CN109169233A - 一种千层塔的水培养殖方法以及生态提取石杉碱甲的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于本发明属于医药生物或药物种植技术领域，具体涉及得到一种千层塔的水培养殖方法以及生态提取石杉碱甲的方法，该技术以壮苗培养基以及营养液为基础，将幼苗接种到壮苗生根培养基中，得到可栽培千层塔幼苗，千层塔幼苗放入营养液中，获得千层塔植株，以植株为原料，采用去离子进行培养后，加放入培养液中，循环几次后，在获得石杉碱甲的同时，获得可栽培植株；本发明的水养殖方法：采用新鲜的车前子汁以及研磨过的苔藓，用于培养基中，营养液采用三七汁、橘皮苷、桑色素以及其他物质，用于强壮植株，研究表明，本发明的千层塔水养殖方法获得千层塔植株生长周期短，进一步以植株为生态原料，获得生物碱，同时达到强壮植株的作用。

Description

一种千层塔的水培养殖方法以及生态提取石杉碱甲的方法
技术领域
本发明属于医药生物或药物种植技术领域，具体涉及一种千层塔的水培养殖方法以及生态提取石杉碱甲的方法。
背景技术
千层塔(Huperzia serrata)，为石杉科石杉属多年生草本植物蛇足石杉的全草，又名金不换、虱子草、宝塔花等。千层塔具有清热解毒、生肌止血、散瘀消肿等功效，民间多用于治跌打损伤、瘀血肿痛、内伤出血，还用于治痈疖肿毒、毒蛇咬伤、烧烫伤等，少量鲜食可防治老年痴呆症。千层塔的有效成分主要有生物碱、三萜类化合物和黄酮类化合物等。1972年我国科技工作者首先报道了从该植物中分离的石杉碱甲具有药理作用，治疗老年痴呆症疗效显著。目前石杉碱甲在美国已经进入三期临床研究，在我国也已获批上市并进入四期临床。由于所含石杉碱甲具有的显著药理作用带来了巨大的市场效益，千层塔天然提取物在世界市场上的交易价格高达50万美元/kg，被誉为“植物的黄金”。
在巨大的经济利益驱使下，野生千层塔被人为大量采掘和破坏，致使该资源处于濒临灭绝的状态。千层塔生长缓慢，而且野生千层塔以孢子繁殖为主，孢子萌发周期长，地下生配子体需6～15年才能成熟。近20多年来，石杉碱甲的合成研究一直是有机合成化学家和药物学家的热点课题，综观目前为止所报道的各种合成方法，均具有一定的局限性，很难以较低成本大量合成高光学活性的石杉碱甲。从植物中提取石杉碱甲，依然是目前最有效的方法，但从植物中提取石杉碱甲由于原料有限，远远满足不了市场需求。
因此，研究新的千层塔组织培养技术以及生物碱的提取技术，具有重要意义。
发明内容
基于上述原因，申请人经过多次创造性研究，得到一种千层塔的水培养殖方法以及生态提取石杉碱甲的方法，该技术以壮苗培养基以及营养液为基础，将幼苗接种到壮苗生根培养基中，得到可栽培千层塔幼植株，千层塔幼苗放入营养液中，获得千层塔植株，以植株为原料，采用去离子进行培养后，加放入培养液中，循环几次后，在获得石杉碱甲的同时，获得可栽培植株；本发明的水养殖方法：采用新鲜的车前子汁以及研磨过的苔藓，用于培养基中，营养液采用三七汁、橘皮苷、桑色素以及其他物质，用于强壮植株，研究表明，本发明的千层塔水养殖方法获得千层塔植株生长周期短，进一步以植株为生态原料，获得生物碱，同时千层塔植株能继续生态提取。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种千层塔水培养殖方法，水培养殖方法为：
(1)取千层塔苗，将苗转接到壮苗生根培养基中，光照至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，培养45-65天，得到千层塔幼植株；
(2)取千层塔幼植株放置在营养液中，温度20-30℃，光照至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，120-150天，得到千层塔植株。
其中壮苗生根培养基为：
1/2MS，NAA5-10mg/L，研磨过的泥炭藓150-200g/L，车前子汁4-6g/L，蔗糖40-50g/L，活性炭5-10g/L，琼脂20-30g/L。
其中营养液为：
去离子水，麦芽糖20-40g/L、蔗糖15-25g/L、蛋白胨5-15g/L、硫酸镁0.5-2g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、硫酸铵0.5-1.5g/L、三七汁0.5-1.5g/L、橘皮苷0.1-0.3g/L、桑色素0.1-0.3g/L。
千层塔生态提取石杉碱甲方法，取千层塔植株，放入去离子水中，水深5-10cm，水温20-25℃，5-10天后，保留去离子水备用，将千层塔植株再放入营养液，8-12天后，取出千层塔植物放入备用的去离子水中，循环8-10次后，将去离子水浓缩、干燥，获得含有石杉碱甲的提取物；千层塔植株继续生态提取。
