CN109468380A - Il1r2在乳腺癌预后评估与靶向治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及IL1R2在乳腺癌的诊断和治疗中的应用。具体地，本发明提供了一种IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其检测试剂的用途，(i)用于检测乳腺癌或乳腺癌风险，和/或乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的标志物；和/或(ii)用于制备检测乳腺癌或乳腺癌风险，和/或乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的诊断试剂或试剂盒。研究表明，IL1R2可作为乳腺癌的治疗靶标。本发明还提供了一种IL1R2的抑制剂的用途，其特征在于，用于制备(i)用于治疗乳腺癌的药物组合物；和/或(ii)用于预防乳腺癌转移的药物组合物。

Description

IL1R2在乳腺癌预后评估与靶向治疗中的应用

技术领域

本发明涉及肿瘤学和诊断领域，具体地，本发明涉及IL1R2在乳腺癌乳腺癌治疗中和预后评估的应用。

背景技术

乳腺癌是一种在女性人群中常见的恶性癌症，严重危害着女性的身心健康。在全球范围内，每年估计有超过120万妇女被诊断为乳腺癌。尽管我国是乳腺癌发病率较低的国家，但由于庞大的人口基数，乳腺癌患者人口绝对数大；同时，我国已经成为乳腺癌发病率增长最快的国家之一，使得其成为女性健康的一大杀手。

乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。

化疗是目前治疗乳腺癌最有效的手段之一。化疗是化学药物治疗的简称，通过使用化学药物，在肿瘤细胞生长繁殖的不同环节上抑制或杀死肿瘤细胞，从而达到治疗目的。化疗是一种全身治疗的手段，化疗药物会随着血液循环遍布全身的绝大部分器官和组织。因此，对一些有全身播撒倾向的肿瘤及已经转移的中晚期肿瘤，化疗都是主要的治疗手段。然而，在一些病人中，化疗过程中出现的药物抵抗问题大大限制了化疗效果。

因此，本领域迫切需要为乳腺癌或乳腺癌转移的诊断和治疗提供新的标志物与治疗手段。

发明内容

本发明的目的就是提供乳腺癌或乳腺癌转移的诊断和治疗提供新的标志物与治疗手段。

在本发明的第一方面，提供了一种IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其检测试剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(i)用于检测患乳腺癌或患乳腺癌风险和/或乳腺癌转移或乳腺癌转移风险；

(ii)用于乳腺癌患者的预后评估。

在另一优选例中，当所述试剂或组合物含有IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白时，所述试剂或组合物还用于选自下组一种或多种用途：

(iii)用作招募单核细胞和/或巨噬细胞的促进剂。

在另一优选例中，所述的预后评价包括预测接受治疗后的乳腺癌患者的生存时间。

在另一优选例中，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。

在另一优选例中，所述IL1R2基因、mRNA、cDNA、或蛋白来源于哺乳动物。

在另一优选例中，所述的哺乳动物包括人和非人哺乳动物，较佳地包括啮齿动物(如小鼠、大鼠)、灵长动物(如人)。

在另一优选例中，所述IL1R2基因、mRNA、cDNA、或蛋白来源于人。

在另一优选例中，所述检测试剂包括IL1R2的特异性抗体、IL1R2的特异性结合分子、特异性扩增引物、探针、核酸芯片(如DNA芯片)或蛋白质芯片。

在另一优选例中，所述检测试剂包括：

(a)IL1R2的特异性抗体、IL1R2的特异性结合分子；和/或

(b)特异性扩增IL1R2mRNA或IL1R2cDNA的引物或引物对、探针或芯片。

在另一优选例中，所述的检测试剂偶联有或带有可检测标记。

在另一优选例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。

在另一优选例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

在另一优选例中，所述的核酸芯片包括基片和点样在基片上的特异性寡核苷酸探针，所述的特异性寡核苷酸探针包括与IL1R2多核苷酸(mRNA或DNA)特异性结合的探针。

在另一优选例中，所述的蛋白质芯片包括基片和点样在基片上的特异性抗体，所述的特异性抗体包括抗IL1R2的特异性抗体。

在另一优选例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

在另一优选例中，所述检测是针对离体样本的检测。

在另一优选例中，所述的离体样本包括：组织样本、体液样本、细胞样本、血液样本、或其组合。

在另一优选例中，所述细胞样本包括：肿瘤细胞样本、癌旁细胞样本、和正常乳腺细胞样本。

在另一优选例中，所述乳腺癌包括：Luminal-A型乳腺癌、Luminal-B型乳腺癌、Her2阳性乳腺癌、三阴性乳腺癌、Claudin-low型乳腺癌。

在另一优选例中，所述乳腺癌转移包括：乳腺癌骨转移、乳腺癌肺转移、乳腺癌脑转移、乳腺癌肝转移，或其组合。

在本发明的第二方面，提供了一种IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其激动剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(a)用作招募单核细胞和/或巨噬细胞的促进剂；

(b)用作多西他赛的增敏剂。

在另一优选例中，所述巨噬细胞包括肿瘤相关巨噬细胞。

在本发明的第三方面，提供了一种用于检测乳腺癌或乳腺癌风险，和/或用于检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测乳腺癌或乳腺癌风险。

在另一优选例中，所述试剂盒还含有IL1R2基因、mRNA、cDNA、和/或蛋白作为对照品或质控品。

在另一优选例中，所述的检测IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂包括：

(a)IL1R2的特异性抗体、IL1R2的特异性结合分子；和/或

(b)特异性扩增IL1R2mRNA或IL1R2cDNA的引物或引物对、探针或芯片。

在另一优选例中，所述IL1R2浓度包括IL1R2浓度、IL1R2的mRNA浓度，或其组合。

在另一优选例中，所述的检测乳腺癌或乳腺癌风险是指检测乳腺癌是否已发生、发生的部位，和/或判断发生乳腺癌的可能性(易感性)大小。

在另一优选例中，所述判断包括预先判断(预测)。

在另一优选例中，所述的检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险是指检测乳腺癌转移是否已发生、发生的转移部位，和/或判断发生乳腺癌转移的可能性(易感性)大小。

