JP2001251962A - アツモリソウ属植物用培養液，アツモリソウ属植物用培地及びアツモリソウ属植物の培養方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 発芽率を向上させ、また、発芽後の培養中の
褐変死の発生を抑えて生存率を高め一度に大量の苗を生
産することができるようにする。 【解決手段】 種子選別工程と、種子を培養液に混合し
て培地に播種する無菌播種工程と、発芽するまで培養す
る発芽培養工程と、発芽し器官分化したものを培地を替
えて継代培養する継代培養工程と、継代培養工程で生育
した培養苗を低温の環境下にさらす低温処理工程と、そ
の後、用土に植え替える鉢上げ工程とを備えた。上記培
養液を、当該培養液１０００ｍｌ中に添加物として、サ
ッカロース０〜１０ｇと、木酢液０．１〜２．０ｍｌ
と、ビタミン類８〜４５ｍｇと、植物活性剤０．１〜
１．０ｍｌとを含有して構成し、上記培地を当該培地用
水溶液１０００ｍｌ中に添加物として、窒素，リン及び
カリウムを含有する肥料１〜３ｇと、ぺプトン１〜３ｇ
と、糖類１０〜３０ｇと、植物活性剤０．２〜１．０ｍ
ｌと、ビタミン類１６〜７０ｍｇとを含有して構成し
た。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ラン科のアツモリ
ソウ属植物を大量に増殖させ、生育させるためのアツモ
リソウ属植物用培養液，アツモリソウ属植物用培地及び
アツモリソウ属植物の培養方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】一般に、アツモリソウ属植物とは、ラン
（蘭）科の一種で、シプリペジュウム属とも言われ、例
えば、その種類として、アツモリソウ，ホテイアツモリ
ソウ，レブンアツモリソウ，カラフトアツモリソウ等が
知られている。アツモリソウ属植物は幻の山野草と言わ
れ、特にアツモリソウは、乱獲のため、絶滅の危機に瀕
していて絶滅のおそれのある野生動植物の譲渡の規制等
に関する法律によって希少野生動植物に登録されている
植物である。また、アツモリソウ属植物は、増殖しにく
い植物であり、その理由のひとつに発芽率が低いという
ことが挙げられる。自然界での発芽率は、１０万分の１
とも言われる。これは、普通の草花では、葉や根に成長
する部分や発芽に必要な栄養分が含まれる胚乳が存在し
ているが、アツモリソウの種子にはそれらがなく、胚が
あるのみで、この種子の構造から発芽率が低いと考えら
れている。そのため、近年、このアツモリソウ属植物の
種の保存を図るため、バイオテクノロジー技術を利用し
て発芽率を向上させて増殖させる研究が行なわれてい
る。尚、国の許可を受けアツモリソウの培養に取り組ん
でいる研究施設は、現在の所、国内で１２カ所ある。

【０００３】従来、アツモリソウ属植物の培養方法とし
ては、例えば、無菌播種により、寒天質の培地上に滅菌
水を流し込み種子を散らすという方法が知られている。
滅菌水としては、例えば、次亜塩素酸ナトリウムを添加
した水溶液等が知られている（例えば、特開平５−１４
８１１５号公報掲載）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】ところで、このような
従来のアツモリソウ属植物の培養方法にあっては、必ず
しも満足できる発芽率を達成できていないという問題が
あった。本願発明者らは、平成７年から研究に取り組ん
でおり、その間、１００数種類前後の培地を用い、これ
らの培地上に上記の次亜塩素酸ナトリウムを添加した滅
菌水を使用して種子を広げて試験を行なったが、発芽率
が延びないことが分かった。また、このアツモリソウ属
植物では発芽しても苗に育つ前に植物が褐変死する確率
が高いという問題もあった。褐変死は、植物体が黒色に
変化したフェノール物質を出して褐変して死んでしまう
現象である。従って、従来の培養方法，培地，培養液で
は発芽率の向上は難しく、また、発芽しても培養中に植
物が褐変死することが多く大きな問題となっている。

【０００５】本発明は、このような問題点に鑑みてなさ
れたもので、発芽率を向上させ、また、発芽後の培養中
の褐変死の発生を抑えて生存率を高め一度に大量の苗を
生産することができるアツモリソウ属植物用培養液，ア
ツモリソウ属植物用培地及びアツモリソウ属植物の培養
方法を提供することを目的とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】このような課題を解決す
るため本願発明者らは、播種する際、培地上に種子を広
げるために使っていた滅菌水の代替用として栄養素を含
んだ培養液を用いることを研究し、その開発に取り組
み、褐変の発生を抑え、発芽率を向上させることのでき
る以下のアツモリソウ属植物用培養液，アツモリソウ属
植物用培地及びアツモリソウ属植物の培養方法を開発し
た。本発明のアツモリソウ属植物用培養液は、アツモリ
ソウ属植物を種子から培養する際に用いられ水に添加物
を添加してなるアツモリソウ属植物用培養液において、
当該培養液１０００ｍｌ中に、添加物として、糖類０〜
１０ｇと、木酢液０．１〜２．０ｍｌと、ビタミン類８
〜４５ｍｇと、植物活性剤０．１〜１．０ｍｌとを含有
した構成とした。この培養液を無菌播種に用いると、木
酢液，ビタミン類及び植物活性剤の相互作用によって、
種子が栄養分を吸収し易くなり、プロトコーム形成の促
進が図られ、発芽率が大幅に向上させられる。また、発
芽後の継代培養中に添加することにより植物体の褐変の
発生が抑えられ、褐変死させることが抑制され、更に植
物体が栄養分を良く吸収して順調に生育させられ、生存
率が大幅に向上させられる。

