CN109663124B - 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用 - Google Patents

针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109663124B
CN109663124B CN201910115088.4A CN201910115088A CN109663124B CN 109663124 B CN109663124 B CN 109663124B CN 201910115088 A CN201910115088 A CN 201910115088A CN 109663124 B CN109663124 B CN 109663124B
Authority
CN
China
Prior art keywords
vaccine
amino acid
acid sequence
antihypertensive
epitope
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201910115088.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109663124A (zh
Inventor
廖玉华
陈霄
吴海浪
邱志华
廖梦阳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhan Huajiyuan Biotechnology Development Co ltd
Original Assignee
Wuhan Huajiyuan Biotechnology Development Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhan Huajiyuan Biotechnology Development Co ltd filed Critical Wuhan Huajiyuan Biotechnology Development Co ltd
Priority to CN201910115088.4A priority Critical patent/CN109663124B/zh
Publication of CN109663124A publication Critical patent/CN109663124A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109663124B publication Critical patent/CN109663124B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6075—Viral proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10123—Virus like particles [VLP]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2730/10143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

本发明公开了一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用，它包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合。本发明根据乙肝核心抗原的分子结构及免疫学特性，结合目前高血压疫苗研制的实际缺陷，设计出了一种针对多靶点的治疗性降压疫苗，该疫苗能诱导产生分别针对多种治疗性靶点的特异性抗体，发挥联合降压效应，有效降低了高血压动物模型的血压。

Description

针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌 合型二价降压疫苗及其应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用。
背景技术
高血压是最常见的慢性疾病，目前已经成为心血管疾病、慢性肾脏疾病和糖尿病的首要危险因素，其脑卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性肾脏病等主要并发症，不仅致残、致死率高，而且严重消耗医疗和社会资源，给家庭和国家造成沉重负担。在最近数十年，我国高血压患病人数急剧增加，目前中国高血压患病率25.2％，全国已有2.7亿高血压患者(2014年)。虽然血管紧张素II受体阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂以及钙拮抗剂等化学药物已经在临床广泛使用并且展现出良好的疗效，但是由于这类化学药物往往需要每天服药甚至终身服药，因此化学药物的治疗依从性不佳，这也导致目前我国高血压人群的血压控制率仅为8％，远远落后于美国(35％)、加拿大(66％)等欧美发达国家。
与传统化学药物相比，疫苗接种能够诱导针对高血压相关靶分子的特异性抗体，减少给药频率，从而为当前的困境提供一种可能的解决方案。目前研究中的高血压疫苗主要针对肾素-血管紧张素系统，且多为针对单一靶点的疫苗。瑞士Cytos公司研制的针对血管紧张素II的CYT006-AngQb疫苗被认为是极有希望的降压疫苗。但是在后续临床试验中，与安慰剂组相比，该疫苗将受试者的日间平均动态血压从基线水平下调-9/-4mm Hg，这一降压幅度还不能完全满足临床实际要求。据分析，这种情况可能是由于三个方面的因素导致：
首先，针对血管紧张素II疫苗免疫会诱导肾素-血管紧张素系统反馈激活，这可能在一定程度上削弱了疫苗的降压效应；
其次，原发性高血压基本上是多种因素的联合作用效果，而实际上针对多个靶点的联合用药往往能获得更佳的预后效果。该疫苗仅针对单一靶点，可能导致无法获得理想的疗效；
最后，CYT006-AngQb疫苗作为一种化学偶联疫苗，其疫苗载体颗粒表面展示的血管紧张素II表位密度不足，载体蛋白表位大量暴露于机体免疫系统，导致该疫苗主要诱导产生的是针对载体颗粒的抗体，而不是期待的针对RAS系统成分血管紧张素II的抗体，这可能进一步制约疫苗的疗效。
发明内容