在另一优选例中，所述的乳腺癌转移包括乳腺癌骨转移、乳腺癌肺转移、乳腺癌脑转移、乳腺癌肝转移、或其组合。

在另一优选例中，当所述试剂盒用于用于检测乳腺癌或乳腺癌风险时，所述的标签或说明书中注明以下内容：

如果检测对象的IL1R2浓度C1显著高于对照参比值C0，则该对象患有乳腺癌或患有乳腺癌的风险大于正常人，或该对象的乳腺癌已发生转移或乳腺癌转移的风险高。

在另一优选例中，所述的对照参比值C0为正常人群中相同样本中的IL1R2浓度、除了乳腺癌患者之外的一般癌症患者人群中相同样本中的IL1R2浓度。

在另一优选例中，所述“显著高于”指C1/C0的比值≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3.0。

在另一优选例中，当所述试剂盒用于检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险时，所述的标签或说明书中注明以下内容：

如果检测对象的IL1R2浓度C2显著高于对照参比值C0，则该对象的乳腺癌已发生转移或乳腺癌转移的风险高。

在另一优选例中，所述的对照参比值C0为患有未转移的乳腺癌的患者人群中相同样本中的IL1R2浓度。

在另一优选例中，所述“显著高于”指C2/C0的比值≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3.0。

在本发明的第四方面，提供了一种IL1R2的抑制剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物包括：

(i)用于预防和/或治疗乳腺癌的药物组合物；

(ii)用于招募单核细胞和/或巨噬细胞的抑制剂；和/或

(iii)用于增加多西他赛抗肿瘤效果的增敏剂。

在另一优选例中，所述IL1R2的抑制剂包括：中和性抗体、小分子化合物、反义核酸，或其组合。

在另一优选例中，所述IL1R2的抑制剂为中和性抗体。

在另一优选例中，所述药物组合物含有(a)IL1R2的抑制剂以及(b)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的0.1-99.9wt％,较佳地10-99.9wt％，更佳地70％-99.9wt％。

在另一优选例中，所述药物组合物为液态、固体、或半固体。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型、注射剂、或外用药物剂型。

在另一优选例中，所述药物组合物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、或注射剂。

在另一优选例中，所述的组合物为液态组合物。

在另一优选例中，所述组合物为口服制剂。

在另一优选例中，所述的载体选自下组：输液剂载体和/或注射剂载体，较佳地，所述的载体是选自下组的一种或多种载体：生理盐水、葡萄糖盐水、或其组合。

在另一优选例中，所述药物组合物在治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的应用中，可单独使用，或联合使用。

在另一优选例中，所述的联合使用包括：与其它治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物联合使用。

在另一优选例中，所述“其它治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物”包括：多西他赛(Docetaxel)、紫杉醇、多柔比星、或其组合。

在另一优选例中，所述“其它治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物”为多西他赛(Docetaxel)。

在另一优选例中，所述巨噬细胞包括肿瘤相关巨噬细胞。

在本发明的第五方面，提供了一种药盒，所述药盒包括：

(I)第一容器以及位于第一容器中的包含有IL1R2的抑制剂的药物组合物；

(II)任选地，第二容器以及位于第二容器中的用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物；和

(III)说明书，所述说明书上记载了所述药盒用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移。

在另一优选例中，所述IL1R2的抑制剂包括：中和性抗体、小分子化合物、反义核酸，或其组合。

在另一优选例中，所述IL1R2的抑制剂为中和性抗体。

在另一优选例中，所述药物组合物含有(a)IL1R2的抑制剂以及(b)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的0.1-99.9wt％,较佳地10-99.9wt％，更佳地70％-99.9wt％。

在另一优选例中，所述药物组合物为液态、固体、或半固体。

在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型、注射剂、或外用药物剂型。

在另一优选例中，所述药物组合物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、或注射剂。

在另一优选例中，所述的组合物为液态组合物。

在另一优选例中，所述组合物为口服制剂。

在另一优选例中，所述的载体选自下组：输液剂载体和/或注射剂载体，较佳地，所述的载体是选自下组的一种或多种载体：生理盐水、葡萄糖盐水、或其组合。

在另一优选例中，所述在另一优选例中，所述“用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物”包括：多西他赛(Docetaxel)、紫杉醇、多柔比星、或其组合。

在另一优选例中，所述用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物为多西他赛(Docetaxel)。

在本发明的第六方面，提供了一种药物组合，所述的药物组合包括：

(a)第一药物组合物，所述的第一药物组合物含有IL1R2抑制剂，以及药学上可接受的载体；和

(b)第二药物组合物，所述的第二药物组合物含有多西他赛以及药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的第一药物组合物和第二药物组合物是同一或不同的药物组合物。

在另一优选例中，所述的IL1R2抑制剂包括抗体。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1显示了IL1R2基因表达在乳腺癌组织中，特别是乳腺癌干细胞中显著增高。

图2显示了IL1R2mRNA在不同分子分型乳腺癌患者肿瘤组织的表达情况。

图3显示了IL1R2高表达乳腺癌细胞促进了TAMs在乳腺癌组织的招募。

图4显示了IL1R2中和性抗体抑制肿瘤细胞体外与体内成瘤能力。

图5显示了IL1R2中和性抗体抑制移植瘤组织中乳腺癌肿瘤干细胞富集。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，首次意外地发现，IL1R2可以作为乳腺癌或其转移的诊断标志物，并且IL1R2的抑制剂可以有效地降低乳腺癌细胞的恶性表型。实验表明，IL1R2在人乳腺癌肿瘤细胞中的表达显著高于癌旁正常乳腺上皮细胞，同时IL1R2mRNA和蛋白在乳腺癌ALDH+CD24-CD44+肿瘤干细胞群中的表达显著高于非肿瘤干细胞群；并且IL1R2中和性抗体处理不管在体内还是在体外都具有抑制肿瘤细胞增殖和增强对化疗药物Docetaxel敏感性的作用。因此，有希望将IL1R2基因或蛋白表达检测与中和性抗体抑制IL1R2蛋白表达应用于乳腺癌诊疗过程中。在此基础上完成了本发明。

