CN109355203A - 一种裂褶菌液体菌种的培养方法 - Google Patents

一种裂褶菌液体菌种的培养方法 Download PDF

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Abstract

一种裂褶菌液体菌种的培养方法,本发明方法是先制作裂褶菌种子液,再制作裂褶菌液体培养基,然后将将培养好的裂褶菌种子液按照裂褶菌液体培养基体积的2%接种至裂褶菌液体培养基;接种结束后,将摇瓶置于摇床上培养,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3‑4d,得到菌丝密度好且均匀的裂褶菌液体菌种。本发明的液体培养基可将裂褶菌液体菌种培养时间缩短至3‑4d,且菌丝密度好、均匀、性状稳定。本发明方法操作简单,对设备投入要求不高,可大大降低生产成本,易于推广实施。

Description

一种裂褶菌液体菌种的培养方法
技术领域
本发明属于食用菌液体菌种培养方法技术领域,具体涉及裂褶菌液体菌种的培养方法。
背景技术
裂褶菌(拉丁文名称Schizophyllum commune Fr.),隶属于真菌门(Eumycophyta),担子菌纲(Basidiomycetes),伞菌目(Agaricales),裂褶菌科(Schizophyllaceae),裂褶菌属(Schizophyllum)。
裂褶菌是一类食用兼药用菌,口感好,有滋补强壮、镇静的药效,对精神不振、头昏耳鸣等症状也有明显的功效。我国在裂褶菌栽培上很少采用液体菌种,几乎不见报导,主要原因一是在裂褶菌深层发酵的研究上比较欠缺、没有技术支持的条件下,使用液体菌种存在较大的风险;二是液体菌种生产要求的设备昂贵,对于小规模企业不适用。
此外,其含有的裂褶菌多糖不仅是发挥药用的主要功能成分,还是作为护肤产品的优选保湿添加物,保湿能力比常见的保湿剂成分燕麦β-葡聚糖好,可以开发作为日用化妆品中保湿剂。此外,裂褶菌多糖还能作为新型生物絮凝剂材料,现已广泛应用于食品、医药工业及生物化学等方面,其市场前景广阔。目前获取裂褶菌多糖的重要途径之一是从深层发酵得到的发酵液中提取,因此优化液体菌种培养方法对裂褶菌多糖获取至关重要。
发明内容
本发明的目的是解决现有的技术难题,提供一种裂褶菌液体菌种的制作方法,以实现用液体菌种进行裂褶菌的工厂化栽培,为获取较优的裂褶菌多糖发酵液以提取裂褶菌多糖创造有利条件。
本发明采取的技术方案如下:
一种裂褶菌液体菌种的制备方法,包括以下步骤:
(1)制作裂褶菌种子液,方法如下:
1)母种活化:将保存在冰箱中的裂褶菌母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用;
2)液体配制:按照马铃薯160~240g、葡萄糖18~22g、蛋白胨1~3g、水1000ml,装于摇瓶中,搅拌均匀;
3)灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准对配制的液体进行灭菌,灭菌完成后,将摇瓶置于超净工作台上冷却;挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的裂褶菌母种接入摇瓶;
4)培养:将接种后的摇瓶置于磁力搅拌器上培养,培养温度24℃±1℃,避光培养3-4d,得裂褶菌种子液;
(2)制作裂褶菌液体培养基,方法如下:
1)配制以下四种培养基液体供选用:
麸皮液体培养基:麸皮10~30g,葡萄糖10~20g,蛋白胨1~3g,KH2PO41~3g,MgSO41~2g,麸皮加1000ml水煮沸至10min,液体颜色呈小麦色后过滤,将葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4,MgSO4加入滤液,搅拌均匀后装入摇瓶中;
玉米粉液体培养基:玉米粉20g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
黄豆粉液体培养基:黄豆粉20g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
马铃薯液体培养基:去皮马铃薯100g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
2)灭菌:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准对配制的液体培养基进行灭菌,灭菌完成后,置于超净工作台上冷却,即得裂褶菌液体培养基;
(3)裂褶菌种子液接种:将培养好的裂褶菌种子液按照裂褶菌液体培养基体积的2%接种至裂褶菌液体培养基;
(4)培养:接种结束后,将摇瓶置于摇床上培养,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3-4d,得到菌丝密度好且均匀的裂褶菌液体菌种。