本发明的目的在针对现有的血管紧张素II的治疗性高血压疫苗面临单一靶点、肾素-血管紧张素系统反馈激活、以及疫苗载体的抗体滴度过高等问题，提供了一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗。
为实现上述目的，本发明所设计一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，
所述重组乙肝核心蛋白单体分子以免疫原性载体为骨架+高血压发病相关靶分子表位组合，即为：
将高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列插入在免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，
或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；
其中，免疫原性载体的氨基酸序列如SEQ ID No.1，高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列含有两种高血压发病相关靶分子表位的氨基酸序列。
高血压的发病为多因素交互作用的结果，交感神经系统亢进、RAS系统激活、血管活性物质异常改变以及血管重构等机制被认为在高血压发病过程中发挥重要作用。以参与高血压发病过程的相关分子为治疗靶点研制药物，是抗高血压药物研发的重要策略。瑞士Cytos公司研制的CYT006-AngQb疫苗正是以RAS系统的重要成分血管紧张素II(序列为DRVYIHPF)为治疗靶点。本发明以高血压发病相关分子(例如血管紧张素1型受体和血管平滑肌细胞L型钙通道)为靶点设计抗原表位(本发明称之高血压发病相关靶分子表位)，构建降压疫苗。
进一步地，所述高血压发病相关靶分子表位组合包含一个以上人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和一个以上人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位的组合多肽；其中，
所述人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位氨基酸序列为AFHYESQ，如SEQ ID No.2所示；所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列为VPAEDDPSPC、DSSKQTEAECK、DSHTEDKGPI和CAPESEPSNSTE中任意一种，它们分别如SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ IDNo.5和SEQ ID No.6所示，简称分别为VC10、DK11、DI10、CE12。
再进一步地，所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列为CAPESEPSNSTE，如SEQ ID No.6所示，简称CE12表位。
再进一步地，所述高血压发病相关靶分子表位组合两个人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和两个人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位通过连接短肽交替连接而成，其氨基酸序列为CAPESEPSNSTEGSGAFHYESQGSGCAPESEPSNSTEGSGAFHYESQ，如SEQ ID No.7所示；
上述序列替换免疫原性载体氨基酸序列中第79至80位氨基酸，形成重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10-CE12-CQ10，其氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。
再进一步地，所述嵌合型二价疫苗还包括佐剂，所述佐剂为氢氧化铝。
本发明还提供了一种上述嵌合型疫苗在制备治疗高血压药物中的应用。
本发明原理：
本发明针对血管紧张素1型受体表位CQ10的疫苗可以有效降低高血压动物模型的血压，并且提供有效的靶器官保护效应，而不反馈激活肾素-血管紧张素系统。为了获得更优的降压效果，经过反复对比、分析、实验研究，找到一段来源于L型CaV1.2钙通道的线性表位，它能诱导针对L型钙通道的特异性抗体，并且降低高血压动物模型的血压，可以作为另一个新的治疗性高血压疫苗靶点。
乙肝核心抗原(HBcAg)是由180或者240个乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒颗粒。乙肝核心蛋白的76-82位氨基酸构成的免疫优势区(majorimmunodominant region,MIR)暴露于乙肝核心抗原颗粒的长刺突表面，极具免疫原性。MIR区成功容纳了多达238个氨基酸长度的外源序列，而不影响病毒颗粒自我组装，因此被认为是展示外源表位并且遮蔽载体蛋白表位的理想位置。
本发明的有益效果：
1、本发明根据乙肝核心抗原的分子结构及免疫学特性，结合目前高血压疫苗研制的实际缺陷，设计出了一种针对多靶点的治疗性降压疫苗，该疫苗能诱导产生分别针对多种治疗性靶点的特异性抗体，发挥联合降压效应，有效降低了高血压动物模型的血压。
2、本发明以乙肝核心抗原病毒样颗粒为疫苗载体构建二价疫苗，该疫苗克服了现有疫苗的诸多不足，在动物模型中诱导的主要是针对插入表位的特异性抗体，而不是针对载体蛋白的抗体，同时二价疫苗在高血压动物模型展示出了优于传统偶联疫苗的降压效应。因此，本发明创新性的解决了上述问题，提供了一种新的治疗性高血压疫苗构建策略。
3、本发明制备得到的二价疫苗在多种高血压动物模型中均展示了良好的降压效果，因此该疫苗可以应用于制备治疗高血压药物。
附图说明
图1为实施例4中二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗的SDS-PAGE凝胶电泳检测图；
图中，M为蛋白质分子标记物，泳道1为纯化的HBcAg病毒样颗粒蛋白单体，泳道2为纯化的二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗单体，泳道3为重组表达质粒pET28-HBcAg-CE12-CQ10在大肠杆菌表达后的裂菌产物沉淀，泳道3为重组表达质粒pET28-HBcAg-CE12-CQ10在大肠杆菌表达后的裂菌产物上清；
