CN100531559C - 一种人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种在人工栽培龙血树或野生龙血树上利用外源化学物质诱导生产血竭的方法，它是在三年生以上的龙血树上，在二年生或二年生以上的枝干中间钻孔并注入诱导物质，并在枝干四周纵切纵沟，然后用脱脂棉吸湿诱导物质后填充至纵沟里，再用透明的塑料薄膜或保鲜袋将整条枝干抱扎封口，待整条枝干全部变红产生血竭后将枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取得到血竭。本发明所提供的利用化学物质诱导龙血树生产血竭的方法，工艺简单，操作方便，诱导效果显著，可极大地缩短血竭生产的周期，实用于大规模标准化商品化生产，对龙血树资源的保护、开发和利用提供有效的新途径，具有重要的经济、社会和生态效益。

Description

一种人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法

技术领域

本发明涉及一种外源化学物质诱导龙血树产生血竭的方法，尤其涉及一种利用外源化学物质诱导人工栽培龙血树生产血竭的方法。

背景技术

血竭是一种名贵而常用的传统中药，具有止血、活血、消炎、定痛和生肌的功效。现代药理学研究表明：血竭具有改善机体微循环，调整机体新陈代谢，提高机体免疫功能等作用，因而在临床上得到广泛的应用。血竭主要来源于两类植物：一类是百合科植物剑叶龙血树属植物含脂木质部中提取而得的树脂(称国产血竭，亦称龙血竭)，实际上也主要依靠从东南亚进口；另一类是棕榈科黄藤属藤本植物麒麟竭(DaemonoropsdracoBl.)及同属他种植物果实中溶出或分泌的红色树脂(称进口血竭)。我国中医应用血竭的历史有上千年，但长期以来，我国的血竭原料仍然依赖于进口。

龙血树属植物，全世界有150种左右，分布于亚洲和非洲的热带与亚热带地区。我国原产有5种，主要分布在海南、云南西双版纳、广西、广东等地。龙血树生长缓慢，在植物界中它的生命期最长，可达八千年，因此被植物学家们誉之为“植物寿星”。龙血树不仅具有重要的观赏价值，可做室内观赏盆景，又可做公共场所的重要点缀观赏植物，它还是提炼名贵中药——“血竭”的重要原材料。如龙血树属中的剑叶龙血树、海南龙血树等是提炼血竭的原料，其经济价值极高。已有的研究表明，国产血竭是龙血树树干受伤后(如机械损伤、昆虫蛀洞等)由于禾谷镰刀菌(红色)等真菌的侵入，龙血树植物本身产生一种防卫反应，而形成的防卫素即称为血竭。通常，从龙血树上获取的血竭亦称龙血竭。

龙血竭的获取，目前有三种方法：

1、从野生龙血树上取其自然干枯的树杆或者枝条，再用其提炼血竭。野生龙血树中血竭的形成是其在受伤后由于感染了禾谷镰刀菌等真菌而形成的，其形成的过程比较缓慢，一般需要上百年的积累才能进行砍伐，且因不断的砍伐还会导致资源的枯竭。目前，周边东南亚国家的龙血树野生资源已经枯竭，我国的野生龙血树资源也已枯竭，上世纪八十年代我国就将龙血树列为国家III级保护的珍稀濒危保护植物。

2、利用龙血树在组织培养的过程中，通过添加外源诱导物质于增殖培养基中使幼苗在切割部位产生血竭并分泌到培养基中，然后直接将培养基烘干，用甲醇提取，即可得到血竭。

3、在野生剑叶龙血树活体枝条上开槽或钻孔，然后将从龙血树上分离、培养、提取的菌株悬浮液注入其中，并用塑料膜密闭覆盖，处理6～12个月后，将处理过的剑叶龙血树枝条锯下来，经干燥、粉碎后用乙醇提取而得。该法使用的诱导物质属于微生物菌种，且适用于野生剑叶龙血树，但目前野生大面积连片的龙血树资源已经枯竭。

