405A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103621405B publication Critical patent/CN103621405B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种诸葛菜人工种子制作方法，包括诸葛菜芽蔟的诱导、诸葛菜芽的增殖、诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备等步骤。本发明制作的种子，生根发芽效果好，相比天然种子，人工种子可以不受季节、环境各方面天然条件的限制来进行大规模大批量高效制作生产种子，可应用于诸葛菜的择时播种。

Description

一种诸葛菜人工种子制作方法
技术领域
本发明属于生物技术和农业工程领域，具体涉及一种诸葛菜人工种子制作方法。
背景技术
诸葛菜又称二月兰，十字花科诸葛菜属植物，一年或二年生草本，广泛分布于全国大部分地区，对土壤光照等条件要求较低，极耐低温严寒、干旱，生命力顽强。花开为紫色或近白色异常耀眼，常被栽植作为绿化美化及地被植物，除作为养殖业常用饲料外，其嫩茎叶可作野菜食用，叶生长量较大，营养成分种类多、含有多种微量元素、维生素、胡萝卜素以及抗癌物质等,可开发成抗癌保健蔬菜。诸葛菜含油量高，也是一种很好的低芥酸、低亚麻酸和高亚油酸的油料植物，可开发出保健油。特别是具有降低人体内血清胆固醇和甘油三酯的功能的亚油酸比例高，为心血管病患者提供了良好的食用油。近年来，诸葛菜的喀斯特适生性得到高度关注，人们将诸葛菜作为喀斯特地区的生态修复的先锋物种。此外，诸葛菜还可以作为浮床植物以及植生混凝土植物、能源植物和蜜源植物等多种用途。
喀斯特地区土壤具有岩溶干旱、高钙、高pH以及低营养的特征，使得诸葛菜的萌发受到限制。由于喀斯特地区土壤的岩溶干旱特征，使得诸葛菜种子不能得到实时萌发。在喀斯特地区开发利用诸葛菜资源，必需要解决诸葛菜种子萌发问题。天然诸葛菜种子萌发需要较长时间，若这段时间水分得不到稳定地供给，则种子失去萌发能力，陈年种子萌发率极低，不到1%。相比天然种子，人工种子可以不受季节来进行播种萌发，可依据喀斯特地区气候条件雨季播种，一旦萌发后，即可正常生长发育直至成熟，从而避免喀斯特地区常出现的秋旱而导致诸葛菜天然种子不能萌发的结局。因此，为了更好地在喀斯特地区开发利用诸葛菜资源，开发诸葛菜的人工种子生产技术成为当务之急！
人工种子其实质是将组织培养产生的具有生物活性生长力的外植体即体细胞胚或胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等部分包裹在能提供养分的胶囊里，构成一种类似于种子的结构，具有天然种子发芽出苗的功能。相比天然种子，人工种子可以不受季节、环境各方面天然条件的限制来进行大规模大批量高效制作生产，使得农业生产的择时播种成为可能。
发明内容
本发明的目的在于提供一种诸葛菜人工种子制作方法，以不受季节、环境各方面天然条件的限制即可进行大规模大批量诸葛菜种子高效制作生产，实现喀斯特地区的诸葛菜的择时播种，为诸葛菜资源开发提供技术保证。
为了解决以上技术问题，本发明采用的具体技术方案如下：一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于包括以下步骤
步骤一，诸葛菜芽蔟的诱导：取诸葛菜幼苗，冲刷洗净，截取其上5～10mm的腋芽和顶芽，在超净台内完成消毒，无菌接种在芽蔟诱导培养基上进行芽蔟诱导培养；
步骤二，诸葛菜芽的增殖：将诸葛菜芽在所述芽蔟诱导培养基上培养至20天后，获得大量芽蔟，将所述大量芽蔟分割成单芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养；
