CN109576367A - 检测bcor基因突变的引物、试剂盒和方法 - Google Patents

检测bcor基因突变的引物、试剂盒和方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种检测BCOR基因突变的引物和方法，其包括扩增BCOR基因全外显子序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明可快速地将BCOR基因全外显子的突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断AML和OFCD，对疾病的诊断和预后有重要的参考意义。

Description

检测BCOR基因突变的引物、试剂盒和方法
技术领域
本发明属于分子检测领域，特别涉及一种检测BCOR基因突变的试剂盒和检测方法。
背景技术
BCOR(BCL6 co-repressor)基因位于染色体Xp11.4，由15个外显子组成，编码3个同源异构体，包括3个重要的结构域：BBD、AF9BD、ANK1-2-3，其中BBD结构域为BCL6结合结构域，可选择性地同BCL6的POZ结构域相互作用，参与转录抑制过程。BCOR蛋白广泛地表达在人类的多个组织。BCOR是BCL6的共抑制子，是早期胚胎发育、间充质干细胞功能和造血功能调控的关键转录调控因子。同时BCOR还通过组蛋白甲基化调节染色质重塑等表观遗传学机制，参与转录抑制并影响凋亡进程。
生殖系中BCOR突变与OFCD综合征有关，多为散发，X连锁显性遗传，推测为男性致死，是一种罕见的累及多器官多系统的先天发育异常性疾病，临床特征性地表现为眼部、面部、心血管和牙齿的先天发育异常，与此疾病相关的BCOR基因突变绝大数为插入和缺失突变。
BCOR基因还与肿瘤发生关系密切，在携带抑癌基因TP53基因突变的多种肿瘤样本中能检测到BCOR基因的突变，这些疾病包括脑部髓母细胞瘤、淋巴瘤、胸腺瘤、视网膜母细胞瘤等，以上结果提示BCOR可能在调节抑癌基因TP53活性方面发挥重要作用，从而参与肿瘤的发生过程。
BCOR突变常见于髓系恶性肿瘤，但在淋巴系肿瘤中特异见于NKTCL(NK/T细胞淋巴瘤)。Dobashi等对25例NKTCL的研究发现，NKTCL患者中常见的体细胞突变中BCOR突变占32％，这些常见的突变改变最后造成了BCOR功能的丢失，进而促进了NKTCL的发生。
另外，BCOR和再生障碍性贫血(AA)有关，研究结果显示，AA突变最常累及的5个基因为PIGA、BCOR/BCORL1、DNMT3A和ASXL1。BCOR、BCORL1和PIGA基因突变在AA患者中更为显著，而JAK2、RUNX1、TET2和TP53基因突变在AA中则相对少见。并且，AA患者基因突变在位点分布上与MDS/AML有高度重叠，主要表现为移码、无义和剪接突变。因此，对再生障碍性贫血的患者检测BCOR基因突变，有助于了解疾病演变，而且AA高度特异性突变(如BCOR、BCORL1和PIGA突变)通常提示对免疫抑制疗法有好的效果并预后良好，生存率高。
在2017年《成人急性髓系白血病(非急性早幼粒细胞白血病)中国诊疗指南》及欧洲白血病网中相继提出，在分子学检查初级检查之后，次级检查中指出了RNA剪接染色质修饰基因突变—BCOR基因突变的检测，并指出这项检查对于AML的预后判断及治疗药物选择具有一定的指导意义。
由此表明，BCOR基因突变的检测对OFCD综合征的检测、再生障碍性贫血疾病进程演变及预后、AML的检测有重要的作用，尤其是在成人急性髓系白血病中的预后判断及治疗药物的选择具有重要的指导意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测BCOR基因多态突变热点的试剂盒，采用PCR技术，可用于快速检测患者体内BCOR基因多态位点的突变情况。
检测BCOR基因突变的引物，其特征在于，包括扩增BCOR基因的引物，其碱基序列为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA。
进一步地，所述引物还包括检测BCOR基因的测序引物，其碱基序列为：
M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13 R：AACAGCTATGACCATG
进一步地，引物序列BC-E1-F和BC-E1-R是扩增BCOR基因第1外显子序列的引物，引物序列BC-E2-F和BC-E2-R是扩增BCOR基因第2外显子序列的引物，引物序列BC-E3-F和BC-E3-R是扩增BCOR基因第3外显子序列的引物，引物序列BC-E4-(1-5)-F和BC-E4-(1-5)-R是扩增BCOR基因第4外显子序列的引物，引物序列BC-E5-F和BC-E5-R是扩增BCOR基因第5外显子序列的引物，引物序列BC-E6-F和BC-E6-R是扩增BCOR基因第6外显子序列的引物，引物序列BC-E7-F和BC-E7-R是扩增BCOR基因第7外显子序列的引物，引物序列BC-E8-F和BC-E8-R是扩增BCOR基因第8外显子序列的引物，引物序列BC-E9-F和BC-E9-R是扩增BCOR基因9外显子序列的引物，引物序列BC-E10-F和BC-E10-R是扩增BCOR基因第10外显子序列的引物，引物序列BC-E11-F和BC-E11-R是扩增BCOR基因第11外显子序列的引物，引物序列BC-E12-F和BC-E12-R是扩增BCOR基因第12外显子序列的引物，引物序列BC-E13-F和BC-E13-R是扩增BCOR基因第13外显子序列的引物，引物序列BC-E14-F和BC-E14-R是扩增BCOR基因第14外显子序列的引物，引物序列BC-E15-(1-2)-F和BC-E15-(1-2)-R是扩增BCOR基因第15外显子序列的引物。
本发明还提供了一种检测BCOR基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
(1)抽提血液中的组织DNA；
(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；其中PCR扩增引物为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA
(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；测序引物碱基序列为：
M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13 R：AACAGCTATGACCATG；
(4)对测序结果进行判断，确定BCOR基因是否发生突变。
