CN109266702A - 一种青钱柳提取多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种青钱柳提取多糖的方法,包括下列步骤:a.将青钱柳用清水洗涤样品经粉碎机粉碎,过40目筛;b.酶解;c.将酶解后的物料加入乙醇溶液混合后,40‑60℃超声处理1‑3h,反应结束后过滤,残渣烘干;d.二次酶解;e.热水浸提;f.浓缩纯沉;g.洗涤;h.纯化。本发明的整个工艺过程中无污染物排放,适合于大规模生产,有益于青钱柳资源的开发利用。具有该步骤简单,成本低,可操作性强,产量高的优点,易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种青钱柳提取多糖的方法。属于海洋微藻养殖领域。
背景技术
青钱柳,(拉丁文名:Cyclocaryapaliurus.)别名:摇钱树、麻柳,青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物,我国南方多省均有发现,多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种,仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫,医学界的第三棵树。人们知道,医学界的第一棵树——柳树,产生了阿司匹林,消炎杀菌、抗血栓,揭开了人类健康史的第一次变革。
现代研究证实青钱柳叶具有降血糖、降血压、降血脂作用、增强机体免疫功能等作用。其主要活性成分是黄酮类和多糖类化合物。青钱柳中含有丰富的黄酮类物质,具有降血压、降血糖等作用。现代药理研究表明青钱柳多糖类同样具有降血糖作用。目前,中国专利“从青钱柳提取多糖及有效成分的方法”(申请号为200810073472.4)公开了一种从青钱柳中提取青钱柳多糖的方法。另外,中国专利“果味青钱柳多糖咀嚼片的制备方法”(申请号为201010158487.8)公开了一种青钱柳黄酮提取物制备果味咀嚼片的方法。这些提取方法主要为水或者是有机溶剂(如乙醇)直接浸提或者回流提取,提取物纯度过低,技术含量不高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:提供一种青钱柳提取多糖的方法。
为解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是:
本发明提供的一种青钱柳提取多糖的方法,包括下列步骤:
a.将青钱柳用清水洗涤,40-50℃烘干干燥,样品经粉碎机粉碎,过40目筛;
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水,用均质机打浆,青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2;然后加入复合酶液,复合酶液的重量为物料总重量的0.2-0.5%;温度维持在30-40℃,维持时间0.5h,然后升温到80-90℃灭酶活性;
c.将酶解后的物料加入5-10倍体积的80%乙醇溶液混合后,40-60℃超声处理1-3h,反应结束后过滤,残渣烘干;
d.二次酶解:残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液,调节pH7.5-8.0,55℃下反应1-3h,纤维素酶的重量为物料总重量的0.2-0.5%;
e.热水浸提:酶解后的物料采用30-50倍体积的水热回流提取,90℃反应2小时,离心收集滤液和残渣,并用热水洗涤3次;
f.浓缩纯沉:将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积,调节pH至7,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,边加边搅拌,放置4h后,5000rpm离心10min,收集沉淀;
g.洗涤:将沉淀用95%的乙醇洗涤后,得到青钱柳粗多糖;
h.纯化:将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解;用sevag法除蛋白;调pH至8,在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min;加入3倍体积95%乙醇,离心,收集沉淀3次,冷冻干燥得到青钱柳多糖。
优选的,复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶,两者的重量比例是0.5:1-3。
青钱柳多糖含量采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定。
然后按下式计算青钱柳多糖得率:
多糖得率(%)=提取物中多糖质量/原料质量
本发明的有益效果:
本发明在青钱柳多糖的提取过程中,首先采用初步酶解的方法,将单糖、双糖、低聚糖、生物碱等去除。然后二次酶解,将多糖充分释放出来,并优化了复合酶酶解条件(复合酶比例,酶解温度,酶解时间),并在得到粗提液后,增加了sevag的脱蛋白、双氧水脱色的纯化的过程。
本发明的整个工艺过程中无污染物排放,适合于大规模生产,有益于青钱柳资源的开发利用。具有该步骤简单,成本低,可操作性强,产量高的优点,易于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的青钱柳提取多糖的方法,包括下列步骤:
a.将青钱柳用清水洗涤,50℃烘干干燥,样品经粉碎机粉碎,过40目筛;
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水,用均质机打浆,青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2;然后加入复合酶液,复合酶液的重量为物料总重量的0.5%;温度维持在40℃,维持时间0.5h,然后升温到90℃灭酶活性;