图2为实施例4中纯化的二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗经透射电镜分析鉴定图；
图3为实施例5中Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗的SDS-PAGE凝胶电泳检测图；
图中，VLP为Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白单体，Qβ-CQ10为Qβ-CQ10疫苗，Qβ-CE12为Qβ-CE12疫苗；
图4为实施例6中二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫雄性BALB/c小鼠后产生的抗CQ10、抗CE12抗体滴度图；
图中，anti-CQ10、anti-CE12分别代表抗CQ10、抗CE12抗体；
图5为实施例6中二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫雄性BALB/c小鼠后产生的降压效应图；
图中，Control代表对照组小鼠，HBcAg-CE12-CQ10代表接受二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫的雄性BALB/c小鼠；
图6为实施例7中Qβ-CQ10疫苗、Qβ-CE12疫苗以及HBcAg-CE12-CQ10疫苗分别免疫6只4周龄雄性SHR大鼠之后产生的抗CQ10、抗CE12抗体滴度图；
其中，A为实施例7中Qβ-CQ10疫苗、Qβ-CE12疫苗以及HBcAg-CE12-CQ10疫苗分别免疫6只4周龄雄性SHR大鼠之后产生的抗CQ10短肽抗体滴度图，黑色点状虚线代表Qβ-CQ10疫苗免疫雄性SHR大鼠之后产生的抗Qβ载体的抗体，灰色虚线代表HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫雄性SHR大鼠之后产生的抗HBcAg载体的抗体；
B为实施例7中Qβ-CQ10疫苗、Qβ-CE12疫苗以及HBcAg-CE12-CQ10疫苗分别免疫6只4周龄雄性SHR大鼠之后产生的抗CE12抗体滴度图，黑色点状虚线代表Qβ-CE12疫苗免疫雄性SHR大鼠之后产生的抗Qβ载体的抗体，灰色虚线代表HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫雄性SHR大鼠之后产生的抗HBcAg载体的抗体；
图7为实施例7中Qβ-CQ10疫苗、Qβ-CE12疫苗以及HBcAg-CE12-CQ10疫苗分别免疫6只4周龄雄性SHR大鼠之后产生的降压效应图；
图中，Control代表对照组SHR，Qβ-CQ10代表接受Qβ-CQ10疫苗免疫的SHR，Qβ-CE12代表接受Qβ-CE12免疫的SHR，HBcAg-CE12-CQ10代表接受二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗免疫的SHR。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细描述，以便本领域技术人员理解。
以下为各个序列和物种以及简称：
人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位氨基酸序列为AFHYESQ以下简称CQ10，该序列在申请号为201110171715.X的中国发明专利血管紧张素Ⅱ受体1型多肽-载体疫苗及其用途中公开。
血管紧张素II作为治疗靶点的氨基酸序列为DRVYIHPF，简称为Ang II。
人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位的四个氨基酸序列：
VPAEDDPSPC以下简称VC10，
DSSKQTEAECK以下简称DK11，
DSHTEDKGPI以下简称DI10，
CAPESEPSNSTE以下简称CE12
CAPESEPSNSTEGSGAFHYESQGSGCAPESEPSNSTEGSGAFHYESQ以下简称CE12-CQ10-CE12-CQ10；
CE12-CQ10-CE12-CQ10序列替换免疫原性载体氨基酸序列中第79至80位氨基酸，形成重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10-CE12-CQ10，以下简称HBcAg-CE12-CQ10
针对血管平滑肌细胞L型钙通道CaV1.2的CE12表位的偶联疫苗以下简称Qβ-CE12疫苗,针对血管紧张素1型受体CQ10表位的偶联疫苗以下简称Qβ-CQ10疫苗。
自发性高血压大鼠英文缩写为SHR，以下均用SHR表示自发性高血压大鼠。
实施例1人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位的四个氨基酸序列的筛选与制备
根据生物信息学技术如氨基酸亲水性、抗原性及序列空间构象等进行B细胞表位预测，设计出针对人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位的四个氨基酸序列：VPAEDDPSPC，DSSKQTEAECK，DSHTEDKGPI，CAPESEPSNSTE。采用PSSM-8型肽自动合成仪(日本SHIMADZU公司)合成肽段，合成的肽段经高效液相色谱分析纯度达到95％以上。将得到的肽段冻干，分装后置于冻存管中，-80℃冻存备用。
实施例2高血压发病相关靶分子表位组合设计
利用上述四个人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位与人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位/血管紧张素II表位序列组合，形成各种高血压发病相关靶分子表位组合如下表：
Figure BDA0001969849090000081
注：上述各段表位序列之间采用氨基酸序列“GSG”进行连接，而高血压发病相关靶分子表位组合不局限于人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位组合与人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位/血管紧张素II组合；现有的两种高血压发病相关靶分子表位均可以进行组成。
实施例3重组乙肝核心蛋白单体分子设计
上表中高血压发病相关靶分子表位组合能插入在免疫原性载体氨基酸序列(SEQID No.1)中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，
或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；本实施例以上表中“-CE12-CQ10-CE12-CQ10-”的组合形式为例构建重组乙肝核心蛋白单体分子：
a.将“-CE12-CQ10-CE12-CQ10-”的组合插入免疫原性载体氨基酸序列(SEQ IDNo.1)中第80位与81位氨基酸之间：“--WVGTNMEDPA--CAPESEPSNSTEGSGAFHYESQGSGCAPESEPSNSTEGSGAFHYESQ--SRDLVVSYVN--”；
b.将“-CE12-CQ10-CE12-CQ10-”的组合替换免疫原性载体氨基酸序列(SEQ IDNo.1)中第79位和80位的氨基酸，得到重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10。
实施例4：嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗的制备
利用上述重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10制备嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗：
1)构建二价疫苗表达质粒：从Uniprot蛋白质数据库获取人乙肝核心蛋白(Uniprot数据库编号：P03147)氨基酸序列，将C末端149位氨基酸以后序列去除，29位氨基酸和127位氨基酸分别用半胱氨酸代替，得到的多肽序列作为构建二价疫苗的骨架序列。将CE12表位序列和CQ10表位序列以“-CE12-CQ10-CE12-CQ10-”的排列形式插入乙肝核心蛋白序列的MIR区78位与81位氨基酸之间，插入序列与乙肝核心蛋白骨架序列之间采用有弹性的连接序列“GGGGSGGGG”进行连接。对构建的重组多肽序列设计相应的表达基因序列并进行密码子优化，以利于在大肠杆菌工程菌高效表达。优化后的基因片段由上海生工生物工程公司采用化学合成法合成，并利用限制性酶切位点Nco I和Xho I插入原核表达质粒pET-28a(+)中，得到构建的重组表达质粒pET28-HBcAg-CE12-CQ10。对重组表达质粒测序，以确定构建正确；
2)诱导表达HBcAg-CE12-CQ10蛋白：采用热击法将重组质粒转化BL21(DE3)感受态细菌。将转化并复苏的菌液涂布至LB固体培养基平板上，37℃温箱培养过夜，挑取单个菌落培养于LB液体培养基，37℃恒温摇床培养5h后，加入0.2M的IPTG诱导重组菌株表达HBcAg-CE12-CQ10蛋白，诱导6小时，收集菌液并进行超声裂解，获取裂解沉淀；
3)包涵体复性：用包涵体洗涤液(50mmol/L Tris-Cl,pH 8.0；0.2％Triton-X100)洗涤沉淀并离心，收集沉淀用重悬液(50mmol/L Tris-Cl,2mmol/L尿素)重悬，再次离心获取沉淀。循环洗涤至少3次，以获得杂质较少的包涵体。用包涵体溶解缓冲液(50mmol/LTris-Cl,pH 8.0；8mol/L尿素)溶解包涵体，混合物持续剧烈搅拌4小时以上后离心，收集上清液。向上清液中加入5mmol/Lβ-巯基乙醇、0.5mmol/L GSH、0.1mmol/L GSSG并对含有8mol/L尿素的复性缓冲液(50mmol/L Tris-Cl,0.5mmol/L GSH,0.1mmol/L GSSG,pH8.0)透析，剧烈搅拌。向透析外液中以恒定的流速0.5mL/min持续泵入复性缓冲液，直至透析外液中尿素浓度降低至1mol/L。随后将透析外液换成磷酸缓冲盐溶液(PBS；137mmol/L NaCl,2.7mmol/L KCl,4.3mmol/L Na2HPO4,1.4mmol/L KH2PO4,pH 7.4)，透析12小时。随后收集透析内液，采用Sepharose CL-4B柱进行凝胶过滤层析。收集级分，用SDS-PAGE和透射电镜分析鉴定所获得的蛋白产物。结果分别如图1和图2。
4)将步骤3)中收集的蛋白产物与氢氧化铝佐剂进行1:1等体积混合，即得嵌合型二价HBcAg-CE12-CQ10疫苗。
实施例5 Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗的制备
利用Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白制备Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗。具体制备过程如下：
1)采用PSSM-8型肽自动合成仪(日本SHIMADZU公司)合成CQ10肽段和CE12短肽，合成的肽段经高效液相色谱分析肽段的纯度，经检测肽段的纯度达到95％以上。将得到的肽段冻干，分装后置于冻存管中，-80℃冻存备用；
2)制备Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白：Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白英文缩写为：Qβ-2aa VLP，以下均用Qβ-2aa VLP表示Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白。
2a)获取表达Qβ-2aa VLP的重组菌株：该重组菌株为大肠杆菌DH5α/pGEXQβ-A1，此重组菌株能诱导产生Qβ-2aa病毒样颗粒蛋白。大肠杆菌DH5α/pGEXQβ-A1的保藏号为CCTCCNO：M209282，具体的制备过程参见中国专利：一种Qβ-2aa噬菌体病毒样颗粒蛋白的制备方法及其用途，授权公开日为CN 101921733B授权公告日2013.06.05；
2b)诱导表达Qβ-2aa VLP：首先从液氮罐中取出保藏的大肠杆菌DH5α/pGEXQβ-A1重组菌株，将该重组菌株活化后，涂布至LB固体培养基平板上，37℃温箱培养过夜，挑取单个菌落培养于LB液体培养基，37℃恒温摇床培养5h后，加入0.2M的IPTG诱导重组菌株表达Qβ-2aa VLP，诱导6小时，收集菌液并进行超声裂解，获取裂解上清液；
2c)Qβ-2aa VLP的纯化：裂解上清液经过硫酸铵沉淀，酸化处理，疏水层析，凝胶层析后得到纯化后的Qβ-2aa VLP；
2d)Qβ-2aa VLP的鉴定：将纯化后的Qβ-2aa VLP用二硫苏糖醇(DTT)进行解配处理，将解配后的Qβ-2aa VLP凝胶电泳鉴定其分子量，电镜观测其形态大小和粒径；最后通过试验结果确定得到的蛋白即为Qβ-2aa VLP；
3)制备载体：取步骤2c)纯化后Qβ-2aa VLP 375μg与佐剂：CPG-ODN 2OD配制成为装配体系(其中，CPG-ODN购自上海生工生物工程公司)，室温放置60小时，Qβ-2aa VLP将进行自组装，同时包裹装配体系内的CPG-ODN，装配完成后用凝胶层析纯化，得到载体：Qβ-2aa-CPG-ODN VLP；
4)制备Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗：将CQ10肽段、CE12短肽分别与载体Qβ-2aa-CPG-ODN VLP进行偶联反应，偶联反应采用异双功能交联剂(Sulfo-SMCC)，分别得到Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗；
5)将步骤4)得到的Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗进行SDS-PAGE凝胶电泳检测，检测结果如图3所示。
实施例6：嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗对BALB/c小鼠血管紧张素II灌注模型血压水平的影响
1)实验分组及干预方案：
将实施例4得到的嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗在第0、14、28天皮下多点免疫6只7周龄雄性BALB/c小鼠。其中，作为对照组，6只雄性BALB/c小鼠给与同等剂量的PBS。接种剂量为100μg/只。在第7天，采用2％异氟烷以气体吸入麻醉方式将小鼠麻醉，在无菌条件下，在小鼠背部皮下植入充满血管紧张素II(Sigma)的微渗泵(Alzet)，以1.4mg/kg/d恒定流速给与血管紧张素II持续14天；
2)采血：分别在第7，21，35，49天鼠尾采血，RT 3000rpm 10min离心收集上清，-80℃保存备用；
3)ELISA免疫印迹实验
由于免疫动物时所选用的载体为HBcAg VLP，为了避免交叉反应，采用KLH作为载体分别与CE12、CQ10短肽偶联成疫苗，包板测定相应的抗体滴度，KLH作为载体与短肽偶联成疫苗的具体过程见实施例1；
3a)包板：将载体疫苗KLH-CE12、KLH-CQ10各取100μg，分别加入到10ml包被稀释液(PH9.6，0.05M NaCO3-NaHCO3缓冲液)中混匀后加入96孔板中，100μL/孔，4℃湿盒孵育过夜；
3b)封闭：第二天弃包被液，加入浓度为1％BSA的PBS缓冲液，100μL/孔，37℃封闭2h；
3c)封膜：封闭后弃封闭液，拍干并室温晾干后，贴上ELISA包被膜；
3d)将上述血清取出，冰上解冻后，用ELISA法测定相应抗体滴度，具体步骤如下：
3e)倍比稀释：将血清上清用浓度为10％FBS的PBS缓冲液作为稀释液，做1：100，1：1000，1：5000，1：10000的梯度倍比稀释；
3f)孵育一抗：用移液器将1：1000倍比稀释后的血清标本加入到步骤1)中的96孔板中，37℃温箱、孵育2h；
3g)孵育二抗：一抗孵育完成后，弃液体并用洗涤液(0.03％PBST PH7.4)洗3遍，拍干，然后加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠的二抗(1：3000稀释稀释液为10％FBS的PBS缓冲液)，37℃温箱中孵育0.5h；
3h)显色：二抗孵育完成后弃液体并用洗涤液(0.03％PBST PH7.4)洗3遍，拍干，然后加入TMB显色液，100ul/孔，室温观察颜色变化；
3i)终止反应：待空白对照孔颜色开始变绿后，加入终止液(1M稀盐酸)，100ul/孔；
3j)读数：加入终止液后，放在酶标仪上在450nm波长下读出吸光度(OD)值；
3k)结果分析：以OD值不小于空白对照组的2.1倍作为待测标本阳性的标准，然后计算出相应标本的抗体滴度值。结果如图4，结果显示二价疫苗免疫小鼠后分别产生了针对CE12和CQ10的特异性抗体；
4)血压水平测量
采用Softron BP98A鼠尾血压计在第7，21，35天对动物血压进行监测。具体监测方法如下：
4a)预热：将待测动物放置于37℃加热笼中预热15分钟；
4b)固定：预热后，将待测动物转移至相应的有加热功能的固定笼套内，将露出的鼠尾从测量传感器中穿过，将传感器置于鼠尾根部位置，以待血压测量；
4c)测量：将传感器与Softron BP98A鼠尾血压计通过数据线连接，然后开始进行血压的测量，每次测量6组读数，取平均值。
测量在上午9点钟至11点钟之间进行，测量过程中保持环境的安静，室温保持在25℃。结果如图5。结果显示，疫苗组显著降低了BALB/c小鼠血压。
实施例7：嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗对自发性高血压大鼠模型血压水平的影响
1)实验分组及干预方案：
将实施例5得到的Qβ-CQ10疫苗和Qβ-CE12疫苗以及实施例4得到的嵌合型二价降压HBcAg-CE12-CQ10疫苗分别在第0、14、28天皮下多点免疫6只4周龄雄性SHR，接种剂量为400μg/只。其中，作为对照组，6只雄性SHR给与同等剂量的PBS；
2)采血：分别在第7、21、35、49天鼠尾采血，RT 3000rpm 10min离心收集上清，-80℃保存备用；
3)ELISA免疫印迹实验
由于免疫动物的疫苗载体为QβVLP或者HBcAg VLP，为了避免交叉反应，采用KLH作为载体分别与CE12、CQ10短肽偶联成疫苗，包板测定相应的针对CE12、CQ10短肽的抗体滴度，KLH作为载体与短肽偶联成疫苗的具体过程见实施例1；分别以QβVLP、HBcAg VLP包板测定相应的针对QβVLP、HBcAg VLP的抗体滴度，QβVLP的制备过程见实施例5，HBcAg VLP的制备过程见实施例4；