本发明最后提供了一种检测BCOR基因多态突变位点的试剂盒，包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR扩增反应液；包括扩增BCOR基因的引物，其碱基序列为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA；
(iii)测序体系试剂；包括检测BCOR基因的测序引物，其碱基序列为：
M13 F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13 R：AACAGCTATGACCATG。
有益效果：本发明设计了扩增BCOR全部15个外显子序列的引物。通过加接头，使所有20对引物的PCR产物均可以用一种测序引物进行测序。采用PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。BCOR基因的突变类型种类繁多且遍布整个基因，因此本发明所述引物既能将所述BCOR全外显子序列都扩增出来，也保证无论这些外显子的何处位置发生突变，都不会出现漏检的情况。相比较荧光定量PCR法降低了检测的成本和难度。荧光定量PCR法要针对不同的突变类型设计多个探针，成本高，检测难度大。
附图说明
图1为BCOR基因在染色体上定位图。
图2为BCOR第1号外显子野生型测序截图。
图3为BCOR第2号外显子野生型测序截图。
图4为BCOR第3号外显子野生型测序截图。
图5为BCOR第4号外显子野生型测序截图。
图6为BCOR第5号外显子野生型测序截图。
图7为BCOR第6号外显子野生型测序截图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法：譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
实施例1
检测BCOR基因多态突变位点的引物，该引物的设计是针对BCOR全外显子设计的扩增引物，包括：
扩增BCOR基因全外显子序列的引物，其碱基序列为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA。
检测BCOR基因多态突变位点的试剂盒，包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中，组织DNA抽提试剂可购自天根DNA抽提试剂盒等商品化试剂。
检测体系PCR扩增反应液包括：2×PCR Buffer；2mM dNTPs；KOD FX DNAPolymerase(1U/μl)；BCOR基因15个外显子序列的上、下游引物引物BC-E1-F/R、BC-E2-F/R、BC-E3-F/R、BC-E4-(1-5)-F/R、BC-E5-F/R、BC-E6-F/R、BC-E7-F/R、BC-E8-F/R、BC-E9-F/R、BC-E10-F/R、BC-E11-F/R、BC-E12-F/R、BC-E13-F/R、BC-E14-F/R、BC-E15-(1-2)-F/R引物浓度均为10μM。
测序体系试剂包括：测序纯化液(ExoI:0.6U，CIP:1.2U)、EDTA(125mmol)、无水乙醇、75％乙醇、HIDI(高度去离子甲酰胺)、测序引物：检测BCOR基因全外显子序列的上、下游引物分别为M13-F(3.2μm)、M13-R(3.2μm),以及Bigdye Terminator V3.1(购买自美国Applied Biosystems公司)。
实施例2
血液/细胞/组织基因组DNA抽提试剂盒(天根生物)的操作流程：
(1)抽提血液中的组织DNA：1)抽取300μl血液加入900μl红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次。12，000rpm离心1min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀。2)加入20μl蛋白酶K溶液，混匀。3)加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。4)加入200μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。5)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。6)向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。7)向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。8)向吸附柱CB3中加入500μl漂洗液PW，12，000rpm离心30秒，倒掉废液。9)将吸附柱CB3放回收集管中，12，000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12，000rpm离心2分钟，将溶液收集到离心管中。
(2)试剂配置：按检测人份数配置检测体系PCR反应液各Xμl，每人份19μl分装：
X＝19μl反应液×(n份标本+1份空白对照)
n为检测标本数。
(3)加样：加入检测体系PCR反应液中1μl DNA；空白对照加1μl生理盐水或不加任何物质。
(4)扩增：检测在常规PCR仪上进行，可用仪器包括ABI veriti(美国AppliedBiosystems公司)等。反应条件如下：
PCR扩增体系试剂配制方法如下：
其中，引物序列为：
(5)电泳：1.5％琼脂糖凝胶电泳，110V，25min，凝胶成像系统观察。
(6)Sanger测序：
取9μl PCR产物与2μl纯化体系。按照以下程序进行纯化：
将1μl纯化产物分别与上、下测序引物按照如下体系进行混合：
反应程序：
沉淀环节：
向完成测序反应的产物中加入2μl 125mmol的EDTA，静置5min；加入15μl无水乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心30min；倒置离心15sec，加入50μl 70％乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心15min；倒置离心15sec，置于95℃金属浴上；加入10μl Hi-Di后进行变性试验。
变性程序结束后，上测序仪(ABI3730)测序。
(7)结果判断：分别将测序结果与BCOR野生型参考序列(Genbank：NG_008880.1)进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。
实施例3
取5例的临床样本按实施例1和2的试剂和方法提取基因组、配制试剂、扩增和测序。每份检测体系PCR反应液中加入样本1μl。
其中一份样本的检测结果如图2、3、4、5、6、7所示：
