CN112680520A

CN112680520A - Znf408在乳腺癌诊断及预后评估中的应用

Info

Publication number: CN112680520A
Application number: CN202011593847.7A
Authority: CN
Inventors: 尚永丰; 梁静; 程笑
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2020-12-29
Filing date: 2020-12-29
Publication date: 2021-04-20
Anticipated expiration: 2040-12-29
Also published as: CN112680520B

Abstract

本发明属于乳腺癌诊断及预后技术领域，公开了ZNF408在乳腺癌诊断和预后评估中的应用。本发明提供了一种ZNF408基因、mRNA、cDNA、或蛋白的检测试剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物(i)用于检测患乳腺癌或患乳腺癌风险；(ii)用于乳腺癌患者的预后评估。同时，还提供了一种用于检测乳腺癌或乳腺癌风险的试剂盒，以及一种ZNF408的抑制剂的用途。本发明提供的ZNF408在乳腺癌样本中高表达，且高表达ZNF408的ER阳性患者预后更差，ZNF408促进乳腺癌细胞的增殖。本发明提供的ZNF408蛋白能促进乳腺癌细胞的增殖速率，导致较差的预后，为乳腺癌的个性化治疗开辟新的方向。

Description

ZNF408在乳腺癌诊断及预后评估中的应用

技术领域

本发明属于乳腺癌诊断及预后技术领域，涉及ZNF408在乳腺癌诊断和预后评估中的应用。

背景技术

乳腺癌是女性发病率及死亡率排名前列的癌症。美国癌症协会发表的《2019年癌症数据报告》显示：女性最常见的3种癌症分别是乳腺癌(30％)、肺癌和结肠直肠癌。中国国家癌症中心2015年发布的关于中国各种类型恶性肿瘤的数据显示，乳腺癌为女性恶性肿瘤发病之首，每年发病人口达30.4万人，占整体女性恶性肿瘤的17.1％。

虽然乳腺癌的发病率在上升，但乳腺癌的死亡率却在下降。这是因为靶向药物治疗的研究不断深入，乳腺癌预后得以改善，复发率降低。因此，继续寻找与乳腺癌发生发展相关的基因对乳腺癌的机制研究以及临床上的诊断和治疗具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是为乳腺癌诊断和治疗提供新的标志物与治疗手段，具体提供了一种ZNF408在乳腺癌诊断及预后评估中的应用。本发明“ZNF408”是指包含SEQ ID No.1序列所示的核苷酸序列及相应编码的SEQ ID No.2所示的蛋白，以及在真核系统中纯化得到的蛋白复合物。

本发明第一方面提供了一种ZNF408基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其检测试剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(i)用于检测患乳腺癌或患乳腺癌风险；

(ii)用于乳腺癌患者的预后评估。

在某些实施例中，所述预后评估为乳腺癌患者经过内分泌治疗或者经过化疗治疗后的预后评估。

在某些实施例中，所述的预后评价包括预测接受治疗后的乳腺癌患者的生存时间。

在某些实施例中，所述的蛋白包括全长蛋白或蛋白片段。

在某些实施例中，所述检测试剂包括ZNF408的特异性抗体、ZNF408的特异性结合分子、特异性扩增引物、探针、核酸芯片(如DNA芯片)或蛋白质芯片。

在某些实施例中，所述的检测试剂偶联有或带有可检测标记。

在某些实施例中，所述可检测标记选自下组：生色团、化学发光基团、荧光团、同位素或酶。

在某些实施例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

在某些实施例中，所述的核酸芯片包括基片和点样在基片上的特异性寡核苷酸探针，所述的特异性寡核苷酸探针包括与ZNF408多核苷酸(mRNA或DNA)特异性结合的探针。

在某些实施例中，所述的蛋白质芯片包括基片和点样在基片上的特异性抗体，所述的特异性抗体包括抗ZNF408的特异性抗体。

在某些实施例中，所述的抗体是单克隆抗体或多克隆抗体。

在某些实施例中，所述检测是针对离体样本的检测。

在某些实施例中，所述的离体样本包括：组织样本、体液样本、细胞样本、血液样本、或其组合。

在某些实施例中，所述细胞样本包括：肿瘤细胞样本、癌旁细胞样本、和正常乳腺细胞样本。

在某些实施例中，所述乳腺癌包括：Luminal-A型乳腺癌、Luminal-B型乳腺癌、Her2阳性乳腺癌、三阴性乳腺癌、Claudin-low型乳腺癌。

本发明的第二方面，提供了一种用于检测乳腺癌或乳腺癌风险的试剂盒，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测ZNF408基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂。

在某些实施例中，所述试剂盒中还包括标签说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测乳腺癌或乳腺癌风险。

在某些实施例中，所述试剂盒还含有ZNF408基因、mRNA、cDNA、和/或蛋白作为对照品或质控品。

在某些实施例中，所述的检测乳腺癌或乳腺癌风险是指检测乳腺癌是否已发生、发生的部位，和/或判断发生乳腺癌的可能性(易感性)大小。

在某些实施例中，所述判断包括预先判断(预测)。

在某些实施例中，当所述试剂盒用于用于检测乳腺癌或乳腺癌风险时，所述的标签或说明书中注明以下内容：

如果检测对象的ZNF408表达量显著高于对照表达量，则该对象患有乳腺癌或患有乳腺癌的风险大于正常人，或该对象的乳腺癌已发生转移或乳腺癌转移的风险高。

在某些实施例中，所述的对照表达量为正常人群中相同样本中的ZNF408浓度、除了乳腺癌患者之外的一般癌症患者人群中相同样本中的ZNF408浓度。

本发明的第三方面，提供了一种ZNF408的抑制剂的用途，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物为用于预防和/或治疗乳腺癌的药物组合物。

在某些实施例中，所述ZNF408的抑制剂为中和性抗体、小分子化合物、反义核酸，或其组合。

本发明的第四方面，提供了一种药物组合，所述的药物组合含有ZNF408抑制剂，以及药学上可接受的载体。

在某些实施例中，所述组分(a)占所述药物组合物总重量的0.1-99.9wt％,较佳地10-99.9wt％，更佳地70％-99.9wt％。

在某些实施例中，所述药物组合物为液态、固体、或半固体。

在某些实施例中，所述的药物组合物的剂型为口服剂型、注射剂、或外用药物剂型。

在某些实施例中，所述药物组合物的剂型包括片剂、颗粒剂、胶囊、口服液、或注射剂。

在某些实施例中，所述的组合物为液态组合物。

在某些实施例中，所述组合物为口服制剂。

在某些实施例中，所述的载体选自下组：输液剂载体和/或注射剂载体，较佳地，所述的载体是选自下组的一种或多种载体：生理盐水、葡萄糖盐水、或其组合。

本发明相对与现有技术具有的效果：

本发明提供的ZNF408在乳腺癌样本中高表达，且高表达ZNF408的ER阳性患者预后更差，ZNF408促进乳腺癌细胞的增殖。同时，本发明提供的ZNF408蛋白能促进乳腺癌细胞的增殖速率，导致较差的预后，为乳腺癌的个性化治疗开辟新的方向。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示本发明实施例提供的ZNF408在27种肿瘤中的表达差异。数据来源于GTEx数据库中的正常组织的数据和TCGA肿瘤组织的数据，其中，*表示p<0.05，**表示p<0.01，***表示p<0.001。

图2示本发明实施例中ZNF408在各种类型乳腺肿瘤中均高表达。

图3示本发明实施例提供的ZNF408的低表达可抑制MCF-7及MDA-MB-231的增殖能力的示意图。图中显示，敲低ZNF408后，细胞克隆形成的克隆数减少。同时CCK-8细胞计数实验显示，敲低ZNF408后，细胞增殖能力降低。

图4示本发明实施例提供的ZNF408在ER阳性的乳腺癌患者中表达较高时预后更差。

图5示本发明实施例提供的在接受内分泌治疗和未接受内分析治疗乳腺癌患者的生存率与ZNF408表达量的关系。

图6示本发明实施例提供的接受化疗和未接受化疗的乳腺癌患者的生存率与ZNF408表达量的关系。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施案例所描述的内容仅用于说明和解释本发明，并不用于限制权利要求书中所详细描述的本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备如无特别说明，均为常规方法，所使用的试验材料如无特别说明，均可从商业公司获取。