c.将酶解后的物料加入10倍体积的80%乙醇溶液混合后,60℃超声处理2h,反应结束后过滤,残渣烘干;
d.二次酶解:残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液,调节pH8.0,55℃下反应3h,纤维素酶的重量为物料总重量的0.5%;
e.热水浸提:酶解后的物料采用50倍体积的水热回流提取,90℃反应2小时,离心收集滤液和残渣,并用热水洗涤3次;
f.浓缩纯沉:将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积,调节pH至7,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,边加边搅拌,放置4h后,5000rpm离心10min,收集沉淀;
g.洗涤:将沉淀用95%的乙醇洗涤后,得到青钱柳粗多糖;
h.纯化:将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解;用sevag法除蛋白;调pH至8,在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min;加入3倍体积95%乙醇,离心,收集沉淀3次,冷冻干燥得到青钱柳多糖。
采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定,本实施例提供的方法,青钱柳多糖得率可达到10.53%。
实施例2
本实施例提供的青钱柳提取多糖的方法,包括下列步骤:
a.将青钱柳用清水洗涤,40℃烘干干燥,样品经粉碎机粉碎,过40目筛;
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水,用均质机打浆,青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2;然后加入复合酶液,复合酶液的重量为物料总重量的0.2%;温度维持在30℃,维持时间0.5h,然后升温到80℃灭酶活性;
c.将酶解后的物料加入5倍体积的80%乙醇溶液混合后,40℃超声处理1h,反应结束后过滤,残渣烘干;
d.二次酶解:残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液,调节pH7.5,55℃下反应1h,纤维素酶的重量为物料总重量的0.2%;
e.热水浸提:酶解后的物料采用30倍体积的水热回流提取,90℃反应2小时,离心收集滤液和残渣,并用热水洗涤3次;
f.浓缩纯沉:将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积,调节pH至7,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,边加边搅拌,放置4h后,5000rpm离心10min,收集沉淀;
g.洗涤:将沉淀用95%的乙醇洗涤后,得到青钱柳粗多糖;
h.纯化:将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解;用sevag法除蛋白;调pH至8,在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min;加入3倍体积95%乙醇,离心,收集沉淀3次,冷冻干燥得到青钱柳多糖。
采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定,本实施例提供的方法,青钱柳多糖得率可达到9.28%。
Claims (2)
1.一种青钱柳提取多糖的方法,其特征在于,包括下列步骤:
a.将青钱柳用清水洗涤,40-50℃烘干干燥,样品经粉碎机粉碎,过40目筛;
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水,用均质机打浆,青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2;然后加入复合酶液,复合酶液的重量为物料总重量的0.2-0.5%;温度维持在30-40℃,维持时间0.5h,然后升温到80-90℃灭酶活性;
c.将酶解后的物料加入5-10倍体积的80%乙醇溶液混合后,40-60℃超声处理1-3h,反应结束后过滤,残渣烘干;
d.二次酶解:残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液,调节pH7.5-8.0,55℃下反应1-3h,纤维素酶的重量为物料总重量的0.2-0.5%;
e.热水浸提:酶解后的物料采用30-50倍体积的水热回流提取,90℃反应2小时,离心收集滤液和残渣,并用热水洗涤3次;
f.浓缩纯沉:将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积,调节pH至7,加入3倍体积的95%的乙醇溶液,边加边搅拌,放置4h后,5000rpm离心10min,收集沉淀;
g.洗涤:将沉淀用95%的乙醇洗涤后,得到青钱柳粗多糖;
h.纯化:将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解;用sevag法除蛋白;调pH至8,在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min;加入3倍体积95%乙醇,离心,收集沉淀3次,冷冻干燥得到青钱柳多糖。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶,两者的重量比例是0.5:1-3。
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