术语

IL1R2蛋白和多核苷酸

IL1R2属于IL1R的受体家属。其家族的特征为含有一个保守的TIR(Toll-IL-1-receptor)区域，与IL1相互作用后进一步发生信号传导，激活下游的NF-kB，MAPK信号通路等。经典的IL1R受体与IL1作用后，在炎症和感染中发生重要作用。1991年，IL1R2基因首次在B淋巴细胞与单核细胞中发现，其在进化过程中，包括多骨鱼，小鼠及人类中高度保守，且在基因组中与IL1R1的其他家庭成员成簇存在。编码IL1R2的外显子与IL1R1受体亦高度保守，28％的氨基酸相同。IL1R2缺乏一个经典的TIR信号区域，是一个诱饵受体，阻碍IL1与经典受体的相互作用，不进行信号转导，从而负性调控IL1的作用。IL1R2的编码序列中有一个单独的外显子编码器跨膜区域，胞浆区域含有29个氨基酸的尾巴。其蛋白理论大小为45kDa，而IL-1R1的分子量为80–85kDa。IL-1/IL-1R2/IL-1RAcP受体复合物与经典的复合物IL-1/IL-1R1/IL-1AcP的结构相似。IL-1R2还具有一种可溶性的形式，由解聚酶，基质金属蛋白酶17(ADAM17)，还有多种分泌酶剪切而成。可溶性的IL1R2在血液中浓度较高，高达ng/ml，可与IL-1a和IL1B的前体结合，并且阻断IL-1转化酶(ICE)/caspase-1对IL-1的转化作用。在炎症或感染时，caspase-1发生作用，清除IL1R2，恢复IL-1的功能。

IL1R2在单核细胞，中性粒细胞，淋巴细胞及M2型的巨噬细胞中高表达，负性调控IL1，进而抗炎。糖皮质激素，前列腺素，阿司匹林，抗炎因子IL-4，IL-13，IL-10，IL-27可上调IL1R2的表达，而IL-4可降低IL1R2的表达。正常条件下，IL1R2表达于皮肤的上皮细胞中，且在牛皮癣中表达量明显上调。此外，子宫内膜异位及子宫内膜样的卵巢癌与IL1R2的低表达相关。胰腺癌、骨肉瘤、结肠癌、泌尿系统的肿瘤发现与IL1R2的高表达相关。

在本发明中，术语“IL1R2基因”、“IL1R2多核苷酸”可互换使用，都指具有IL1R2核苷酸序列的核酸序列。

需理解的是，当编码相同的氨基酸时，密码子中核苷酸的取代是可接受的。另外需理解的是，由核苷酸取代而产生保守的氨基酸取代时，核苷酸的变换也是可被接受的。

在本发明中，本发明的蛋白还包括其保守性变异体，指与本发明蛋白的氨基酸序列相比，有至多10个，较佳地至多8个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表A进行氨基酸替换而产生。

表A

在得到了IL1R2的氨基酸片段的情况下，可根据其构建出编码它的核酸序列，并且根据核苷酸序列来设计特异性探针。核苷酸全长序列或其片段通常可以用PCR扩增法、重组法或人工合成的方法获得。对于PCR扩增法，可根据本发明所公开的IL1R2核苷酸序列，尤其是开放阅读框序列来设计引物，并用市售的cDNA库或按本领域技术人员已知的常规方法所制备的cDNA库作为模板，扩增而得有关序列。当序列较长时，常常需要进行两次或多次PCR扩增，然后再将各次扩增出的片段按正确次序拼接在一起。

一旦获得了有关的序列，就可以用重组法来大批量地获得有关序列。这通常是将其克隆入载体，再转入细胞，然后通过常规方法从增殖后的宿主细胞中分离得到有关序列。

此外，还可用人工合成的方法来合成有关序列，尤其是片段长度较短时。通常，通过先合成多个小片段，然后再进行连接可获得序列很长的片段。

目前，已经可以完全通过化学合成来得到编码本发明蛋白(或其片段，衍生物)的DNA序列。然后可将该DNA序列引入本领域中已知的各种现有的DNA分子(如载体)和细胞中。

通过常规的重组DNA技术，可利用本发明的多核苷酸序列可用来表达或生产重组的IL1R2多肽。一般来说有以下步骤：

(1)用本发明的编码人IL1R2多肽的多核苷酸(或变异体)，或用含有该多核苷酸的重组表达载体转化或转导合适的宿主细胞；

(2)在合适的培养基中培养的宿主细胞；

(3)从培养基或细胞中分离、纯化蛋白质。

本发明中，IL1R2多核苷酸序列可插入到重组表达载体中。总之，只要能在宿主体内复制和稳定，任何质粒和载体都可以用。表达载体的一个重要特征是通常含有复制起点、启动子、标记基因和翻译控制元件。

本领域的技术人员熟知的方法能用于构建含IL1R2编码DNA序列和合适的转录/翻译控制信号的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的DNA序列可有效连接到表达载体中的适当启动子上，以指导mRNA合成。表达载体还包括翻译起始用的核糖体结合位点和转录终止子。

此外，表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如真核细胞培养用的二氢叶酸还原酶、新霉素抗性以及绿色荧光蛋白(GFP)，或用于大肠杆菌的四环素或氨苄青霉素抗性。

包含上述的适当DNA序列以及适当启动子或者控制序列的载体，可以用于转化适当的宿主细胞，以使其能够表达蛋白质。

宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌，链霉菌属的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；昆虫细胞；动物细胞等。

用重组DNA转化宿主细胞可用本领域技术人员熟知的常规技术进行。当宿主为原核生物如大肠杆菌时，能吸收DNA的感受态细胞可在指数生长期后收获，用CaCl₂法处理，所用的步骤在本领域众所周知。另一种方法是使用MgCl₂。如果需要，转化也可用电穿孔的方法进行。当宿主是真核生物，可选用如下的DNA转染方法：磷酸钙共沉淀法，常规机械方法如显微注射、电穿孔、脂质体包装等。

获得的转化子可以用常规方法培养，表达本发明的基因所编码的多肽。根据所用的宿主细胞，培养中所用的培养基可选自各种常规培养基。在适于宿主细胞生长的条件下进行培养。当宿主细胞生长到适当的细胞密度后，用合适的方法(如温度转换或化学诱导)诱导选择的启动子，将细胞再培养一段时间。

在上面的方法中的重组多肽可在细胞内、或在细胞膜上表达、或分泌到细胞外。如果需要，可利用其物理的、化学的和其它特性通过各种分离方法分离和纯化重组的蛋白。这些方法是本领域技术人员所熟知的。这些方法的例子包括但并不限于：常规的复性处理、用蛋白沉淀剂处理(盐析方法)、离心、渗透破菌、超处理、超离心、分子筛层析(凝胶过滤)、吸附层析、离子交换层析、高效液相层析(HPLC)和其它各种液相层析技术及这些方法的结合。

特异性抗体

在本发明中，术语“本发明抗体”、“抗IL1R2的特异性抗体”可互换使用。

本发明还包括对人IL1R2多肽具有特异性的多克隆抗体和单克隆抗体，尤其是单克隆抗体。这里，“特异性”是指抗体能结合于人IL1R2基因产物或片段。较佳地，指那些能与人IL1R2基因产物或片段结合但不识别和结合于其它非相关抗原分子的抗体。本发明中抗体包括那些能够结合并抑制人IL1R2蛋白的分子，也包括那些并不影响人IL1R2蛋白功能的抗体。本发明还包括那些能与修饰或未经修饰形式的人IL1R2基因产物结合的抗体。

本发明不仅包括完整的单克隆或多克隆抗体，而且还包括具有免疫活性的抗体片段，如Fab’或(Fab)2片段；抗体重链；抗体轻链；遗传工程改造的单链Fv分子(Ladner等人，美国专利No.4,946,778)；或嵌合抗体，如具有鼠抗体结合特异性但仍保留来自人的抗体部分的抗体。

本发明的抗体可以通过本领域内技术人员已知的各种技术进行制备。例如，纯化的人IL1R2基因产物或者其具有抗原性的片段，可被施用于动物以诱导多克隆抗体的产生。与之相似的，表达人IL1R2蛋白或其具有抗原性的片段的细胞可用来免疫动物来生产抗体。本发明的抗体也可以是单克隆抗体。此类单克隆抗体可以利用杂交瘤技术来制备(见Kohler等人,Nature 256；495,1975；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：511,1976；Kohler等人,Eur.J.Immunol.6：292,1976；Hammerling等人,In Monoclonal Antibodies and TCell Hybridomas,Elsevier,N.Y.,1981)。本发明的抗体包括能阻断人IL1R2蛋白功能的抗体以及不影响人IL1R2蛋白功能的抗体。本发明的各类抗体可以利用人IL1R2基因产物的片段或功能区，通过常规免疫技术获得。这些片段或功能区可以利用重组方法制备或利用多肽合成仪合成。与人IL1R2基因产物的未修饰形式结合的抗体可以用原核细胞(例如E.Coli)中生产的基因产物来免疫动物而产生；与翻译后修饰形式结合的抗体(如糖基化或磷酸化的蛋白或多肽)，可以用真核细胞(例如酵母或昆虫细胞)中产生的基因产物来免疫动物而获得。

抗人IL1R2蛋白的抗体可用于免疫组织化学技术中，检测标本(尤其是组织样本或血清样本)中的人IL1R2蛋白。由于IL1R2蛋白存在胞外区，因此在胞外区脱落并进入血液的情况下，这些可溶性的IL1R2胞外区就可成为血清检测的靶对象。

抑制剂

如本文所用，术语“拮抗剂”、“抑制剂”具有相同的含义，均指利用本发明蛋白(IL1R2蛋白)，通过各种常规筛选方法，可筛选出与IL1R2蛋白发生相互作用的物质，尤其是抑制剂等。

本发明IL1R2蛋白的抑制剂(包括抗体、反义核酸、小分子化合物以及其他抑制剂)，当在治疗上进行施用(给药)时，可抑制IL1R2蛋白的表达和/或活性，进而减弱紫杉烷类药物耐药性。通常，可将这些物质配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药。

可用于本发明的抑制剂包括：IL1R2的抗体(如IL1R2中和抗体)、抑制性mRNA、IL1R2核酸的反义RNA、siRNA、shRNA、小分子化合物以及IL1R2的活性抑制剂。其中，典型的IL1R2抑制剂为抑制性miRNA、siRNA和IL1R2中和抗体。

在本发明的一个优选的实施方式中，选用的IL1R2的抑制剂为市售的IL1R2蛋白的中和性抗体，购自R&D公司，货号为AF263。

检测方法

利用IL1R2在乳腺癌细胞、组织中高表达，本发明还提供了检测患乳腺癌或患乳腺癌风险的方法。同时与其他高表达分子相比，IL1R2表现为在具有最强恶性程度的乳腺癌肿瘤干细胞群表达更强，因此IL1R2表达的显著增高不仅提示乳腺癌肿瘤的存在，同时提示该患者出现转移或复发的可能显著增高，基于此，本发明还提供了检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的方法。

本发明涉及定量和定位检测人IL1R2蛋白水平或mRNA水平的诊断试验方法。这些试验是本领域所熟知的。试验中所检测的人IL1R2蛋白水平，可以用于诊断(包括辅助诊断)受试者是否存在患乳腺癌或患乳腺癌风险和/或乳腺癌转移或乳腺癌转移风险，并可用于乳腺癌患者的预后评估。

一种检测样本中是否存在IL1R2蛋白的方法是利用IL1R2蛋白的特异性抗体进行检测，它包括：将样本与IL1R2蛋白特异性抗体接触；观察是否形成抗体复合物，形成了抗体复合物就表示样本中存在IL1R2蛋白。

IL1R2蛋白或其多核苷酸可用于IL1R2蛋白相关疾病的诊断和治疗。本发明的多核苷酸的一部分或全部可作为探针固定在微阵列或DNA芯片上，用于分析组织中基因的差异表达分析和基因诊断。抗IL1R2的抗体可以固定在蛋白质芯片上，用于检测样本中的IL1R2蛋白。

检测试剂盒

基于IL1R2与乳腺癌患病和/或乳腺癌转移的相关性，即IL1R2在乳腺癌细胞、组织中高表达，并且在具有最强恶性程度的乳腺癌肿瘤干细胞群表达较强，因此IL1R2可以作为患乳腺癌和/或乳腺癌转移的一种诊断标志物。

本发明还提供了一种检测乳腺癌或乳腺癌风险和/或用于检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测乳腺癌或乳腺癌风险。优选地，所述试剂盒还含有IL1R2基因、mRNA、cDNA、和/或蛋白作为对照品或质控品。

在另一优选例中，所述的检测IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂包括：

(a)IL1R2的特异性抗体、IL1R2的特异性结合分子；和/或

(b)特异性扩增IL1R2mRNA或IL1R2cDNA的引物或引物对、探针或芯片。

在另一优选例中，所述IL1R2浓度包括IL1R2浓度、IL1R2的mRNA浓度，或其组合。

在另一优选例中，所述的检测乳腺癌或乳腺癌风险是指检测乳腺癌是否已发生、发生的部位，和/或判断发生乳腺癌的可能性(易感性)大小。

在另一优选例中，所述判断包括预先判断(预测)。

在另一优选例中，所述的检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险是指检测乳腺癌转移是否已发生、发生的转移部位，和/或判断发生乳腺癌转移的可能性(易感性)大小。

在另一优选例中，所述的乳腺癌转移包括乳腺癌骨转移、乳腺癌肺转移、乳腺癌脑转移、乳腺癌肝转移、或其组合。

在另一优选例中，当所述试剂盒用于用于检测乳腺癌或乳腺癌风险时，所述的标签或说明书中注明以下内容：

如果检测对象的IL1R2浓度C1显著高于对照参比值C0，则该对象患有乳腺癌或患有乳腺癌的风险大于正常人，或该对象的乳腺癌已发生转移或乳腺癌转移的风险高。所述“显著高于”指C1/C0的比值≥1.5，较佳地≥2.0，更佳地≥3.0。

在另一优选例中，所述的对照参比值C0为正常人群中相同样本中的IL1R2浓度、除了乳腺癌患者之外的一般癌症患者人群中相同样本中的IL1R2浓度。

药物组合

本发明还提供了一种药物组合，它含有第一药物组合物和第二药物组合物，其中，第一药物组合物包括上述的IL1R2的抑制剂(含量为0.001-99wt％，较佳地0.01-90wt％)，以及药学上可接受的载体(含量为余量)。所述的药物组合可用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移。

在本发明中，所述的抑制剂包括针对IL1R2的反义核酸(如siRNA、shRNA、反义RNA、反义DNA)、抗体、或其组合。此外，所述的抑制剂还包括可以降低IL1R2表达或活性的小分子化合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物还包括化疗药物，较佳地为多西他赛(Docetaxel)、紫杉醇、多柔比星、或其组合。

通常，可将IL1R2抑制剂配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的水性载体介质中，其中pH通常约为5-8，较佳地pH约为6-8，尽管pH值可随被配制物质的性质以及待治疗的病症而有所变化。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：瘤内、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、口服、或局部给药。

本发明的第一药物组合物可直接用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移。此外，还可与其他治疗剂，即第二药物组合物联用。

本发明的第一药物组合物含有安全有效量的本发明上述的IL1R2抑制剂以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的第一药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。第一药物组合物如针剂、溶液宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克/千克体重-约5毫克/千克体重。此外，本发明还可与第二药物组合物一起使用。

在一优选的实施方式中，使用药物组合时，是将安全有效量的本发明的IL1R2拮抗剂施用于哺乳动物，其中该安全有效量通常至少约10微克/千克体重，而且在大多数情况下不超过约8毫克/千克体重，较佳地该剂量是约10微克/千克体重-约1毫克/千克体重。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

本发明的主要优点包括：

1)本发明阐述一种在乳腺癌细胞高表达的蛋白分子IL1R2，同时与其他高表达分子相比，IL1R2表现为在具有最强恶性程度的乳腺癌肿瘤干细胞群表达更强；

2)IL1R2表达的显著增高不仅提示乳腺癌肿瘤的存在，同时提示该患者出现转移或复发的可能显著增高；

3)通过IL1R2特异性中和抗体的方法可以靶向抑制乳腺癌肿瘤细胞特别是具有最强恶性的乳腺肿瘤干细胞中IL1R2蛋白的表达，并抑制其成瘤能力和耐药能力；而通过IL1R2特异性和传统化疗药物如多西他赛、多柔比星联合使用的方法，不仅可以杀伤普通乳腺癌肿瘤细胞，而且同时靶向杀伤乳腺癌肿瘤干细胞，降低乳腺癌患者出现复发的可能，改善乳腺癌患者预后；

4)通过IL1R2特异性中和抗体等方法抑制IL1R2的表达可以同时改变乳腺癌组织中炎症细胞特别是肿瘤相关巨噬细胞的浸润，从而抑制乳腺癌肿瘤细胞的免疫逃逸。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

如无特别说明，实施例所用的材料和试剂均为市售产品。

实验方法

1.实时荧光定量PCR(qPCR)

实时荧光定量PCR是将荧光能量技术应用于多聚酶链式反应的实验方法。本方法使用一种称为SYBR GreenⅠ的荧光染料，在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。荧光染料发射出的荧光讯号强度与DNA产量成正比，检测PCR过程的荧光讯号便可得知靶序列初始浓度，从而达到定量目的。

2.酶联免疫吸附实验(ELISA)

本方法中运用的酶联免疫吸附实验是通过ELISA kit(Raybio公司，货号ELH-IL1R2)进行的。首先，取100uL标准品或样品加入到ELISA板的相应孔中，室温孵育2.5h。弃去液体，使用kit中自带的wash solution洗去残留样品。每孔加入100uL生物素标记的抗体，室温下轻轻摇晃孵育一小时。弃去液体，使用kit中自带的wash solution洗去残留抗体。每孔加入100uL HRP标记的链霉亲和素溶液，室温下轻轻摇晃孵育45min。弃去液体，使用kit中自带的wash solution洗去残留的游离的链霉亲和素。每孔加入100uL反应底物，室温下轻轻摇晃避光孵育30min。每孔加入50uL终止液，然后立即测定450nm波长处的吸光度值。

3.免疫组织化学染色(IHC)

石蜡切片经脱蜡水化后使用柠檬酸钠缓冲液进行热修复，3％过氧化氢溶液(使用甲醇稀释30％过氧化氢获得)室温孵育10分钟阻断内源过氧化物酶活性，再利用正常非免疫动物血清封闭，anti-IL1R2(R&D公司，货号AF263)一抗4℃孵育过夜。第二天加上相应HRP偶联的羊抗鼠/兔IgG抗体，室温孵育15分钟，利用新配置的DAB显色液室温避光显色，最后苏木素复染，脱水透明，中性树脂封片，显微镜下观察，拍照分析。

4.药物敏感度检测(MTT)

将生长状态良好的细胞，正常消化并计数。调整细胞密度为30,000个细胞/ml，将等量的细胞铺于整块96孔板中，每孔加入100ul细胞悬液，即3,000个细胞，37℃培养过夜。待细胞过夜贴壁良好后，在相应不同孔中依次加入梯度倍比稀释的药物100ul(含一组空白对照，即药物浓度为0)，37℃培养。48小时后每孔加入15ul MTT溶液(5mg/ml)，37℃孵育2小时。弃去上清后每孔加入DMSO 100ul，震荡混匀10分钟后使用酶标仪检测OD490。

5.移植瘤成瘤实验

使用腹腔注射戊巴比妥钠溶液麻醉小鼠，具体使用剂量依小鼠品系而定。待小鼠被麻醉后，使用1ml注射器向两侧第四节乳房垫中注射100ul混有Matrigel的肿瘤细胞。注射完成后使用动物手术专用订针，将小鼠腹部皮肤伤口订起来，一周后去除订针。对于完成荷瘤的小鼠，每周观察并测量肿瘤生长情况，如需药物治疗，应每周按时进行给药操作(给药方式为腹腔注射)。待肿瘤生长至直径达到1.5厘米或小鼠状态不好时，及时结束动物实验。3、结束实验时，使用二氧化碳窒息法处死小鼠，取出肿瘤及相应可能出现转移器官如肝脏、肺脏等；取得的肿瘤的一部分和器官应及时使用福尔马林溶液固定，进行石蜡包埋，用于进一步免疫组化检测相关指标，另一部分肿瘤组织则通过胶原酶消化成单细胞用于流式检测肿瘤干细胞。

实施例1：IL1R2基因表达在乳腺癌组织中显著增高

首先，通过RNAseq检测了来源于人乳腺癌组织异种移植瘤模型小鼠肿瘤组织分选得到的ALDH+CD24-CD44+乳腺癌肿瘤干细胞的基因表达，对其进一步分析发现IL1R2mRNA在移植瘤组织ALDH+CD24-CD44+乳腺癌肿瘤干细胞群中表达增高。

在人乳腺癌细胞系重新分选ALDH+CD24-CD44+乳腺癌肿瘤干细胞，再一次验证IL1R2mRNA与蛋白均在乳腺癌肿瘤干细胞群中表达增高(图1A和1B)。

于是，通过免疫组织化学检测了38例乳腺癌患者肿瘤组织中IL1R2表达情况，发现在其中32例(约占81.58％)患者乳腺癌细胞中IL1R2表达显著高于对应正常乳腺上皮细胞(图1C)。

利用乳腺癌组织芯片检测200例不同分子分型乳腺癌(Luminal_A,Luminal_B,Her2+,Basal-like乳腺癌患者各50例)患者肿瘤组织中IL1R2表达情况，发现在所有分子分型的乳腺癌患者肿瘤组织中IL1R2表达均增高(图1D)，同时IL1R2蛋白的表达增高与乳腺癌患者转移的发生正相关(表1)。然而，在乳腺癌组织芯片的检测结果中，结果显示IL1R2蛋白的表达在不同分子分型的乳腺癌组织中未呈现表达差异。

对不同人乳腺癌细胞系的检测显示，IL1R2mRNA与蛋白在Basal-like型乳腺癌细胞系(HCC1937,SUM149,SUM159和MDA-MB-231)中表达较高(图1E)，同时公共数据库TCGA数据库的分析结果显示在具有更强恶性的Her2+,Basal-like与Claudin-low乳腺癌患者组织IL1R2mRNA表达水平更高(图2)。

对乳腺癌病人IL1R2mRNA水平分析的结果也显示，IL1R2mRNA水平在乳腺癌组织中显著高于癌旁正常组织，类似的结果在TCGA数据库中也可以得到(图1F)。同时，根据TCGA数据库的分析结果显示，肿瘤组织中高表达IL1R2mRNA的乳腺癌病人往往具有更短的总生存期(Overall Survival)与更短的无复发生存期(Relapse Free Survival)(图1G)。

