CN109266702A - 一种青钱柳提取多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：a.将青钱柳用清水洗涤样品经粉碎机粉碎，过40目筛；b.酶解；c.将酶解后的物料加入乙醇溶液混合后，40‑60℃超声处理1‑3h，反应结束后过滤，残渣烘干；d.二次酶解；e.热水浸提；f.浓缩纯沉；g.洗涤；h.纯化。本发明的整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，有益于青钱柳资源的开发利用。具有该步骤简单，成本低，可操作性强，产量高的优点，易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种青钱柳提取多糖的方法。属于海洋微藻养殖领域。
背景技术
青钱柳，（拉丁文名：Cyclocaryapaliurus.）别名：摇钱树、麻柳，青钱李、山麻柳、山化树。胡桃科、青钱柳属植物，我国南方多省均有发现，多以零星分布。青钱柳乃冰川四纪幸存下来的珍稀树种，仅存于中国。青钱柳被誉为植物界的大熊猫，医学界的第三棵树。人们知道，医学界的第一棵树——柳树，产生了阿司匹林，消炎杀菌、抗血栓，揭开了人类健康史的第一次变革。
现代研究证实青钱柳叶具有降血糖、降血压、降血脂作用、增强机体免疫功能等作用。其主要活性成分是黄酮类和多糖类化合物。青钱柳中含有丰富的黄酮类物质，具有降血压、降血糖等作用。现代药理研究表明青钱柳多糖类同样具有降血糖作用。目前，中国专利“从青钱柳提取多糖及有效成分的方法”（申请号为200810073472.4）公开了一种从青钱柳中提取青钱柳多糖的方法。另外，中国专利“果味青钱柳多糖咀嚼片的制备方法”（申请号为201010158487.8）公开了一种青钱柳黄酮提取物制备果味咀嚼片的方法。这些提取方法主要为水或者是有机溶剂（如乙醇）直接浸提或者回流提取，提取物纯度过低，技术含量不高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种青钱柳提取多糖的方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
本发明提供的一种青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，40-50℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛；
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水，用均质机打浆，青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2；然后加入复合酶液，复合酶液的重量为物料总重量的0.2-0.5%；温度维持在30-40℃，维持时间0.5h，然后升温到80-90℃灭酶活性；
c.将酶解后的物料加入5-10倍体积的80%乙醇溶液混合后，40-60℃超声处理1-3h，反应结束后过滤，残渣烘干；
d.二次酶解：残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液，调节pH7.5-8.0，55℃下反应1-3h，纤维素酶的重量为物料总重量的0.2-0.5%；
e.热水浸提：酶解后的物料采用30-50倍体积的水热回流提取，90℃反应2小时，离心收集滤液和残渣，并用热水洗涤3次；
f.浓缩纯沉：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积，调节pH至7，加入3倍体积的95%的乙醇溶液，边加边搅拌，放置4h后，5000rpm离心10min，收集沉淀；
g.洗涤：将沉淀用95%的乙醇洗涤后，得到青钱柳粗多糖；
h.纯化：将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解；用sevag法除蛋白；调pH至8，在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min；加入3倍体积95%乙醇，离心，收集沉淀3次，冷冻干燥得到青钱柳多糖。
优选的，复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶，两者的重量比例是0.5：1-3。
青钱柳多糖含量采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定。
然后按下式计算青钱柳多糖得率：
多糖得率(%)=提取物中多糖质量/原料质量
本发明的有益效果：
本发明在青钱柳多糖的提取过程中，首先采用初步酶解的方法，将单糖、双糖、低聚糖、生物碱等去除。然后二次酶解，将多糖充分释放出来，并优化了复合酶酶解条件（复合酶比例，酶解温度，酶解时间），并在得到粗提液后，增加了sevag的脱蛋白、双氧水脱色的纯化的过程。
本发明的整个工艺过程中无污染物排放，适合于大规模生产，有益于青钱柳资源的开发利用。具有该步骤简单，成本低，可操作性强，产量高的优点，易于工业化生产。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供的青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，50℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛；
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水，用均质机打浆，青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2；然后加入复合酶液，复合酶液的重量为物料总重量的0.5%；温度维持在40℃，维持时间0.5h，然后升温到90℃灭酶活性；
c.将酶解后的物料加入10倍体积的80%乙醇溶液混合后，60℃超声处理2h，反应结束后过滤，残渣烘干；
d.二次酶解：残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液，调节pH8.0，55℃下反应3h，纤维素酶的重量为物料总重量的0.5%；
e.热水浸提：酶解后的物料采用50倍体积的水热回流提取，90℃反应2小时，离心收集滤液和残渣，并用热水洗涤3次；
f.浓缩纯沉：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积，调节pH至7，加入3倍体积的95%的乙醇溶液，边加边搅拌，放置4h后，5000rpm离心10min，收集沉淀；
g.洗涤：将沉淀用95%的乙醇洗涤后，得到青钱柳粗多糖；
h.纯化：将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解；用sevag法除蛋白；调pH至8，在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min；加入3倍体积95%乙醇，离心，收集沉淀3次，冷冻干燥得到青钱柳多糖。
采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定，本实施例提供的方法，青钱柳多糖得率可达到10.53%。
实施例2
本实施例提供的青钱柳提取多糖的方法，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，40℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛；
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水，用均质机打浆，青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2；然后加入复合酶液，复合酶液的重量为物料总重量的0.2%；温度维持在30℃，维持时间0.5h，然后升温到80℃灭酶活性；
c.将酶解后的物料加入5倍体积的80%乙醇溶液混合后，40℃超声处理1h，反应结束后过滤，残渣烘干；
d.二次酶解：残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液，调节pH7.5，55℃下反应1h，纤维素酶的重量为物料总重量的0.2%；
e.热水浸提：酶解后的物料采用30倍体积的水热回流提取，90℃反应2小时，离心收集滤液和残渣，并用热水洗涤3次；
f.浓缩纯沉：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积，调节pH至7，加入3倍体积的95%的乙醇溶液，边加边搅拌，放置4h后，5000rpm离心10min，收集沉淀；
g.洗涤：将沉淀用95%的乙醇洗涤后，得到青钱柳粗多糖；
h.纯化：将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解；用sevag法除蛋白；调pH至8，在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min；加入3倍体积95%乙醇，离心，收集沉淀3次，冷冻干燥得到青钱柳多糖。
采用蒽酮-硫酸法对其进行含量测定，本实施例提供的方法，青钱柳多糖得率可达到9.28%。
Claims (2)
1.一种青钱柳提取多糖的方法，其特征在于，包括下列步骤：
a.将青钱柳用清水洗涤，40-50℃烘干干燥，样品经粉碎机粉碎，过40目筛；
b.酶解:将青钱柳干燥粉末加入蒸馏水，用均质机打浆，青钱柳干燥粉末和蒸馏水的重量比为1:1-2；然后加入复合酶液，复合酶液的重量为物料总重量的0.2-0.5%；温度维持在30-40℃，维持时间0.5h，然后升温到80-90℃灭酶活性；
c.将酶解后的物料加入5-10倍体积的80%乙醇溶液混合后，40-60℃超声处理1-3h，反应结束后过滤，残渣烘干；
d.二次酶解：残渣以重量比1:40的料液比加入纤维素酶液，调节pH7.5-8.0，55℃下反应1-3h，纤维素酶的重量为物料总重量的0.2-0.5%；
e.热水浸提：酶解后的物料采用30-50倍体积的水热回流提取，90℃反应2小时，离心收集滤液和残渣，并用热水洗涤3次；
f.浓缩纯沉：将得到的滤液在50℃下减压浓缩蒸馏1/4体积，调节pH至7，加入3倍体积的95%的乙醇溶液，边加边搅拌，放置4h后，5000rpm离心10min，收集沉淀；
g.洗涤：将沉淀用95%的乙醇洗涤后，得到青钱柳粗多糖；
h.纯化：将得到的青钱柳粗多糖加入4倍0.02MNaOH溶液溶解；用sevag法除蛋白；调pH至8，在50℃下滴加入10%的H2O2脱色10min；加入3倍体积95%乙醇，离心，收集沉淀3次，冷冻干燥得到青钱柳多糖。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，复合酶包括纤维素酶和中性蛋白酶，两者的重量比例是0.5：1-3。
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