【０００７】そして、必要に応じ、上記培養液をｐＨ
５．５〜６．０とすることが有効である。ｐＨをアツモ
リソウの自生地のｐＨに近い値にすることにより、発芽
及び培養の環境を最適にでき、発芽率の向上と生育良好
とすることができる。また、必要に応じ、上記添加物と
して糖類を含有した構成とした。この場合、上記培養液
１０００ｍｌ中に糖類を１〜１０ｇ含有したことが有効
である。そして、必要に応じ、上記糖類をサッカロース
とした。そしてまた、必要に応じ、上記ビタミン類を塩
酸チアミンとした構成とした。この場合、上記塩酸チア
ミンを１〜１０ｍｇ含有したことが有効である。また、
必要に応じ、上記ビタミン類をニコチン酸とした構成と
した。この場合、上記ニコチン酸を１〜５ｍｇ含有した
ことが有効である。また、必要に応じ、上記ビタミン類
を塩酸ピリドキシンとした構成とした。この場合、上記
塩酸ピリドキシンを１〜１０ｍｇ含有したことが有効で
ある。更にまた、必要に応じ、上記ビタミン類をミオイ
ノシトールとした構成とした。この場合、上記ミオイノ
シトールを５〜２０ｍｇ含有したことが有効である。ラ
ン科植物の培養ではビタミン類が培養を促進させる効果
があることが多く、その選択は重要であるが、上記のビ
タミンを添加することにより、発芽及び継代培養中、植
物体にビタミンがバランス良く有効に作用する。

【０００８】そして、必要に応じ、上記植物活性剤は、
粗タンパク質０．０５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３
〜０．５重量％、無機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／
ｌ、Ｃａ３０〜３５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ
／ｌ、Ｍｇ３．０〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．
０ｍｇ／ｌ、Ｎ９０〜１００ｍｇ／ｌを備えている。植
物活性剤の添加により、栄養バランスが良く、発芽を促
進させる効果を発揮させる。

【０００９】そして、本発明のアツモリソウ属植物用培
地は、アツモリソウ属植物を種子から培養する際に用い
られ、水に添加物を添加した水溶液をゲル状にしたアツ
モリソウ属植物用培地において、上記水溶液１０００ｍ
ｌ中に添加物として、窒素，リン及びカリウムを含有す
る肥料１〜３ｇと、ぺプトン１〜３ｇと、糖類１０〜３
０ｇと、植物活性剤０．２〜１．０ｍｌと、ビタミン類
１６〜７０ｍｇとを含有している。この培地を無菌播種
に用いることにより、プロトコーム形成の促進を図るの
で発芽率を向上させることができる。また、必要に応
じ、上記植物活性剤の替わりにポテトキューブを培地５
０ｍｌ中０．５〜１．５ｇ添加する構成とした。そし
て、必要に応じ、上記水溶液をｐＨ５．５〜６．０とす
る構成とした。ｐＨをアツモリソウの自生地のｐＨに近
い値とすることにより、発芽及び培養の環境を最適にで
き、発芽率の向上と生育良好とすることができる。

【００１０】また、必要に応じ、上記糖類をサッカロー
スとした構成とした。そして、必要に応じ、上記ビタミ
ン類を塩酸チアミンとした構成とした。この場合、上記
塩酸チアミンを５〜２０ｍｇ含有したことが有効であ
る。そしてまた、必要に応じ、上記ビタミン類をニコチ
ン酸とした構成とした。この場合、上記ニコチン酸を１
〜１０ｍｇ含有したことことが有効である。更にまた、
必要に応じ、上記ビタミン類を塩酸ピリドキシンとした
構成とした。この場合、上記塩酸ピリドキシンを５〜２
０ｍｇ含有したことが有効である。また、必要に応じ、
上記ビタミン類をミオイノシトールとした構成とした。
この場合、上記ミオイノシトールを５〜２０ｍｇ含有し
たことが有効である。ラン科植物の培養ではビタミン類
が培養を促進させる効果があることが多く、その選択は
重要であるが、上記のビタミンを添加することにより、
発芽及び継代培養中、植物体にビタミンがバランス良く
有効に作用する。

【００１１】そして、必要に応じ、上記植物活性剤は、
粗タンパク質０．０５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３
〜０．５重量％、無機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／
ｌ、Ｃａ３０〜３５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ
／ｌ、Ｍｇ３．０〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．
０ｍｇ／ｌ、Ｎ９０〜１００ｍｇ／ｌを備えている。植
物活性剤の添加により、栄養バランスが良く、発芽の促
進させる効果を発揮させる。そして、必要に応じ、上記
ゲル化剤としてゲランガムを用いた構成とした。このこ
とにより、発芽及び発育に効果がある。

【００１２】また、必要に応じ、上記水溶液中に添加物
として活性炭を含有した構成とした。活性炭を添加する
ことにより、発芽後の継代培養中において植物体の褐変
の発生を抑えるので褐変死させることなく生育させて生
存率を高めることができる。この場合、上記活性炭を
０．５〜３ｇ含有したことが有効である。

【００１３】また、本発明のアツモリソウ属植物の培養
方法は、アツモリソウ属植物を種子から培養するアツモ
リソウ属植物の培養方法において、選別して使用する種
子を得る種子選別工程と、得られた種子を培養液を用い
て無菌的に固形培地に播種する無菌播種工程と、播種
後、発芽するまで培養する発芽培養工程と、発芽し器官
分化したものを培地を替えて継代培養する継代培養工程
と、培養苗がある一定の大きさに生育したら低温の環境
下にさらす低温処理工程と、低温処理終了後、用土に植
え替える鉢上げ工程とを備えた構成とした。これによ
り、培地に種子を播種した後、プロトコームが形成され
発芽率が驚異的に向上する。培地に種子を播種して無菌
播種から栄養、温度、湿度等の条件を理想的な状態で生
育して苗まで成長させたアツモリソウ属植物を自然の栽
培環境に移す鉢上げ前に低温処理が行なわれ、苗が環境
の変化に対して丈夫になり順化が順調に行なわれる。

【００１４】そして、必要に応じ、上記培養液を培地と
は異なる組成の培養液とする構成とした。このことによ
り、培地の成分による要素だけでなく、培養液の成分の
要素も加わるので栄養が豊富となり、発芽を促進させる
ことができる。また、必要に応じ、上記発芽培養工程に
おいて、播種した培地を暗黒下において培養する構成と
した。アツモリソウ属植物は光に敏感で、光に当てると
褐変が発生して褐変死してしまう。また、必要に応じ、
上記発芽培養工程において、播種した培地を１０〜２５
℃の環境において培養する構成とした。アツモリソウ属
植物の培養において最適な温度であり、２５℃より高い
と褐変が発生して褐変死してしまう。また、１０℃に満
たない温度では、生育が遅く、褐変も発生して褐変死し
てしまう。

【００１５】そして、必要に応じ、上記継代培養工程に
おいて、培地に培養液を添加する構成とした。種子や発
芽直後の植物体及び幼い苗において乾燥に耐えることが
できず死んでしまう危険性が高いが、培養液を添加する
ことにより乾燥することなく、また、液体のため栄養素
を吸収し易く、更には発芽後の培養中の褐変死の発生を
抑えて生存率を高めることができる。また、必要に応
じ、上記継代培養工程において、培地を１０〜２５℃の
環境において培養する構成とした。アツモリソウ属植物
の培養において最適な温度であり、２５℃より高いと褐
変が発生して褐変死してしまう。また、１０℃に満たな
い温度では、生育が遅く、褐変も発生して褐変死してし
まう。

【００１６】そして、必要に応じ、上記低温処理工程に
おいて、低温処理期間を３０〜９０日とした構成とし
た。この場合、望ましくは、上記低温処理工程におい
て、低温処理期間を６０日±５日としたことが有効であ
る。アツモリソウ属植物において、培養によって順調に
生育した苗を自然環境においても生育させるために低温
下に置く春化処理が９０日以上必要とされている。しか
し、本発明の培養方法では、６０日±５日程度の低温処
理工程において春化処理と同様の効果が得られる。

【００１７】更にまた、必要に応じ、上記低温処理工程
において、低温処理温度を０〜１０℃とした構成とし
た。０℃より低温であると、幼苗が凍り、壊死してしま
う。また、１０℃より温度が高くなると、低温処理の効
果が見られず順調に成長しない。この場合、望ましく
は、上記低温処理工程において、低温処理温度を３〜５
℃としたことが有効である。

【００１８】また、この培養方法において用いる培養液
は「請求項１〜１４」に挙げた培養液が望ましく、同様
に培地も「請求項１５〜３０」に挙げた培地を用いるこ
とが望ましい。この場合、発芽率が８０％以上になり、
発芽後の生存率も７０％以上となり、アツモリソウ属植
物の大量増殖が可能となり、鉢上げ後の苗を供給でき
る。

【００１９】

【発明の実施の形態】以下、添付図面に基づいて本発明
の実施の形態に係るアツモリソウ属植物用培養液，アツ
モリソウ属植物用培地及びアツモリソウ属植物の培養方
法を説明する。アツモリソウ属植物用培養液及びアツモ
リソウ属植物用培地はアツモリソウ属植物の培養方法に
おいて用いられるので、この培養方法の説明において説
明する。

【００２０】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属
植物の培養方法は、図１乃至３に示すように、選別して
使用する種子を得る種子選別工程（１）と、得られた種
子を無菌的に固形培地に播種する無菌播種工程（２）
と、播種後、発芽するまで培養する発芽培養工程（３）
と、発芽し器官分化したものを培地を替えて継代培養す
る継代培養工程（４）と、培養苗がある一定の大きさに
生育したら低温の環境下にさらす低温処理工程（５）
と、低温処理終了後、用土に植え替える鉢上げ工程
（６）からなる。以下に各工程を詳しく説明する。

【００２１】（１）種子選別工程 先ず、無菌播種に使用する培養に適した優良なアツモリ
ソウの種子を以下のようにして得る。 人工交配 開花から３０日以内、望ましくは開花から１週間以内ま
での花を選び花粉を採取して交配先となる株の受精先に
花粉を受粉させ交配を完了させる。 さやの保護 人工交配終了後、交配が確認できたら直ちに病害虫によ
る被害から防ぐためさや全体を袋で覆う。また、袋で覆
わない場合には、定期的に殺菌剤をさやにかける。 さやの採取時期 人工交配終了後、４０〜１２０日までのさや、望ましく
は、６０〜８０日のさやを採取し無菌播種の材料として
使用する。ここで、アツモリソウでは胚の形成が始まる
交配後６０日前後の種子が最も発芽率が高く、望まし
い。交配後４０日に満たないと胚が充分に形成されてお
らず、交配後８０日を過ぎると発芽率が低下する。 種子選別 採取したさやを殺菌処理した後、さやから種子を取出
し、顕微鏡にて種子内部にある胚を観察し選別する。種
子は、発芽能力が高いものの特徴である胚の形状が丸み
を帯びていて、かつ、胚の色が白又は黄色のものを選
ぶ。胚の色が白又は黄色のものは、発芽抑制物質の影響
を受けていないため、発芽し易い。逆に胚の形状が細
く、米状のものは発芽能力が低い。また、胚の色が茶色
又は黒っぽいものは発芽能力が極めて低い。

【００２２】（２）無菌播種工程 選別した種子を培養液に入れて、無菌的に発芽の際に用
いる発芽用培地に播種する。培養液中の種子を培地に流
し入れて種子が培地全体に広がるように拡散する。この
ときフラスコ内の種子は約３００〜１０００個である。

【００２３】ここで用いる培養液は、本発明の実施の形
態に係る培養液であり、サッカロース０〜１０ｇと、木
酢液０．１〜２．０ｍｌと、ビタミン類として塩酸チア
ミン１〜１０ｍｇ，ニコチン酸１〜５ｍｇ，塩酸ピリド
キシン１〜１０ｍｇ及びミオイノシトール５〜２０ｍｇ
と、植物活性剤０．１〜１．０ｍｌとを用い、これらの
添加物に蒸留水を加え、０．１Ｎの塩酸や０．１Ｎの水
酸化ナトリウムを用いてｐＨ５．５〜６．０に調整した
培養液１０００ｍｌを得た。その後、オートクレーブで
高圧殺菌し、無菌室内で放冷する。ここで、植物活性剤
としては、例えば、市販されている商品であるＨＢ１０
１（株式会社フローラ社製）やメネデール（株式会社メ
ネデール化学研究所社製）が用いられる。植物活性剤
は、粗タンパク質０．０５〜０．１５重量％、粗脂肪
０．３〜０．５重量％、無機質として、Ｎａ３５〜４５
ｍｇ／ｌ、Ｃａ３０〜３５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．
０ｍｇ／ｌ、Ｍｇ３．０〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０
〜８．０ｍｇ／ｌ、Ｎ９０〜１００ｍｇ／ｌを備えてい
る。例えば、植物活性剤としては、市販されている商品
であるＨＢ１０１（株式会社フローラ社製）やメネデー
ル（株式会社メネデール化学研究所社製）が用いられ
る。

【００２４】また、ここで用いる培地は、本発明の実施
の形態に係るアツモリソウ属植物用培地であり、窒素が
６．５，リン酸が６及びカリウムが１９の比率（重量
％）で含有されている肥料（市販されている商品名「ハ
イポネックス」（株式会社ハイポネックス社製））１〜
３ｇと、ペプトン１〜３ｇと、サッカロース１０〜３０
ｇと、ビタミン類として塩酸チアミン５〜２０ｍｇ，ニ
コチン酸１〜１０ｍｇ，塩酸ピリドキシン５〜２０ｍｇ
及びミオイノシトール５〜２０ｍｇと、植物活性剤０．
１〜１．０ｍｌとを用い、これらの添加物に蒸留水を加
え、０．１Ｎの塩酸や０．１Ｎの水酸化ナトリウムを用
いてｐＨ５．５〜６．０に調整して１０００ｍｌの水溶
液を得る。そして、この水溶液に、ゲル化剤としてゲラ
ンガム３〜４ｇを加え、その後、攪拌しながら加熱して
ゲランガムを溶かし、フラスコに約５０ｍｌずつ分注
し、オートクレーブで高圧殺菌して、無菌室内で放冷し
て、凝固させる。植物活性剤としては、上述したと同様
の成分を有し、例えば、市販されている商品であるＨＢ
１０１（株式会社フローラ社製）やメネデール（株式会
社メネデール化学研究所社製）が用いられる。尚、培地
に含まれるビタミン類は上述した培養液の２倍の重量と
なる。

【００２５】（３）発芽培養工程 無菌播種終了後、室温を１５〜２０℃に設定し暗黒下に
置き培養を開始する。尚、培養を暗黒下で行なうのは、
光に当たると種子が褐変して死滅してしまうためであ
る。播種後、約２〜３カ月で、ＰＬＢ（プロトコーム）
が見られ発芽する。その後、器官分化が見られるまで、
培養する。 （４）継代培養工程 発芽し器官分化したものを培地を替えて継代培養する。
ここで用いる培地は、発芽用培地に活性炭を０．５〜
３．０ｇ加えた組成の継代培養用培地である。活性炭を
加えた継代培養用培地にピンセットを使い移して、培地
上に培養液を培地５０ｍｌ中に約０．５〜１．０ｍｌ添
加した後、暗黒下に置き、室温を１０〜２５℃に設定し
て培養を開始する。継代培養は１〜６カ月行なう。この
間、培地の植え替えを上記と同様に１〜５回行ない、そ
の際に培養液も添加する。ここで、培養苗の生育を進め
たいとき、茎葉部の発生が見られたらごくわずかな光
（光量は、０〜２０００ｌｕｘ（ルクス））を照射して
も差支えない。

【００２６】（５）低温処理工程 培養苗が約１０ｍｍ以上に成長したら、温度を３〜５℃
に設定して６０日以上、低温の環境に置く。アツモリソ
ウ属植物において、培養によって順調に生育した苗を自
然環境においても生育させるために低温下に置く春化処
理が９０日以上必要とされている。しかし、本発明の培
養方法では、６０日以上の低温処理工程において９０日
以上の春化処理と同様の効果が得られる。 （６）鉢上げ工程 低温処理終了後、用土に植え替えて鉢上げする。鉢上げ
は、培地上で生育した培養苗をピンセットを使い取り出
し、水又は殺菌剤を加えた水に浸けて苗を充分に湿らせ
る。次に、予め準備した鉢に用土を加え、その土中に深
さ約１ｃｍ程度の穴をつくり苗全体が埋没するように
（植物体を外に出さないようにする）植えつけて鉢上げ
する。栽培開始後、土から植物体が伸長し、生育を開始
する。

【００２７】従って、この実施の形態に係る培養方法に
よれば、発芽率が著しく高く、また、培養中に褐変の発
生を抑えて生育させることができるので生存率も高くア
ツモリソウ属植物の大量増殖を図ることができる。ま
た、鉢上げ工程を春に行なうように培養を行なうと、ア
ツモリソウの生育サイクルと季節が一致して鉢上げ後も
アツモリソウを順調に成長させることができる。

【００２８】

【実施例】（Ａ）培養液（「遠野培養液」と命名） 本発明の実施例に係る培養液は、図４に示すように、サ
ッカロース１０ｇと、木酢液１．０〜２．０ｍｌと、ビ
タミン類として塩酸チアミン５ｍｇ，ニコチン酸２．５
ｍｇ，塩酸ピリドキシン５ｍｇ及びミオイノシトール１
０ｍｇとを用い、これらの添加物に蒸留水を加えるとと
もに、植物活性剤としてのＨＢ１０１（株式会社フロー
ラ社製）を０．１〜１．０ｍｌ適宜に滴下し、更に、
０．１Ｎの塩酸や０．１Ｎの水酸化ナトリウムを用いて
ｐＨ５．６５に調整して、１０００ｍｌの培養液を得
た。この植物活性剤としてのＨＢ１０１は、粗タンパク
質０．１％、粗脂肪０．４％、無機質として、Ｎａ４１
ｍｇ／ｌ、Ｃａ３３ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．８ｍｇ／ｌ、Ｍ
ｇ３．３ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．４ｍｇ／ｌ、Ｎ９７ｍｇ／
ｌを備えている。水素イオン濃度（原液）は、ｐＨ４．
０である。その後、オートクレーブで高圧殺菌し、無菌
室内で放冷した。

【００２９】（Ｂ）発芽用培地（「遠野培地」と命名） 本発明の実施例に係る培地は、図５に示すように、肥料
として「ハイポネックス」（株式会社ハイポネックス社
製）を用いた。ここで、「ハイポネックス」は、窒素が
６．５，リン酸が６及びカリウムが１９の比率（重量
％）で含有されている肥料である。そして、「ハイポネ
ックス」２ｇと、ペプトン２ｇと、サッカロース２０ｇ
と、ビタミン類として塩酸チアミン１０ｍｇ，ニコチン
酸５ｍｇ，塩酸ピリドキシン１０ｍｇ及びミオイノシト
ール２０ｍｇとを用い、これらの添加物に蒸留水を加え
るとともに、植物活性剤としてのＨＢ１０１（株式会社
フローラ社製）０．１〜１．０ｍｌを適宜に滴下し、更
に、０．１Ｎの塩酸及び０．１Ｎの水酸化ナトリウムを
用いてｐＨ５．６５に調整して、１０００ｍｌの水溶液
を得た。この状態の水溶液に、ゲル化剤としてゲランガ
ム３〜４ｇを、攪拌しながら加熱して溶かし、フラスコ
に約５０ｍｌずつ分注し、オートクレーブで高圧殺菌し
て、無菌室内で放冷して、凝固させる。 （Ｃ）継代培養用培地（「遠野培地」と命名） 本発明の実施例に係る継代培養用培地は、上記水溶液中
に添加物として活性炭を０．５〜３．０ｇ含有させた組
成のものを用いた。

【００３０】培養方法は、上述した実施の形態に従って
行なった。尚、継代培養工程（４）において、継代培養
は１〜６カ月で、培地の植え替えを１〜５回行ない、培
養苗が約１０ｍｍ以上に成長させた。そして茎葉部が発
生しても光を照射することなく培養した。また、低温処
理工程（５）においては、苗を温度を３〜５℃に設定し
て暗所に６０日間、低温の環境に置いた。

【００３１】

【実験例】（Ｉ−Ｉ）発芽用培地の実験 先ず、本発明の実施例に係る培地（Ｂ）について比較例
とともに以下の実験をした。発芽用培地の比較例とし
て、ＭＳ培地，ハイポネックス培地，ＭＴ培地，ナドソ
ンＢ培地，ナドソンＣ培地，リングマイヤー・スクーグ
培地，ホワイト培地，ベーシン・ベント培地，ウインバ
ー培地，Ｂｕｒｇｅｆｔ．Ｈ．Ｅｇ−１培地，カーチ
ス．Ｊ培地，山田培地，バナナ蜂蜜（唐澤）培地，フイ
ツシュ・ソリュブル培地，洋ラン用タマネギ培地，ＧＳ
培地，京都ソリューション培地，Ｂｕｒｇｅｆｔ Ｎ₃
Ｆ培地，ガンボーグＢ５培地，ハーバース培地の計２０
種類の培地を用いた。これらの培地に、アツモリソウの
種子を無菌播種した。尚、播種の際に種子の拡散のため
に用いたのは滅菌水のみであり、他の工程は、上述した
培養方法と同様である。結果を図６に示す。この結果、
本発明の培地は調整が比較的簡易に行なうことができ、
発芽，生育ともに良好であった。

【００３２】（Ｉ−ＩＩ）発芽用培地及び継代培養用培
地の実験 各培地による発芽と生育の違いを調べるため、本発明の
実施例に係る培地（Ｂ）及び（Ｃ）について比較例とと
もに以下の実験をした。発芽用培地及び継代培養用培地
の比較例として、本発明の培地の成分を１／２にして作
成した培地（本発明の培地の濃度の１／２の培地），ハ
ーバース培地，ＭＴ培地，ＭＳ培地の計４種類の培地に
アツモリソウの種子を無菌播種した。尚、播種用培地、
継代培養用培地以外は、上述した培養方法と同様に行な
った。そして、播種から２カ月後，４カ月後，６カ月後
の生育した苗の高さを測定した。結果を図７及び８に示
す。本発明の培地（Ｂ）及び（Ｃ）を順に使用した最終
の発芽率は８２．６％と最も高く、本発明の培地の成分
を１／２にして作成した培地の発芽率は７１．０％，ハ
ーバース培地の発芽率は７０．５％，ＭＴ培地の発芽率
は１．４％，ＭＳ培地の発芽率は０．６％であった。ま
た、図８において、播種から２カ月後，４カ月後，６カ
月後の生育した苗の高さは、苗２０〜３０個の平均の値
である。この結果、本発明の培地で培養したアツモリソ
ウの苗は播種から６カ月後に平均値で５０ｍｍとなり、
他の培地で培養した苗の平均値より生育したことが分か
る。

【００３３】（ＩＩ）培養液の実験 各培養液による発芽と生育の違いを調べるため、本発明
の実施例に係る培養液について比較例とともに以下の実
験をした。 滅菌水とサッカロースにＨＢ１０１を添加した液，
滅菌水とサッカロースに木酢液を添加した液，滅菌水
とサッカロースにＨＢ１０１と木酢液を添加した液，
滅菌水とサッカロースに木酢液とビタミンを添加した液
の培養液を用いて、培養を行なった。また、の液にお
いてＨＢ１０１の添加濃度を変えた液でも調べてみた。
尚、培養液以外は、上述した培養方法と同様に行なっ
た。結果を図９に示す。この結果から、滅菌水とサッカ
ロースにＨＢ１０１と木酢液とビタミンを添加した本発
明の培養液が最も褐変の発生を抑え、生育が良好であっ
た。

【００３４】（ＩＩＩ）培養温度の実験 各培養温度による影響を調べるため、本発明の実施例に
係る培養方法の発芽培養工程（３）において、培養温度
を変えた比較例として以下の実験をした。培養は、１０
℃，１５℃，２０℃，２５℃，３０℃の各温度で行な
い、各温度の試験数は５０個として、培養中に褐変が発
生して発芽しない割合（褐変死率）を調べた。尚、培養
温度以外は、上述した培養方法と同様に行なった。結果
は図１０に示すように、２５℃の培養では約７０％、３
０℃の培養では約９５％が褐変して死んでしまい、播種
後の培養温度は１０〜２０℃で行なうことが最適である
ことが分かった。

【００３５】（ＩＶ−Ｉ）低温処理の効果を調べる実験 低温処理の効果を調べるため、本発明の実施例に係る培
養方法と低温処理を行なわない比較例として以下の実験
をした。低温処理を行なわないで２０℃の暗所で６０日
間置いて鉢上げした苗と２０℃の明所で６０日間置いて
鉢上げした苗の生存率を調べた。実施例において低温処
理は、苗を３〜５℃の暗所で６０日間であるが、この低
温処理工程において明所においた場合の苗の鉢上げした
後の生存率及びその後の生育も調べた。尚、低温処理以
外の条件は上述した培養方法と同様に行なった。低温処
理を行なわないで鉢上げしたときの苗の生存率の結果
は、図１１に示すように、暗所での生存率が７％でかな
り低く、明所でも１３％で生存率が低い。これに対し、
低温処理したものは、暗所、明所ともに８０％以上の高
い生存率であり、わずかに明所での生存率が高かった。
また、低温処理の暗所と明所のその後の生育の結果は、
図１２に示すように、暗所は明所と比較して生育は劣る
が褐変は発生せず、明所では、茎葉部の色が薄くなった
が生育は進んだ。しかし明所ではわずかに褐変が発生し
た。

【００３６】（ＩＶ−ＩＩ）低温処理を行なうアツモリ
ソウの成長状態の実験 次に、低温処理を行なうアツモリソウの成長状態を調べ
るために、本発明の実施例に係る培養方法と低温処理を
行なわない比較例として以下の実験をした。実施例で
は、苗が１０ｍｍ以上に成長した状態で低温処理を行な
った。比較例では、発芽直後のプロトコーム，苗が５ｍ
ｍ程度に成長した状態で低温処理を行なった後の状態及
びその後の生育を調べた。低温処理以外の条件は上述し
た培養方法と同様に行なった。結果は図１２に示すよう
に、プロトコームでは生育が止まり褐変死したものが見
られ、５ｍｍ程度の植物体では生育に変化が見られず、
１０ｍｍ以上の植物体（苗）では生育が順調に進んだ。

【００３７】（ＩＶ−ＩＩＩ）低温処理を行なう期間の
実験 次に、低温処理を行なう期間を調べるために、本発明の
実施例に係る培養方法と低温処理を行なわない比較例と
して以下の実験をした。本発明の実施例では６０日間低
温処理を行なったが、比較例として、１５日，３０日，
６０日，９０日の各期間、約１０ｍｍの植物体（苗）を
暗所で３〜５℃で低温処理を行なった。結果は図１３に
示すように、６０日間，９０日間の低温処理を行なった
苗の生育が良好であったことから、６０日以上行なうと
低温処理の効果が見られる。

【００３８】上記低温処理に関する各実験から、低温処
理は１０ｍｍ以上に生育した苗を３〜５℃で６０日以上
行なうことが最適であり、明るさは、暗所、明所どちら
でも構わないということが分かった。

【００３９】尚、上記実施の形態において、培地に植物
活性剤を添加したが、植物活性剤を添加することなく、
ポテトキューブを用いても良い。

【００４０】

【発明の効果】以上説明したように、本発明のアツモリ
ソウ属植物用培養液によれば、アツモリソウ属植物を種
子から培養する際に用いられ水に添加物を添加してなる
アツモリソウ属植物用培養液において、培養液１０００
ｍｌ中に、添加物として、木酢液０．１〜２．０ｍｌ
と、ビタミン類８〜４５ｍｇと、植物活性剤０．１〜
１．０ｍｌとを含有した構成としたことから、液体のた
め種子が栄養分を吸収し易くプロトコームを形成させて
発芽率を向上させることができ、また、発芽後の継代培
養中に添加することにより植物体の褐変の発生を抑える
ので褐変死させることなく、更に植物体が栄養分を吸収
し易いため有効に作用し、順調に生育させて生存率を高
めることができる。

【００４１】そして、培養液をｐＨ５．５〜６．０とし
た場合には、発芽及び培養の環境を最適にでき、発芽率
を向上させ生育を良好にすることができる。また、添加
物として糖類を含有した場合には、種子に栄養分を与え
ることができ発芽率が向上する。この場合、培養液１０
００ｍｌ中に糖類を１〜１０ｇ含有したことが有効であ
る。そしてまた、糖類をサッカロースとし、ビタミン類
において、塩酸チアミンを１〜１０ｍｇ、ニコチン酸を
１〜５ｍｇ、塩酸ピリドキシンを１〜１０ｍｇ、ミオイ
ノシトールを５〜２０ｍｇ含有した場合には、アツモリ
ソウ属植物の発芽率を向上させ、生育を促進させること
ができる。そして、植物活性剤が、粗タンパク質０．０
５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３〜０．５重量％、無
機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／ｌ、Ｃａ３０〜３５
ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ／ｌ、Ｍｇ３．０〜
４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．０ｍｇ／ｌ、Ｎ９０
〜１００ｍｇ／ｌを備えている場合には、バランスが良
く、発芽促進をさせることができる。

【００４２】そして、本発明のアツモリソウ属植物用培
地によれば、アツモリソウ属植物を種子から培養する際
に用いられ水に添加物とゲル化剤を添加してゲル状にし
たアツモリソウ属植物用培地において、窒素，リン及び
カリウムを含有する肥料１〜３ｇと、ぺプトン１〜３ｇ
と、糖類１０〜３０ｇと、植物活性剤０．２〜１．０ｍ
ｌと、ビタミン類１６〜７０ｍｇとを用い、これらの添
加物を水に混合して１０００ｍｌとした水溶液をゲル状
としたので、この培地を無菌播種に用いることにより、
プロトコームを形成させて発芽率を向上させることがで
きる。また、植物活性剤の替わりにポテトキューブを培
地５０ｍｌ中０．５〜１．５ｇ添加する場合には、ポテ
トの養分を種子に与えることができる。そして、培地を
ｐＨ５．５〜６．０とした場合には、発芽及び培養の環
境を最適にでき、発芽率の向上と生育を良好にすること
ができる。

【００４３】そしてまた、糖類をサッカロースとし、ビ
タミン類において、塩酸チアミンを５〜２０ｍｇ、ニコ
チン酸を１〜１０ｍｇ、塩酸ピリドキシンを５〜２０ｍ
ｇ、ミオイノシトールを５〜２０ｍｇ含有した場合に
は、アツモリソウ属植物の発芽率を向上させ、生育を促
進させることができる。そして、植物活性剤が、粗タン
パク質０．０５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３〜０．
５重量％、無機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／ｌ、Ｃ
ａ３０〜３５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ／ｌ、
Ｍｇ３．０〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．０ｍｇ
／ｌ、Ｎ９０〜１００ｍｇ／ｌを備えている場合には、
栄養バランスが良く、発芽を促進させることができる。
更にまた、活性炭を添加した場合には、発芽後の継代培
養において植物体の褐変の発生を抑えるので褐変死させ
ることなく生育させて生存率を高めることができる。

【００４４】そして、本発明のアツモリソウ属植物の培
養方法によれば、選別して使用する種子を得る種子選別
工程と、得られた種子を培養液に混合して無菌的に固形
培地に播種する無菌播種工程と、播種後、発芽するまで
培養する発芽培養工程と、発芽培養工程において発芽し
器官分化したものを培地を替えて継代培養する継代培養
工程と、継代培養工程で生育した培養苗を低温の環境下
にさらす低温処理工程と、低温処理終了後、用土に植え
替える鉢上げ工程とを備えたので、プロトコームを形成
させることができ発芽率が驚異的に向上する。

【００４５】そして、培養液を培地とは異なる組成の培
養液とした場合には、培地の成分による要素だけでな
く、培養液の成分の要素も加わり、種子の発芽に刺激を
与え発芽を促進させることができる。また、発芽培養工
程において、播種した培地を暗黒下において培養する場
合には、褐変の発生による種子の死滅を抑えるので、発
芽率を向上させることができる。また、発芽培養工程に
おいて、播種した培地を１０〜２５℃の環境において培
養する場合には、褐変の発生による種子の死滅を抑える
ので、発芽率を向上させることができる。

【００４６】そして、継代培養工程において、培地に培
養液を添加する場合には、発芽後の培養中の褐変死の発
生を抑えて生存率を高めることができる。また、継代培
養工程において、培地を１０〜２５℃の環境において培
養する場合には、褐変の発生による死滅を抑えるので、
順調に生育させることができる。

【００４７】更にまた、低温処理工程において、低温処
理温度を０〜１０℃とした場合には０℃より低温である
と、幼苗が凍り、壊死してしまう。また、１０℃より温
度が高くなると、順調に成長しない。この場合、望まし
くは、低温処理工程において、低温処理温度を３〜５℃
としたことが有効である。そして、低温処理工程におい
て、低温処理期間を３０〜９０日とした場合には、従来
９０日以上必要とされていた期間を短縮しても、苗が環
境の変化に対して丈夫になり順化が順調に行なわれ、生
存率が向上する。更には、アツモリソウを大量増殖させ
ることができ、苗を自然環境に供給することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
の培養方法を示す工程図である。

【図２】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
の培養方法を示す工程図である。

【図３】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
の培養方法を示す工程図である。

【図４】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
用培養液の組成を示す表図である。

【図５】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
用培地の組成を示す表図である。

【図６】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
用培地に係り他の培地での発芽を比較した結果を示す表
図である。

【図７】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
用培地に係り他の培地での発芽率を示す図である。

【図８】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
用培地に係り他の培地で培養した苗の生育状況を示す図
である。

【図９】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植物
の培養液に係り他の培養液による生育状況を示す図であ
る。

【図１０】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植
物の培養方法に係り培養温度による褐変の発生状況を示
す図である。

【図１１】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植
物の培養方法に係り、低温処理の効果を示す図である。

【図１２】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植
物の培養方法に係り、低温処理を行なう時期を変えた場
合の生育状況を示す図である。

【図１３】本発明の実施の形態に係るアツモリソウ属植
物の培養方法に係り、低温処理を行なう期間を変えた場
合の生育状況を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０５Ｇ 3/00 Ｃ０５Ｇ 3/00 Ｚ Ｆターム(参考） 2B022 AA01 DA01 DA17 DA19 DA20 EA01 4H061 AA01 AA10 BB01 BB21 BB51 DD11 DD12 EE05 EE11 EE12 EE14 EE16 EE25 EE29 EE51 EE61 EE70 FF05 FF25 KK07 KK09 LL25 LL26