实施例1

从TCGA数据库中获取了ZNF408基因在各个肿瘤样本中癌与癌旁的表达差异。如图1中显示，ZNF408基因在27种肿瘤及正常组织中的mRNA水平表达差异。ZNF408在ACC(肾上腺皮质癌)、BRCA(乳腺浸润癌)、CESC(宫颈鳞癌和腺癌)、CHOL(胆管癌)、COAD(结肠癌)、ESCA(食管癌)、GBM(多形成性胶质细胞瘤)、HNSC(头颈鳞状细胞癌)、KICH(肾显色细胞癌)、KIRC(肾透明细胞癌)、KIRP(肾乳头状细胞癌)、LGG(脑低级别胶质瘤)、LIHC(肝细胞癌)、LUAD(肺腺癌)、LUSC(肺鳞癌)、OV(卵巢浆液性囊腺癌)、PAAD(胰腺癌)、PRAD(前列腺癌)、READ(直肠腺癌)、SKCM(皮肤黑色素瘤)、STAD(胃癌)、TGCT(睾丸癌)、THCA(甲状腺癌)、UCS(子宫肉瘤)这几种肿瘤中显著高表达。

进一步地，从TCGA数据库中获取了基因在正常乳腺组织及各个分型乳腺肿瘤样本中的差异，并用Oncomine工具进行分析，结果如图2显示，ZNF408在各种类型乳腺肿瘤中均高表达。

实施例2

实验中所用的NC(阴性对照)和S1、S2、S3为上海吉玛公司化学合成的干扰片段。转染时用

RNAiMAX。

转染MCF7及MDA-MB-231细胞72h后，进行克隆形成能力分析。具体步骤如下：将细胞计数并传至6孔板中，每孔5000个细胞，在37℃培养箱培养14天，隔两天换液，最后用冷的PBS洗2遍细胞，用4％多聚甲醛室温固定10分钟，用0.1％结晶紫染色液染20分钟，用PBS冲洗干净。

转染MCF7及MDA-MB-231细胞24、48、72、96、120h和144h后，体外用CCK-8试剂盒检测细胞增殖，具体步骤如下：

转染后的细胞培养72h，用0.25％胰酶消化进行细胞计数，将细胞接种于96孔板中，浓度为1×10⁴/ml，每孔加100μl；避光条件下，96孔板中每孔加入10μl的CCK8试剂，晃动培养板3min，然后将培养板放入培养箱中继续培养，2h后取出，在酶标仪450nm波长处测定OD值。

结果如图3，敲低ZNF408后，相比对照，细胞增殖明显受到抑制。可见，抑制ZNF408的表达能够显著性抑制乳腺癌细胞的增殖。

实施例3

用在线工具(https://kmplot.com/analysis/)分析在ER阳性的乳腺癌患者中，ZNF408高表达与无病生存率的关系。如图4结果显示：ZNF408高表达时，ER阳性的患者预后更差，P值为0.00068，差异显著。

用在线工具(https://kmplot.com/analysis/)分析在接受内分泌治疗和未接受内分析治疗、接受化疗和未接受化疗的乳腺癌患者的生存率与ZNF408表达量的关系。结果如图5所示，ZNF408高表达时，接受内分泌治疗的患者预后更差，P值为0.002，差异显著。同时，未接受内分泌治疗的患者预后与ZNF408表达量的相关性无统计学意义。如图6所示，ZNF408高表达时，接受内分泌治疗的患者预后更差，P值为0.022，有统计学意义。同时，未接受内分泌治疗的患者预后与ZNF408表达量的相关性无统计学意义。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims

1.一种ZNF408基因、mRNA、cDNA、或蛋白的检测试剂的用途，其特征在于，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物用于选自下组一种或多种用途：

(i)用于检测患乳腺癌或患乳腺癌风险；

(ii)用于乳腺癌患者的预后评估。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述预后评估为乳腺癌患者经过内分泌治疗或者经过化疗治疗后的预后评估。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述检测试剂包括：

(a)ZNF408的特异性抗体、ZNF408的特异性结合分子；和/或

(b)特异性扩增ZNF408 mRNA或ZNF408 cDNA的引物或引物对、探针或芯片。

4.一种用于检测乳腺癌或乳腺癌风险的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有一容器，所述容器中含有检测ZNF408基因、mRNA、cDNA、蛋白、或其组合的检测试剂。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测乳腺癌或乳腺癌风险。

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有ZNF408基因、mRNA、cDNA、和/或蛋白作为对照品或质控品。

7.一种ZNF408的抑制剂的用途，其特征在于，用于制备一种试剂或组合物，所述试剂或组合物为用于预防和/或治疗乳腺癌的药物组合物。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述ZNF408的抑制剂为中和性抗体。

9.一种药物组合，其特征在于，所述的药物组合含有ZNF408抑制剂，以及药学上可接受的载体。