CN104387492A - 一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法 - Google Patents

一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法 Download PDF

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一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其具体步骤为：（1）材料预处理；（2）超声提取；（3）酶解提取；（4）制备洗脱液；（5）制备截留液；（7）减压浓缩；（8）离心得沉降物；（9）真空干燥；本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，增加内容物的溶出率，同时应用树脂层析柱进行脱色脱蛋白，除去了蛋白质等分子杂质，使提取的多糖含量更高、更纯。

Description

一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法
技术领域
本发明涉及一种多糖提取方法，特别是一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法。
背景技术
灰树花又名粟蘑、莲花菌，日本称“舞茸”，是一种珍稀的食、药兼用真菌。灰树花不仅食用味道鲜美，有“食用菌王子”之美称，富含维生素，并含有锌、钙、磷、铁、硒等多种对人体有益的矿物质，而且具有医疗保健作用，在日本民间用来治疗糖尿病、高血压等疾病。
灰树花的调节免疫力、抗肿瘤、治疗糖尿病等药用功效来源于其含有的多种生理活性物质，如多糖(糖蛋白)、核酸、多酚、矿物质等，尤其灰树花多糖(糖蛋白复合体)是研究重点。灰树花的生物活性主要来自其多糖成分。灰树花多糖具有抗肿瘤、增强免疫功能、抗HIV等多种生物活性。
目前常用的灰树花多糖的提取方法有碱提法、酸提法、盐提法还有热水浸提法。稀酸、稀碱法，试剂用量少，仪器均为常规仪器，因此操作简单易行。但稀酸、稀碱条件下，易使多糖发生糖苷键的断裂，部分多糖发生水解而使多糖的提取率减少，而且杂质含量，也比较多，有一定的适用范围，所以本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提高了多糖的提取含量。
发明内容
本发明的目的是提供一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，同时加入酶解提取，去除了蛋白等杂质，大大提高了多糖的提取含量。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其具体步骤为：
（1）材料预处理：取干燥灰树花粉碎，过60～100目筛，得灰树花干燥粉末，加入5～20倍质量的蒸馏水，于50℃～65℃的温度条件下，浸泡1-5小时；
（2）超声提取：把步骤（1）的物质放入超声波中，于20～60℃的温度条件下，用5～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1；
（3）酶解提取：调节滤液1pH为3～6，加入其质量体积0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，于30～60℃的温度条件下，水解0.5h～3.0h，离心分离，取滤液2；
（4）制备洗脱液：滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0～4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4～5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6～7BV洗脱液；
（5）制备截留液：调节洗脱液pH为6.5～7.5，在0.1～0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和10KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
（7）减压浓缩：将（6）步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70℃，压力小于0.lMPa，浓缩到500℃热测比重1.050—1.080；
（8）离心得沉降物：4000rmp高速离心，得沉淀物；
（9）真空干燥：沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃的条件下，干燥20min，得到灰树花多糖。
本发明的有益效果：本发明在水提的基础上，复合超声提取，使细胞内容物更大量的释放，增加内容物的溶出率，同时应用树脂层析柱进行脱色脱蛋白，除去了蛋白质等分子杂质，使提取的多糖含量更高、更纯。
具体实施方式
实施例1
（1）材料预处理：取干燥灰树花粉碎，过60目筛，得灰树花干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50℃～65℃下，侵泡3小时；
（2）超声提取：接着把步骤（1）的物质放入超声波中，20～60℃下用5～20KHz超声波萃取0.5h，过滤，取滤液1；滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取；
（3）酶解提取：调节滤液pH为3～6，加入质量体积比为0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，30～60℃水解0.5h，离心取滤液2；
（4）制备洗脱液：滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0～4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4～5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6～7BV洗脱液；
（5）制备截留液：调节洗脱液pH为6.5～7.5，在0.1～0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和10KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
（7）减压浓缩：将（6）步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70℃，压力小于0.lMPa。浓缩到比重1.050-1.080(500℃热测)；
（8）离心得沉降物：4000rmp高速离心，得沉淀物；
（9）真空干燥：沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，得到灰树花多糖。
实施例2
（1）材料预处理：取干燥灰树花粉碎，过60目筛，得灰树花干燥粉末，按重量配比加入10倍质量的蒸馏水，于50℃～65℃下，侵泡4小时；
（2）超声提取：接着把步骤（1）的物质放入超声波中，20～60℃下用5～20KHz超声波萃取1.0h，过滤，取滤液1；滤渣可重复进行以上操作，滤液进行下一步提取；
（3）酶解提取：调节滤液pH为3～6，加入质量体积比为0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，30～60℃水解1.0h，离心取滤液2；
（4）制备洗脱液：滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0～4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4～5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6～7BV洗脱液；
（5）制备截留液：调节洗脱液pH为6.5～7.5，在0.1～0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和10KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
（7）减压浓缩：将（6）步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70℃，压力小于0.lMPa，浓缩到比重1.050-1.080(500℃热测)；
（8）离心得沉降物：4000rmp高速离心，得沉淀物；
（9）真空干燥：沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃下，干燥20min，得到灰树花多糖。
提取的灰树花多糖得率为22.15%。

Claims (1)

1.一种超声波辅助提取灰树花多糖的方法，其特征在于：其具体步骤为：
（1）材料预处理：取干燥灰树花粉碎，过60～100目筛，得灰树花干燥粉末，加入5～20倍质量的蒸馏水，于50℃～65℃的温度条件下，浸泡1-5小时；
（2）超声提取：把步骤（1）的物质放入超声波中，于20～60℃的温度条件下，用5～20KHz超声波萃取0.5h～2.0h，过滤，取滤液1；
（3）酶解提取：调节滤液1pH为3～6，加入其质量体积0.5-2.5%的纤维素酶和木瓜蛋白酶，于30～60℃的温度条件下，水解0.5h～3.0h，离心分离，取滤液2；
（4）制备洗脱液：滤液2用稀盐酸调节滤液pH为4.0～4.5，上层析柱，柱内填充介质为HD-3树脂，4～5BV/h流速下层析脱色脱蛋白，收集6～7BV洗脱液；
（5）制备截留液：调节洗脱液pH为6.5～7.5，在0.1～0.25Mpa压力下，用超滤膜为50KD和10KD的陶瓷膜进行超滤，收集中间截留液；
（7）减压浓缩：将（6）步骤的截留液进行减压浓缩，浓缩温度65-70℃，压力小于0.lMPa，浓缩到500℃热测比重1.050—1.080；
（8）离心得沉降物：4000rmp高速离心，得沉淀物；
（9）真空干燥：沉淀物在真空度-0.095MPa，干燥温度20-50℃的条件下，干燥20min，得到灰树花多糖。
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