CN110346338A - 一种荧光探针及其制备方法、生物传感器及其构建方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于荧光法检测2,6‑吡啶二羧酸浓度的荧光探针，包括金纳米簇粒子，其中掺杂有铕元素，所述荧光探针的粒径为1‑2nm。将稀土铕元素发光与金纳米簇稳定发光相结合，得到的铕掺杂金纳米簇荧光探针具有比率型发光的特点，消除了环境内置干扰，发光信号稳定，检测准确度高，灵敏度高，降低了检测限，检测范围广。本发明还提供了一种用于荧光法检测2,6‑吡啶二羧酸浓度的生物传感器，将铕掺杂金纳米簇荧光探针与标准曲线结合，可以简化后续的检测步骤，灵敏度高，准确度高，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器。本发明还分别公开了荧光探针和生物传感器的制备方法，制作过程简单，容易操作，成本低，适合推广使用。

Description

一种荧光探针及其制备方法、生物传感器及其构建方法和 应用
技术领域
本发明属于生物传感技术领域，尤其涉及一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸的荧光探针及其制备方法、生物传感器及其构建方法和应用。
背景技术
2,6-吡啶二羧酸是一种食源性标志致病菌休眠体-芽孢萌发时释放出的核内物质，大量存在于细菌芽孢内。传统的热杀菌技术只能将细菌营养体杀灭，而不能将芽孢杀死。芽孢的这种强抗逆性主要依赖于芽孢核心区或其内细胞质高度脱水状态和高密度的吡啶二羧酸钙等核内物质。芽孢的萌发过程中，占芽孢干重约5-10％的2,6-吡啶二羧酸以及与其结合的二价阳离子(主要为Ca2+)从芽孢核内释放，这些物质的释放使芽孢的折光性逐渐消失，随后肽聚糖芽孢皮层水解，相关蛋白酶的活性恢复，萌发结束。因此，对2,6-吡啶二羧酸浓度的精确检测对于判断芽孢萌发情况具有极其重要的意义。
传统的检测2,6-吡啶二羧酸浓度的方法主要有荧光聚合酶链式反应检测法、比色法、高效液相色谱法等，这些方法虽然在单一体系内检测结果可靠，但处理过程繁琐，检测限高，检测范围小，而且对于复杂体系内标志物的检测结果不准确，选择性较差，灵敏度不理想，很容易受到环境干扰。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服以上背景技术中提到的不足和缺陷，提供一种选择性好、灵敏度高、检测限低、检测范围宽的可用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的荧光探针及其制备方法、生物传感器及其制备构建方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为：
一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的荧光探针，包括金纳米簇粒子，其中掺杂有铕元素，所述荧光探针的粒径为1-2nm。
本发明还提供一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
(1)分别配制氯金酸溶液和硝酸铕溶液，混合均匀，得到含铕元素的反应体系；
(2)在所述步骤(1)得到的反应体系内加入球蛋白，合成金纳米簇溶液，调节所述金纳米簇溶液的pH为碱性，在搅拌条件下剧烈反应，得到铕掺杂金纳米簇的荧光探针。
上述的制备方法，优选的，所述步骤(1)中，氯金酸溶液和硝酸铕溶液的体积比为1︰1，质量浓度比为1︰1-2；所述氯金酸溶液的浓度为5-10mM，所述硝酸铕溶液的浓度为5-10mM。
优选的，所述步骤(2)中，球蛋白为牛血清白蛋白，其浓度为50-100mg/mL，球蛋白加入过程中以1000r/min的速度剧烈搅拌并持续搅拌2-5min；调节所述金纳米簇溶液的pH为10-12，调节pH所用的试剂为氢氧化钠溶液，其浓度为1-2M。
优选的，所述步骤(2)中，反应的温度为35-37℃，反应的时间为10-12h，搅拌转速为1000-1200r/min。