步骤三，诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备：待所述单芽在所述芽繁培养基上生长至20天后，在超净台里取3-5mm的芽，放在经过灭菌处理的包埋液中，搅拌充分混匀；用内径4-6mm的吸管吸取适量包有芽的包埋液，滴入到质量浓度为2.0%的CaCl2溶液中，络合凝固10分钟，形成人工种子胶囊，取出所述人工种子胶囊并用滤纸吸干所述人工种子胶囊上的液体，将人工种子胶囊储藏待萌发。
所述的芽蔟诱导培养基的成分为：MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂；所述MS培养基为Murashige和Skooge培养基，所述NAA为α-萘乙酸，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤；所述芽蔟诱导培养基的pH=5.8；所述芽蔟诱导培养的条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的日光灯光源光照14小时。
所述的芽繁培养基的成分为：MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+谷氨酸400mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂。所述芽繁培养条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的LED红光源光照14小时；所述芽繁培养基的pH=5.8。
所述的包埋液为海藻酸钠水溶胶，成分为：3.0%海藻酸钠+1/2MS+3.0%蔗糖+NAA0.5mg/L,所述包埋液的pH=5.8。
所述的MS培养基的成分包括：
大量元素，KNO3为1900mg/L、NH4NO3为1650mg/L、MgSO4·7H2O为370mg/L、KH2PO4为170mg/L、CaCl2·2H2O为440mg/L；
微量元素MnSO4·4H2O为22.3mg/L、ZnSO4·7H2O为8.6mg/L、H3BO3为6.2mg/L、KI为0.83mg/L、NaMoO4·4H2O为0.25mg/L、CuSO4·5H2O为0.025mg/L、CoCl2·6H2O为0.025mg/L；
铁盐溶液FeSO4·4H2O为27.8mg/L、Na2-EDTA为37.3mg/L；
有机成分甘氨酸为2.0mg/L、盐酸硫胺素为0.1mg/L、盐酸吡哆醇为0.5mg/L、烟酸为0.5mg/L、肌醇为100mg/L。
本发明具有益效果。本发明通过人工的方法制备种子以代替天然种子，可节约大量种子，增加了经济效益和生态效益；可不受季节限制，大规模大批量高效生产人工种子，实现喀斯特地区的诸葛菜的择时播种，为该地区的诸葛菜资源开发提供技术保证；材料来源简便，操作简易；与试管苗相比，体积小，运输及保存方便，成本低廉，减少了移栽驯化过程。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。
本发明的实施例中，一种诸葛菜人工种子制作方法依以下步骤：
步骤一，诸葛菜芽蔟的诱导：取生长三个月的诸葛菜幼苗，冲刷洗净，截取其上10mm的腋芽和顶芽，在超净台内完成消毒，无菌接种在芽蔟诱导培养基上进行芽蔟诱导培养；所述的芽蔟诱导培养基的成分为MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂；所述MS培养基为Murashige和Skooge培养基，所述NAA为α-萘乙酸，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤；所述芽蔟诱导培养基的pH=5.8；所述芽蔟诱导培养的条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的日光灯光源光照14小时。
步骤二，诸葛菜芽的增殖：将诸葛菜芽在所述芽蔟诱导培养基上培养至20天后，获得大量芽蔟，将所述大量芽蔟分割成单芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养；所述的芽繁培养基的成分为：MS+NAA0.2mg/L+6-BA2mg/L+谷氨酸400mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂。所述芽繁培养条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的LED红光源光照14小时；所述芽繁培养基的pH=5.8。
步骤三，诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备：待所述单芽在所述芽繁培养基上生长至20天后，在超净台里取3-5mm的芽，放在经过灭菌处理的包埋液中，搅拌充分混匀；用内径6mm的吸管吸取适量包有芽的包埋液，滴入到质量浓度为2.0%的CaCl2溶液中，络合凝固10分钟，形成人工种子胶囊，取出所述人工种子胶囊并用滤纸吸干所述人工种子胶囊上的液体，将人工种子胶囊储藏待萌发。
所述的包埋液为海藻酸钠水溶胶，成分为：3.0%海藻酸钠+1/2MS+3.0%蔗糖+NAA0.5mg/L,所述包埋液的pH=5.8。
所述的MS培养基的成分包括
大量元素，KNO3为1900mg/L、NH4NO3为1650mg/L、MgSO4·7H2O为370mg/L、KH2PO4为170mg/L、CaCl2·2H2O为440mg/L；
微量元素MnSO4·4H2O为22.3mg/L、ZnSO4·7H2O为8.6mg/L、H3BO3为6.2mg/L、KI为0.83mg/L、NaMoO4·4H2O为0.25mg/L、CuSO4·5H2O为0.025mg/L、CoCl2·6H2O为0.025mg/L；
铁盐溶液FeSO4·4H2O为27.8mg/L、Na2-EDTA为37.3mg/L；
有机成分甘氨酸为2.0mg/L、盐酸硫胺素为0.1mg/L、盐酸吡哆醇为0.5mg/L、烟酸为0.5mg/L、肌醇为100mg/L。
下面以两个实验来说明本发明的包埋液的激素配比和基本培养基强度配制的合理性。
实验一，调整包埋液中的激素配比，进行诸葛菜人工种子的萌发实验。
分别对包埋液即海藻酸钠水溶胶中的激素配比和基本培养基的强度进行调整，依发明内容中所述的步骤制作诸葛菜人工种子，观察诸葛菜人工种子的萌发情况。对包埋液中的激素配比进行调整的诸葛菜人工种子的萌发情况，实验分8组进行，分为CK对照组即本发明使用的激素配比、以及处理2-8组，结果如表1所示。
表1包埋液中不同激素配比对诸葛菜人工种子萌发的影响
从表1中可以看出，在只有NAA的处理过程中，当其浓度升高时，出芽生根情况随之显著增强，当NAA浓度在0.5mg/L时即为CK处理时，人工种子萌发出芽、生根情况显著高于处理2、3和4组。而只添加6-BA的处理5-6组，发芽效果只略高于处理4组。而在同时添加有0.5mg/LNAA以及不同浓度6-BA的处理7-8组中，发芽效果显著好于对照组，但抑制生根。总体说，本发明的包埋液中激素配比即仅含有NAA且其浓度为0.5mg/L时，发芽和生根效果均佳。
实验二，调整包埋液中的基本培养基强度，依发明内容中所述的步骤制作诸葛菜人工种子，进行诸葛菜人工种子的萌发实验。
实验分4组进行，包括CK对照组即本发明使用的基本培养基强度、以及处理2-4组，实验结果如表2所示。
表2包埋液中的基本培养基强度对诸葛菜人工种子的萌发的影响
Figure BDA0000424184610000051
在表2中可以看出，添加半强度的MS培养基即CK对照组相比于处理2组和处理3-4组来说，其发芽和生根效果都好，说明本发明的包埋液中的半强度基本培养基即1/2MS是合适的。

Claims (5)

1.一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤一，诸葛菜芽蔟的诱导
取诸葛菜幼苗，冲刷洗净，截取其上5~10mm的腋芽和顶芽，在超净台内完成消毒，无菌接种在芽蔟诱导培养基上进行芽蔟诱导培养； 
步骤二，诸葛菜芽的增殖
将诸葛菜芽在所述芽蔟诱导培养基上培养至20天后，获得大量芽蔟，将所述大量芽蔟分割成单芽，转接到芽繁培养基上进行芽繁培养； 
步骤三，诸葛菜芽的包埋和人工种子胶囊制备
待所述单芽在所述芽繁培养基上生长至20天后，在超净台里取3-5mm的芽，放在经过灭菌处理的包埋液中，搅拌充分混匀；用内径4-6mm的吸管吸取适量包有芽的包埋液，滴入到质量浓度为2.0% 的CaCl2溶液中，络合凝固10 分钟，形成人工种子胶囊，取出所述人工种子胶囊并用滤纸吸干所述人工种子胶囊上的液体，将人工种子胶囊储藏待萌发。
2.根据权利要求1所述的一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于：所述的芽蔟诱导培养基的成分为：MS +NAA 0.2mg/L+6-BA 2mg/L+3.0%蔗糖+0.7%琼脂；所述MS培养基为Murashige和Skooge培养基，所述NAA为α-萘乙酸，6-BA为6-苄氨基腺嘌呤；所述芽蔟诱导培养基的pH=5.8；所述芽蔟诱导培养的条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的日光灯光源光照14小时。
3.根据权利要求1所述的一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于：所述的芽繁培养基的成分为：MS +NAA 0.2mg/L+6-BA 2mg/L+谷氨酸400 mg/L +3.0%蔗糖+0.7%琼脂，
所述芽繁培养条件为，以光强为35μmol·m-2·s-1的LED红光源光照14小时；所述芽繁培养基的pH =5.8。
4.根据权利要求1所述的一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于：所述的包埋液为海藻酸钠水溶胶，成分为：3.0%海藻酸钠+1/2 MS+3.0%蔗糖+ NAA 0.5mg/L, 所述包埋液的pH= 5.8。
5.根据权利要求1-4所述的一种诸葛菜人工种子制作方法，其特征在于所述的MS培养基的成分包括：
大量元素，KNO3为1900mg/L、NH4NO3为1650mg/L、MgSO4·7H2O为370mg/L、KH2PO4为170mg/L、CaCl2·2H2O为440mg/L；
微量元素MnSO4·4H2O为22.3mg/L、ZnSO4·7H2O为8.6mg/L、H3BO3为6.2mg/L、KI为0.83mg/L、NaMoO4·4H2O为0.25mg/L、CuSO4·5H2O为0.025mg/L、CoCl2·6H2O为0.025mg/L；  
铁盐溶液FeSO4·4H2O为27.8mg/L、Na2-EDTA为37.3mg/L；
有机成分甘氨酸为2.0mg/L、盐酸硫胺素为0.1mg/L、盐酸吡哆醇为0.5mg/L、烟酸为0.5mg/L、肌醇为100mg/L。
CN201310618848.6A 2013-11-27 2013-11-27 一种诸葛菜人工种子制作方法 Active CN103621405B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310618848.6A CN103621405B (zh) 2013-11-27 2013-11-27 一种诸葛菜人工种子制作方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310618848.6A CN103621405B (zh) 2013-11-27 2013-11-27 一种诸葛菜人工种子制作方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103621405A true CN103621405A (zh) 2014-03-12
CN103621405B CN103621405B (zh) 2015-05-13