本发明所述的“三七汁”为：新鲜三七经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的三七汁。
本发明所述的“车前子汁”为：新鲜茯苓经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的茯苓汁。
本发明所述的“研磨过的泥炭藓”为：取新鲜泥炭藓，用去离子水洗净，采用研磨机研磨得到。
具体实施例
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。
本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。
制备实施例
实施例1
一种千层塔水陪养殖方法，该水培养殖方法为：
(1)取千层塔幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照至2500Lx，光照10小时/天，培养65天，得到千层塔幼植株；
(2)取千层塔幼植株放置在营养液中，温度20℃，光照至2500Lx，光照14小时/天，150天，得到千层塔植株。
其中壮苗生根培养基为：
1/2MS，NAA5mg/L，研磨过的泥炭藓150g/L，车前子汁4g/L，蔗糖40g/L，活性炭5g/L，琼脂20g/L。
其中营养液为：
去离子水，麦芽糖20g/L、蔗糖15g/L、蛋白胨5g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1g/L、硫酸铵0.5g/L、三七汁0.5g/L、橘皮苷0.1g/L、桑色素0.1g/L。
生态提取方法为：取千层塔植株，放入去离子水中，水深5cm，水温20℃，10天后，保留去离子水备用，将千层塔幼植株再放入营养液，12天后，取出千层塔植物放入备用的去离子水中，循环10次后，将去离子水浓缩、干燥，获得含有石杉碱甲的提取物；千层塔植株按照上述生态提取方法继续生态提取。
本发明所述的“三七汁”为：新鲜三七经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的三七汁。
本发明所述的“车前子汁”为：新鲜茯苓经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的茯苓汁。
本发明所述的“研磨过的泥炭藓”为：取新鲜泥炭藓，用去离子水洗净，采用研磨机研磨得到。
实施例2
一种千层塔水陪养殖方法，该水培养殖方法为：
(1)取千层塔幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照至4000Lx，光照14小时/天，培养45天，得到千层塔幼植株；
(2)取千层塔幼植株放置在营养液中，温度30℃，光照至4000Lx，光照10小时/天，150天，得到千层塔植株。
其中壮苗生根培养基为：
1/2MS，NAA10mg/L，研磨过的泥炭藓200g/L，车前子汁6g/L，蔗糖50g/L，活性炭10g/L，琼脂30g/L。
其中营养液为：
去离子水，麦芽糖40g/L、蔗糖25g/L、蛋白胨15g/L、硫酸镁2g/L、磷酸二氢钾3g/L、硫酸铵1.5g/L、三七汁1.5g/L、橘皮苷0.3g/L、桑色素0.3g/L。
生态提取方法为：取千层塔植株，放入去离子水中，水深10cm，水温25℃，5天后，保留去离子水备用，将千层塔植株再放入营养液，8天后，取出千层塔植物放入备用的去离子水中，循环8次后，将去离子水浓缩、干燥，获得含有石杉碱甲的提取物；千层塔植株按照上述生态提取方法继续生态提取。
本发明所述的“三七汁”为：新鲜三七经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的三七汁。
本发明所述的“车前子汁”为：新鲜茯苓经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的茯苓汁。
本发明所述的“研磨过的泥炭藓”为：取新鲜泥炭藓，用去离子水洗净，采用研磨机研磨得到。
实施例3
一种千层塔水培养殖方法，该水培养殖方法为：
(1)取千层塔幼苗转接到壮苗生根培养基中，光照至3500Lx，光照12小时/天，培养55天，得到千层塔幼植株；
(2)取千层塔幼植株放置在营养液中，温度25℃，光照至3500Lx，光照12小时/天，135天，得到千层塔植株。
其中壮苗生根培养基为：
1/2MS，NAA7.5mg/L，研磨过的泥炭藓175g/L，车前子汁5g/L，蔗糖45g/L，活性炭7.5g/L，琼脂25g/L。
其中营养液为：
去离子水，麦芽糖40g/L、蔗糖20g/L、蛋白胨10g/L、硫酸镁1.5g/L、磷酸二氢钾2g/L、硫酸铵1g/L、三七汁1g/L、橘皮苷0.2g/L、桑色素0.2g/L。
生态提取方法为：取千层塔植株，放入去离子水中，水深2.5cm，水温22℃，8天后，保留去离子水备用，将千层塔植株再放入营养液，10天后，取出千层塔植物放入备用的去离子水中，循环9次后，将去离子水浓缩、干燥，获得含有石杉碱甲的提取物；千层塔植株按照上述生态提取方法继续生态提取。
本发明所述的“三七汁”为：新鲜三七经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的三七汁。
本发明所述的“车前子汁”为：新鲜茯苓经过去离子水洗净后，灭菌，采用榨汁机榨取的茯苓汁。
本发明所述的“研磨过的泥炭藓”为：取新鲜泥炭藓，用去离子水洗净，采用研磨机研磨得到。
试验1
去离子水中石杉碱甲检测
【含量测定】照髙效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾2.72g，加水1000ml溶解，用磷酸调节pH值至2.5)-乙腈(86:14)为流动相；检测波长为310nm。理论板数按石杉碱甲峰计算不低于2000。
测定法：取提取物，精密称取干燥物3g采用索氏提取法，加乙醇100ml，加热回流提取4h，过滤，残渣加乙醇100ml置50mL烧杯中-加20mL乙醇-置于超声细胞粉碎机500w处提取30min，合并提取液-用离心机离心除杂，用旋转蒸发器回收乙醇液，提取液回收至干，得到干燥物2。精密称定干燥物2，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每lml中约含40μg的溶液，作为供试品溶液，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图；另取石杉碱甲对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
试验结果：见表1。
表1不同实施例去离子水中石杉碱甲含量
试验结论：上述试验表明，本发明所述的水培养殖方法和生态提取方法，具有重要意义。
本发明以壮苗培养基以及营养液为基础，将幼苗接种到壮苗生根培养基中，得到可栽培千层塔幼植株，千层塔幼苗放入营养液中，获得千层塔植株，以植株为原料，采用去离子进行培养后，加放入培养液中，循环几次后，在获得石杉碱甲的同时，获得可栽培植株；本发明的水养殖方法：采用新鲜的车前子汁以及研磨过的苔藓，用于培养基中，营养液采用三七汁、橘皮苷、桑色素以及其他物质，用于强壮植株，研究表明，本发明的千层塔水养殖方法获得千层塔植株生长周期短，进一步以植株为生态原料，获得生物碱，同时千层塔植株能继续生态提取。

Claims (4)

1.一种千层塔水培养殖方法，其特征在于：该水培养殖方法为：
(1)取千层塔苗，将苗转接到壮苗生根培养基中，光照至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，培养45-65天，得到千层塔幼植株；
(2)取千层塔幼植株放置在营养液中，温度20-30℃，光照至2500-4000Lx，光照10-14小时/天，120-150天，得到千层塔植株。
2.根据权利要求1所述的一种千层塔水培养殖方法，其中壮苗生根培养基为：
1/2MS，NAA5-10mg/L，研磨过的泥炭藓150-200g/L，车前子汁4-6g/L，蔗糖40-50g/L，活性炭5-10g/L，琼脂20-30g/L。
3.根据权利要求1所述的一种千层塔水培养殖方法，其中营养液为：
去离子水，麦芽糖20-40g/L、蔗糖15-25g/L、蛋白胨5-15g/L、硫酸镁0.5-2g/L、磷酸二氢钾1-3g/L、硫酸铵0.5-1.5g/L、三七汁0.5-1.5g/L、橘皮苷0.1-0.3g/L、桑色素0.1-0.3g/L。
4.根据权利要求1或4所述的一种千层塔水培生长方法，其特征在于：千层塔生态提取石杉碱甲方法，取千层塔植株，放入去离子水中，水深5-10cm，水温20-25℃，5-10天后，保留去离子水备用，将千层塔植株再放入营养液，8-12天后，取出千层塔植物放入备用的去离子水中，循环8-10次后，将去离子水浓缩、干燥，获得含有石杉碱甲的提取物；千层塔植株继续生态提取。
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