CN109370565B - 一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用 - Google Patents

一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物功能材料制备技术领域，具体涉及一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用。本发明将碳量子点包覆于二氧化硅纳米球内，作为比率荧光探针的内核，然后将红色碲化镉量子点作为响应信号，以丙烯酰胺和4‑乙烯基苯硼酸作为双功能单体，以N,N‑亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，以多巴胺为模板分子在醇相中通过偶氮二异丁腈的引发，合成对多巴胺具有特异性识别位点的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子，再采用浸渍法制备了具有可视化效果的荧光检测试纸，从而实现对DA的可视化检测，并通过将其应用于人体血清样品中DA的检测结果证明，本方法制备的荧光检测试纸可用于实际复杂样品的DA半定量检测。

Description

一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与 应用
技术领域
本发明涉及生物功能材料制备技术领域，具体涉及一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用。
背景技术
分子印迹技术（Molecular imprinting technology，MIT）是制备对某一特定分子具有专一识别能力聚合物的过程，可用于制备具有专一选择性的分子印迹聚合物（Molecularly imprinted polymers, MIPs）。荧光分析法具有快速、简单、灵敏等优点，在分析领域有巨大的潜力，相比于高效液相色谱等高等仪器分析，无论从溶剂的消耗、样品的前处理，还是测试时间都有着比较大的优势。
越来越多的科研工作者选择将量子点作为荧光信号的发射源，利用荧光传感器的信号传输能力和分子印迹技术的选择性识别能力，合成具有明显选择性识别效果的量子点分子印迹荧光传感器。
多巴胺（DA）含量异常对人体的危害不可小觑，现阶段检测多巴胺的方法大多都是通过色谱法来实现的，但是色谱法使用的仪器比较昂贵，样品检测的前处理比较复杂。因此，在实际检测中继续一种廉价、快速简便检测多巴胺含量的方法。研究应用可视化荧光分析法快速简便检测多巴胺含量具有十分重要的意义。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。本发明的目的在于提出一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子、可视化测量血清中多巴胺含量的荧光检测试纸、多巴胺含量检测系统。进一步地，本发明的可视化测量血清中多巴胺含量的荧光检测试纸上包含有双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子，通过可视化的观察不同浓度多巴胺对荧光检测试纸的颜色变化，使检测结果更加的直观快速、准确性强、灵敏度高、成本低廉。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子(DE-MIPs)。根据本发明的实施例，所述双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子为碳量子点(CQDs)包覆于二氧化硅纳米球内作为比率荧光探针的内核，碲化镉量子点(CdTe QDs)为响应信号，丙烯酰胺（AAm）和4-乙烯基苯硼酸（VPBA）作为双功能单体，N,N-亚甲基双丙烯酰胺（MBAAm）作为交联剂，多巴胺（DA）作为模板分子，在醇相中通过偶氮二异丁腈（AIBN）的引发合成。对多巴胺具有特异性识别位点的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子。
本发明还提供了一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，包括步骤如下：
（1）碲化镉量子点的制备：将Te粉、NaBH4和水依次加入离心管里，排出多余的氢气，超声反应后得到前驱体NaHTe；将CdCl2·2.5H2O和巯基乙酸配成混合溶液，调节混合溶液的pH值，通入惰性气体并搅拌，将上述前驱体NaHTe加入混合溶液中，惰性气氛下回流反应，得到碲化镉量子点CdTe QDs；