发明内容

本发明的目的是提供一种在人工栽培龙血树或野生龙血树上利用外源化学物质诱导生产血竭的方法。

本发明所提出的血竭生产方法，是利用人工栽培或野生的龙血树，对三年龄以上的树体通过截除其生长不到二年的嫩枝干后，在二年生或二年生以上的枝干中间钻孔注射外源化学诱导物质，同时在枝干的四周进行纵切3—8条纵沟，然后用脱脂棉吸湿外源化学诱导物质后填充至纵沟里，再用透明的塑料薄膜或保鲜袋抱扎，两头封口。1个月后经诱导的枝干开始产生红色的血竭，5—10个月即可将该枝干截下，干燥、粉碎后用甲醇提取血竭。整个过程包括：龙血树的人工栽培过程、血竭的诱导过程以及血竭的提取过程。

所述龙血树的人工栽培过程是：将龙血树幼苗按株行距1—2米×2—3米规格种植在田间，当龙血树生长至高45—55厘米时对其进行截顶分枝，并在每个截顶的枝条上选留2—3条分枝；待分枝生长至长45—55厘米时再对其进行截顶次分枝，在每条分枝上选留2—3条二级分枝，依次类推进行，当第三级分枝长出后可不再对其进行截顶，让其自然生长。所述龙血树幼苗是种子苗、扦插苗或组培苗。

所述血竭的诱导过程是：在三年生以上人工栽培的龙血树上将二年生以下的枝条截出，在二年生或二年生以上的枝干中间钻孔，孔深40厘米或深至分枝部位，再往孔内注射诱导物质，并用脱脂棉封口；再在该枝干的四周纵切3—8条宽1厘米、深至木质部、长40厘米或至分枝部位的纵沟，并用脱脂棉吸湿诱导物质后填充至纵沟里，然后再用透明的塑料薄膜或保鲜袋进行抱扎，两头封口。1个月后诱导的枝干开始产生红色的血竭，5—10个月后所处理的枝条整个木质部都充满了血脂，即全部变成红色，此时可将其切下进行血竭的提取。所述诱导物质是6-BA。

所述血竭的提取过程是：将已诱导产生血脂的枝干截取，干燥粉碎后，用甲醇提取，即得到血竭。

本发明所述血竭的诱导过程也可以选择在野生的龙血树上进行。本发明所提供的在人工栽培龙血树或野生龙血树上利用外源化学物质人工诱导生产血竭的方法，工艺简单，操作方便，诱导效果显著，可极大地缩短血竭生产的周期，能很好地解决因龙血树资源匮乏而不能大量生产血竭的问题，可使再生资源得到高效和可持续发展，所体现的经济效益、社会效益和生态效益均非常显著。

具体实施方式

下面结合实例对本发明进行详细说明。

本发明所涉及的在人工栽培龙血树或野生龙血树上，通过外源化学物质诱导生产血竭的方法，包括龙血树的人工栽培过程、血竭的诱导过程以及血竭的提取过程。

1、龙血树的人工栽培过程：选地：选水源方便，土层深厚，土壤肥沃的地块；土地整理：先对土地进行两犁两耙，再按株行距1—2米×2—3米的规格挖穴，穴的规格为口宽0.4米×底宽0.4米×深0.4米；基肥：每穴施入猪牛粪10kg，过磷酸钙0.25kg，复合肥0.1kg，尿素0.05kg；苗木规格：20—30厘米高的龙血树种子苗、或扦插苗或组培苗；种植：3—8月为最佳种植季节，植后淋透水；栽培管理：种植后每年施追肥3—4次，每次0.1—0.2kg复合肥；树身管理：生长至高45—55厘米时对其进行截顶分枝，并在每个截顶的枝条上选留2—3条分枝；待分枝生长至长45—55厘米时再对其进行截顶次分枝，同样再在每条分枝上选留2—3条二级分枝，依次类推进行，当第三级分枝长出后可不再对其进行截顶，让其自然生长。

2、血竭的诱导过程：在三年生以上人工栽培的龙血树上将二年生以下的枝条截出，在二年生或二年生以上的枝干中间钻孔，孔径1—2厘米，孔深40厘米或至分枝部位，再往孔内注射诱导物质至满，用脱脂棉堵塞孔口；在枝干的四周纵切3—8条宽1厘米、深至木质部、长40厘米或至分枝部位的纵沟，用脱脂棉吸湿诱导物质后填充至纵沟里，或用脱脂棉填充在纵沟里再充分注射诱导物质，最后再用透明的塑料薄膜或保鲜袋把整条枝干抱扎，两头封口。约1个月后诱导的枝干开始产生血竭，5—10月该枝干木质部全部变为红色，可用于提取血竭。所述诱导物质是0.5-10.0mg/L 6-BA。

3、血竭的提取过程：将已诱导产生血竭的枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取，即得到血竭。所述用甲醇提取血竭的过程是用分析纯甲醇溶解粉碎物，之后经过滤并弃其残渣，所得滤液用石油醚萃取，静置后分层；待甲醇层回收溶剂至小体积后再加入蒸馏水，使甲醇浓度达到28—35％，接着再进行过滤得到滤液和滤渣；将滤液于Diaion树脂上层析，再用蒸馏水洗脱除去寡糖，然后又用甲醇洗脱，回收甲醇洗脱液后用SephadexLH-20层析，再以45—55％甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到若干个流分；将所得流分用MCIgel柱或SephadexLH-20层析纯化，所得化合物即为血竭的有效成分；将滤渣先以石油醚-丙酮的混合溶液为洗脱剂用200～300目硅胶柱层析，获得若干流分段，再经SephadexLH-20柱层析，再用MCIgel柱分别纯化，所得化合物即为血竭的有效成分。所述石油醚-丙酮混合溶液中石油醚与丙酮的比例为5∶3。

本发明所述血竭的诱导过程可以选择在野生的龙血树上进行。

Claims (4)

1、一种人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法，其特征在于包括龙血树的人工栽培过程、血竭的诱导过程以及血竭的提取过程：

1)、所述龙血树的人工栽培过程是按株行距1—2米×2—3米的规格种植龙血树幼苗，待苗木生长至高45—55厘米时进行截顶分枝，并在每个截顶的枝条上选留2—3条分枝；待分枝生长至长45—55厘米时再进行截顶次分枝，每条分枝选留2—3条二级分枝，依次类推到第三级分枝时可不再截顶，让其自然生长；

2)、所述血竭的诱导过程是在三年生以上人工栽培的龙血树上将二年生以下的枝条截出，在二年生或二年生以上的枝干中间钻孔，孔径1—2厘米，孔深40厘米或至分枝部位，再往孔内注射诱导物质至满，用脱脂棉堵塞孔口；在枝干的四周纵切3—8条宽1厘米、深至木质部、长40厘米或至分枝部位的纵沟，用脱脂棉吸湿诱导物质后填充至纵沟里，最后再用透明的塑料薄膜或保鲜袋把整条枝干抱扎，两头封口，待枝干木质部全部变为红色，用于提取血竭；所述诱导物质是0.5-10.0mg/L6-BA；

3)、所述血竭的提取过程是将已诱导产生血竭的枝干截取，干燥、粉碎后用甲醇提取，即得到血竭；所述用甲醇提取血竭的过程是用分析纯甲醇溶解粉碎物，之后经过滤并弃其残渣，所得滤液用石油醚萃取，静置后分层；待甲醇层回收溶剂至小体积后再加入蒸馏水，使甲醇浓度达到28—35％，接着再进行过滤得到滤液和滤渣；将滤液于Diaion树脂上层析，再用蒸馏水洗脱除去寡糖，然后又用甲醇洗脱，回收甲醇洗脱液后用SephadexLH-20层析，再以45—55％甲醇为洗脱剂进行洗脱，得到若干个流分；将所得流分用MCIgel柱或SephadexLH-20层析纯化，所得化合物即为血竭的有效成分；将滤渣先以石油醚-丙酮的混合溶液为洗脱剂用200～300目硅胶柱层析，获得若干流分段，再经SephadexLH-20柱层析，再用MCIgel柱分别纯化，所得化合物即为血竭的有效成分；所述石油醚-丙酮混合溶液中石油醚与丙酮的比例为5∶3。

2、根据权利要求1所述的人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法，其特征在于：所述龙血树幼苗是种子苗、扦插苗或组培苗。

3、根据权利要求1所述的人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法，其特征在于：所述血竭的诱导过程是在野生的龙血树上进行。

4、根据权利要求1所述的人工栽培龙血树诱导生产血竭的方法，其特征在于：在血竭的诱导过程中纵沟的埋填方式是将脱脂棉填充在纵沟里再充分注射诱导物质。