本发明的技术方案，通过一锅法合成荧光探针，将氯金酸和硝酸铕溶液混匀，在剧烈搅拌条件下加入牛血清白蛋白并持续搅拌两分钟，使牛血清白蛋白能够还原氯金酸，用氢氧化钠溶液调节反应体系为碱性，在35-37℃充分反应得到发光稳定的铕掺杂金纳米簇的荧光探针。所合成的铕离子掺杂的金纳米簇荧光探针对于2,6-吡啶二羧酸的荧光检测为比率型荧光探针，其中金纳米簇对2,6-吡啶二羧酸的浓度变化无响应，荧光强度基本保持不变，而铕离子与2,6-吡啶二羧酸结合后铕离子荧光发射峰强度显著增强。以两个不同波长的荧光发射峰强度比为信号，提供了环境干扰的内置校正，消除了激发光强度的干扰，与探针的浓度不相关，从而提高了定量分析的准确性。
稀土元素的高路易斯酸性导致这一类元素对负电荷或中性氧或氮原子表现出强的倾向性，Eu3+可以跟牛血清白蛋白上很多位点相结合，比如与牛血清白蛋白中的羧基氧和胺基或酰胺基中的氮形成强烈配位的化合物，而且镧系元素复合物激发光波长宽度可达200nm，而发射光谱只有十多纳米。较宽的激发光可以加强激发光的信号，较窄的发射光使得能量能够在较短的波长发射，两方面提高荧光信号组成。
所用球蛋白为牛血清白蛋白，其在合成荧光探针的过程中发挥了两个作用，分别为稳定剂和还原剂。利用蛋白质作为模板合成金纳米簇的过程不需要额外加入还原剂和稳定剂，这些合成金纳米簇的蛋白质模板仍保留其固有的生物学活性，因此最后由牛血清白蛋白还原HAuCl4溶液得到的金纳米簇具备良好的生物学功能。此外，牛血清白蛋白表面含多个氨基酸、羧基和氨基，可以与铕离子络合将其结合在蛋白上，其中的氨基酸残基能将Au(III)还原为Au(I)离子及金原子，残基中的-SH与Au形成Au-S键使得合成的Au NCs非常稳定。
基于一个总的技术构思，本发明还提供一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器，包括所述的铕掺杂金纳米簇荧光探针以及标准2,6-吡啶二羧酸浓度的标准曲线，所述标准曲线由所述铕掺杂金纳米簇荧光探针与不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸进行混合反应后通过荧光法测定、绘制得到。
本发明还提供一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器的构建方法，包括如下步骤：
A)将所述铕掺杂金纳米簇荧光探针，与不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸进行混合反应，构建检测2,6吡啶二羧酸的比率型荧光传感器；
B)采用荧光法进行测定，得到不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸荧光光谱图；
C)以各荧光光谱图中617nm与650nm处荧光强度的比值为纵坐标，标准2,6-吡啶二羧酸浓度为横坐标绘制标准曲线。
上述的构建方法，优选的，所述2,6-吡啶二羧酸的浓度分别为1μM，μM，10μM，15μM，20μM，25μM，30μM，35μM，40μM，45μM，50μM；所述铕掺杂金纳米簇荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸的体积比为1︰240。
优选的，所述混合反应的温度为25-30℃，时间为10-30min。
本发明还提供一种生物传感器在检测2,6-吡啶二羧酸浓度中的应用，所述应用包括如下操作步骤：取待测2,6-吡啶二羧酸与所述铕掺杂金纳米簇荧光探针按体积比为1︰240进行混合反应，采用荧光法进行测定，得到相应荧光强度值，在所述的标准曲线中找到该荧光强度值所对应的2,6-吡啶二羧酸溶液的浓度，即得待测2,6-吡啶二羧酸溶液的浓度。
本发明的生物传感器用于荧光法检测的方法：将所制备的铕离子掺杂的金纳米簇荧光探针与不同浓度2,6吡啶二羧酸溶液混合反应，采用荧光法进行测定。通过检测一系列不同浓度的2,6-吡啶二羧酸溶液，可以得到一系列荧光光谱图，其中650nm处荧光强度基本不变，而617nm处荧光强度随2,6-吡啶二羧酸浓度变化而显著变化，也就是说617nm和650nm处荧光强度的比值与2,6-吡啶二羧酸的浓度在一定范围内呈线性关系。将各荧光光谱图中617nm和650nm处荧光强度的比值作为纵坐标，2,6-吡啶二羧酸的浓度为横坐标绘制标准曲线，再对未知浓度的2,6-吡啶二羧酸进行测定，可以依据标准曲线，得到待测2,6-吡啶二羧酸溶液的浓度。所述荧光法参数设置如下：激发波长设置为530nm，狭缝宽度设置为10nm，电压值设置为700V，扫描速度设置为1200nm/min。
本发明通过荧光法检测2,6-吡啶二羧酸，是基于构建了比率型铕掺杂金纳米簇荧光探针实现的，该铕掺杂金纳米簇荧光探针具有检测限低，灵敏度高，选择性好，适于复杂生物环境等优点。
在传统的检测2,6-吡啶二羧酸的荧光法中，所利用的荧光探针为单光子发射，不具备比率型的特点，即在复杂生物环境体系，荧光探针的发光强度很容易受到背景环境的干扰。而在本发明中将稀土元素铕与发光稳定的金纳米簇结合，以两个不同波长的荧光峰的强度比为信号，提供了环境干扰的内置校正，消除了激发光强度的干扰。通过加入不同浓度2,6-吡啶二羧酸经荧光光谱法检测处理后得到标准曲线，该标准曲线为一直线。2,6-吡啶二羧酸浓度越大，荧光峰强度比越大；再加入未知浓度2,6-吡啶二羧酸，将该荧光峰强度比与标准曲线进行比较得到未知浓度2,6-吡啶二羧酸的浓度。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明的荧光探针，将稀土铕元素发光与金纳米簇稳定发光相结合，提出了一种新的铕掺杂金纳米簇荧光探针，该荧光探针具有比率型发光的特点，消除了环境内置干扰，发光信号稳定，增加了检测结果的准确度，铕元素与待测物的特异性结合大大提高了灵敏度，降低了检测限，检测范围广，并且可推广至其他传感器，用于对不同生物小分子的浓度检测。
2、本发明的生物传感器，将铕掺杂金纳米簇荧光探针与标准曲线结合，可以简化后续的检测步骤，灵敏度高，准确度高，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器。
3、本发明的制备方法，制作过程简单，容易操作，成本低，适合推广使用。
4、本发明的应用，采用生物传感器检测2,6-吡啶二羧酸的浓度，简化了检测步骤，对2,6-吡啶二羧酸的选择性高，不会受到环境干扰，提高了灵敏度，增加了检测结果的准确度，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明的检测方法的原理示意图；
图2是传感器对空白样品与小浓度2,6-吡啶二羧酸(1μM，5μM，10μM)响应对比图；
图3是实施例1中不同浓度2,6-吡啶二羧酸对应的荧光光谱图；
图4是实施例1中不同浓度的2,6-吡啶二羧酸的标准曲线图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下文将结合说明书附图和较佳的实施例对本发明做更全面、细致地描述，但本发明的保护范围并不限于以下具体实施例。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除非另有特别说明，本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
实施例1：
一种本发明的用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器，包括铕掺杂金纳米簇的荧光探针以及标准2,6-吡啶二羧酸浓度的标准曲线；铕掺杂金纳米簇的荧光探针由铕离子掺杂金纳米簇后得到，荧光探针的粒径为1-2nm。
该生物传感器构建方法，包括如下步骤：
(1)通过一锅法合成荧光探针：分别配制8mM的氯金酸溶液和硝酸铕溶液，将二者以体积比为1︰1的比例混合均匀，并剧烈搅拌，得到含铕元素的反应体系；
(2)加入还原剂：在反应体系内加入牛血清白蛋白做还原剂和稳定剂，其浓度为70mg/mL，加入过程中以1000r/min的速度剧烈搅拌并在完全加入后持续搅拌2min，合成金纳米簇溶液；
(3)控制反应：用1M的氢氧化钠溶液调节掺杂铕元素后金纳米簇溶液的酸碱性使pH为10-12，得到能够使氯金酸被还原的碱性反应环境，反应体系在1100r/min的搅拌条件下剧烈反应12h，反应温度控制在37℃，得到均匀的铕掺杂金纳米簇荧光探针；
(4)不同浓度2,6-吡啶二羧酸特异性结合：将铕掺杂的金纳米簇荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸混合进行特异性反应；标准2,6-吡啶二羧酸的浓度分别为1μM，5μM，10μM，15μM，20μM，25μM，30μM，35μM，40μM，45μM，50μM(同时设置浓度为0μM的空白样品对照)，特异性反应的温度为30℃，反应时间为10min，荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸的体积比为1︰240，得到结合了不同浓度2,6-吡啶二羧酸的荧光探针，构建得到检测2,6吡啶二羧酸的比率型荧光传感器；传感器对空白样品与小浓度2,6-吡啶二羧酸(1μM，5μM，10μM)响应对比图如图2所示；
(5)荧光光谱法检测：采用荧光法，在电压值为700V，狭缝宽度为10nm激发光波长为530nm的条件下测定580-720nm的光谱，得到各探针的荧光光谱图(如图3)，然后将各谱图中617nm和650nm的荧光峰强度比值与对应的标准2,6-吡啶二羧酸浓度绘制标准曲线，得到标准2,6-吡啶二羧酸的标准曲线(如图4)；
(6)实际样品的测量(其原理示意图如图1所示)：取能够产生芽孢的细菌之一——枯草芽孢杆菌在营养培基上划线培养到第三代，37℃恒温培养一周后，收集芽孢到离心管中，在4℃离心10min，转速为5000r/min；用冷的无菌水洗涤芽孢三次，将其重新分散在无菌水中，置于4℃保存；使用浊度仪测定芽孢悬浮液浊度为6.23×109CFU.mL-1后逐级稀释到104数量级；将1mL 10-20mM十二胺加入到9mL不同浓度的芽孢悬浮液中，在90℃加热30min，立刻冷却，离心并保留上清液；然后在480μL不同浓度的芽孢分泌物中分别加入20μL铕离子掺杂金纳米簇的荧光探针，采用荧光法对其进行荧光检测，将得到的检测结果与标准曲线比对得到实际测量浓度值。
经过试验验证，该测量浓度值与比色法结果相比有很好的一致性，相关系数为0.994。该检测方法不仅简化了检测步骤，而且采用的荧光探针对2,6-吡啶二羧酸的选择性高，不会受到环境干扰，提高了灵敏度，增加了检测结果的准确度，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器，降低了成本。
实施例2：
一种本发明的用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器，包括铕掺杂金纳米簇的荧光探针以及标准2,6-吡啶二羧酸浓度的标准曲线；铕掺杂金纳米簇的荧光探针由铕离子掺杂金纳米簇后得到，荧光探针的粒径为1-2nm。
该生物传感器构建方法，包括如下步骤：
(1)通过一锅法合成荧光探针：分别配制5mM的氯金酸溶液和10mM的硝酸铕溶液，将二者以体积比为1︰1的比例混合均匀，并剧烈搅拌，得到含铕元素的反应体系；
(2)加入还原剂：在反应体系内加入牛血清白蛋白做还原剂和稳定剂，其浓度为50mg/mL，加入过程中以1000r/min的速度剧烈搅拌并在完全加入后持续搅拌5min，合成金纳米簇溶液；
(3)控制反应：用1M的氢氧化钠溶液调节掺杂铕元素后金纳米簇溶液的酸碱性使pH为10-12，得到能够使氯金酸被还原的碱性反应环境，反应体系在1000r/min的搅拌条件下剧烈反应10h，反应温度控制在35℃，得到均匀的铕掺杂金纳米簇荧光探针；
(4)不同浓度2,6-吡啶二羧酸特异性结合：将铕掺杂的金纳米簇荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸混合进行特异性反应；标准2,6-吡啶二羧酸的浓度分别为1μM，5μM，10μM，15μM，20μM，25μM，30μM，35μM，40μM，45μM，50μM，特异性反应的温度为25℃，反应时间为30min，荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸的体积比为1︰120，得到结合了不同浓度2,6-吡啶二羧酸的荧光探针，构建得到检测2,6吡啶二羧酸的比率型荧光传感器；
(5)荧光光谱法检测：采用荧光法，在电压值为700V，狭缝宽度为10nm激发光波长为530nm的条件下测定580-720nm的光谱，得到各探针的荧光光谱图，然后将各谱图中617nm和650nm的荧光峰强度比值与对应的标准2,6-吡啶二羧酸浓度绘制标准曲线，得到标准2,6-吡啶二羧酸的标准曲线；
(6)实际样品的测量(其原理示意图如图1所示)：取能够产生芽孢的细菌之一——枯草芽孢杆菌在营养培基上划线培养到第三代，37℃恒温培养一周后，收集芽孢到离心管中，在4℃离心10min，转速为5000r/min；用冷的无菌水洗涤芽孢三次，将其重新分散在无菌水中，置于4℃保存；使用浊度仪测定芽孢悬浮液浊度为6.23×109CFU.mL-1后逐级稀释到104数量级；将1mL 10-20mM十二胺加入到9mL不同浓度的芽孢悬浮液中，在90℃加热30min，立刻冷却，离心并保留上清液；然后在480μL不同浓度的芽孢分泌物中分别加入20μL铕离子掺杂金纳米簇的荧光探针，采用荧光法对其进行荧光检测，将得到的检测结果与标准曲线比对得到实际测量浓度值。
经过试验验证，该测量浓度值与比色法结果相比有很好的一致性，相关系数为0.995。该检测方法不仅简化了检测步骤，而且采用的荧光探针对2,6-吡啶二羧酸的选择性高，不会受到环境干扰，提高了灵敏度，增加了检测结果的准确度，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器，降低了成本。
实施例3：
一种本发明的用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器，包括铕掺杂金纳米簇的荧光探针以及标准2,6-吡啶二羧酸浓度的标准曲线；铕掺杂金纳米簇的荧光探针由铕离子掺杂金纳米簇后得到，荧光探针的粒径为1-2nm。
该生物传感器构建方法，包括如下步骤：
(1)通过一锅法合成荧光探针：分别配制10mM的氯金酸溶液和硝酸铕溶液，将二者以体积比为1︰1的比例混合均匀，并剧烈搅拌，得到含铕元素的反应体系；
(2)加入还原剂：在反应体系内加入牛血清白蛋白做还原剂和稳定剂，其浓度为100mg/mL，加入过程中以1000r/min的速度剧烈搅拌并在完全加入后持续搅拌3min，合成金纳米簇溶液；
(3)控制反应：用1M的氢氧化钠溶液调节掺杂铕元素后金纳米簇溶液的酸碱性使pH为10-12，得到能够使氯金酸被还原的碱性反应环境，反应体系在1200r/min的搅拌条件下剧烈反应12h，反应温度控制在37℃，得到均匀的铕掺杂金纳米簇荧光探针；
(4)不同浓度2,6-吡啶二羧酸特异性结合：将铕掺杂的金纳米簇荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸混合进行特异性反应；标准2,6-吡啶二羧酸的浓度分别为1μM，5μM，10μM，15μM，20μM，25μM，30μM，35μM，40μM，45μM，50μM，特异性反应的温度为28℃，反应时间为20min，荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸的体积比为1︰180，得到结合了不同浓度2,6-吡啶二羧酸的荧光探针，构建得到检测2,6吡啶二羧酸的比率型荧光传感器；
(5)荧光光谱法检测：采用荧光法，在电压值为700V，狭缝宽度为10nm激发光波长为530nm的条件下测定580-720nm的光谱，得到各探针的荧光光谱图，然后将各谱图中617nm和650nm的荧光峰强度比值与对应的标准2,6-吡啶二羧酸浓度绘制标准曲线，得到标准2,6-吡啶二羧酸的标准曲线；
(6)实际样品的测量(其原理示意图如图1所示)：取能够产生芽孢的细菌之一——枯草芽孢杆菌在营养培基上划线培养到第三代，37℃恒温培养一周后，收集芽孢到离心管中，在4℃离心10min，转速为5000r/min；用冷的无菌水洗涤芽孢三次，将其重新分散在无菌水中，置于4℃保存；使用浊度仪测定芽孢悬浮液浊度为6.23×109CFU.mL-1后逐级稀释到104数量级；将1mL 10-20mM十二胺加入到9mL不同浓度的芽孢悬浮液中，在90℃加热30min，立刻冷却，离心并保留上清液；然后在480μL不同浓度的芽孢分泌物中分别加入20μL铕离子掺杂金纳米簇的荧光探针，采用荧光法对其进行荧光检测，将得到的检测结果与标准曲线比对得到实际测量浓度值。
经过试验验证，该测量浓度值与比色法结果相比有很好的一致性，相关系数为0.994。该检测方法不仅简化了检测步骤，而且采用的荧光探针对2,6-吡啶二羧酸的选择性高，不会受到环境干扰，提高了灵敏度，增加了检测结果的准确度，检测范围宽，无需借助其他精密贵重仪器，降低了成本。

Claims (10)

1.一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的荧光探针，其特征在于，包括金纳米簇粒子，其中掺杂有铕元素，所述荧光探针的粒径为1-2nm。
2.一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的荧光探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)分别配制氯金酸溶液和硝酸铕溶液，混合均匀，得到含铕元素的反应体系；
(2)在所述步骤(1)得到的反应体系内加入球蛋白，合成金纳米簇溶液，调节所述金纳米簇溶液的pH为碱性，在搅拌条件下剧烈反应，得到铕掺杂金纳米簇的荧光探针。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，氯金酸溶液和硝酸铕溶液的体积比为1︰1，质量浓度比为1︰1-2；所述氯金酸溶液的浓度为5-10mM，所述硝酸铕溶液的浓度为5-10mM。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，球蛋白为牛血清白蛋白，其浓度为50-100mg/mL，球蛋白加入过程中以1000r/min的速度剧烈搅拌并持续搅拌2-5min；调节所述金纳米簇溶液的pH为10-12，调节pH所用的试剂为氢氧化钠溶液，其浓度为1-2M。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，反应的温度为35-37℃，反应的时间为10-12h，搅拌转速为1000-1200r/min。
6.一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器，其特征在于，包括权利要求1所述或由权利要求2-5中任一项所述制备方法制备得到的荧光探针以及标准2,6-吡啶二羧酸浓度的标准曲线，所述标准曲线由所述荧光探针与不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸进行混合反应后通过荧光法测定、绘制得到。
7.一种用于荧光法检测2,6-吡啶二羧酸浓度的生物传感器的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
A)将权利要求1所述或由权利要求2-5中任一项所述制备方法制备得到的荧光探针，与不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸混合进行特异性反应，构建检测2,6吡啶二羧酸的比率型荧光传感器；
B)采用荧光法进行测定，得到不同浓度的标准2,6-吡啶二羧酸荧光光谱图；
C)以各荧光光谱图中617nm与650nm处荧光强度的比值为纵坐标，标准2,6-吡啶二羧酸浓度为横坐标，绘制标准曲线。
8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，所述2,6-吡啶二羧酸的浓度分别为1μM，μM，10μM，15μM，20μM，25μM，30μM，35μM，40μM，45μM，50μM；所述荧光探针与标准2,6-吡啶二羧酸的体积比为1︰120-240。
9.根据权利要求7或8所述的构建方法，其特征在于，所述特异性反应的温度为25-30℃，时间为10-30min。
10.一种如权利要求6所述或由权利要求7-9中任一项所述构建方法得到的生物传感器的应用，其特征在于，采用所述的生物传感器检测2,6-吡啶二羧酸的浓度，检测的过程包括如下步骤：取待测2,6-吡啶二羧酸与所述荧光探针按体积比为1︰120-240进行混合反应，然后采用荧光法进行测定，得到相应荧光强度值，在所述的标准曲线中找到该荧光强度值所对应的2,6-吡啶二羧酸的浓度，即得待测2,6-吡啶二羧酸的浓度。
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