图2显示BCOR 1号外显子野生型测序截图，说明1号外显子未发生突变。
图3显示BCOR 2号外显子野生型测序截图，说明2号外显子未发生突变。
图4显示BCOR 3号外显子野生型测序截图，说明3号外显子未发生突变。
图5显示BCOR 4号外显子野生型测序截图，说明4号外显子未发生突变。
图6显示BCOR 5号外显子野生型测序截图，说明5号外显子未发生突变。
图7显示BCOR 6号外显子野生型测序截图，说明6号外显子未发生突变。
从检测结果可以看出，本发明所述引物已经把外显子序列包括在内了，能够扩展出BCOR基因全部15个外显子，并且测序结果完全准确。本发明所述引物可以准确的扩展出BCOR基因全外显子，无论是野生型还是突变型。
序列表
<110> 福州艾迪康医学检验所有限公司
<120> 检测BCOR基因突变的引物、试剂盒和方法
<160> 42
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 1
tgtaaaacga cggccagtat tatttagcac agtcctccac cc 42
<210> 2
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 2
aacagctatg accatgctgg cgtcctctac tccct 35
<210> 3
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 3
tgtaaaacga cggccagtct cctttactga acctcctgg 39
<210> 4
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 4
aacagctatg accatgcacg gtggctgtga gaagttg 37
<210> 5
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 5
tgtaaaacga cggccagtgc ggagggttaa ggacagt 37
<210> 6
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 6
aacagctatg accatggcag atatggcatc aacagaac 38
<210> 7
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 7
tgtaaaacga cggccagtct ttaacccttt gtgcttgga 39
<210> 8
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 8
aacagctatg accatgtcag tgaatactta tttggcgag 39
<210> 9
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 9
tgtaaaacga cggccagtca atccttacat ggagggtgc 39
<210> 10
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 10
aacagctatg accatgcgtc tttggtaacg gtctgct 37
<210> 11
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 11
tgtaaaacga cggccagtcg gttcaagaca gaaaagatg 39
<210> 12
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 12
aacagctatg accatgactt acagcaatgc cctca 35
<210> 13
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 13
tgtaaaacga cggccagtag ttacctccct tacccagcc 39
<210> 14
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 14
aacagctatg accatgcagc gctctggcca acact 35
<210> 15
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 15
tgtaaaacga cggccagtcc gagaagaacc agatgctaa 39
<210> 16
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 16
aacagctatg accatgcttc attcaccaaa tctgcgt 37
<210> 17
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 17
tgtaaaacga cggccagttc taaatgatcc attgagtgcg 40
<210> 18
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 18
aacagctatg accatgcaca atgaataaag acgaccag 38
<210> 19
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 19
tgtaaaacga cggccagttg gttggttttg ggcactttt 39
<210> 20
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 20
aacagctatg accatgtttc catctccgtt ctctttctag 40
<210> 21
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 21
tgtaaaacga cggccagtcg accttcgggc ttcatt 36
<210> 22
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 22
aacagctatg accatggccg cacatccaca tct 33
<210> 23
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 23
tgtaaaacga cggccagtcc ccttcccaaa agcaga 36
<210> 24