Family

ID=50203141

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310618848.6A Active CN103621405B (zh) 2013-11-27 2013-11-27 一种诸葛菜人工种子制作方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103621405B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104982336A (zh) * 2015-07-28 2015-10-21 江苏大学 一种茅苍术人工种子制作方法
CN105557527A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 南京农业大学 一种大花蕙兰人工种子制作方法
CN105557528A (zh) * 2016-01-28 2016-05-11 江苏大学 一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法
CN106134995A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 江苏大学 一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003001900A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Icon Genetics Ag Process of controlled shuffling of chromosome fragments for plant breeding
CN1608449A (zh) * 2004-11-23 2005-04-27 江苏大学 诸葛菜用作浮床植物的新用途
CN1843095A (zh) * 2006-05-11 2006-10-11 南京大学 金线莲人工种子制作方法
CN1843096A (zh) * 2006-05-11 2006-10-11 南京大学 杜鹃兰人工种子制作方法
CN101849503A (zh) * 2009-10-26 2010-10-06 刘宏源 一种铁皮石斛人工种子的制作方法
CN102428870A (zh) * 2011-09-22 2012-05-02 澄思源生物科技（上海）有限公司 一种铁皮石斛人工种子的制作方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003001900A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Icon Genetics Ag Process of controlled shuffling of chromosome fragments for plant breeding
CN1608449A (zh) * 2004-11-23 2005-04-27 江苏大学 诸葛菜用作浮床植物的新用途
CN1843095A (zh) * 2006-05-11 2006-10-11 南京大学 金线莲人工种子制作方法
CN1843096A (zh) * 2006-05-11 2006-10-11 南京大学 杜鹃兰人工种子制作方法
CN101849503A (zh) * 2009-10-26 2010-10-06 刘宏源 一种铁皮石斛人工种子的制作方法
CN102428870A (zh) * 2011-09-22 2012-05-02 澄思源生物科技（上海）有限公司 一种铁皮石斛人工种子的制作方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张铭等: ""植物人工种子研究进展"", 《植物学通报》 *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104982336A (zh) * 2015-07-28 2015-10-21 江苏大学 一种茅苍术人工种子制作方法
CN105557527A (zh) * 2016-01-26 2016-05-11 南京农业大学 一种大花蕙兰人工种子制作方法
CN105557527B (zh) * 2016-01-26 2018-06-12 南京农业大学 一种大花蕙兰人工种子制作方法
CN105557528A (zh) * 2016-01-28 2016-05-11 江苏大学 一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法
CN106134995A (zh) * 2016-06-30 2016-11-23 江苏大学 一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法
CN106134995B (zh) * 2016-06-30 2018-01-16 江苏大学 一种双层包埋的诸葛菜人工种子制作方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN103621405B (zh) 2015-05-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103651121B (zh) 一种白及分化、壮苗培养基
CN103371100B (zh) 春石斛兰种苗的组织培养快速繁殖方法
CN103651122B (zh) 一种白及原球茎诱导培养基
CN102246695A (zh) 一种培养器皿内制备白及假鳞茎的方法及其专用培养基
CN106561456B (zh) 一种海伦兜兰无菌播种快速繁殖方法
CN103416305A (zh) 金线莲种苗的无激素组织培养及快速繁殖方法
CN113080061B (zh) 一种香露兜栽培方法
CN103749302A (zh) 一种耐盐芦竹种苗的诱导驯化培育方法
CN101983557B (zh) 檀香种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
CN104322375A (zh) 一种鼓槌石斛种子组织培养快速繁殖方法
CN105010140A (zh) 一种利用稀土元素促进铁皮石斛丛生芽的诱导和生根的培养基及培养方法
CN103548696B (zh) 一种繁殖蓝莓苗的方法
CN105191802B (zh) 一种植物组织胶囊、制备及应用
CN103621405B (zh) 一种诸葛菜人工种子制作方法
CN102919133A (zh) 一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法
CN104137779A (zh) 一种白木乌桕茎段快速诱导再生植株的方法
CN102893872A (zh) 一种香根鸢尾驯化苗的组培方法
CN106489748A (zh) 一种平铺白珠树的组培快速繁殖方法
CN103636506B (zh) 用银水牛果幼茎再生植株诱导培养基进行植株培养的方法
CN104982336A (zh) 一种茅苍术人工种子制作方法
CN105557528A (zh) 一种抗菌的诸葛菜人工种子制作方法
CN105165363B (zh) 一种土人参的高产繁种方法
JP2001251962A (ja) アツモリソウ属植物用培養液，アツモリソウ属植物用培地及びアツモリソウ属植物の培養方法
CN104686342A (zh) 一种白花树无性快繁技术
CN108450328A (zh) 一种鳄嘴花组织培养快速繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20201224

Address after: 224200 No.88 Gangcheng Avenue, Dongtai coastal economic zone, Yancheng City, Jiangsu Province

Patentee after: Dongtai Haibin science and Technology Pioneer Park Management Co.,Ltd.

Address before: No. 101, Nanxu Avenue, Zhenjiang City, Jiangsu Province, 212000

Patentee before: JIANGSU HUIZHI INTELLECTUAL PROPERTY SERVICES Co.,Ltd.

Effective date of registration: 20201224

Address after: No. 101, Nanxu Avenue, Zhenjiang City, Jiangsu Province, 212000

Patentee after: JIANGSU HUIZHI INTELLECTUAL PROPERTY SERVICES Co.,Ltd.

Address before: 212013 No. 301, Xuefu Road, Zhenjiang, Jiangsu

Patentee before: JIANGSU University

TR01 Transfer of patent right