CN101736053A - 一种提取灰树花水溶性多糖的工艺 - Google Patents
一种提取灰树花水溶性多糖的工艺 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种提取灰树花水溶性多糖的工艺，以灰树花子实体为原料，水浸2-3小时，超声提取2-4次，调pH，木瓜蛋白酶酶解法除蛋白后加活性炭脱色，脱色液过膜截留浓缩，乙醇沉淀，冷冻干燥即得成品。采用本法生产多糖，成本低，能源消耗少，纯度高，保留了灰树花多糖的活性。
Description
技术领域：
本发明涉及一种多糖提取工艺，尤其是一种从灰树花子实体中提取多糖的方法。
背景技术：
灰树花(Fructificatio Polypori Frondosi)，别名栗蘑、佛菌、莲花菌，为担子菌亚门层菌纲多孔菌目多孔菌科的一种大型真菌。子实体覆瓦状丛生，菌盖扇形或匙形，表面灰褐色，较光滑，孔面白色至淡黄色，密生延生的菌管，管口近圆形至多角形。体轻，质脆，断面类白色，不平坦。气腥，味微甘。营养价值及其丰富，富含大量蛋白、脂肪、粗纤维、碳水化合物及多种有益矿物质、维生素，被誉为“真菌之王，抗癌奇葩”。灰树花多糖具有抗肿瘤、增强免疫力、抗病毒、抗脂肪肝和高血脂等，其抗肿瘤抑制率可达86.5％，比国际认证的抗癌新药“香菇多糖”抑制率高32％。
目前，灰树花提取多糖，一般原料采用灰树花子实体、菌丝或发酵液。中国专利CN1110566C采用斜面菌种进行一、二和三级种子培养，再进行发酵培养，将发酵液加热、搅拌，经泵压将发酵液放入料槽中经板框压滤得到灰树花多糖，该方法降低了成本，但蛋白质含量较高，得到的是粗多糖，含量较低。中国专利CN1322141C公开了一种酶解制备灰树花多糖的方法，向发酵液中加入纤维素酶、β-葡聚糖酶、果胶酶及中性蛋白酶，酶解后经灭酶、过滤、浓缩、醇沉分离等步骤得到灰树花多糖，但该法专业要求较高，不宜用于大规模的工业应用。史宝军发表的“碱提灰树花多糖的分离纯化及其性质研究”，采用水提多次后碱提，酸中和离心多次，醇沉，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，H2O2除色素，Sevag法除蛋白，透析3天再醇沉干燥，提取时间长，有机溶剂用量大，且除蛋白中所用三氯甲烷有致癌毒性，不宜用于食品、药品和保健品等领域。
发明内容：
本发明的目的是为了提供一种成本低，能源消耗少，纯度高，保持原有活性，易于实现工业化的多糖提取工艺。
本发明所提出的制备方法如下：
1)超声水提：将灰树花原料粉碎，加15-20倍量水室温动态浸泡2-3小时，超声提取2-3次，过滤，合并提取液；
2)除蛋白：上述提取液加酸调pH，加入木瓜蛋白酶搅拌酶解，酶控反应结束后升温灭酶5分钟；
3)脱色：上述酶解液加活性炭脱色，收集脱色液；
4)膜浓缩：上述脱色液先通过超滤膜系统截留大分子物质，透过液再用纳滤膜浓缩得浓缩液；
5)醇沉：上述浓缩液加入3-5倍量95％乙醇，沉淀析出后离心，弃去上清液，用无水乙醇洗涤沉淀2-4次，减压浓缩至无醇，干燥即得产品。
所述的水提条件：每次超声15-45分钟，超声功率200-500W。
所述调pH所用酸可选用乙酸、磷酸或盐酸。
所述的木瓜蛋白酶酶底比为1.2％，反应温度60℃，搅拌速度30-50r/min，酶控反应时间1-3小时；灭酶温度90-100℃。
所述的活性炭为301或303活性炭，加入量为酶解液量的1-2％，脱色时间1-2小时。
所述的超滤膜为截留分子量为1000-3000的超滤膜；所述的纳滤膜为HNF-4040系列纳滤膜或ESNA系列纳滤膜。纳滤膜可截留分子量较大的多糖分子，除去小分子杂质，溶剂分离达到浓缩的目的，同时在一定程度上缩短了生产周期。
综上所述，本发明存在以下优点：超声提取提率高且用时短，木瓜蛋白酶酶解除蛋白用量小、安全无毒，并能保持多糖活性；膜浓缩处理条件温和，后处理后可重复利用。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式：
下述实施例中灰树花多糖的检测采用苯酚-硫酸法(参照宋玉良等“灰树花中多糖含量的测定”文献)。
实施例1：
将灰树花子实体粉碎，取100g加1.5L水，室温动态浸泡3小时后超声提取20分钟(超声功率为260W)，提取3次，合并得4L提取液，加5％盐酸调pH至5.5，加入48g木瓜蛋白酶，55℃下保温，以50转/分搅拌酶解2小时，反应结束后升温到90℃灭酶5分钟，加入53g活性炭脱色1小时，将脱色液先通过截留分子量3000的中空纤维超滤膜系统除去大分子杂质，再用截留分子量100的纳滤膜系统浓缩，浓缩液加入4倍量95％乙醇，沉淀析出后开始离心，弃去上清液，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，挥干乙醇，冷冻干燥，最终得到15.5g含量为98.6％的多糖。
实施例2：
将灰树花子实体粉碎，取200g加3.6L水，室温动态浸泡2小时后超声提取38分钟(超声功率360W)，提取2次，合并得7L提取液，加乙酸调pH至5，加入84g木瓜蛋白酶，60℃下保温，以40转/分搅拌酶解1.5小时，反应结束后升温到100℃灭酶5分钟，加入90g活性炭脱色2小时，将脱色液先通过截留分子量2000的中空纤维超滤膜系统除去大分子杂质，再用截留分子量100的纳滤膜系统浓缩，浓缩液加入3倍量95％乙醇，沉淀析出后开始离心，弃去上清液，再用无水乙醇洗涤沉淀2次，挥干乙醇，减压真空干燥，最终得到32g含量为98％的多糖。
实施例3：
将灰树花子实体粉碎，取500g加10L水，室温动态浸泡2.5小时后超声提取40分钟(超声功率450W)，提取3次，合并得28L提取液，加1％盐酸调pH至6，加入336g木瓜蛋白酶，60℃下保温，以35转/分搅拌酶解3小时，反应结束后升温到90℃灭酶5分钟，加入360g活性炭脱色1.5小时，将脱色液先通过截留分子量1000的中空纤维超滤膜系统除去大分子杂质，再用截留分子量100的纳滤膜系统浓缩，浓缩液加入5倍量95％乙醇，沉淀析出后开始离心，弃去上清液，再用无水乙醇洗涤沉淀3次，挥干乙醇，冷冻干燥，最终得到83g含量为98.3％的多糖。
实施例4：
将灰树花子实体粉碎，取1kg加17L水，室温动态浸泡2.5小时后超声提取25分钟(超声功率230W)，提取2次，合并得32L提取液，加0.5％磷酸调pH至5.5，加入384g木瓜蛋白酶，60℃下保温，以30转/分搅拌酶解2小时，反应结束后升温到95℃灭酶5分钟，加入410g活性炭脱色2小时，将脱色液先通过截留分子量3000的中空纤维超滤膜系统除去大分子杂质，再用截留分子量100的纳滤膜系统浓缩，浓缩液加入4倍量95％乙醇，沉淀析出后开始离心，弃去上清液，再用无水乙醇洗涤沉淀2次，挥干乙醇，减压干燥，最终得到169g含量为98.6％的多糖。
Claims (6)
1.一种提取灰树花水溶性多糖的工艺，其特征在于由以下步骤组成：
(1)超声水提：将灰树花原料粉碎，加15-20倍量水室温动态浸泡2-3小时，超声提取2-3次，过滤，合并提取液；
(2)除蛋白：上述提取液加酸调pH，加入木瓜蛋白酶搅拌酶解，酶控反应结束后升温灭酶5分钟；
(3)脱色：上述酶解液加活性炭脱色，收集脱色液；
(4)膜浓缩：上述脱色液先通过超滤膜系统截留大分子物质，透过液再用纳滤膜浓缩得浓缩液；
(5)醇沉：上述浓缩液加入3-5倍量95％乙醇，沉淀析出后离心，弃去上清液，用无水乙醇洗涤沉淀2-4次，减压浓缩至无醇，干燥即得产品。
2.根据权利要求1所述提取灰树花水溶性多糖工艺，其特征在于所述的水提条件：每次超声15-45分钟，超声功率200-500W。
3.根据权利要求1所述提取灰树花水溶性多糖工艺，其特征是所述调pH所用酸可选用乙酸、磷酸或盐酸。
4.根据权利要求1所述提取灰树花水溶性多糖工艺，其特征在于所述的木瓜蛋白酶酶底比为1.2％，反应温度60℃，搅拌速度30-50r/min，酶控反应时间1-3小时，；灭酶温度90-100℃。
5.根据权利要求1所述提取灰树花水溶性多糖工艺，其特征在于所述的活性炭为食品工业类301或303活性炭，加入量为酶解液量的1-2％，脱色时间1-2小时。
6.根据权利要求1所述提取灰树花水溶性多糖工艺，其特征是所述的超滤膜为截留分子量为1000-3000的超滤膜；所述的纳滤膜为HNF-4040系列纳滤膜或ESNA系列纳滤膜。
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