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 24
aacagctatg accatggaac actcaagggg tggc 34
<210> 25
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 25
tgtaaaacga cggccagtcc gcttcttctc ccgtct 36
<210> 26
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 26
aacagctatg accatggttc gcacaggccc caga 34
<210> 27
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 27
tgtaaaacga cggccagttt agaaggacgc gggcttaa 38
<210> 28
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 28
aacagctatg accatgctgc ctgaacacga actgaa 36
<210> 29
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 29
tgtaaaacga cggccagtcc ctcaccaaga catccac 37
<210> 30
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 30
aacagctatg accatgacca ccaccgcaca gata 34
<210> 31
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 31
tgtaaaacga cggccagtcc agctttgcct gttgct 36
<210> 32
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 32
aacagctatg accatgtcaa acactcggct gctc 34
<210> 33
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 33
tgtaaaacga cggccagtta tttttctctc cctccaga 38
<210> 34
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 34
aacagctatg accatgcacc cataccagac agaaat 36
<210> 35
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 35
tgtaaaacga cggccagttg gtatgggtga gggaaagtg 39
<210> 36
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 36
aacagctatg accatgtgtg aggttcgtgg acagtta 37
<210> 37
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 37
tgtaaaacga cggccagttt gggcgcactt ttcattt 37
<210> 38
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 38
aacagctatg accatgcgta tcccaaagca tgtgtgc 37
<210> 39
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 39
tgtaaaacga cggccagttc cagtcagaag gacttagaa 39
<210> 40
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 40
aacagctatg accatggaag aatcagggac aacaata 37
<210> 41
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 41
tgtaaaacga cggccagt 18
<210> 42
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial synthesis)
<400> 42
aacagctatg accatg 16

Claims (5)

1.检测BCOR基因突变的引物，其特征在于，包括扩增BCOR基因的引物，其碱基序列为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括检测BCOR基因的测序引物，其碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列BC-E1-F和BC-E1-R是扩增BCOR基因第1外显子序列的引物，引物序列BC-E2-F和BC-E2-R是扩增BCOR基因第2外显子序列的引物，引物序列BC-E3-F和BC-E3-R是扩增BCOR基因第3外显子序列的引物，引物序列BC-E4-(1-5)-F和BC-E4-(1-5)-R是扩增BCOR基因第4外显子序列的引物，引物序列BC-E5-F和BC-E5-R是扩增BCOR基因第5外显子序列的引物，引物序列BC-E6-F和BC-E6-R是扩增BCOR基因第6外显子序列的引物，引物序列BC-E7-F和BC-E7-R是扩增BCOR基因第7外显子序列的引物，引物序列BC-E8-F和BC-E8-R是扩增BCOR基因第8外显子序列的引物，引物序列BC-E9-F和BC-E9-R是扩增BCOR基因9外显子序列的引物，引物序列BC-E10-F和BC-E10-R是扩增BCOR基因第10外显子序列的引物，引物序列BC-E11-F和BC-E11-R是扩增BCOR基因第11外显子序列的引物，引物序列BC-E12-F和BC-E12-R是扩增BCOR基因第12外显子序列的引物，引物序列BC-E13-F和BC-E13-R是扩增BCOR基因第13外显子序列的引物，引物序列BC-E14-F和BC-E14-R是扩增BCOR基因第14外显子序列的引物，引物序列BC-E15-(1-2)-F和BC-E15-(1-2)-R是扩增BCOR基因第15外显子序列的引物。
4.检测BCOR基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
(1)抽提血液中的组织DNA；
(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；其中PCR扩增引物为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA
(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG；
(4)对测序结果进行判断，确定BCOR基因是否发生突变。
5.检测BCOR基因多态突变位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR扩增反应液；包括扩增BCOR基因的引物，其碱基序列为：
BC-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTATTATTTAGCACAGTCCTCCACCC
BC-E1-R：AACAGCTATGACCATGCTGGCGTCCTCTACTCCCT
BC-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTCCTTTACTGAACCTCCTGG
BC-E2-R：AACAGCTATGACCATGCACGGTGGCTGTGAGAAGTTG
BC-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCGGAGGGTTAAGGACAGT
BC-E3-R：AACAGCTATGACCATGGCAGATATGGCATCAACAGAAC
BC-E4-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCTTTAACCCTTTGTGCTTGGA
BC-E4-1-R：AACAGCTATGACCATGTCAGTGAATACTTATTTGGCGAG
BC-E4-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCAATCCTTACATGGAGGGTGC
BC-E4-2-R：AACAGCTATGACCATGCGTCTTTGGTAACGGTCTGCT
BC-E4-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGGTTCAAGACAGAAAAGATG
BC-E4-3-R：AACAGCTATGACCATGACTTACAGCAATGCCCTCA
BC-E4-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGTTACCTCCCTTACCCAGCC
BC-E4-4-R：AACAGCTATGACCATGCAGCGCTCTGGCCAACACT
BC-E4-5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGAGAAGAACCAGATGCTAA
BC-E4-5-R：AACAGCTATGACCATGCTTCATTCACCAAATCTGCGT
BC-E5-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCTAAATGATCCATTGAGTGCG
BC-E5-R：AACAGCTATGACCATGCACAATGAATAAAGACGACCAG
BC-E6-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTTGGTTTTGGGCACTTTT
BC-E6-R：AACAGCTATGACCATGTTTCCATCTCCGTTCTCTTTCTAG
BC-E7-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGACCTTCGGGCTTCATT
BC-E7-R：AACAGCTATGACCATGGCCGCACATCCACATCT
BC-E8-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCCTTCCCAAAAGCAGA
BC-E8-R：AACAGCTATGACCATGGAACACTCAAGGGGTGGC
BC-E9-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCGCTTCTTCTCCCGTCT
BC-E9-R：AACAGCTATGACCATGGTTCGCACAGGCCCCAGA
BC-E10-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTAGAAGGACGCGGGCTTAA
BC-E10-R：AACAGCTATGACCATGCTGCCTGAACACGAACTGAA
BC-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCCTCACCAAGACATCCAC
BC-E11-R：AACAGCTATGACCATGACCACCACCGCACAGATA
BC-E12-F：TGTAAAACGACGGCCAGTCCAGCTTTGCCTGTTGCT
BC-E12-R：AACAGCTATGACCATGTCAAACACTCGGCTGCTC
BC-E13-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTATTTTTCTCTCCCTCCAGA
BC-E13-R：AACAGCTATGACCATGCACCCATACCAGACAGAAAT
BC-E14-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTGGTATGGGTGAGGGAAAGTG
BC-E14-R：AACAGCTATGACCATGTGTGAGGTTCGTGGACAGTTA
BC-E15-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTTGGGCGCACTTTTCATTT
BC-E15-1-R：AACAGCTATGACCATGCGTATCCCAAAGCATGTGTGC
BC-E15-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGTTCCAGTCAGAAGGACTTAGAA
BC-E15-2-R：AACAGCTATGACCATGGAAGAATCAGGGACAACAATA；
(iii)测序体系试剂；包括检测BCOR基因的测序引物，其碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
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