CN109507426A - 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用 - Google Patents

前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109507426A
CN109507426A CN201811439102.8A CN201811439102A CN109507426A CN 109507426 A CN109507426 A CN 109507426A CN 201811439102 A CN201811439102 A CN 201811439102A CN 109507426 A CN109507426 A CN 109507426A
Authority
CN
China
Prior art keywords
prostate cancer
subject
excretion body
gcp2
positive
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201811439102.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109507426B (zh
Inventor
王家亮
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Sheng Fuel Biotechnology Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Sheng Fuel Biotechnology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Sheng Fuel Biotechnology Co Ltd filed Critical Shanghai Sheng Fuel Biotechnology Co Ltd
Priority to CN201811439102.8A priority Critical patent/CN109507426B/zh
Publication of CN109507426A publication Critical patent/CN109507426A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109507426B publication Critical patent/CN109507426B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57484—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumor, cancer, neoplasia, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides, metabolites
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用。本发明所述前列腺癌诊断标志物所述前列腺癌诊断标志物组包括所述标志物组包括外泌体源性GCP2和外泌体源性CD63，或者，GCP2阳性外泌体和CD63阳性外泌体，其在对前列腺癌进行诊断、分级和/或预后预测时具有灵敏度高、特异性好的优点，对前列腺癌的诊断、分级和/或预后预测具有良好的指示效果。

Description

前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统 及其应用
技术领域
本发明涉及医学诊断领域，具体而言，涉及前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用。
背景技术
在世界范围内，前列腺癌发病率位居男性恶性肿瘤第2位。目前前列腺癌在美国的发病率已经超过肺癌，成为第一位危害男性健康的肿瘤。我国前列腺癌发病率较低，但近年来呈显著上升趋势。自2008年起，前列腺癌已成为泌尿系统发病率最高的恶性肿瘤，国内前列腺癌发病率城乡差异较大，特别是大城市的发病率更高，2017年中国前列腺癌确诊患者是122万，近五年的复合增长率在12%左右。
前列腺癌早期不易被发现，约65%～75%的前列腺癌患者在确诊时病情已发展至晚期。早期前列腺癌进行根治手术或者放疗，5年的总生存率可以接近100%；而一旦到了晚期，5年的生存率只有28%。前列腺癌的早期诊断对患者的治疗和预后至关重要。另外，前列腺癌的分级和预后信息能辅助医生制定有针对性的治疗方案，使患者利益最大化。因此，对前列腺癌进行准确、有效的诊断、分级和/或预后判断具有重要意义。
前列腺特异抗原PSA是由前列腺上皮细胞产生的类丝氨酸蛋白酶的激肽释放酶。目前，血清PSA指标筛查是前列腺癌检测的最常用的方法。与经直肠指检和经直肠超声发现可疑病灶相比，作为独立变量的PSA是较好的预测因子。实际上，没有公认的PSA水平的上限。PSA是一个连续参数，数值越高，前列腺癌的可能性越大。但是尽管血清PSA水平较低，男性仍有隐匿性前列腺癌的可能。
尽管PSA被认为是医学界较好的前列腺癌标志物，但是由于以下原因PSA被认为是不完美的标志物：PSA具有器官特异性，但是不具有癌症特异性，高假阳性率和低特异性导致大量不必要的前列腺活检和心理问题。PSA在诊断前列腺癌方面敏感性及特异性较差，尤其是PSA在4~10ng/mL时；PSA不能区别是原位性癌症还是致命远处转移性癌症。
因此，在前列腺癌的诊断、分级和/或预后判断方面需求是寻找更加可靠或者细分的标志物。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物组，基于所述标志物组，本发明还提供所述标志物组在制备相应检测试剂或试剂盒中的应用，制成的试剂或试剂盒，以及一种用于前列腺癌诊断、分级和/或预后判断的系统。
本发明所述标志物组为新型的前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物，现有技术尚未发现其具有前列腺癌诊断、分级和/或预后的作用。其次，本发明所述标志物组、试剂或试剂盒、应用和系统能够提高前列腺癌的诊断、分级和/或预后判断的灵敏度和特异性，具有良好的指示作用。
为实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物组，所述前列腺癌诊断标志物组包括外泌体源性GCP2和外泌体源性CD63，或者，GCP2阳性外泌体和CD63阳性外泌体。
在一些具体的实施方式中，所述标志物组还包括PSA。
在一些具体的实施方式中，所述诊断包括区分前列腺癌阳性受试者与前列腺癌阴性受试者，优选地，所述前列腺癌阳性受试者为低级别前列腺癌受试者或高级别前列腺癌受试者。
在一些具体的实施方式中，所述分级包括区分低级别前列腺癌受试者和高级别/远处转移性前列腺受试者，或者，所述分级包括区分不高于高级别的前列腺癌受试者和远处转移性前列腺癌受试者。
在一些具体的实施方式中，所述预后包括预测前列腺癌受试者的的生存情况和前列腺癌的转移情况，优选地，所述生存情况包括死亡风险和生存期，更优选地，所述预后为预测术后复发的前列腺癌患者的死亡风险。。
在一些具体的实施方式中，所述外泌体为血液、血清或血浆外泌体，优选为血清外泌体；所述PSA为血液、血清或血浆PSA。
本发明还提供前述标志物组的检测试剂在制备前列腺癌诊断、分级和/或预后的检测试剂或试剂盒中的应用。
在一些具体的实施方式中，所述检测试剂包括外泌体提取试剂、GCP2和CD63检测试剂。
在一些具体的实施方式中，所述检测试剂包括外泌体提取试剂、GCP2阳性外泌体颗粒数和CD63阳性外泌体颗粒数的检测试剂，优选地，所述检测试剂包括GCP2抗体和CD63抗体-磁珠复合物，可选地，还包括抗所述GCP2抗体的二抗。
本发明还涉及根据前述应用制备而成的试剂或试剂盒。
本发明还涉及一种用于前列腺癌诊断、分级和/或预后的系统，所述系统包括受试者信息获取模块和评价模块，其中：
所述受试者信息获取模块，用于执行获取前述标志物组的检测信息的步骤；所述评价模块，用于执行根据所述标志物的检测信息对所述受试者进行诊断、分级和/或预后判断的步骤。
在一些具体的实施方式中，所述评价模块用于执行根据受试者的PSA浓度、以及外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比值对所述受试者进行诊断和/或分级的步骤。
在一些具体的实施方式中，所述评价模块用于执行根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行诊断和/或分级步骤。
在一些具体的实施方式中，所述评价模块用于执行根据受试者的GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对所述受试者进行预后判断的步骤。
在一些具体的实施方式中，所述诊断包括根据受试者的PSA浓度、以及外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比值对受试者进行前列腺癌诊断：
如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值≤0.25，则所述受试者为前列腺癌阴性；如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值＞0.25，则所述受试者为前列腺癌阳性。
在一些具体的实施方式中，所述诊断包括根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行前列腺癌诊断：
如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值≤0.3，则所述受试者为前列腺癌阴性；如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值＞0.3，则所述受试者为前列腺癌阳性。
在一些具体的实施方式中，所述分级包括根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行前列腺癌分级：
在一些具体的实施方式中，所述预后判断包括根据GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行预后判断：如果所述比值≤0.3，则判断所述受试者预后佳，如果所述比值＞0.3则，则判断所述受试者预后不佳；优选地，所述受试者为术后复发的前列腺癌患者，所述预后佳是指受试者的死亡风险低，优选地，受试者五年内死亡风险概率低于30%，所述预后不佳是指受试者死亡高，优选地，受试者五年内死亡风险高于70%。
在一些具体的实施方式中，所述系统还包括检测模块和/或显示模块，其中，所述检测模块用于检测前述标志物，优选的，所述检测模块使用前述检测试剂或试剂盒进行检测；
所述显示模块用于结果展示，优选的，通过显示器、打印或播报的方式进行结果展示。
术语定义
PSA：本发明所述PSA是指由PSA（prostate-specific antigen）基因编码的前列腺特异性抗原蛋白；
GCP2：本发明所述GCP2是指由GCP2（glutamate carboxypeptidase 2）基因编码的谷氨酸羧肽酶2蛋白；
CD63：本发明所述CD63是指由CD63（cluster of differentiation 63）基因编码的抗原分化簇63；
颗粒数：本发明所述颗粒数是指单个外泌体颗粒的数量；
Fexo/Texo：本发明所述Fexo是指GCP2阳性外泌体的颗粒数，所述Texo是指CD63阳性外泌体，Fexo/Texo是指GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值；
低级别前列腺癌：本发明所述低级别前列腺癌（L期前列腺癌）是指Gleason分级为Gleason1~3级的前列腺癌；
高级别前列腺癌：本发明所述高级别前列腺癌（H期前列腺癌）是指Gleason分级为Gleason4~5级的前列腺癌。
有益效果
与现有技术相比，本发明的有益效果为：（1）本发明独创性地发现外泌体源性GCP2和CD6，或GCP2阳性外泌体和CD6阳性外泌体与前列腺癌之间的关系，并基于该独创性发现建立一种新型前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物组、对应的检测试剂/试剂盒及其制备用途、系统。（2）本发明对前列腺癌具有良好的指示作用，能够提高前列腺癌的诊断、分级和/或预后判断的灵敏度和特异性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例2所述柱状图；
图2为实施例3所述ROC曲线，其中1为Ratio 100μL，2为Ratio 25μL，3为参考线；
图3为实施例4所述ROC曲线，其中1为体积比1:1，2为体积比4:1，3为参考线；
图4为实施例5所述存活曲线，其中1为Fexo/Texo，2为PSA，3为实际。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
实施例1
本实施例提供提供一种血清外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比值的检测方法，包括：
1. 基本检测方法的建立：用外泌体提取试剂盒(QIAGEN公司：exoEasy Maxi Kit或者miRCURY Exosome Kits；Thermofisher公司：Total Exosome Isolation Reagent fromserum)，将血清中的总外泌体提取出来，溶于PBS溶液中，形成外泌体-PBS溶液。用ELISA试剂盒分别检测所述外泌体-PBS溶液中GCP2和CD63蛋白浓度(检测GCP2的ELISA试剂盒是R&DSystem公司的Human PSMA/FOLH1 DuoSet ELISA；检测CD63的ELISA试剂盒是LifespanbiosciencesHuman CD63 ELISA Kit Sandwich ELISA)，其中100μL外泌体-PBS溶液用于GCP2的检测，100μL外泌体-PBS溶液用于CD63。计算GCP2浓度与CD63浓度的比值。
2、优化前述方法中溶解1mL血清样本提取的外泌体的PBS溶液用量：用20个高级别前列腺癌血清样本，每个样本1毫升，提取外泌体后分别溶于50μL、100μL、200μL和1毫升PBS溶液中。按照ELISA试剂盒说明书操作将外泌体溶液等分成两份并测定GCP2和CD63浓度，并计算两者比值。当用25μL溶解血清外泌体检测，GCP2/CD63是0.49±0.15；当用100μL溶解血清外泌体检测，GCP2/CD63是0.36±0.10，当用200μL溶解血清外泌体检测，GCP2/CD63是0.54±0.01，当用400μL溶解血清外泌体检测，GCP2/CD63是0.49±0.12。从统计结果（表1）中可以发现，当1毫升血清的外泌体用200μL PBS溶液后，并用100μL作为ELISA反应液得到的比值重复性最佳，而用50μL作为ELISA反应液得到的比值整体偏低，用25和200μL作为ELISA反应液得到的比值平均值虽然与100μL的结果相近但标准差明显偏大，说明比值的重复性不佳。
表1 不同PBS用量下GCP2与CD63的检测结果
实施例2
本实施例提供提供一种血清GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比（Fexo/Texo）的检测方法，包括：
1、基本检测方法的建立：用外泌体提取试剂盒(QIAGEN公司：exoEasy Maxi Kit或者miRCURY Exosome Kits；Thermofisher公司：Total Exosome Isolation Reagent fromserum)，将血清中的总外泌体提取出来，溶于PBS溶液中，形成外泌体-PBS溶液。
将CD63抗体与磁珠孵育4°C过夜结合形成CD63磁珠液。而后将200μL的外泌体-PBS溶液稀释100倍至20毫升并从20毫升取500μL外泌体稀释液。将50μLCD63磁珠液加入到500μL外泌体稀释液中，37°C孵育1小时。将上述孵育后的混合液放置于磁力架上使磁珠沉淀于eppendorf离心管底部。吸去上层液后用PBS溶液漂洗三次磁珠并丢弃PBS溶液。再次用500μLPBS重悬磁珠，随后加入10μLGCP2抗体，37°C孵育1小时。并再次加入抗GCP2但是不与CD63抗体结合的荧光二抗。室温下避光孵育10分钟后将上述孵育混合液放置于磁力架上使磁珠沉淀与eppendorf离心管底部。吸去上层液后用PBS溶液漂洗三次磁珠并最终用1毫升PBS溶液将磁珠重悬。将最终得到的磁珠重悬液用NS300仪器(马尔文公司)进行上机检测，分别计算粒径在30-150nm的颗粒数Texo以及有荧光的颗粒数Fexo。计算Fexo与Texo的比值。
其中，前述方法中的GCP2用abcam公司一抗Anti-PSMA antibody货号ab19071，针对CD63用abcam公司一抗Anti-CD63 antibody货号ab68418，磁珠用Thermofisher公司Dynabeads™ Protein A and Magnet Starter Pack货号10013D，荧光二抗用Thermofisher公司Goat anti-Mouse Secondary Antibody, Alexa Fluor 488货号A-10667。
2、优化磁珠用量与CD63抗体的比例：将磁珠与CD63抗体按体积比4:1，2:1，1:1各自混合形成50μL磁珠抗体混合液。随后按照实验流程完成免疫荧光实验并进行外泌体粒径分析与计数。用10例样本(5例高级别前列腺癌，5例前列腺癌阴性)统计三种磁珠与CD63抗体比例下的Fexo/Texo。具体结果参见图1所示柱状图。从图1所示结果可知，当磁珠与CD63抗体的体积比为1:1时，Fexo/Texo值在高级别前列腺癌和前列腺癌阴性样本的差异最显著。体积比为4:1和2:1时，两组样本之间的Ratio存在差异但不如体积1:1结果。
实施例3
本实施例的目的在于评价血清外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比对前列腺癌诊断的效果：
1、入组样本：选择30例临床诊断结果以及血清PSA浓度已知的受试者作为入组样本，其具体信息如表2所示。
2. 检测入组样本血清外泌体源性GCP2与血清外泌体源性CD63的浓度比（具体方法参见实施例1，1mL血清样本的外泌体提取物用50μL PBS溶液溶解，等分为25μL（即ratio25μL组），用于检测GCP2或CD63；或者，1mL血清样本的外泌体提取物用200μL PBS溶液溶解，等分为100μL（即ratio 100μL组），用于检测GCP2或CD63），并根据已知诊断结果和检测所得浓度比绘制ROC曲线图。所述浓度比的结果如表2所示，ROC曲线如图2所示。
3. 结论：根据图2所示结果可知，在样本PSA浓度低的情况下，本发明所述浓度比在区分前列腺癌阴性和低级别前列腺癌时，AUC面积分别为0.897（ratio 100μL）和0.823（ratio 25μL），特异性和灵敏度高，对前列腺癌，特别是前列腺癌的早期的诊断具有良好的指示作用。
表2 入组样本的具体信息和检测结果
样本编号 诊断结论 PSA(ng/mL) Ratio25μL Ratio100μL
1 前列腺癌阴性 4.01 0.03 0.21
2 前列腺癌阴性 4.35 0.17 0.17
3 低级别前列腺癌 4.72 0.18 0.39
4 前列腺癌阴性 4.75 0.12 0.12
5 前列腺癌阴性 4.88 0.03 0.03
6 前列腺癌阴性 5.45 0.18 0.18
7 前列腺癌阴性 5.50 0.04 0.2
8 前列腺癌阴性 5.60 0.02 0.02
9 前列腺癌阴性 5.87 0.01 0.01
10 前列腺癌阴性 5.94 0.01 0.01
11 低级别前列腺癌 6.19 0.41 0.41
12 前列腺癌阴性 6.21 0.29 0.29
13 前列腺癌阴性 6.24 0.31 0.31
14 前列腺癌阴性 6.28 0.26 0.06
15 低级别前列腺癌 6.31 0.44 0.44
16 前列腺癌阴性 6.49 0.32 0.32
17 低级别前列腺癌 6.58 0.36 0.36
18 前列腺癌阴性 6.65 0.13 0.13
19 前列腺癌阴性 6.81 0.11 0.11
20 前列腺癌阴性 6.84 0.51 0.03
21 前列腺癌阴性 7.78 0.00 0.00
22 前列腺癌阴性 7.80 0.00 0.00
23 低级别前列腺癌 7.86 0.19 0.29
24 低级别前列腺癌 7.96 0.51 0.2
25 前列腺癌阴性 8.03 0.08 0.08
26 低级别前列腺癌 8.06 0.39 0.39
27 低级别前列腺癌 8.09 0.07 0.21
28 前列腺癌阴性 8.14 0.07 0.07
29 前列腺癌阴性 8.33 0 0.56
30 低级别前列腺癌 8.51 0.15 0.37
实施例4
本实施例的目的在于评价血清GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比（Fexo/Texo）对前列腺癌的诊断、分级效果：
1、入组样本：选择30例临床诊断结果以及血清PSA浓度已知的受试者作为入组样本，其具体信息如表3所示。
2. 检测入组样本血清Fexo/Texo（具体方法参见实施例2，磁珠与抗体的体积比分别取4:1和1:1），并根据已知诊断结果和检测所得浓度比绘制ROC曲线图。所述浓度比的结果如表3所示，ROC曲线如图3所示。根据图3所示结果可知，本发明所述RatioFexo/Texo在前列腺癌分级时，AUC面积分别为0.876（体积比1:1）和0.820（体积比4:1），特异性和灵敏度高，对前列腺癌的诊断和分级具有良好的指示作用。
表3 入组样本的具体信息和检测结果
样本编号 诊断结论 PSA(ng/mL) 4:1(磁珠：CD63) 1:1(磁珠：CD63)
1 高级别前列腺癌 11.87 0.37 0.43
2 前列腺癌阴性 12.88 0.17 0.32
3 远处转移性前列腺癌 13.97 0.61 0.62
4 前列腺癌阴性 14.06 0.34 0.12
5 前列腺癌阴性 14.44 0.52 0.42
6 高级别前列腺癌 16.13 0.08 0.18
7 低级别前列腺癌 16.28 0.61 0.2
8 低级别前列腺癌 16.58 0.41 0.67
9 前列腺癌阴性 17.38 0.16 0.43
10 前列腺癌阴性 17.58 0.46 0.52
11 远处转移性前列腺癌 18.32 0.41 0.67
12 低级别前列腺癌 18.38 0.29 0.29
13 前列腺癌阴性 18.47 0.31 0.31
14 高级别前列腺癌 18.59 0.26 0.06
15 远处转移性前列腺癌 18.68 0.44 0.59
16 高级别前列腺癌 19.21 0.32 0.32
17 远处转移性前列腺癌 19.48 0.78 0.71
18 高级别前列腺癌 19.68 0.13 0.13
19 低级别前列腺癌 20.16 0.11 0.11
20 前列腺癌阴性 20.25 0.51 0.03
21 前列腺癌阴性 21.03 0.16 0.35
22 高级别前列腺癌 21.09 0.38 0.25
23 远处转移性前列腺癌 22.27 0.61 0.47
24 远处转移性前列腺癌 22.56 0.51 0.36
25 前列腺癌阴性 22.77 0.24 0.58
26 远处转移性前列腺癌 23.86 0.39 0.56
27 远处转移性前列腺癌 25.95 0.56 0.67
28 前列腺癌阴性 29.09 0.07 0.07
29 高级别前列腺癌 34.66 0.41 0.56
30 远处转移性前列腺癌 48.19 0.15 0.37
实施例5
本实施例的目的在于比较评价Fexo/Texo对前列腺癌的预后预测效果：
1. 入组样本的选择：25例前列腺癌患者，接受根治切除后复发。
2. 检测所述入组样本的血清Fexo/Texo，根据血清Fexo/Texo判断患者的的生存风险，如果所述Fexo/Texo＞0.3，则预期患者的生存风险为death（死亡），否则为survival（生存）。检测所述入组样本的血清PSA浓度，如果PSA＞0.4ng/ml，则预期患者的生存风险为death（死亡），否则为survival（生存）。对所述25名受试者进行实际随访。预测结果和实际随访信息参见表4。
3. 根据预测结果和实际随访结构绘制存活曲线（见图4）。
4. 结论：根据表4和图4所示结果可知，Fexo/Texo的预测结果与实际随访结果多处重合，而血清PSA的预测结果与随访结果相去甚远，表明Fexo/Texo对前列腺癌具有良好的预见预测功能，远优于血清PSA。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种前列腺癌诊断、分级和/或预后标志物组，其特征在于，所述标志物组包括外泌体源性GCP2和外泌体源性CD63，或者，GCP2阳性外泌体和CD63阳性外泌体。
2.根据权利要求1所述的标志物，其特征在于，所述标志物组还包括PSA。
3.根据权利要求1或2所述的标志物组，其特征在于，所述诊断包括区分前列腺癌阳性受试者与前列腺癌阴性受试者，优选地，所述前列腺癌阳性受试者为低级别前列腺癌受试者或高级别前列腺癌受试者；