由于细胞中IL1R2可以被剪切修饰后分泌到细胞外，在本实施例中，还通过ELISA方法对50例健康人、50例原发性乳腺癌患者与21例乳腺癌转移患者血清中分泌型IL1R2的表达水平进行了检测。ELISA检测结果显示，乳腺癌患者血清中分泌型IL1R2的表达水平略高于正常体检人群(图1H)。另外，在正常人群中(50例)，血清分泌型IL1R2的表达水平与血液中单核细胞数有明显相关性(表2)。

表1.IL1R2表达与乳腺癌临床病理特征的相关性

*,方差分析显示双尾差异p值小于0.05具有显著性。

表2正常人血清分泌型IL1R2与血象特征的相关性

*,Spearman相关性分析显示双尾差异p值小于0.05具有显著性。

实施例2：IL1R2通过多种细胞因子招募肿瘤相关巨噬细胞

研究表明，肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)具有促进肿瘤生长、耐药和转移的作用。实施例1的结果表明，血清中IL1R2的表达与单核细胞数有关，同时TAMs来源于外周单核细胞的分化，于是在本实施例中，分析了移植瘤组织中TAMs的富集情况。

通过流式细胞术分析移植瘤组织中TAMs标志物CD11b和MHC-II分子的表达情况，结果显示IL1R2的敲低使得CD11b+MHC-II+TAMs在移植瘤细胞中所占的比例显著下降(图3A)，而IL1R2的过表达促进了TAMs在移植瘤组织中的增加(图3B)。非接触性共培养系统的结果显示，IL1R2过表达细胞的培养上清可以促进人单核细胞THP-1和小鼠永生化巨噬细胞iBMM的迁移能力，即IL1R2过表达细胞上清可以在体外促进巨噬细胞的招募(图3C)。

在本实施例中，为了验证IL1R2高表达组织中巨噬细胞的功能和作用，用IL1R2过表达细胞培养上清预处理由PMA诱导的人THP-1巨噬细胞48小时，而后去除细胞培养上清，再将预处理后的THP-1巨噬细胞与肿瘤细胞进行非接触性共培养48小时，进而观察共培养后肿瘤细胞表型的变化(实验流程见图3D)。实验结果显示，IL1R2过表达细胞上清预处理的THP-1巨噬细胞共培养可以增强肿瘤细胞的侵袭能力(图3E)和增殖能力(图3F)(这里使用了IL4诱导巨噬细胞发生具有促肿瘤作用的M2极化作为阳性对照，LPS诱导巨噬细胞发生具有抑制肿瘤作用的M1极化作为阴性对照)。

这些结果显示，IL1R2高表达肿瘤细胞可以促进肿瘤组织中TMAs的招募，后者又进一步促进了肿瘤细胞的增殖与侵袭。

另外，本实施例通过细胞因子芯片(Cytokine Array，Raybiotech)对IL1R2过表达肿瘤细胞培养上清中的120种分泌蛋白的表达进行了检测，以明确IL1R2促进TMAs招募的分子机制。结果发现大量分泌蛋白的表达在IL1R2过表达细胞培养上清中增高。qRT-PCR的结果显示，IL1R2的高表达可以稳定上调M-CSF，BMP4,SCF的表达，下调GM-CSF,IL8的表达(图3G)。

已有研究表明，SCF,BMP4和M-CSF可以诱导巨噬细胞发生M2极化或者促进巨噬细胞增殖，而GM-CSF可以诱导巨噬细胞发生M1极化，IL8则可以被巨噬细胞高表达并在中性细胞招募过程中发挥重要作用。本实施例的结果显示，IL1R2可以通过改变巨噬细胞相关分泌蛋白的表达来促进肿瘤组织中巨噬细胞的招募。

之前的研究发现IL1R2可以和去泛素化酶USP15与BMI1形成复合物，并通过USP15调控BMI1蛋白的去泛素化，导致BMI1蛋白在肿瘤细胞中不易发生降解，进而提高BMI1蛋白的表达。在本实施例中，观察了上述分泌蛋白在BMI1敲低细胞中的表达，qRT-PCR分析结果显示在过表达IL1R2的细胞中敲低BMI1基因表达可以显著逆转M-CSF,BMP4,SCF的表达增高与IL8的表达下降，提示IL1R2主要通过BMI1发挥对这些分泌蛋白的调控作用(图3H)。

在本实施例中，还通过免疫组织化学法分析了38例乳腺癌组织中IL1R2，BMI1与巨噬细胞光谱标志物CD68蛋白的表达，以验证上述调控关系在乳腺癌患者肿瘤组织中同时存在。结果显示，乳腺癌组织中IL1R2,BMI1蛋白与CD68蛋白的表达分别呈现正相关且具有统计学意义，提示IL1R2在乳腺癌患者体内也可以通过BMI1调控巨噬细胞的招募(图3I)。

实施例3：IL1R2中和性抗体处理可以抑制人乳腺癌细胞恶性表型

通过shRNA敲低IL1R2基因表达或者过表达IL1R2基因在人乳腺癌细胞中的表达，结果显示IL1R2可以调控乳腺癌细胞的增殖、侵袭和肿瘤干细胞自我更新能力，并且在免疫缺陷小鼠体内调控乳腺癌移植瘤的生长、转移和肿瘤相关巨噬细胞的浸润。IL1R2的作用与通过去泛素化酶USP15调控BMI1蛋白泛素化修饰水平与蛋白稳定性有关。因此在本发明人探究了能够靶向抑制乳腺癌IL1R2表达的方式。

结果显示，使用IL1R2蛋白中和性抗体(R&D公司,货号:AF263)处理人乳腺癌细胞系SUM149细胞48小时可以显著抑制SUM149细胞中IL1R2蛋白本身及其下游靶蛋白BMI1的表达，且抑制效果呈现浓度依赖性(图4A)。相似的抑制作用可以在不同的乳腺癌细胞系(SUM149和SUM159)使用不同的中和性抗体(R&D公司,货号:AF263,MAB263,MAB663)达到(图4B and 4C)。

体外实验结果显示，IL1R2中和性抗体(AF263)预处理48小时，可以抑制乳腺癌细胞的生长能力(平板克隆形成实验，图4D)，侧向迁移能力(划痕实验，图4E)，自我更新能力(肿瘤球形成实验，图4F)，特别是经过中和性抗体3ug/ml预处理48小时后的SUM149细胞对于化疗药物Docetaxel或Doxorubicine的敏感性显著增高(图4G)。中和性抗体(AF263，3ug/ml)处理7天也可以抑制ALDH+CD24-CD44+乳腺癌肿瘤干细胞的体外富集(流式细胞分析术，图4H)。

体内实验结果显示，经过IL1R2中和性抗体(1ug/ml或3ug/ml)预处理7天后的SUM149细胞相对于对照细胞(正常小鼠IgG,cIgG，处理7天)，其在裸鼠体内的移植瘤生长能力显著下降(图4I)。而为了观察中和性抗体是否可以在体内增强肿瘤细胞对Docetaxel的敏感性，本发明人在SUM149细胞在NOD/SCID小鼠体内形成移植瘤(开始给药时最长直径约2mm)后，使用IL1R2中和性抗体(10mg/kg)联合化疗药物Docetaxel(10mg/kg)给予小鼠腹腔注射4周，每周1次。

结果显示，中和性抗体单独使用已经可以显著抑制已经形成的移植瘤生长，同时可以增强化疗药物Docetaxel的抑制肿瘤作用(图4J)。实验中，中和性抗体和化疗药物的使用对小鼠体重没有显著影响(图4K)。

为了进一步明确中和性抗体和Docetaxel联合治疗对乳腺癌肿瘤干细胞的影响，本发明人对移植瘤组织进行了消化，再将肿瘤细胞悬液有限稀释后重新注入免疫缺陷小鼠乳腺脂肪垫(Limited Dilution Assay)，通过观察这些细胞的成瘤情况再利用统计学方法估算肿瘤干细胞所占的比例。观察10周后，收集各组小鼠的移植瘤成瘤情况(图5)。

统计结果显示，单纯中和性抗体处理即可抑制乳腺癌肿瘤干细胞的富集(图4,anti-IL1R2+PBS vs cIgG+PBS)。虽然单独Docetaxel处理(Docetaxel+PBS)不能降低乳腺癌肿瘤干细胞的比例，IL1R2中和性抗体和Docetaxel联合处理可以有效降低肿瘤组织中乳腺癌肿瘤干细胞的富集(图4,anti-IL1R2+Docetaxel vs.Docetaxel+PBS)。

这些结果提示，中和性抗体处理可以有效降低乳腺癌移植瘤组织中乳腺癌干细胞的比例，由于之前的报导显示乳腺癌干细胞与肿瘤的复发和转移密切相关，因此这些结果也提示应用IL1R2中和性抗体疗法可能抑制乳腺癌的复发和转移。

讨论

本发明发现IL1R2在人乳腺癌肿瘤细胞中的表达显著高于癌旁正常乳腺上皮细胞，同时IL1R2mRNA和蛋白在乳腺癌ALDH+CD24-CD44+肿瘤干细胞群中的表达显著高于非肿瘤干细胞群，但是血清中分泌型IL1R2蛋白的表达在乳腺癌患者没有显著增高。IL1R2蛋白高表达的乳腺癌患者出现转移的可能性明显增高，同时血清中分泌型IL1R2蛋白的表达可能与血液中的单核细胞数有关。

本发明发现IL1R2中和性抗体处理是抑制IL1R2蛋白本身及其下游靶蛋白BMI1表达的有效手段。IL1R2中和性抗体处理不管在体内还是在体外都具有抑制肿瘤细胞增殖和增强对化疗药物Docetaxel敏感性的作用，因此IL1R2中和性抗体联合化疗药物Docetaxel是一种治疗乳腺癌的新型联合治疗策略。

本发明旨在将IL1R2蛋白表达检测与中和性抗体抑制IL1R2蛋白表达应用于乳腺癌诊疗过程中。为乳腺癌的诊断和治疗提供新的检测标志物与治疗手段，最终改善乳腺癌患者预后。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(i)用于检测患乳腺癌或患乳腺癌风险和/或乳腺癌转移或乳腺癌转移风险；

(ii)用于乳腺癌患者的预后评估。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括：

(a)IL1R2的特异性抗体、IL1R2的特异性结合分子；和/或

(b)特异性扩增IL1R2mRNA或IL1R2cDNA的引物或引物对、探针或芯片。

3.一种IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其激动剂的用途，其特征在于，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(a)用作招募单核细胞和/或巨噬细胞的促进剂；

(b)用作多西他赛的增敏剂。

4.一种用于检测乳腺癌或乳腺癌风险，和/或用于检测乳腺癌转移或乳腺癌转移风险的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测IL1R2基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂；以及标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测乳腺癌或乳腺癌风险。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有IL1R2基因、mRNA、cDNA、和/或蛋白作为对照品或质控品。

6.一种IL1R2的抑制剂的用途，其特征在于，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物包括：

(i)用于预防和/或治疗乳腺癌的药物组合物；

(ii)用于招募单核细胞和/或巨噬细胞的抑制剂；和/或

(iii)用于增加多西他赛抗肿瘤效果的增敏剂。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述IL1R2的抑制剂为中和性抗体。

8.一种药盒，其特征在于，所述药盒包括：

(I)第一容器以及位于第一容器中的包含有IL1R2的抑制剂的药物组合物；

(II)任选地，第二容器以及位于第二容器中的用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物；和

(III)说明书，所述说明书上记载了所述药盒用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移。

9.如权利要求8所述的药盒，其特征在于，所述用于治疗乳腺癌或预防乳腺癌转移的药物为多西他赛(Docetaxel)。

10.一种药物组合，其特征在于，所述的药物组合包括：

(a)第一药物组合物，所述的第一药物组合物含有IL1R2抑制剂，以及药学上可接受的载体；和

(b)第二药物组合物，所述的第二药物组合物含有多西他赛以及药学上可接受的载体。