ELISA具体实施方法同前，结果分析以OD值不小于空白对照组的2.1倍作为待测样本阳性的标准，然后计算出相应样本的抗体滴度值。结果如图6。结果显示各疫苗组均产生了针对CE12或者CQ10的特异性抗体，并且二价疫苗免疫产生的主要是针对插入表位的抗体；
4)血压水平测量
采用Softron BP98A鼠尾血压计在第7，21，35天对动物血压进行监测，具体监测方法同前，结果如图7。结果显示，与对照组相比，各疫苗组均产生了显著的降压效应，并且HBcAg-CE12-CQ10疫苗组产生的降压效应(191±2vs 212±3mmHg)优于Qβ-CQ10疫苗(200±2vs 212±3mmHg)和Qβ-CE12疫苗(198±2vs 212±3mmHg)。
其它未详细说明的部分均为现有技术。尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
序列表
<110> 武汉华纪元生物技术开发有限公司
<120> 针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 149
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 1
Met Asp Ile Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Thr Val Glu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Cys Leu Leu Asp
20 25 30
Thr Ala Ala Ala Leu Tyr Arg Asp Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys
35 40 45
Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Asp
50 55 60
Leu Ser Thr Leu Ala Thr Trp Val Gly Thr Asn Met Glu Asp Pro Ala
65 70 75 80
Ser Arg Asp Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Thr Asn Val Gly Leu Lys
85 90 95
Phe Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly Arg
100 105 110
Glu Thr Val Leu Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Cys Thr
115 120 125
Pro Pro Ala Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu Pro
130 135 140
Glu Thr Thr Val Val
145
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 2
Ala Phe His Tyr Glu Ser Gln
1 5
<210> 3
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 3
Val Pro Ala Glu Asp Asp Pro Ser Pro Cys
1 5 10
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 4
Asp Ser Ser Lys Gln Thr Glu Ala Glu Cys Lys
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 5
Asp Ser His Thr Glu Asp Lys Gly Pro Ile
1 5 10
<210> 6
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 6
Cys Ala Pro Glu Ser Glu Pro Ser Asn Ser Thr Glu
1 5 10
<210> 7
<211> 47
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 7
Cys Ala Pro Glu Ser Glu Pro Ser Asn Ser Thr Glu Gly Ser Gly Ala
1 5 10 15
Phe His Tyr Glu Ser Gln Gly Ser Gly Cys Ala Pro Glu Ser Glu Pro
20 25 30
Ser Asn Ser Thr Glu Gly Ser Gly Ala Phe His Tyr Glu Ser Gln
35 40 45
<210> 8
<211> 212
<212> PRT
<213> 人工合成序列(Synthetic sequence)
<400> 8
Met Asp Ile Asp Pro Tyr Lys Glu Phe Gly Ala Thr Val Glu Leu Leu
1 5 10 15
Ser Phe Leu Pro Ser Asp Phe Phe Pro Ser Val Arg Cys Leu Leu Asp
20 25 30
Thr Ala Ala Ala Leu Tyr Arg Asp Ala Leu Glu Ser Pro Glu His Cys
35 40 45
Ser Pro His His Thr Ala Leu Arg Gln Ala Ile Leu Cys Trp Gly Asp
50 55 60
Leu Ser Thr Leu Ala Thr Trp Val Gly Thr Asn Met Glu Asp Gly Gly
65 70 75 80
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Cys Ala Pro Glu Ser Glu Pro Ser Asn
85 90 95
Ser Thr Glu Gly Ser Gly Ala Phe His Tyr Glu Ser Gln Gly Ser Gly
100 105 110
Cys Ala Pro Glu Ser Glu Pro Ser Asn Ser Thr Glu Gly Ser Gly Ala
115 120 125
Phe His Tyr Glu Ser Gln Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Arg Asp Leu Val Val Ser Tyr Val Asn Thr Asn Val Gly Leu Lys Phe
145 150 155 160
Arg Gln Leu Leu Trp Phe His Ile Ser Cys Leu Thr Phe Gly Arg Glu
165 170 175
Thr Val Leu Glu Tyr Leu Val Ser Phe Gly Val Trp Ile Cys Thr Pro
180 185 190
Pro Ala Tyr Arg Pro Pro Asn Ala Pro Ile Leu Ser Thr Leu Pro Glu
195 200 205
Thr Thr Val Val
210

Claims (4)

1.一种针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗包括由180个或者240个重组乙肝核心蛋白单体分子自我组装形成的二十面体病毒样颗粒，所述重组乙肝核心蛋白单体分子由免疫原性载体和高血压发病相关靶分子表位组合构成，即为：
将高血压发病相关靶分子表位组合的氨基酸序列插入在免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间任意一个位点中，
或者，将高血压发病相关靶分子表位组合替换免疫原性载体氨基酸序列中第76至82位氨基酸之间的一段任意长度的氨基酸序列；
其中，所述免疫原性载体的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，
所述高血压发病相关靶分子表位组合由两个人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位和两个人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位通过连接短肽交替连接而成，其氨基酸序列如SEQID No.7所示；
所述人血管紧张素1型受体抗原CQ10表位氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述人血管平滑肌细胞L型钙通道抗原表位氨基酸序列如SEQ ID No.6所示。
2.根据权利要求1所述针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：将高血压发病相关靶分子表位组合氨基酸序列替换免疫原性载体氨基酸序列中第79至80位氨基酸，形成重组乙肝核心蛋白单体分子HBcAg-CE12-CQ10 - CE12 -CQ10，所述重组乙肝核心蛋白单体分子氨基酸序列如SEQ ID No.8所示。
3.根据权利要求1~2中任意一项所述针对人血管平滑肌细胞L型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗，其特征在于：所述嵌合型二价疫苗还包括佐剂，所述佐剂为氢氧化铝。
4.权利要求1所述嵌合型二价降压疫苗在制备治疗高血压药物中的应用。
CN201910115088.4A 2019-02-14 2019-02-14 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用 Active CN109663124B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910115088.4A CN109663124B (zh) 2019-02-14 2019-02-14 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910115088.4A CN109663124B (zh) 2019-02-14 2019-02-14 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109663124A CN109663124A (zh) 2019-04-23
CN109663124B true CN109663124B (zh) 2022-05-13

Family

ID=66152294

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910115088.4A Active CN109663124B (zh) 2019-02-14 2019-02-14 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109663124B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110330562B (zh) * 2019-06-18 2022-12-27 武汉华纪元生物技术开发有限公司 用于治疗高血压的α1D-肾上腺素能受体的免疫原性肽段及其应用
CN112852852B (zh) * 2019-11-27 2023-07-25 中国医学科学院医学生物学研究所 一种ox40抗原表位重组病毒样颗粒及其制备方法和应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1706502A (zh) * 2005-05-25 2005-12-14 中国药科大学 一种抗高血压核酸疫苗及其制备方法
CN1896094A (zh) * 2006-06-08 2007-01-17 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管紧张素ⅱ受体1型免疫原性肽段及其用途
CN102584943A (zh) * 2012-01-31 2012-07-18 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管平滑肌l型钙离子通道免疫原性肽段及其用途
WO2015024022A2 (en) * 2013-08-16 2015-02-19 University Of Rochester Designed peptides for tight junction barrier modulation
CN107530408A (zh) * 2014-11-20 2018-01-02 安琪士摩奇株式会社 Dna‑肽组合疫苗

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102247604B (zh) * 2011-06-24 2013-03-27 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管紧张素ⅱ受体1型多肽-载体疫苗及其用途

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1706502A (zh) * 2005-05-25 2005-12-14 中国药科大学 一种抗高血压核酸疫苗及其制备方法
CN1896094A (zh) * 2006-06-08 2007-01-17 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管紧张素ⅱ受体1型免疫原性肽段及其用途
CN102584943A (zh) * 2012-01-31 2012-07-18 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种血管平滑肌l型钙离子通道免疫原性肽段及其用途
WO2015024022A2 (en) * 2013-08-16 2015-02-19 University Of Rochester Designed peptides for tight junction barrier modulation
CN107530408A (zh) * 2014-11-20 2018-01-02 安琪士摩奇株式会社 Dna‑肽组合疫苗

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Vaccine for hypertension: Modulating the renin–angiotensin system;Rabindra Pandey等;《International Journal of Cardiology》;20090531;第160–168页 *
一种针对血管紧张素Ⅱ的新型抗肾性高血压核酸疫苗的构建及药效;谢燕飞等;《药物生物技术》;20080415;第79-85页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109663124A (zh) 2019-04-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US8715695B2 (en) Polypeptide fragments of the hepatitis E virus, the vaccine composition comprising said fragments and the diagnostic kits
JP2002532387A (ja) ペプチドリガンドを介して結合された複数の免疫原性成分を有するｈｂｖコア抗原粒子
CN109663124B (zh) 针对人血管平滑肌细胞l型钙通道和血管紧张素1型受体的嵌合型二价降压疫苗及其应用
JP5187883B2 (ja) 抗原ペプチドおよびその利用
CN117304281A (zh) 一种重组rsv f蛋白及其应用
CN114127098A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒51型l1蛋白
CN113633762B (zh) 一种介孔硅负载SARS-CoV-2 S蛋白B细胞抗原的纳米颗粒的制备方法及其应用
CN113121704B (zh) 基于纳米颗粒的冠状病毒疫苗
US20150050306A1 (en) Epitope-Scaffold Immunogens Against Respiratory Syncytial Virus (RSV)
CN114174319A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒52型l1蛋白
CN114127100A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒39型l1蛋白
CN113278634B (zh) 一种预防和治疗默克尔细胞癌的新型疫苗
CN106883295B (zh) 人内皮素a型受体免疫原性肽段及其载体疫苗
CN114835819A (zh) SARS-CoV-2 S1偶联纳米颗粒及其应用
CN110951703B (zh) 一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体的制备
CN110330562B (zh) 用于治疗高血压的α1D-肾上腺素能受体的免疫原性肽段及其应用
CN114127127A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒35型l1蛋白
CN114127295A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒16型l1蛋白
CN114127094A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒58型l1蛋白
CN114127096A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒31型l1蛋白
CN114127099A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒6型l1蛋白
CN114174320A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒18型l1蛋白
CN114127093A (zh) 嵌合的人乳头瘤病毒45型l1蛋白
CN114127092A (zh) 人乳头瘤病毒多价免疫原性组合物
CN109678946B (zh) 人血管平滑肌细胞l型钙通道免疫原性肽段及其疫苗和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant