CN104357518A - 一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 - Google Patents
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104357518A CN104357518A CN201410642850.1A CN201410642850A CN104357518A CN 104357518 A CN104357518 A CN 104357518A CN 201410642850 A CN201410642850 A CN 201410642850A CN 104357518 A CN104357518 A CN 104357518A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yeast
- concentration
- nucleotide
- ultrafiltration
- ultrafiltration apparatus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明公开了一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，其步骤为将啤酒废酵母进行过筛、脱苦、脱臭处理后配制成酵母悬浮液，然后使用高温浓盐法在不锈钢反应釜中抽提一段时间，抽提结束后迅速冷却过滤取上清液，再用超滤设备进行超滤脱盐浓缩，浓缩液加入蛋白酶水解后进行高温灭酶，并调节酸度使蛋白变性沉淀，离心取上清液，上清液经过超滤设备纯化后加入核酸酶水解，灭酶提纯后经喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉；与现有技术相比，本发明采用高温浓盐抽提法与蛋白酶解技术、超滤膜技术，易操作、成本低，提高了核酸的提取率和纯度，由此制得的酵母核苷酸回收率高、纯度好，提高了啤酒废酵母加工的增值能力，产生巨大的经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种制备核苷酸的方法，尤其涉及一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法。
背景技术
啤酒废酵母是啤酒生产的副产物，是啤酒生产过程中历经主发酵和后发酵的酿造工序之后所产生的，含有丰富的营养成分及功能性成分。啤酒废酵母中大约含有40％～50％的蛋白质、4％～6％的核糖核酸、30％～35％的碳水化合物、2.8％～3％的脂质。核糖核酸已广泛应用在医药、保健品、农业、食品加工等方面。核糖核酸经水解得到的四种5-核苷酸，作为基础原料在医药行业上具有广阔的应用前景。核苷酸在生物体内具有多种生物学功能，在维持细胞结构以及细胞能量调节等方面有着重要作用。近几年，随着核苷酸生物作用的开发，核苷酸类在饲料工业中已扩展成为具有提高生物体免疫功能的功能性饲料添加剂。
与欧美等发达国家相比，我国的啤酒废酵母回收利用无论是技术水平还是工业化程度方面都有着巨大的差距。据统计，我国每年进口核酸类物质约500吨，实际需求及潜在需求约2000吨，缺口很大。因此，核苷酸的短缺不但无法满足人们的需求，且严重影响了我国在核酸领域应用开发的水平。目前我国是世界上最大的啤酒生产国，因此利用啤酒废酵母提取核糖核酸和生产核苷酸，不仅为工业化生产核糖核酸与核苷酸提供一条途径，而且使啤酒废酵母能得到更有价值的利用，这样减少了啤酒企业处理污染的费用，创造更多的经济价值，将会产生潜在的经济效益与社会效益。
在工业上，生产核苷酸的方法以发酵法和酶法的应用较为广泛，想要同时获得组成核糖核酸的各种核苷酸，酶法水解核糖核酸具有较大优势，工业上常用的核酸降解酶包括核酸酶P1和从麦芽根提取的5-磷酸二酯酶。目前，从啤酒酵母中提取核糖核酸的方法主要有盐法、稀碱法、机械法、氨法、自溶法、酶法等。盐法以其提取条件温和、成本低的优点，应用比较广泛，但盐法与稀碱法相比，核糖核酸的提取率低，这样经过酶法水解后核苷酸的得率相对较低，因此有必要对盐法提取工艺进行优化，提高核糖核酸的提取率和纯度，进而提高核苷酸的得率和纯度。
发明内容
本发明的目的旨在克服上述现有技术中的不足，提供一种成本低、易操作的利用啤酒废酵母制备回收率高且纯度好的核苷酸的方法。
为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
对啤酒废酵母进行过筛、脱苦、脱臭处理，离心，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计1％～20％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计1％～20％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度50℃～100℃的条件下抽提2h～12h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下，得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入蛋白酶，在温度为30℃～60℃与pH为4.0～10.0的条件下进行酶解，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至3.0～5.0，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白变性沉淀，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，得到一种滤液；
G、核酸酶解
往步骤F得到的滤液中加入核酸酶进行酶解，得到的酶解液在灭酶提纯后经喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉；
作为优选，在步骤A中，所述的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计1～5倍体积的质量浓度为0.1％～1％的碳酸氢钠或酒石酸水溶液，洗涤0.5h～3h，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计1～5倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到处理的酵母泥；
作为优选，在步骤C中，所述的超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为1000Da～10000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min；
作为优选，在步骤D中，所述的蛋白酶为胰蛋白酶，底物浓度以重量计控制在1％～20％，酶活力与底物浓度之比为1000U/g～10000U/g，酶解时间为4h～12h；
作为优选，在步骤E中，酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白变性沉淀的时间为30min；
作为优选，在步骤F中，所述的超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为5000Da～50000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min；
作为优选，在步骤G中，将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在1％～10％，然后加入5-磷酸二酯酶或核酸酶P1，使酶活力与底物浓度之比为500U/g～10000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为0.5×10-3mol/L～5×10-3mol/L，然后在温度为60℃～90℃、pH值为4.0～8.0的条件下进行酶解1h～5h；
作为优选，在步骤G中，所述灭酶提纯工艺为使用盐酸将酶解液pH值调节至5.0以下，加热至100℃，保持30min，使酶蛋白变性沉淀，然后用碟片离心机分离，取上清液；
作为优选，在步骤G中，所述喷雾干燥机的进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min；
根据上述制备方法所得到的酵母核苷酸粉具有下述特性：性状为干燥无定型粉，均匀一致，颜色为白色，带鲜味，以重量计，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明是以啤酒厂生产啤酒后的副产物——啤酒废酵母为原料，经高温浓盐抽提、生物酶解技术及超滤技术提取核酸，再经酶解制得核苷酸粉，该方法反应条件温和、易操作、能耗低、成本低。
本发明采用高温浓盐抽提法，在高温、高渗透压下酵母会自溶破壁，释放出大分子的蛋白和核酸，同时进行长时间的抽提，增加了酵母细胞破壁率，提高了酵母细胞内蛋白和核酸的溶出率，使得酵母抽提物的得率大大提高，将核酸RNA的提取率从≥4.2％提高到≥6.5％。同时，本发明还联合采用了蛋白酶解技术和超滤膜技术，先去除回收大部分的盐分，然后将抽提物中的大分子蛋白水解成小分子肽和氨基酸，再经过超滤膜过滤，将这些小分子的物质滤除，从而大大提高了核酸的纯度，将核酸的纯度从≥55％提高到≥80％。另外，本发明无需沉淀核酸，没有沉淀剂的投入，不仅减少了工序，节约了成本，也提高了核酸的得率和纯度。而从啤酒废酵母中提取的核酸再经过酶解即得到核苷酸，该酵母核苷酸回收率高、纯度好，回收率≥95％，不仅可以作为食品、饲料工业中的鲜味剂、风味强化剂，还能作为提高生物体免疫功能的添加剂，而且是非常重要的医药原料。本发明在提高啤酒废酵母加工增值能力的同时，也降低了啤酒工业中废酵母的排放对环境的不利影响，实现资源的二次转化，产生巨大的经济效益。
具体实施方式
为了能更好地对本发明的技术方案进行理解，下面通过具体的实施例进行详细地说明：
实施例一
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计1倍体积的质量浓度为1％的碳酸氢钠，洗涤0.5h，然后用离心机以转速1000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计1倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速1000r/min离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计1％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计20％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度100℃的条件下抽提12h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为1000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为10ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在1％，酶活力与底物浓度之比为1000U/g，然后在温度为30℃与pH为4.0的条件下进行酶解4h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至3.0，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为5000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为10ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在1％，然后加入5-磷酸二酯酶，使酶活力与底物浓度之比为500U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为0.5×10-3mol/L，然后在温度为60℃、pH值为4.0的条件下进行酶解1h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
实施例二
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计5倍体积的质量浓度为0.1％的酒石酸水溶液，洗涤3h，然后用离心机以转速5000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计5倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速5000r/min离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计20％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计20％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度50℃的条件下抽提2h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为10000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在20％，酶活力与底物浓度之比为10000U/g，然后在温度为60℃与pH为10.0的条件下进行酶解12h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至5.0，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为50000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在10％，然后加入核酸酶P1，使酶活力与底物浓度之比为10000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为5×10-3mol/L，然后在温度为90℃、pH值为8.0的条件下进行酶解5h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
实施例三
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计3倍体积的质量浓度为0.5％的碳酸氢钠，洗涤1.5h，然后用离心机以转速3000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计3倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速3000r/min的离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计15％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计15％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度75℃的条件下抽提7h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为5000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为5ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在15％，酶活力与底物浓度之比为5000U/g，然后在温度为45℃与pH为7的条件下进行酶解8h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至4，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为25000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为5ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在5％，然后加入5-磷酸二酯酶，使酶活力与底物浓度之比为5000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为2.5×10-3mol/L，然后在温度为75℃、pH值为6的条件下进行酶解3h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
实施例四
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计2倍体积的质量浓度为0.7％的酒石酸水溶液，洗涤2h，然后用离心机以转速3000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计2倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速3000r/min离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计10％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计10％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度80℃的条件下抽提9h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为7000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为7ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在10％，酶活力与底物浓度之比为7000U/g，然后在温度为40℃与pH为6的条件下进行酶解9h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至3.5，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为40000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为7ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在7％，然后加入核酸酶P1，使酶活力与底物浓度之比为7000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为4×10-3mol/L，然后在温度为70℃、pH值为5的条件下进行酶解2h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
实施例五
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计4倍体积的质量浓度为0.3％的碳酸氢钠，洗涤2.5h，然后用离心机以转速3500r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计4倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速3500r/min的离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计5％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计12％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度90℃的条件下抽提5h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为4000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为4ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在5％，酶活力与底物浓度之比为4000U/g，然后在温度为40℃与pH为8的条件下进行酶解6h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至4.5，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为15000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为4ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在6％，然后加入5-磷酸二酯酶，使酶活力与底物浓度之比为3000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为3.5×10-3mol/L，然后在温度为65℃、pH值为5.5的条件下进行酶解2.5h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
实施例六
一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，它包括以下步骤：
A、预处理
将干的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计1～5倍体积的质量浓度为0.1％～1％的碳酸氢钠或酒石酸水溶液，洗涤0.5h～3h，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计1～5倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计1％～20％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计1％～20％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度50℃～100℃的条件下抽提2h～12h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为1000Da～10000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min，脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下后得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入胰蛋白酶，使底物浓度以重量计控制在1％～20％，酶活力与底物浓度之比为1000U/g～10000U/g，然后在温度为30℃～60℃与pH为4.0～10.0的条件下进行酶解4h～12h，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至3.0～5.0，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白进行变性沉淀30min，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，该超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为5000Da～50000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min，超滤纯化后得到一种滤液；
G、核酸酶解
将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在1％～10％，然后加入5-磷酸二酯酶或核酸酶P1，使酶活力与底物浓度之比为500U/g～10000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为0.5×10-3mol/L～5×10-3mol/L，然后在温度为60℃～90℃、pH值为4.0～8.0的条件下进行酶解1h～5h，然后使用盐酸将酶解液的pH值调节至5.0以下，再加热至100℃保持30min，使酶蛋白变性沉淀，最后用碟片离心机分离，取上清液，再经过进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min的喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法，其特征在于它包括以下步骤：
A、预处理
对啤酒废酵母进行过筛、脱苦、脱臭处理，离心，得到处理的酵母泥；
B、抽提、过滤
将步骤A得到的处理的酵母泥配制成酵母泥悬浮液，使悬浮液中的酵母浓度达到以重量计1％～20％，再加入氯化钠，使悬浮液中的氯化钠浓度达到以重量计1％～20％，然后使用氢氧化钠将该悬浮液的pH值调节至7.5，接着使用不锈钢反应釜在温度50℃～100℃的条件下抽提2h～12h，得到的抽提物迅速冷却至室温，再用板框压滤机过滤，取滤液；
C、超滤脱盐浓缩
使用超滤设备将步骤B得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行脱盐浓缩至盐含量为以重量计0.1％以下，得到一种脱盐浓缩液；
D、蛋白酶解
往步骤C得到的脱盐浓缩液中加入蛋白酶，在温度为30℃～60℃与pH为4.0～10.0的条件下进行酶解，得到一种酶解液；
E、沉淀分离蛋白
使用盐酸将步骤D得到的酶解液pH值调节至3.0～5.0，加热至100℃，使酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白变性沉淀，然后用碟片离心机分离，取上清液；
F、超滤纯化核酸
使用超滤设备将步骤E得到的上清液在室温、压强不超过3MPa的条件下进行超滤纯化，得到一种滤液；
G、核酸酶解
往步骤F得到的滤液中加入核酸酶进行酶解，得到的酶解液在灭酶提纯后经喷雾干燥机干燥，即得到酵母核苷酸粉。
2.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤A中，所述的啤酒废酵母先用100目筛筛分两次，再加入以啤酒废酵母体积计1～5倍体积的质量浓度为0.1％～1％的碳酸氢钠或酒石酸水溶液，洗涤0.5h～3h，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到酵母泥，再用以酵母泥体积计1～5倍体积的水洗涤至无苦味，然后用离心机以转速1000～5000r/min离心分离，得到处理的酵母泥。
3.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤C中，所述的超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为1000Da～10000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min。
4.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤D中，所述的蛋白酶为胰蛋白酶，底物浓度以重量计控制在1％～20％，酶活力与底物浓度之比为1000U/g～10000U/g，酶解时间为4h～12h。
5.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤E中，酶蛋白以及未被水解的酵母蛋白变性沉淀的时间为30min。
6.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤F中，所述的超滤设备是以切向流过滤方式运行、使用管式膜组件的超滤设备，其超滤膜截留分子量为5000Da～50000Da，控制进入超滤设备的滤液中的酵母和氯化钠总浓度不超过15％，进样速度为1～10ml/cm2·min。
7.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤G中，将步骤F得到的滤液中的核糖核酸浓度以重量计控制在1％～10％，然后加入5-磷酸二酯酶或核酸酶P1，使酶活力与底物浓度之比为500U/g～10000U/g，再加入硫酸锌，使溶液中硫酸锌的浓度为0.5×10-3mol/L～5×10-3mol/L，然后在温度为60℃～90℃、pH值为4.0～8.0的条件下进行酶解1h～5h。
8.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤G中，所述灭酶提纯工艺为使用盐酸将酶解液pH值调节至5.0以下，加热至100℃，保持30min，使酶蛋白变性沉淀，然后用碟片离心机分离，取上清液。
9.根据权利要求1所述制备核苷酸的方法，其特征在于在步骤G中，所述喷雾干燥机的进风温度为140℃、出风温度为80℃、雾化盘最大转速为20000r/min。
10.根据权利要求1-9中任一项权利要求所述制备核苷酸的方法所得到的酵母核苷酸粉，其特征在于它具有下述特性：性状为干燥无定型粉，均匀一致，颜色为白色，带鲜味，以重量计，其灰分含量≤5％、水分含量≤5％、核苷酸含量≥80％。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410642850.1A CN104357518A (zh) | 2014-11-12 | 2014-11-12 | 一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410642850.1A CN104357518A (zh) | 2014-11-12 | 2014-11-12 | 一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104357518A true CN104357518A (zh) | 2015-02-18 |
Family
ID=52524826
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410642850.1A Pending CN104357518A (zh) | 2014-11-12 | 2014-11-12 | 一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104357518A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104770620A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-07-15 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 一种调节母猪白天同期分娩的全价配合饲料及制备方法和应用 |
| CN106173268A (zh) * | 2016-07-22 | 2016-12-07 | 中山味氏香味剂有限公司 | 一种由啤酒废弃酵母泥制备核糖核苷酸的方法及含核糖核苷酸的饲料添加剂 |
| CN104789554B (zh) * | 2015-04-10 | 2017-11-28 | 中国海洋大学 | 从猪小肠黏膜肝素提取后废弃液中制备脱氧核糖核酸的方法 |
| CN108740358A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-11-06 | 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 | 一种饲料添加剂及其制备方法与应用 |
| CN109651470A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-04-19 | 开封康诺药业有限公司 | 一种辅酶i和其他大分子物质的分离方法 |
| CN110396120A (zh) * | 2019-02-13 | 2019-11-01 | 山东惠仕莱生物科技有限公司 | 一种从s-腺苷蛋氨酸发酵液中提取分离s-腺苷蛋氨酸的方法 |
| CN112843127A (zh) * | 2021-03-10 | 2021-05-28 | 和田帝辰医药生物科技有限公司 | 一种通过调节渗透压来提取肉苁蓉有效成分的方法 |
-
2014
- 2014-11-12 CN CN201410642850.1A patent/CN104357518A/zh active Pending
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 周昌奎: "《分子生物学技术原理》", 31 December 1990 * |
| 洪坚平等: "《应用微生物学》", 30 September 2005 * |
| 胡刚: "啤酒废酵母制备5’-核苷酸的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》 * |
| 邱峰: "《天然药物化学》", 31 August 2013 * |
| 邵秀芝等: "《食品化学实验》", 31 December 2013 * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104789554B (zh) * | 2015-04-10 | 2017-11-28 | 中国海洋大学 | 从猪小肠黏膜肝素提取后废弃液中制备脱氧核糖核酸的方法 |
| CN104770620A (zh) * | 2015-05-05 | 2015-07-15 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 一种调节母猪白天同期分娩的全价配合饲料及制备方法和应用 |
| CN104770620B (zh) * | 2015-05-05 | 2018-03-16 | 中国科学院亚热带农业生态研究所 | 一种调节母猪白天同期分娩的全价配合饲料及制备方法和应用 |
| CN106173268A (zh) * | 2016-07-22 | 2016-12-07 | 中山味氏香味剂有限公司 | 一种由啤酒废弃酵母泥制备核糖核苷酸的方法及含核糖核苷酸的饲料添加剂 |
| CN108740358A (zh) * | 2018-05-17 | 2018-11-06 | 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 | 一种饲料添加剂及其制备方法与应用 |
| CN108740358B (zh) * | 2018-05-17 | 2021-05-25 | 南京同凯兆业生物技术有限责任公司 | 一种饲料添加剂及其制备方法与应用 |
| CN109651470A (zh) * | 2019-01-24 | 2019-04-19 | 开封康诺药业有限公司 | 一种辅酶i和其他大分子物质的分离方法 |
| CN110396120A (zh) * | 2019-02-13 | 2019-11-01 | 山东惠仕莱生物科技有限公司 | 一种从s-腺苷蛋氨酸发酵液中提取分离s-腺苷蛋氨酸的方法 |
| CN112843127A (zh) * | 2021-03-10 | 2021-05-28 | 和田帝辰医药生物科技有限公司 | 一种通过调节渗透压来提取肉苁蓉有效成分的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104357518A (zh) | 一种利用啤酒废酵母制备核苷酸的方法 | |
| CN101481719B (zh) | 用啤酒废酵母制备酵母多糖、海藻糖及酵母抽提物的方法 | |
| CN101096696B (zh) | 从玉米蛋白粉中酶法制取玉米蛋白多肽的工业生产方法 | |
| CN102732589B (zh) | 一种苏氨酸母液处理的方法 | |
| CN105385737A (zh) | 一种牦牛骨胶原寡肽的制备工艺 | |
| CN101897431B (zh) | 一种同时制备酵母抽提物和β-1，3-葡聚糖的方法 | |
| CN105063153B (zh) | 一种食品级低盐分海洋鱼低聚肽粉的制备方法 | |
| CN103045707B (zh) | 一种连续酶解与二级膜过滤提纯制备大米蛋白活性多肽的方法 | |
| CN105002247A (zh) | 一种小分子核桃肽及其制备方法 | |
| CN105249464B (zh) | 一种虾肽螯合钙的制备方法 | |
| CN103388017A (zh) | 鱼皮胶原寡肽的制备工艺 | |
| CN104187924A (zh) | 一种玉米低聚肽粉的制备方法 | |
| CN101869169B (zh) | 以鱼下脚料发酵耦合膜技术制备鱼低聚肽的方法 | |
| CN104509679B (zh) | 一种利用脱脂豆粕制取大豆糖蛋白的方法 | |
| CN108285913B (zh) | 一种制备提取l-谷氨酰胺的工艺 | |
| CN102382203B (zh) | 一种莲子多糖高效提取工艺 | |
| CN102228125A (zh) | 海藻活性肽的制备方法 | |
| CN103739663A (zh) | 微波辅助蛋白酸水解快速制备小肽氨基酸的方法 | |
| CN102643364B (zh) | 从灵芝的深层发酵菌丝体中提取灵芝多糖的方法 | |
| CN107628944B (zh) | 从百香果果壳中提取低酯果胶和柠檬酸钙的方法和系统 | |
| CN103103243A (zh) | 一种游离酶与固定化酶联合水解制备蚕蛹肽的方法 | |
| CN101735331B (zh) | 发酵法提取百合多糖的生产工艺及其产品 | |
| CN103421871A (zh) | 一种金枪鱼骨胶原蛋白肽的制备方法 | |
| CN105886569A (zh) | 一种茶黄素的制备方法 | |
| CN106834399A (zh) | 一种来源于厚壳贻贝闭壳肌的降压肽 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150218 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |