CN109406686A

CN109406686A - 一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法

Info

Publication number: CN109406686A
Application number: CN201811624980.7A
Authority: CN
Inventors: 胡娟; 林巧美; 林胜男; 庞文生; 阚永军; 蒋畅
Original assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Fujian University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2018-12-28
Filing date: 2018-12-28
Publication date: 2019-03-01

Abstract

本发明公开了一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其采用石油醚加热回流的方式，可有效提取太子参中的脂肪酸类成分，然后通过高效液相色谱结合外标‑标准曲线法进行检测和计算，可实现太子参中脂肪酸类成分亚麻酸、亚油酸及油酸含量的准确测定，为完善中药太子参的质量标准奠定基础。

Description

一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法

技术领域

本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法。

背景技术

太子参为石竹科植物孩儿参Pseudostellaria heterophylla （Miq.）Pax ex Paxet Hoffm.的干燥块根。为我国传统中药，其味甘、微苦，平，归脾、肺经，具有益气健脾，生津润肺之功效，用于脾虚体倦，食欲不振，病后虚弱，气阴不足，自汗口渴，肺燥干咳。

目前2015年版《中华人民共和国药典》中关于太子参药材的质量标准中尚无制定含量测定指标。而据现有报道，不同产地、不同批次太子参中均含有脂肪酸成分，但不同批次太子参中脂肪酸成分含量具有一定的差异。因此，通过测定脂肪酸含量以评价太子参的质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其可实现太子参中脂肪酸类成分亚麻酸、亚油酸及油酸含量的准确测定。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其包括以下步骤：

1）标准溶液的配制：精密称取对照品亚麻酸、亚油酸及油酸于容量瓶中，加甲醇溶解定容，得混合标准母液；然后精密量取不同体积的混合标准母液于容量瓶中，加甲醇稀释定容，得到含亚麻酸、亚油酸、油酸的系列浓度混合标准溶液；

2）标准曲线的绘制：将步骤1）所得系列浓度混合标准溶液分别进行HPLC检测，然后以亚麻酸、亚油酸、油酸的浓度为横坐标，亚麻酸、亚油酸、油酸的峰面积为纵坐标，分别绘制亚麻酸、亚油酸、油酸的标准曲线，并计算其线性回归方程；

3）样品的提取：将待测太子参样品粉碎，过三号筛，然后按料液比1:40 g/mL加入石油醚，90 ℃水浴回流提取2 h，过滤，收集滤液，挥干溶剂，得提取物；

4）样品的检测：将所得提取物用甲醇溶解转移至容量瓶中定容，对制备的样品溶液进行HPLC检测，再利用线性回归方程计算样品中亚麻酸、亚油酸及油酸的含量。

所述HPLC检测的色谱条件为：采用SinoChrom ODS-BP色谱柱，规格为4.6 mm×250mm，5μm，进样量20 μL，检测波长为203nm；流速1mL/min；柱温30 ℃，以乙腈-0.2vol%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，其洗脱程序为：0-30min，乙腈体积维持在73%，30-40min，乙腈体积由73%提升到92%，40-50min，乙腈体积维持在92%，50-52min，乙腈体积由92%降低至73%，52-60min，乙腈体积维持在93%。

本发明建立了一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其采用石油醚加热回流的方式，可有效提取太子参中脂肪酸类成分，然后通过高效液相色谱结合外标-标准曲线法进行检测及计算，可实现测定太子参中脂肪酸类成分亚麻酸、亚油酸及油酸的含量的准确测定，为完善中药太子参的质量标准奠定基础。

本发明具有如下优点：

（1）本发明可实现太子参中3种脂肪酸类成分的同时测定，检测效率高，方法简便、可靠。

（2）采用本发明方法进行检测，3种脂肪酸类成分在一定范围类线性关系较好。

（3）本发明能准确、快速的测定太子参中3种脂肪酸类成分的含量，为完善中药太子参的质量标准奠定基础。

附图说明

图1为亚麻酸的标准曲线图。

图2为亚油酸的标准曲线图。

图3为油酸的标准曲线图。

图4为含亚麻酸、亚油酸、油酸的标准溶液的HPLC色谱图。

图5为所检测太子参样品的HPLC色谱图。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

1. 仪器与试药

waters e2695高效液相色谱仪，2998二极管阵列检测器（美国waters公司）；AE240十万分之一电子分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；BUCHI-100旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）；HH-6型数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）。

太子参（样品编码FJ-015、购自福建柘荣太子参市场，经福建省食品药品检定研究院金鸣主任药师鉴定为石竹科太子参）。

对照品：亚麻酸（分子式：C₁₈H₃₀O₂，批号SLBB2034V，纯度：99%，CAS：463-40-1）购自西格玛奥德里奇公司；亚油酸（分子式：C₁₈H₃₂O₂，批号：111622-201704，纯度：99.8%，CAS：60-33-3）、油酸（分子式：C₁₈H₃₄O₂，批号111621-201707，纯度：99.9%，CAS：112-80-1）均购自中国食品药品检定研究院。

色谱纯试剂：甲醇（德国Merck公司、批号1880707710），乙腈（美国Fisher公司、批号167265），磷酸（美国Fisher公司、批号170534）。

分析纯试剂：石油醚（西陇科学股份有限公司、批号1810301）

电阻率为18.2Ω的超纯水。

2. 方法

2.1 流动相配制

0.2 vol %磷酸水溶液：量取超纯水1000 mL置烧杯中，加入2 mL色谱纯磷酸混匀，即得0.2 vol %磷酸1000 mL。

2.2 标准溶液制备

精密称定亚麻酸15.76 mg、亚油酸151.27 mg、油酸100.34 mg，加甲醇溶解定容至同一个50 mL容量瓶中，摇匀，得亚麻酸浓度为0.3152 mg/mL、亚油酸浓度为3.0254 mg/mL、油酸浓度为2.0068 mg/mL的混合标准母液；分别精密量取标准母液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL至5 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得亚麻酸浓度为0.0063、0.0126、0.0315、0.0630、0.0946、0.1261 mg/mL；亚油酸浓度为0.0605、0.1210、0.3025、0.6051、0.9076、1.2102 mg/mL；油酸浓度为0.0401、0.0802、0.2007、0.4014、0.6020、0.8027 mg/mL的混合标准溶液。

2.3 供试品溶液制备

称取太子参（粉碎过三号筛）5.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，加入石油醚200 mL，90 ℃水浴加热回流提取2 h，过滤，并用石油醚洗涤烧瓶及药渣，收集滤液，挥干溶剂，残渣加色谱纯甲醇溶解，移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，用0.22 μm的微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

2.4 色谱分析条件及结果

采用依利特SinoChrom ODS-BP色谱柱( 4.6 mm × 250mm，5μm)，进样量20 μL，检测波长为203nm；流速1mL/min；柱温30 ℃，流动相：乙腈（A）、0.2vol%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序表

亚麻酸浓度为0.0630mg/mL，亚油酸浓度为0.6051 mg/mL，油酸浓度为0.4014 mg/mL的混合标准溶液和太子参样品溶液的HPLC色谱图数据分别见表2和表3。

表2 标准溶液的HPLC图谱峰参数

表3 太子参样品中3种脂肪酸的HPLC图谱峰参数

2.5 线性关系考察

将不同浓度的含3种脂肪酸类成分的混合标准溶液20μL分别进样，以标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算每个成分的线性回归方程，结果见表4。

表43种脂肪酸类成分线性范围及回归方程

3. 方法学验证

3.1 精密度试验

同一供试品溶液重复进样6次，亚麻酸、亚油酸和油酸含量的RSD分别为0.49%、0.24%、1.04%，表明仪器精密度良好。

3.2 重复性试验

取同一批样品，按供试品溶液制备方法平行制备6份，分别进样分析，亚麻酸、亚油酸和油酸含量的RSD分别为2.51%、2.66%、1.28%，表明该方法重复性好。

3.3 稳定性试验

同一供试品分别在0、6、12、18、24、48小时进样，亚麻酸、亚油酸和油酸含量的RSD分别为0.68%、0.47%、1.45%，表明供试品溶液在48小时内稳定。

3.4 回收率试验

按照上述液相色谱条件，将一定量的标准溶液加入已知含量的样品溶液中，测定3种成分含量。亚麻酸、亚油酸和油酸回收率分别为88.91~96.24%、89.42~97.26%、89.10~94.90%，RSD平均值分别为1.74%、1.68%、1.64%，表明该方法准确度良好。

4. 样品含量测定

取福建、贵州两个主产区相同采收期的各10个批次太子参样品溶液，按2.4项下色谱条件进样分析，根据线性回归方程计算3种脂肪酸类成分的含量，结果见表5、表6。

X=(C×f×10^-3)/m，

式中：

X-太子参脂肪酸（亚麻酸、亚油酸、油酸）含量，单位为克每克（g/g，%）；

C-根据标准曲线回归方程计算出太子参脂肪酸（亚麻酸、亚油酸、油酸）的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）；

f-溶液的稀释倍数；

m-样品的取样量，单位为克（g）。

表5 福建太子参样品中脂肪酸含量

表6 贵州太子参样品中脂肪酸含量

5. 结论

药典中药品质量标准分析方法验证指导原则（9101）规定，样品中待测成分含量在0.001%级别，回收率限度为80%~115%；待测成分含量在0.01%级别，回收率限度为85%~110%。本发明中测得样品中亚麻酸含量在0.001%级别、亚油酸和油酸含量在0.01%级别，3个脂肪酸的平均加样回收率均符合药典规定值，说明该方法重现性好、准确度高，为太子参药材质量标准的完善奠定基础。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

4）样品的检测：将所得提取物用甲醇溶解并转移至容量瓶中定容，对制备的样品溶液进行HPLC检测，再利用线性回归方程计算样品中亚麻酸、亚油酸及油酸的含量。

2. 根据权利要求1所述的太子参中脂肪酸类成分的检测方法，其特征在于：所述HPLC检测的色谱条件为：采用SinoChrom ODS-BP色谱柱，规格为4.6 mm×250mm、5μm，进样量20μL，检测波长为203nm；流速1mL/min；柱温30 ℃，以乙腈-0.2vol%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，其洗脱程序为：0-30min，乙腈体积维持在73%，30-40min，乙腈体积由73%提升到92%，40-50min，乙腈体积维持在92%，50-52min，乙腈体积由92%降低至73%，52-60min，乙腈体积维持在93%。