（2）CQDs@SiO2-KH570纳米粒子的合成：将柠檬酸、聚乙烯亚胺和水混合均匀搅拌后烧釜，冷却制得碳量子点CQDs；将碳量子点CQDs均匀分散于环己烷、正己醇和曲拉通100中，加入水、氨水搅拌后加入正硅酸乙酯至完全水解，搅拌、离心、洗涤、干燥得CQDs@SiO2；将CQDs@SiO2分散于甲苯，加入硅烷偶联剂KH-570，油浴后离心、洗涤、干燥得CQDs@SiO2-KH570。
（3）DE-MIPs纳米粒子的合成：取步骤（2）中制备的CQDs@SiO2-KH570分散于乙醇中，再加入上述步骤（1）中制备的CdTe QDs形成分散液，在分散液中加入AAm、VPBA和DA，超声分散均匀，调节pH值，再加入 MBAAm和AIBN，氮气下密封，离心、洗脱、得到双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子(DE-MIPs)。
进一步地，所述的步骤（1）中的Te粉和NaBH4的质量之比为1:2；所述的CdCl2·2.5H2O和巯基乙酸的比例关系为 0.2-0.5 g：0.05-0.25 mL。
所述的步骤（2）中的柠檬酸、聚乙烯亚胺和水的质量比为2：1：35；所述的 CQDs 、环己烷、正己醇和曲拉通100的体积比为0.3~0.5：7.5：1.8：1.8；
所述的步骤（2）中的CQDs与正硅酸乙酯的质量比为0.3~0.5：0.05~0.2；
所述的步骤（3）中的CQDs@SiO2-KH570和CdTe QDs的质量之比为5~10:4~8；加入的AAm、VPBA、DA、MBAAm和AIBN的质量比为2~3:4~6:5~9：70~100:1~5；
所述的步骤（1）中所述的pH值为9.5-12；所述的步骤（3）中所述的pH值为6.8-7.5。
进一步地，本发明还提供一种多巴胺的可视化检测试纸，所述检测试纸中含有双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子，从而实现对血清中DA含量的可视化检测。试纸可以采用浸渍法制备，根据本发明的实施例，将滤纸裁剪后，浸泡在0.5-1.0 mg/mL的DE-MIPs乙醇分散液中后自然晾干，即得到表面均匀分布DE-MIPs纳米粒子的荧光检测试纸。本发明制备的荧光检测试纸可用于实际复杂样品的DA半定量检测。
本发明还提供一种多巴胺可视化荧光检测系统，所述检测系统中含有本发明所述的多巴胺可视化荧光检测试纸，，还包括读取荧光检测试纸的软件以及检测设备，用以检测在所述试纸上施加待检测样品前后试纸变化情况。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明将碳量子点(CQDs)用溶胶凝胶法包覆于二氧化硅纳米球内，作为比率荧光探针的内核，然后将红色碲化镉量子点(CdTe QDs)作为响应信号，以丙烯酰胺(AAm)和4-乙烯基苯硼酸(VPBA)作为双功能单体，AAm通过氢键作用连接DA的氨基，VPBA则和DA的邻羟基通过硼亲和作用以及B-N结合在一起，以N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBAAm)为交联剂，以多巴胺(DA)为模板分子，在醇相中通过偶氮二异丁腈(AIBN)的引发，合成对多巴胺具有特异性识别位点的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子(DE-MIPs)，再采用浸渍法制备具有可视化效果的荧光检测试纸，从而实现对DA的可视化检测；通过将其应用于血清样品中DA的检测结果证明，本方法制备的荧光检测试纸可用于复杂样品的DA半定量检测。
本申请选择将量子点作为荧光检测试纸的荧光基团，由于多巴胺特殊的邻羟基结构，将量子点进行硼酸化修饰，使之能够特异性识别邻羟基类的物质，避免其他物质对检测造成干扰，同时为了排除其他的同类物质对检测结果造成干扰，又引入了分子印迹技术，进一步提高了该荧光传感器的选择性，使检测结果更加准确。结合比率型的荧光传感器，制备了双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子(DE-MIPs)，使之均匀分散在滤纸表面制备成荧光检测试纸，通过可视化来观察不同浓度多巴胺对荧光检测试纸的颜色变化，使检测结果更加的直观快速。该法简单又准确，在开辟研究检测多巴胺的方法上具有重要的作用。
本申请中所涉及的荧光检测试纸表面均匀分布了双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子，与可视化荧光检测技术相结合，使该方法具有检测速率快，直观便捷等特点，适用于血清中多巴胺的检测。在于使用两种量子点作为比率荧光量子点发光基团与两种功能单体和交联剂共聚，合成了具有可视化效果的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子。采用浸渍法制备了荧光检测试纸，具有较快的检测速度和较少的检测用量，可以短时间内对人血清中的多巴胺实现半定量检测。
附图说明
图1 是CQDs@SiO2、DE-MIPs和DE-NIPs的红外光谱图；
图2是CQDs@SiO2和DE-MIPs的动态光散射的粒径分布图；其中，图（a）是实施例1制备的CQDs@SiO2的动态光散射的粒径分布图，图（b）是实施例2制备的DE-MIPs的动态光散射的粒径分布图；
图3 是CQDs、CdTe QDs和DE-MIPs的荧光光谱图及其分别在紫外灯下溶液的颜色图；
图4 是DE-MIPs在PBS溶液中存在DA和不存在DA时的荧光强度曲线和溶液的荧光照片。
图5 是DA加入DE-MIPs后荧光强度比率值（I448/I651）随时间的变化图；
图6 是不同浓度的DA分别加入DE-MIPs和DE-NIPs后荧光强度和可视化效果随浓度的变化图谱；其中，图（a）是DE-MIPs的荧光强度和可视化效果随浓度的变化图，图（b）是DE-NIPs的荧光强度和可视化效果随浓度的变化图；
图7是潜在的干扰物对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；其中，图（a）为干扰物离子对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；图（b）为干扰物分子对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；
图8是DE-MIPs荧光检测试纸的制备过程图及空白滤、纸和DE-MIPs荧光检测试纸的SEM图；
图9是多巴胺浓度变化对DE-MIPs荧光强度比值的相互关系图；
图10是荧光检测试纸半定量测试图；
图11是Lanse APP分析软件读取荧光检测试纸半定量测试图中的RGB数值图。
具体实施方式
下面结合具体实施实例对本发明做进一步说明，但本发明不限于这些实施例。
实施例1
采用水热法制备CdTe QDs。首先制备前驱体：准备一个干净的离心管，将51 mg Te粉、100 mg NaBH4和1.5 mL二次蒸馏水依次加入离心管里，将离心管的盖子上扎入一个针头用来排出反应多余的氢气，然后将离心管置于超声机中超声反应1.0 h后得到CdTe QDs的前驱体NaHTe。将0.3651 g CdCl2·2.5H2O和 0.1777 mL 巯基乙酸溶液配成混合溶液，加入100 mL蒸馏水稀释，并用浓度为1 mol/L 的NaOH溶液将混合溶液的pH调至11.2，通入氮气并搅拌，半个小时后将前驱体NaHTe快速加入混合溶液中，在油浴锅中140℃回流反应，整个反应都保持氮气缓慢通入，反应7天之后得到红色荧光的CdTe QDs。
取2.0 g 柠檬酸、1.0 g聚乙烯亚胺和35 mL H2O混合均匀搅拌30 min，200 ℃烧釜5 h，冷却至室温得到CQDs。将400 µL得到的CQDs 分散于7.5 mL 环己烷、1.8 mL正己醇和1.8 mL曲拉通100混合均匀。加入400μL H2O和240μL氨水搅拌30 min；之后再加入100 μLTEOS常温搅拌反应12小时后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2。
称取0.5 g CQDs@SiO2分散于50 mL甲苯，加入1.5 mL KH-570，90℃油浴24 h后后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2-KH570。称取50 mg所制得的 CQDs@SiO2-KH570分散于60 mL乙醇中，再加入40 mg实施例1中所得的 CdTe QDs，在分散液中加入11.4 mgAAm和23.7 mg VPBA和30.3 mg DA超声分散均匀，调节pH至7.0，预组装24 h。之后再加入154.2 mg MBAAm和5 mg AIBN，然后通入氮气30 min确保烧瓶里没有空气之后将烧瓶密封，放入恒温振荡器中反应，50℃预反应6.0 h后，升温至60℃反应24 h。将得到的产物离心，进行索式提取洗脱模板即可得到DE-MIPs。
实施例2
首先制备前驱体：准备一个干净的离心管，将40 mg Te粉、80mg NaBH4和1.2 mL二次蒸馏水依次加入离心管里，将离心管的盖子上扎入一个针头用来排出反应多余的氢气，然后将离心管置于超声机中超声反应1.0 h后得到CdTe QDs的前驱体NaHTe。将0.2 gCdCl2·2.5H2O和 0.05mL 巯基乙酸溶液配成混合溶液，加入50 mL蒸馏水稀释，并用浓度为1 mol/L 的NaOH溶液将混合溶液的pH调至9.5，通入氩气并搅拌，半个小时后将前驱体NaHTe快速加入混合溶液中，在油浴锅中140℃回流反应，整个反应都保持氩气缓慢通入，反应7天之后得到红色荧光的CdTe QDs。
取2.0 g 柠檬酸、1.0 g聚乙烯亚胺和35 mL H2O混合均匀搅拌30 min，200 ℃烧釜5 h，冷却至室温得到CQDs。将300 µL得到的CQDs 分散于7.5 mL 环己烷、1.8 mL正己醇和1.8 mL曲拉通100混合均匀。加入400μL H2O和200μL氨水搅拌30 min；之后再加入50 μLTEOS常温搅拌反应12小时后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2。
称取0.5 g CQDs@SiO2分散于50 mL甲苯，加入3.0 mL KH-570，90℃油浴24 h后后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2-KH570。称取50 mg所制得的 CQDs@SiO2-KH570分散于50 mL乙醇中，再加入40 mg实施例1中所得的 CdTe QDs，在分散液中加入10.0mgAAm和20.0 mg VPBA和25.0 mg DA超声分散均匀，调节pH至6.8，预组装24 h。之后再加入140 mg MBAAm和2 mg AIBN，然后通入氮气30 min确保烧瓶里没有空气之后将烧瓶密封，放入恒温振荡器中反应，50℃预反应6.0 h后，升温至60℃反应24 h。将得到的产物离心，进行索式提取洗脱模板即可得到DE-MIPs。
实施例3
采用水热法制备CdTe QDs。首先制备前驱体：准备一个干净的离心管，将60mg Te粉、120 mg NaBH4和1.8 mL二次蒸馏水依次加入离心管里，将离心管的盖子上扎入一个针头用来排出反应多余的氢气，然后将离心管置于超声机中超声反应1.0 h后得到CdTe QDs的前驱体NaHTe。将0.5g CdCl2·2.5H2O和 0.25mL 巯基乙酸溶液配成混合溶液，加入500mL蒸馏水稀释，并用浓度为1 mol/L 的NaOH溶液将混合溶液的pH调至12，通入氮气并搅拌，半个小时后将前驱体NaHTe快速加入混合溶液中，在油浴锅中140℃回流反应，整个反应都保持氮气缓慢通入，反应7天之后得到红色荧光的CdTe QDs。
取2.0 g 柠檬酸、1.0 g聚乙烯亚胺和35 mL H2O混合均匀搅拌30 min，200 ℃烧釜5 h，冷却至室温得到CQDs。将500 µL得到的CQDs 分散于7.5 mL 环己烷、1.8 mL正己醇和1.8 mL曲拉通100混合均匀。加入400μL H2O和300μL氨水搅拌30 min；之后再加入200 μLTEOS常温搅拌反应12小时后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2。
称取0.5 g CQDs@SiO2分散于50 mL甲苯，加入3 mL KH-570，90℃油浴24 h后后离心收集，洗涤数次后真空干燥得CQDs@SiO2-KH570。称取50 mg所制得的 CQDs@SiO2-KH570分散于100 mL乙醇中，再加入80 mg上述制备的 CdTe QDs，在分散液中加入15mg AAm和30 mgVPBA和45mg DA超声分散均匀，调节pH至7.5，预组装24 h。之后再加入200mg MBAAm和10 mgAIBN，然后通入氮气30 min确保烧瓶里没有空气之后将烧瓶密封，放入恒温振荡器中反应，50℃预反应6.0 h后，升温至60℃反应24 h。将得到的产物离心，进行索式提取洗脱模板即可得到DE-MIPs。
实施例4
制备双发射荧光非印迹聚合物纳米粒子(DE-NIPs)：所述DE-NIPs的合成制备方法与实施例1中制备DE-MIPs的方法相同，区别仅在于在制备过程中不添加模版分子DA。
图1是CQDs@SiO2、DE-MIPs和DE-NIPs的红外光谱图；图1中， 1634 cm-1对应C=O伸缩振动，1537.01 cm-1对应酰胺N-H伸缩振动，1382.73 cm-1对应的是PBA的B-O伸缩振动；说明成功合成了DE-MIPs。图2 是CQDs@SiO2和DE-MIPs的动态光散射的粒径分布图；其中，图（a）是实施例1制备的CQDs@SiO2的动态光散射的粒径分布图，图（b）是实施例2制备的DE-MIPs的动态光散射的粒径分布图；由图2可见， CQDs@SiO2的平均粒径大小约为45.648 nm，DE-MIPs的粒径大小约为57.417 nm；图3是 CQDs、CdTe QDs和DE-MIPs的荧光光谱图及其分别在紫外灯下溶液的颜色图；由图3可见，CQDs在紫外灯下的颜色为蓝色，CdTe QDs在紫外灯下的颜色为红色，DE-MIPs在紫外灯下的颜色为粉红色。
实施例5：
配制9种浓度分别为0 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、150 nmol/L、300 nmol/L、600 nmol/L、1200 nmol/L、2500 nmol/L的多巴胺标准溶液；将DE-MIPs和DE-NIPs分散在pH为7.4的PBS缓冲液中配置浓度均为0.5 mg·mL-1的分散液。分别量取2.5 ml配制的多巴胺溶液，倒入10 ml比色管内，在每支比色管中分别加入2.5 ml的 DE-MIPs和DE-NIPs分散液，静置3分钟。利用荧光分光光度计检测每支比色管中分散液的荧光强度，室温条件下，在365 nm紫外灯下拍摄对应浓度的荧光颜色。
图4 是DE-MIPs在PBS溶液中存在DA和不存在DA时的荧光强度曲线和溶液的荧光照片。从图中可以看出，DE-MIPs的PBS溶液中不存在DA时，溶液的颜色为粉红色，当存在2500 nmol/L的DA时，溶液的颜色变为蓝色，并且651波长处的荧光强度明显降低。为了考察可视化检测的能力，DA和DE-MIPs的混合物被放置在一个具有365 nm波长的紫外灯下，采用数码单反相机在黑暗环境下拍摄的荧光照片，当不存在DA时，溶液颜色为红色，当加入2500nmol/L的DA后，溶液颜色变为蓝色。图5 是DA加入DE-MIPs后荧光强度比率值（I448/I651）随时间的变化图；如图5所示，随着时间的增加，DE-MIPs溶液的颜色从粉红色逐渐变紫，再变成稳定的蓝色；溶液的颜色在3分钟左右从红色逐渐变为蓝色。图6是不同浓度的DA分别加入DE-MIPs和DE-NIPs后荧光强度和可视化效果随浓度的变化图谱；如图6（a）所示，随着DE-MIPs溶液中添加的DA浓度不断增大，溶液颜色为从粉色逐渐变为蓝色，图6（b）所示，随着DE-NIPs溶液中添加的DA浓度不断增大，溶液颜色只从粉色逐渐变到紫色。
实施例6：
抗干扰性试验
选择生理上常见的潜在干扰物离子和干扰物分子作为抗干扰性实验的干扰物质；干扰物离子包括Na+、Mg2+、K+、Al3+、Ca2+、Mn2+、Zn2+、Ba2+、F-、Cu2+、Hg2+、Fe3+和Fe2+；干扰物分子包括尿酸、天冬氨酸、甘氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、人血清白蛋白、葡萄糖和乳糖。分别配制溶液浓度均为2.5 μmol/L的干扰物质溶液。分别量取相同体积的已配制的溶液，移入比色皿内，然后在每支比色皿中加入等体积的DE-MIPs分散液，静置5分钟。利用荧光分光光度计检测比色皿中分散液的荧光强度。图7是潜在的干扰物对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；其中，图（a）为干扰物离子对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；图（b）为干扰物分子对DE-MIPs的PBS溶液的影响图；从图7中可以看出，除了多巴胺对DE-MIPs溶液的颜色有明显变化，其他干扰物对DE-MIPs溶液几乎没有影响。
实施例7：
荧光检测试纸的制备
将滤纸裁剪为4×10 mm大小，浸泡在实施例2所得的0.5 mg/mL的DE-MIPs乙醇分散液中15分钟，然后取出在室温下自然晾干，即得到表面均匀分布DE-MIPs纳米粒子的荧光检测试纸。图8是DE-MIPs荧光检测试纸的制备过程图及空白滤纸和DE-MIPs荧光检测试纸的SEM图；如图8所示，滤纸表面均匀分布了双发射荧光非印迹聚合物纳米粒子。
实施例8：
样品检测
从健康的志愿者身上采取血液样本，志愿者均知情同意，上述所有样本的取得均通过江苏大学职工医院伦理委员会的同意。采用30k MW的超滤离心管对血液样品进行离心分离得到上层人血清待用。将浓度分别为0 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、150nmol/L、300 nmol/L、600 nmol/L、1200 nmol/L的DA溶液分别添加到含有1 g/L的生理血糖的PBS溶液中，每200 μL血清样品中添加6 μL上述配置的不同浓度的DA溶液。再移入比色皿内，然后静置3分钟进行荧光检测，利用荧光分光光度计检测比色皿中的荧光强度，记录相对应的I651/I448荧光强度比值。
图9是多巴胺浓度变化对DE-MIPs荧光强度比值的相互关系图；从图中可以看出DA浓度变化和(I448/I651)存在较好的线性关系。
采用荧光检测试纸对血清样品中的DA进行半定量测试。准确量取10 μL包含不同浓度DA的人血清样品，滴在荧光检测试纸上，静置等待3分钟。然后在黑暗条件下用数码单反相机拍摄UV灯下荧光检测试纸照片；图10是荧光检测试纸半定量测试图；如图10所示，随着人血清中DA浓度的不断增大，试纸的颜色从粉红色逐渐变为蓝色。采用Lanse APP分析软件读取照片中的RGB（红绿蓝三原色）数值，达到可视化对DA进行半定量检测的目的；对图10中试纸照片读取RGB数据，绘制的图11，可以从图11中得到的RGB曲线用于半定量检测血清中DA含量。

Claims (10)

1.一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子，其特征在于，二氧化硅纳米球包覆于碳量子点表面，所述碳量子点作为比率荧光探针的内核，碲化镉量子点为响应信号，丙烯酰胺和4-乙烯基苯硼酸作为双功能单体，N,N-亚甲基双丙烯酰胺作为交联剂，多巴胺作为模板分子，在醇相中通过偶氮二异丁腈的引发合成。
2.一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：
（1）将Te粉、NaBH4和水依次加入离心管里，排出多余的氢气，超声反应后得到前驱体NaHTe；将CdCl2·2.5H2O和巯基乙酸配成混合溶液，调节混合溶液的pH值，通入惰性气体并搅拌，将上述前驱体NaHTe加入混合溶液中，惰性气氛下回流反应，得到碲化镉量子点CdTeQDs；
（2）将柠檬酸、聚乙烯亚胺和水混合均匀搅拌后烧釜，冷却制得CQDs；CQDs均匀分散于环己烷、正己醇和曲拉通100中，加入水、氨水搅拌后加入正硅酸乙酯至完全水解，搅拌、离心、洗涤、干燥得CQDs@SiO2；将CQDs@SiO2分散于甲苯，加入硅烷偶联剂KH-570，油浴后离心、洗涤、干燥得CQDs@SiO2-KH570；
（3）取步骤（2）中制备的CQDs@SiO2-KH570分散于乙醇中，加入上述步骤（1）中制备的CdTe QDs，加入AAm、VPBA和DA，超声分散均匀，调节pH值，再加入MBAAm和AIBN，氮气下密封，振荡、离心、洗脱、得到双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子。
3.根据权利要求2所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中的Te粉和NaBH4的质量之比为1:2；所述的CdCl2·2.5H2O和巯基乙酸的比例关系为 0.2-0.5 g：0.05-0.25 mL。
4.根据权利要求2所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中的柠檬酸、聚乙烯亚胺和水的质量比为2：1：35；所述的CQDs 、环己烷、正己醇和曲拉通100的体积比为0.3~0.5：7.5：1.8：1.8。
5.根据权利要求2所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中的CQDs与正硅酸乙酯的质量比为0.3~0.5：0.05~0.2。
6.根据权利要求2所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的步骤（3）中的CQDs@SiO2-KH570和CdTe QDs的质量之比为5~10:4~8；加入的AAm、VPBA、DA、MBAAm和AIBN的质量比为2~3:4~6:5~9：70~100:1~5。
7.根据权利要求2所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中所述的pH值为9.5-12；所述的步骤（3）中所述的pH值为6.8-7.5。
8.一种多巴胺可视化荧光检测试纸，其特征在于，所述检测试纸中包含权利要求1所述的双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子。
9.根据权利要求8所述的荧光检测试纸的应用，其特征在于，所述试纸用于非诊断或治疗目的的检测血清中的多巴胺含量。
10.一种多巴胺可视化荧光检测系统，其特征在于，包括权利要求8所述的多巴胺可视化荧光检测试纸，还包括读取荧光检测试纸的软件。
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