本发明创新性的利用麸皮、玉米粉、黄豆粉以及常用的马铃薯作为培养基主要物质来源,研究得到适合裂褶菌生长的液体培养基,以增加液体培养基物质选择面,打破传统常用培养基添加物马铃薯的单一性。结果表明,在4组液体培养基中,麸皮培养基最利于裂褶菌菌丝的生长,在本发明的最优液体培养基中生长速度快,菌球萌发时间仅为18~24h,活力好,培养3d即可用于生产。本发明的液体培养基可将裂褶菌液体菌种培养时间缩短至3-4d,且菌丝密度好、均匀、性状稳定。
本发明为采用裂褶菌液体菌种进行裂褶菌的工厂化生产提供了技术保障,大大降低了裂褶菌工厂化生产的风险。本发明方法操作简单,对设备投入要求不高,可大大降低生产成本,易于推广实施。
附图说明
图1是本发明方法培养的种子液图片。
图2是摇瓶中液体菌种生长情况图片;本发明中种子液均采用500ml盐水瓶,液体体积均为300ml。
图3是本发明方法培养的裂褶菌液体菌种的菌丝球萌发情况;图中可见,菌丝球活力好,萌发时间短仅1d,培养2d后,即可见到茸毛状菌丝。
图4是将本发明方法培养的裂褶菌液体菌种在发酵罐内的生长情况。按照上述摇瓶中培养方法,在发酵罐内培养菌丝3-4d,即可得到裂褶菌液体菌种,本发明的液体菌种菌丝球均匀,密度大,活力好,培养周期短。
具体实施方式
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法。所使用的材料、试剂等如无特殊说明,均可从商业途径买到。
一种裂褶菌种子液培养基,利用本发明培养基培养的裂褶菌菌丝密度好,周期短,不宜老化,活性好,且参照本发明中的操作方法,其污染率低。
一种裂褶菌液体培养基,命名为麸皮培养基,利用本培养基培养的裂褶菌液体菌种菌丝球密度好、均匀,且培养周期短。现已经过发酵罐大量试验,结果与摇瓶一致。
通过种子液制作,以2%的接种量接入液体培养基,即本发明培养基,根据本发明中培养方法培养3-4d即可获得液体菌种,用于裂褶菌多糖的提取或生产上使用的菌种。
实施例1
采用本发明的种子液及液体培养基培养裂褶菌,以达到缩短周期,保持菌丝活力的目的,具体步骤如下:
(1)母种活化:将保存在冰箱中的母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用。
(2)种子液培养基制作:按照马铃薯200g,葡萄糖20g,蛋白胨2g,水1L精确称量后分装于摇瓶中,要求液体体积不超过摇瓶体积的1/2,另将磁力搅拌子放入摇瓶。
(3)种子液灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准进行,灭菌完成后,置于超净台上冷却。挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的母种接入摇瓶,此阶段,最容易带入杂菌,要求无菌条件及规范的无菌操作。
(4)种子液培养条件:放置磁力搅拌器上培养,要求温度24℃±1℃,避光培养3-4d。
本发明提供裂褶菌液体培养基制作方法,包括以下内容:
(1)按照配方:麸皮20g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1L,精确称量,麸皮加1L水煮沸至10min,见液体颜色呈小麦色后经4层纱布过滤,弃废渣,将药品溶于其中,定容,灭菌同种子液操作。
(2)冷却后置于超净工作台,将培养好的种子液按照液体培养基体积的2%进行接种。
(3)接种结束后,将摇瓶放在摇床上,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3d,在摇瓶及发酵罐中培养的菌丝量大,菌丝活力好,萌发快,如图2、图3。
以菌丝生物量、菌球萌发情况、颜色等指标对液体培养基进行择优,结果见表1。结果表明:裂褶菌在麸皮培养基中生长势旺盛,生物量最大,是适合裂褶菌菌丝生长的液体培养基。
表1,本发明培养基与其他培养基培养的裂褶菌液体菌种比较
注:序号①表示麸皮培养基,②表示玉米粉培养基,③表示黄豆粉培养基,④表示马铃薯培养基。
实施例2
采用本发明的种子液及液体培养基培养裂褶菌,以达到缩短周期,保持菌丝活力的目的,具体步骤如下:
(1)母种活化:将保存在冰箱中的母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用。
(2)种子液培养基制作:按照马铃薯160g,葡萄糖30g,蛋白胨2g,水1L精确称量后分装于摇瓶中,要求液体体积不超过摇瓶体积的1/2,另将磁力搅拌子放入摇瓶。
(3)种子液灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准进行,灭菌完成后,置于超净台上冷却。挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的母种接入摇瓶,此阶段,最容易带入杂菌,要求无菌条件及规范的无菌操作。
(4)种子液培养条件:放置磁力搅拌器上培养,要求温度24℃±1℃,避光培养3-4d。
本发明提供裂褶菌液体培养基制作方法,包括以下内容:
(1)按照配方:麸皮30g,葡萄糖10g,蛋白胨1g,KH2PO42g,MgSO42g,水1L,精确称量,麸皮加1L水煮沸至10min,见液体颜色呈小麦色后经4层纱布过滤,弃废渣,将药品溶于其中,定容,灭菌同种子液操作。
(2)冷却后置于超净工作台,将培养好的种子液按照液体培养基体积的2%进行接种。
(3)接种结束后,将摇瓶放在摇床上,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3d。
实施例3
采用本发明的种子液及液体培养基培养裂褶菌,以达到缩短周期,保持菌丝活力的目的,具体步骤如下:
(1)母种活化:将保存在冰箱中的母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用。
(2)种子液培养基制作:按照马铃薯220g,葡萄糖10g,蛋白胨2g,水1L精确称量后分装于摇瓶中,要求液体体积不超过摇瓶体积的1/2,另将磁力搅拌子放入摇瓶。
(3)种子液灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准进行,灭菌完成后,置于超净台上冷却。挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的母种接入摇瓶,此阶段,最容易带入杂菌,要求无菌条件及规范的无菌操作。
(4)种子液培养条件:放置磁力搅拌器上培养,要求温度24℃±1℃,避光培养3-4d。
本发明提供裂褶菌液体培养基制作方法,包括以下内容:
(1)按照配方:麸皮10g,葡萄糖30g,蛋白胨3g,KH2PO41g,MgSO41g,水1L,精确称量,麸皮加1L水煮沸至10min,见液体颜色呈小麦色后经4层纱布过滤,弃废渣,将药品溶于其中,定容,灭菌同种子液操作。
(2)冷却后置于超净工作台,将培养好的种子液按照液体培养基体积的2%进行接种。
(3)接种结束后,将摇瓶放在摇床上,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3d。
实施例4
采用本发明的种子液及液体培养基培养裂褶菌,以达到缩短周期,保持菌丝活力的目的,具体步骤如下:
(1)母种活化:将保存在冰箱中的母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用。
(2)种子液培养基制作:按照马铃薯200g,葡萄糖10g,蛋白胨3g,水1L精确称量后分装于摇瓶中,要求液体体积不超过摇瓶体积的1/2,另将磁力搅拌子放入摇瓶。
(3)种子液灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准进行,灭菌完成后,置于超净台上冷却。挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的母种接入摇瓶,此阶段,最容易带入杂菌,要求无菌条件及规范的无菌操作。
(4)种子液培养条件:放置磁力搅拌器上培养,要求温度24℃±1℃,避光培养3-4d。
本发明提供裂褶菌液体培养基制作方法,包括以下内容:
(1)按照配方:麸皮20g,葡萄糖12g,蛋白胨3g,KH2PO43g,MgSO41.5g,水1L,精确称量,麸皮加1L水煮沸至10min,见液体颜色呈小麦色后经4层纱布过滤,弃废渣,将药品溶于其中,定容,灭菌同种子液操作。
(2)冷却后置于超净工作台,将培养好的种子液按照液体培养基体积的2%进行接种。
(3)接种结束后,将摇瓶放在摇床上,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3d。
实施例5
采用本发明的种子液及液体培养基培养裂褶菌,以达到缩短周期,保持菌丝活力的目的,具体步骤如下:
(1)母种活化:将保存在冰箱中的母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用。
(2)种子液培养基制作:按照马铃薯220g,葡萄糖20g,蛋白胨1g,水1L精确称量后分装于摇瓶中,要求液体体积不超过摇瓶体积的1/2,另将磁力搅拌子放入摇瓶。
(3)种子液灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准进行,灭菌完成后,置于超净台上冷却。挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的母种接入摇瓶,此阶段,最容易带入杂菌,要求无菌条件及规范的无菌操作。
(4)种子液培养条件:放置磁力搅拌器上培养,要求温度24℃±1℃,避光培养3-4d。
本发明提供裂褶菌液体培养基制作方法,包括以下内容:
(1)按照配方:麸皮28g,葡萄糖12g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1L,精确称量,麸皮加1L水煮沸至10min,见液体颜色呈小麦色后经4层纱布过滤,弃废渣,将药品溶于其中,定容,灭菌同种子液操作。
(2)冷却后置于超净工作台,将培养好的种子液按照液体培养基体积的2%进行接种。
(3)接种结束后,将摇瓶放在摇床上,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3d。
将本发明的液体菌种应用于裂褶菌工厂化栽培,可保证菌龄一致性,相比固体菌种而言,培养周期缩短3/4,且发菌期缩短。本发明有着良好的商业价值,可推广使用。

Claims (1)

1.一种裂褶菌液体菌种的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)制作裂褶菌种子液,方法如下:
1)母种活化:将保存在冰箱中的裂褶菌母种转接到母种培养基上,25℃±1℃避光培养6-7d备用;
2)液体配制:按照马铃薯160~240g、葡萄糖18~22g、蛋白胨1~3g、水1000ml,装于摇瓶中,搅拌均匀;
3)灭菌及接种:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准对配制的液体进行灭菌,灭菌完成后,将摇瓶置于超净工作台上冷却;挑取菌丝强壮、洁白、无其他杂菌污染的裂褶菌母种接入摇瓶;
4)培养:将接种后的摇瓶置于磁力搅拌器上培养,培养温度24℃±1℃,避光培养3-4d,得裂褶菌种子液;
(2)制作裂褶菌液体培养基,方法如下:
1)配制以下四种培养基液体供选用:
麸皮液体培养基:麸皮10~30g,葡萄糖10~20g,蛋白胨1~3g,KH2PO41~3g,MgSO41~2g,麸皮加1000ml水煮沸至10min,液体颜色呈小麦色后过滤,将葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4,MgSO4加入滤液,搅拌均匀后装入摇瓶中;
玉米粉液体培养基:玉米粉20g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
黄豆粉液体培养基:黄豆粉20g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
马铃薯液体培养基:去皮马铃薯100g,葡萄糖15g,蛋白胨2g,KH2PO42g,MgSO41.5g,水1000ml;装于摇瓶中,搅拌均匀;
2)灭菌:按照121℃,恒温恒压维持25min的灭菌标准对配制的培养基液体进行灭菌,灭菌完成后,置于超净工作台上冷却,即得裂褶菌液体培养基;
(3)裂褶菌种子液接种:将培养好的裂褶菌种子液按照裂褶菌液体培养基体积的2%接种至裂褶菌液体培养基;
(4)培养:接种结束后,将摇瓶置于摇床上培养,培养条件为转速130r/min,温度24℃±1℃,避光培养3-4d,得到菌丝密度好且均匀的裂褶菌液体菌种。
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