Claims (40)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 アツモリソウ属植物を種子から培養する
   際に用いられ水に添加物を添加してなるアツモリソウ属
   植物用培養液において、 当該培養液１０００ｍｌ中に添加物として、 木酢液０．１〜２．０ｍｌと、 ビタミン類８〜４５ｍｇと、 植物活性剤０．１〜１．０ｍｌとを含有したことを特徴
   とするアツモリソウ属植物用培養液。
2. 【請求項２】 上記培養液をｐＨ５．５〜６．０とする
   ことを特徴とする請求項１記載のアツモリソウ属植物用
   培養液。
3. 【請求項３】 上記添加物として糖類を含有したことを
   特徴とする請求項１または２記載のアツモリソウ属植物
   用培養液。
4. 【請求項４】 上記培養液１０００ｍｌ中に糖類を１〜
   １０ｇ含有したことを特徴とする請求項３記載のアツモ
   リソウ属植物用培養液。
5. 【請求項５】 上記糖類をサッカロースとしたことを特
   徴とする請求項３または４記載のアツモリソウ属植物用
   培養液。
6. 【請求項６】 上記ビタミン類を塩酸チアミンとしたこ
   とを特徴とする請求項１，２，３，４または５記載のア
   ツモリソウ属植物用培養液。
7. 【請求項７】 上記塩酸チアミンを１〜１０ｍｇ含有し
   たことを特徴とする請求項６記載のアツモリソウ属植物
   用培養液。
8. 【請求項８】 上記ビタミン類をニコチン酸としたこと
   を特徴とする請求項１，２，３，４，５，６または７記
   載のアツモリソウ属植物用培養液。
9. 【請求項９】 上記ニコチン酸を１〜５ｍｇ含有したこ
   とを特徴とする請求項８記載のアツモリソウ属植物用培
   養液。
10. 【請求項１０】 上記ビタミン類を塩酸ピリドキシンと
    したことを特徴とする請求項１，２，３，４，５，６，
    ７，８または９記載のアツモリソウ属植物用培養液。
11. 【請求項１１】 上記塩酸ピリドキシンを１〜１０ｍｇ
    含有したことを特徴とする請求項１０記載のアツモリソ
    ウ属植物用培養液。
12. 【請求項１２】 上記ビタミン類をミオイノシトールと
    したことを特徴とする請求項１，２，３，４，５，６，
    ７，８，９，１０または１１記載のアツモリソウ属植物
    用培養液。
13. 【請求項１３】 上記ミオイノシトールを５〜２０ｍｇ
    含有したことを特徴とする請求項１２記載のアツモリソ
    ウ属植物用培養液。
14. 【請求項１４】 上記植物活性剤は、粗タンパク質０．
    ０５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３〜０．５重量％、
    無機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／ｌ、Ｃａ３０〜３
    ５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ／ｌ、Ｍｇ３．０
    〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．０ｍｇ／ｌ、Ｎ９
    ０〜１００ｍｇ／ｌを備えていることを特徴とする請求
    項１，２，３，４，５，６，７，８，９，１０，１１，
    １２または１３記載のアツモリソウ属植物用培養液。
15. 【請求項１５】 アツモリソウ属植物を種子から培養す
    る際に用いられ、水に添加物を添加した水溶液をゲル化
    剤によりゲル状にしたアツモリソウ属植物用培地におい
    て、 上記水溶液１０００ｍｌ中に添加物として、 窒素，リン及びカリウムを含有する肥料１〜３ｇと、 ぺプトン１〜３ｇと、 糖類１０〜３０ｇと、 植物活性剤０．２〜１．０ｍｌと、 ビタミン類１６〜７０ｍｇとを含有したことを特徴とす
    るアツモリソウ属植物用培地。
16. 【請求項１６】 上記植物活性剤の替わりにポテトキュ
    ーブを培地５０ｍｌ中０．５〜１．５ｇ添加することを
    特徴とする請求項１５記載のアツモリソウ属植物用培
    地。
17. 【請求項１７】 上記水溶液をｐＨ５．５〜６．０とす
    ることを特徴とする請求項１５または１６記載のアツモ
    リソウ属植物用培地。
18. 【請求項１８】 上記糖類をサッカロースとしたことを
    特徴とする請求項１５，１６または１７記載のアツモリ
    ソウ属植物用培地。
19. 【請求項１９】 上記ビタミン類を塩酸チアミンとした
    ことを特徴とする請求項１５，１６，１７または１８記
    載のアツモリソウ属植物用培地。
20. 【請求項２０】 上記塩酸チアミンを５〜２０ｍｇ含有
    したことを特徴とする請求項１９記載のアツモリソウ属
    植物用培地。
21. 【請求項２１】 上記ビタミン類をニコチン酸としたこ
    とを特徴とする請求項１５，１６，１７，１８，１９ま
    たは２０記載のアツモリソウ属植物用培地。
22. 【請求項２２】 上記ニコチン酸を１〜１０ｍｇ含有し
    たことを特徴とする請求項２１記載のアツモリソウ属植
    物用培地。
23. 【請求項２３】 上記ビタミン類を塩酸ピリドキシンと
    したことを特徴とする請求項１５，１６，１７，１８，
    １９，２０，２１または２２記載のアツモリソウ属植物
    用培地。
24. 【請求項２４】 上記塩酸ピリドキシンを５〜２０ｍｇ
    含有したことを特徴とする請求項２３記載のアツモリソ
    ウ属植物用培地。
25. 【請求項２５】 上記ビタミン類をミオイノシトールと
    したことを特徴とする請求項１５，１６，１７，１８，
    １９，２０，２１，２２，２３または２４記載のアツモ
    リソウ属植物用培地。
26. 【請求項２６】 上記ミオイノシトールを５〜２０ｍｇ
    含有したことを特徴とする請求項２５記載のアツモリソ
    ウ属植物用培地。
27. 【請求項２７】 上記植物活性剤は、粗タンパク質０．
    ０５〜０．１５重量％、粗脂肪０．３〜０．５重量％、
    無機質として、Ｎａ３５〜４５ｍｇ／ｌ、Ｃａ３０〜３
    ５ｍｇ／ｌ、Ｆｅ１．５〜２．０ｍｇ／ｌ、Ｍｇ３．０
    〜４．０ｍｇ／ｌ、Ｓｉ７．０〜８．０ｍｇ／ｌ、Ｎ９
    ０〜１００ｍｇ／ｌを備えていることを特徴とする請求
    項１５，１６，１７，１８，１９，２０，２１，２２，
    ２３，２４，２５または２６記載のアツモリソウ属植物
    用培地。
28. 【請求項２８】 上記ゲル化剤としてゲランガムを用い
    たことを特徴とする請求項１５，１６，１７，１８，１
    ９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２６または
    ２７記載のアツモリソウ属植物用培地。
29. 【請求項２９】 上記水溶液中に添加物として活性炭を
    含有したことを特徴とする請求項１５，１６，１７，１
    ８，１９，２０，２１，２２，２３，２４，２５，２
    ６，２７または２８記載のアツモリソウ属植物用培地。
30. 【請求項３０】 上記活性炭を０．５〜３ｇ含有したこ
    とを特徴とする請求項２９記載のアツモリソウ属植物用
    培地。
31. 【請求項３１】 アツモリソウ属植物を種子から培養す
    るアツモリソウ属植物の培養方法において、 選別して使用する種子を得る種子選別工程と、 得られた種子を培養液に混合して無菌的に固形培地に播
    種する無菌播種工程と、 播種後、発芽するまで培養する発芽培養工程と、 発芽培養工程において発芽し器官分化したものを培地を
    替えて継代培養する継代培養工程と、 継代培養工程で生育した培養苗を低温の環境下にさらす
    低温処理工程と、 低温処理終了後、用土に植え替える鉢上げ工程とを備え
    たことを特徴とするアツモリソウ属植物の培養方法。
32. 【請求項３２】 上記培養液を培地とは異なる組成の培
    養液とすることを特徴とする請求項３１記載のアツモリ
    ソウ属植物の培養方法。
33. 【請求項３３】 上記発芽培養工程において、播種した
    培地を暗黒下において培養することを特徴とする請求項
    ３１または３２記載のアツモリソウ属植物の培養方法。
34. 【請求項３４】 上記発芽培養工程において、播種した
    培地を１０〜２５℃の環境において培養することを特徴
    とする請求項３１，３２または３３記載のアツモリソウ
    属植物の培養方法。
35. 【請求項３５】 上記継代培養工程において、培地に培
    養液を添加することを特徴とする請求項３１，３２，３
    ３または３４記載のアツモリソウ属植物の培養方法。
36. 【請求項３６】 上記継代培養工程において、培地を１
    ０〜２５℃の環境において培養することを特徴とする請
    求項３１，３２，３３，３４または３５記載のアツモリ
    ソウ属植物の培養方法。
37. 【請求項３７】 上記低温処理工程において、低温処理
    期間を３０〜９０日としたことを特徴とする請求項３
    １，３２，３３，３４，３５または３６記載のアツモリ
    ソウ属植物の培養方法。
38. 【請求項３８】 上記低温処理工程において、低温処理
    期間を６０日±５日としたことを特徴とする請求項３７
    記載のアツモリソウ属植物の培養方法。
39. 【請求項３９】 上記低温処理工程において、低温処理
    温度を０〜１０℃としたことを特徴とする請求項３１，
    ３２，３３，３４，３５，３６，３７または３８記載の
    アツモリソウ属植物の培養方法。
40. 【請求項４０】 上記低温処理工程において、低温処理
    温度を３〜５℃としたことを特徴とする請求項３９記載
    のアツモリソウ属植物の培養方法。