所述分级包括区分低级别前列腺癌受试者和高级别/远处转移性前列腺受试者，或者，所述分级包括区分不高于高级别的前列腺癌受试者和远处转移性前列腺癌受试者；
所述预后包括预测前列腺癌受试者的的生存情况和前列腺癌的转移情况，优选地，所述生存情况包括死亡风险和生存期，更优选地，所述预后为预测术后复发的前列腺癌患者的死亡风险。
4.根据权利要求1或2所述的标志物组，其特征在于，所述外泌体为血液、血清或血浆外泌体，优选为血清外泌体；所述PSA为血液、血清或血浆PSA。
5.权利要求1~4任一项所述标志物组的检测试剂在制备前列腺癌诊断、分级和/或预后的检测试剂或试剂盒中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括外泌体提取试剂、GCP2和CD63检测试剂；
或者，所述检测试剂包括外泌体提取试剂、GCP2阳性外泌体颗粒数和CD63阳性外泌体颗粒数的检测试剂，优选地，所述检测试剂包括GCP2抗体和CD63抗体-磁珠复合物，可选地，还包括抗所述GCP2抗体的二抗。
7.根据权利要求5~6任一项所述应用制备而成的试剂或试剂盒。
8.一种用于前列腺癌诊断、分级和/或预后的系统，其特征在于，所述系统包括受试者信息获取模块和评价模块，其中：
所述受试者信息获取模块，用于执行获取权利要求1~4任一项所述标志物组的检测信息的步骤；所述评价模块，用于执行根据所述标志物的检测信息对所述受试者进行诊断、分级和/或预后判断的步骤。
9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述评价模块用于执行根据受试者的PSA浓度、以及外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比值对所述受试者进行诊断和/或分级的步骤；
或者，所述评价模块用于执行根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行诊断和/或分级步骤；
或者，所述评价模块用于执行根据受试者的GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对所述受试者进行预后判断的步骤。
10.权利要求9所述的系统，其特征在于，所述诊断包括根据受试者的PSA浓度、以及外泌体源性GCP2与外泌体源性CD63的浓度比值对受试者进行前列腺癌诊断：
如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值≤0.25，则所述受试者为前列腺癌阴性；如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值＞0.25，则所述受试者为前列腺癌阳性；
或者，所述诊断包括根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行前列腺癌诊断：
如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值≤0.3，则所述受试者为前列腺癌阴性；如果4 ng/ml＜PSA浓度≤10 ng/ml，且所述比值＞0.3，则所述受试者为前列腺癌阳性；
所述分级包括根据受试者的PSA浓度、以及GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行前列腺癌分级：
如果PSA＞10 ng/ml，且所述比值≤0.5，则所述受试者为不高于高级别的前列腺癌；如果如果PSA＞10 ng/ml，且所述比值＞0.5，则所述受试者为远处转移性前列腺癌；
所述预后判断包括根据GCP2阳性外泌体与CD63阳性外泌体的颗粒数比值对受试者进行预后判断：如果所述比值≤0.3，则判断所述受试者预后佳，如果所述比值＞0.3则，则判断所述受试者预后不佳；优选地，所述受试者为术后复发的前列腺癌患者，所述预后佳是指受试者的死亡风险低，优选地，受试者五年内死亡风险概率低于30%，所述预后不佳是指受试者的死亡风险高，优先地，受试者五年内死亡风险高于70%。
CN201811439102.8A 2018-11-29 2018-11-29 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用 Active CN109507426B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811439102.8A CN109507426B (zh) 2018-11-29 2018-11-29 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811439102.8A CN109507426B (zh) 2018-11-29 2018-11-29 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109507426A true CN109507426A (zh) 2019-03-22
CN109507426B CN109507426B (zh) 2022-03-15

Family

ID=65751121

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811439102.8A Active CN109507426B (zh) 2018-11-29 2018-11-29 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109507426B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110343761A (zh) * 2019-06-06 2019-10-18 宽盈医疗科技(上海)有限公司 前列腺癌的标志物组及其应用
CN110577988A (zh) * 2019-07-19 2019-12-17 南方医科大学 胎儿生长受限的预测模型
CN110628908A (zh) * 2019-09-19 2019-12-31 北京恩泽康泰生物科技有限公司 用于前列腺癌诊断分级和良恶性预测的生物标志物及检测试剂盒
EP4148140A4 (en) * 2020-09-24 2023-11-22 JVCKenwood Corporation METHOD AND KIT FOR ASSESSING THE CONDITION OF A CELL

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102301002A (zh) * 2008-11-12 2011-12-28 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和系统
WO2012048372A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Medsaic Pty Ltd Assay for disease detection
CN103237901A (zh) * 2010-03-01 2013-08-07 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 用于治疗诊断的生物标志物
CN104302667A (zh) * 2011-12-26 2015-01-21 盐野义制药株式会社 外来体检测用单克隆抗体
CN105934670A (zh) * 2013-12-03 2016-09-07 拜奥默里克斯公司 用于分离外泌体的方法
CN108387746A (zh) * 2018-03-02 2018-08-10 浙江大学 一种捕获外泌体的超顺磁纳米微粒及其制备方法和特异性外泌体发光免疫定量检测试剂盒

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102301002A (zh) * 2008-11-12 2011-12-28 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和系统
CN103237901A (zh) * 2010-03-01 2013-08-07 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 用于治疗诊断的生物标志物
WO2012048372A1 (en) * 2010-10-11 2012-04-19 Medsaic Pty Ltd Assay for disease detection
CN104302667A (zh) * 2011-12-26 2015-01-21 盐野义制药株式会社 外来体检测用单克隆抗体
CN105934670A (zh) * 2013-12-03 2016-09-07 拜奥默里克斯公司 用于分离外泌体的方法
CN108387746A (zh) * 2018-03-02 2018-08-10 浙江大学 一种捕获外泌体的超顺磁纳米微粒及其制备方法和特异性外泌体发光免疫定量检测试剂盒

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HOMA MOLLAEI ET AL.: "A brief review of exosomes and their roles in cancer", 《META GENE》 *
MARIANTONIA LOGOZZI ET AL.: "Increased PSA expression on prostate cancer exosomes in in vitro condition and in cancer patients", 《CANCER LETTERS》 *
吉进等: "外泌体在前列腺癌进展中的作用", 《第二军医大学学报》 *
彭广等: "外泌体在前列腺癌诊疗中的研究进展", 《第二军医大学学报》 *
李学超等: "前列腺特异膜抗原的研究进展", 《军事医学科学院院刊》 *
胡明等: "前列腺特异性膜抗原的研究进展", 《国际泌尿系统杂志》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110343761A (zh) * 2019-06-06 2019-10-18 宽盈医疗科技(上海)有限公司 前列腺癌的标志物组及其应用
CN110343761B (zh) * 2019-06-06 2023-06-27 宽盈医疗科技(上海)有限公司 前列腺癌的标志物组及其应用
CN110577988A (zh) * 2019-07-19 2019-12-17 南方医科大学 胎儿生长受限的预测模型
CN110577988B (zh) * 2019-07-19 2022-12-20 南方医科大学 胎儿生长受限的预测模型
CN110628908A (zh) * 2019-09-19 2019-12-31 北京恩泽康泰生物科技有限公司 用于前列腺癌诊断分级和良恶性预测的生物标志物及检测试剂盒
CN110628908B (zh) * 2019-09-19 2022-05-10 北京恩泽康泰生物科技有限公司 用于前列腺癌诊断分级和良恶性预测的生物标志物及检测试剂盒
EP4148140A4 (en) * 2020-09-24 2023-11-22 JVCKenwood Corporation METHOD AND KIT FOR ASSESSING THE CONDITION OF A CELL

Also Published As

Publication number Publication date
CN109507426B (zh) 2022-03-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109507426A (zh) 前列腺癌诊断、分级或预后标志物、检测试剂或试剂盒、系统及其应用
CN105092855B (zh) 一种用于肝纤维化和肝硬化检测的试剂盒
CN104136630B (zh) 诊断和预示乳腺癌的标志物
US5698402A (en) Methods for diagnosing benign prostatic hyperplasia
US20130224752A1 (en) Method for early determination of recurrence after therapy for prostate cancer
CN101868729B (zh) 利用标记物组合钙防卫蛋白和血红蛋白/触珠蛋白复合物从粪便样品评价结肠直肠癌的方法
CN104650234B (zh) 抗akr1b10蛋白单克隆抗体及其应用
CN109765378A (zh) 一种新的肝硬化或肝纤维化标志物
CN109342727B (zh) 食管鳞状细胞癌自身抗体分子标志物模型及其应用
CN110187108A (zh) 一种用于早期食管癌筛查的自身抗体联合检测elisa试剂盒
CN103245784A (zh) 肺癌的诊断分析法
CN110196329A (zh) 一种食管癌早期联合检测试剂盒
Yang et al. Combined features based on preoperative controlling nutritional status score and circulating tumour cell status predict prognosis for colorectal cancer patients treated with curative resection
CN110199198A (zh) 用于评估卵巢癌的代谢生物标志物组
CN109270269A (zh) 一种用于早期乳腺癌多联检测的荧光免疫层析检测卡、试剂盒
CN106248940A (zh) 多指标联合诊断卵巢癌和/或非卵巢来源的恶性肿瘤的系统
CN101101290A (zh) 肿瘤血清标志物及其应用
CN109557312A (zh) 肝癌早期诊断方法和诊断试剂盒
Lee et al. Usefulness of carbohydrate antigen 19-9 test in healthy people and necessity of medical follow-up in individuals with elevated carbohydrate antigen 19-9 level
CN106680515B (zh) 用于肺癌诊断的多分子标志物组合
CN103487493A (zh) 尿液分子的应用
CN105492907B (zh) 新检测方法
CN103954761B (zh) 用于卵巢癌早中期快速诊断试剂盒及其检测方法
US20060084126A1 (en) Migration inhibitory factor in serum as a tumor marker for prostate, bladder, breast, ovarian, kidney and lung cancer
CN108548923A (zh) 肺小细胞癌早期特异性自身抗体panel诊断试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant