CN109123281A - 一种人参皂苷饮液的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种人参皂苷饮液的制备方法，包括以下步骤：取新鲜的人参根际土壤为原料，过筛，加入水振荡，静置，取上清液稀释后，接种至液体培养基中恒温培养，九轮筛选，再加入特殊培养基中，恒温富集培养，得到酵母菌和乳杆菌的混合物；将人参洗净切段，加入无菌水，接种酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质，固态发酵，得到人参生物发酵剂；将人参生物发酵剂研磨后，加入甲醇，密封加热提取，过滤，取滤渣再加入甲醇，密封加热提取，将两次滤液合并后，经脱脂萃取，得到人参皂苷混合液；将人参皂苷混合液去除溶剂，喷雾干燥后，形成人参皂苷颗粒，将人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，超声分散处理，得到益生元基人参皂苷饮液。
Description
技术领域
本发明属于人参皂苷饮液制备技术领域，具体涉及一种人参皂苷饮液的制备方法。
背景技术
人参为多年生草本植物，是五加科人参属植物的干燥根，人参性平，味甘，微苦，具有滋补强壮、补脾益肺、安神益智、生津止渴等功效，归脾、肺经、心经。人参既可以食用补虚，又可以药用治病，人参中的主要活性成分为人参皂苷和人参多糖，人参皂苷具有抗肿瘤、抗癌、抗炎、抗疲劳、抗氧化、提高免疫力等多种功效，人参多糖是人参中提纯的高分子酸性多糖，也具有调节人体免疫力、抗肿瘤等功效。目前，人参一直作为食品应用，可作为添加剂加入饮料、饼干、糖、茶、蜜片等多种制品出售。
人参的食用及使用形式大致分为 3种，第一种是直接食用，第二种是人参提取液，第三种是人参发酵液，其中，人参发酵液是利用乳酸菌和酵母菌等微生物发酵而得，在体外制备的可供人体直接吸收利用的制剂。中国专利CN 107484935A公开的一种复合乳酸菌发酵人参果汁饮料及其制备方法，将成熟度好、肉质后、无伤无病变的人参果洗净、切丁后，在维C中浸泡后，打浆过滤，得到人参果汁，将嗜热链球菌和保加利亚乳酸菌分别接种于灭菌的脱脂乳中，恒温培养传代3-4次，取5h内凝乳的酸奶备用，将植物乳酸菌接种于MRS液体培养基中恒温培养传代2-3次，备用，用浓度梯度法对乳酸菌进行驯化培养后，接种至人参果汁和脱脂乳混合培养基中逐级培养，驯化，得到母发酵剂。驯化后的母发酵剂进行菌种筛选，接入人参果汁中恒温发酵，扩大培养，得到发酵剂，然后将已灭菌的蔗糖、柠檬酸、海藻酸钠、羧甲基纤维素钠和扩大培养的发酵剂接入过滤灭菌好的人参果汁中，恒温发酵，均质处理，无菌灌装，得到复合乳酸菌发酵人参果汁饮料。该方法采用菌种复合发酵，发酵掐尖多种菌种有协调共生机制，在人参果汁喝脱脂乳混合培养，对人参果汁的适应性好，降低了人参果的营养流失，大大提高了人参果汁的人体吸收率，提高了人参果汁的口感。中国专利CN 105296313A公开的一种复合发酵型人参保健饮料及其生产工艺，将枸杞、山楂、淮山药加入水中，浸泡打浆，经果胶酶酶解，将人参、淫羊藿、鹿茸、甜叶菊、菟丝子、韭菜子、党参、肉苁蓉、玛卡、甘草粉碎过筛，加水，超声波辅助浸提，然后将两者混合后加入干酵母，恒温发酵，过滤，陈酿，复配，微孔膜过滤，得到人参保健饮料。该方法将多种原料与人参复配，经酵母发酵生产得到含多糖、多肽、多种氨基酸、维生素及矿物质的人参保健饮料。由上述现有技术可知，通过复合原料或者复合微生物都可以提高人参饮料的保健性和口味，但是目前微生物发酵所选用的微生物都其他原料提取的，对人参的实用性有限。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种人参皂苷饮液的制备方法，是以人参根际土壤为原料，经培养、筛选、纯化、分离得到酵母菌和乳杆菌的混合物，然后将酵母菌和乳杆菌的混合物接种于切断的人参中，固态培养，得到人参生物发酵剂，将提纯的人参皂苷溶液喷雾干燥后加入益生元溶液中，得到益生元基人参皂苷饮液。
为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：
一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）取新鲜的人参根际土壤为原料，过筛，加入无菌水中进行振荡，静置，取上清液加无菌水稀释后，接种至液体培养基中，恒温培养，九轮筛选，得到人参根际土壤的混合菌剂；
（2）将步骤（1）制备的人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中进行富集培养，得到酵母菌和乳杆菌的混合物；
（3）将人参放置于食盐水溶液中浸泡后，取出，切段，加入无菌水，然后接种步骤（2）制备的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质，固态发酵，得到人参生物发酵剂；
（4）将步骤（3）制备的人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，密封加热提取，过滤，取滤渣再加入甲醇，密封加热提取，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到人参皂苷混合液；
（5）将步骤（4）制备的人参皂苷混合液去除溶剂，喷雾干燥后，形成人参皂苷颗粒，将人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，超声分散处理，得到益生元基人参皂苷饮液。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（1）中，人参根际土壤为5-20年生人参根际5-20cm处的土壤，振荡的频率为200-250r/min，时间为10-15min，静置的时间为20-25min。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（1）中，九轮筛选的工艺为：取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在25-28℃下，以100-150r/min的速率摇床培养3-5d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28-30℃下，以150-200r/min的速率摇床培养3-5d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养3-5d，重复上述步骤3次。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（2）中，富集培养的工艺为：以25-28℃为起始温度，一边以1-1.5℃/min的速度降温至23-25℃，一边以振荡频率为250-300r/min进行振荡，保温处理1-3h，然后一边以0.5-1℃/min的速度升温至30-32℃，一边以振荡频率为100-200r/min进行振荡，保温处理2-4h。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（3）中，氯化钠水溶液的含量为0.9-1.5%，浸泡的时间为3-5min。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（3）中，切段的长度为5-10mm，酵母菌和乳杆菌的混合物的接种量为3-5wt%，营养物质为蜂蜜，人参与蜂蜜的质量比为1:0.2-0.3。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（3）中，固态发酵的培养基的含水量为30-40%，温度为30-32℃，时间为8-12d。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（4）中，人参皂苷混合液中含量为13-16mg/mL。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（5）中，喷雾干燥的工艺为：在0.15-0.5MPa的压力下，以8000-10000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以50-55m/s的速度通过60-80℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为40-70wt%的人参皂苷颗粒。
作为上述技术方案的优选，所述步骤（5）中，人参皂苷颗粒与益生元溶液的用料比为1mg:3-10mL。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明制备的益生元基人参皂苷饮液主要成分为人参皂苷和益生元，人参中人参皂苷的品种很多，其中二醇型和三醇型人参皂苷占人参皂苷中的种类较多，人参皂苷在人体肠道的代谢途径需要多种肠道微生物的协同作用，肠道中能代谢人参皂苷的微生物越多，人参皂苷发挥的功效就越强，人参皂苷的利用率就越高，将人参皂苷与益生元配合作为饮液，益生元具有增值双歧杆菌和拟杆菌的作用，可以提高人参皂苷在人体中的生物利用率。
（2）本发明制备的益生元基人参皂苷饮液中的人参皂苷是以人参根际土壤为原料，经九轮驯化和富集培养得到活力强的酵母菌和乳酸菌作为发酵菌剂，对人参的作用力强，利用固体发酵，提纯而成，不仅制备人参皂苷液中人参皂苷的含量高，纯度好，多为二醇型和三醇型人参皂苷，而且利用人参相关益生菌先发酵人参，不仅有利于提高人参的作用效果，还有助于降低食品安全风险，有益于降低生产成本，促进产业发展。
具体实施方式
下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例以及说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例1：
（1）取新鲜的5年生人参根际5cm处的土壤为原料，过50目筛，加入无菌水，以200r/min的转速振荡10min，静置20min，取上清液加无菌水稀释3倍后，接种至液体培养基中，在30℃下恒温培养1d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在25℃下，以100r/min的速率摇床培养3d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28℃下，以150r/min的速率摇床培养3d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养3d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以25℃为起始温度，一边以1℃/min的速度降温至23℃，一边以振荡频率为250r/min进行振荡，保温处理1h，然后以0.5℃/min的速度升温至30℃一边以振荡频率为100r/min进行振荡，保温处理2h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于0.9%食盐水溶液中浸泡3min后，取出，切段至5mm，加入无菌水，然后接种3wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.2，固态发酵的培养基的含水量为30%，在30℃下固态发酵8d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在40℃下密封加热提取1h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在40℃下密封加热提取1h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到13mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.15MPa的压力下，以8000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以50m/s的速度通过60℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为40wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:3mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1000W的功率超声分散处理5min，得到益生元基人参皂苷饮液。
实施例2：
（1）取新鲜的20年生人参根际20cm处的土壤为原料，过100目筛，加入无菌水，以250r/min的转速振荡15min，静置25min，取上清液加无菌水稀释5倍后，接种至液体培养基中，在32℃下恒温培养5d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28℃下，以150r/min的速率摇床培养5d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以200r/min的速率摇床培养5d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养5d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以28℃为起始温度，一边以1.5℃/min的速度降温至25℃，一边以振荡频率为300r/min进行振荡，保温处理3h，然后以1℃/min的速度升温至32℃，一边以振荡频率为200r/min进行振荡，保温处理4h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于1.5%食盐水溶液中浸泡5min后，取出，切段至10mm，加入无菌水，然后接种5wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.3，固态发酵的培养基的含水量为40%，在32℃下固态发酵12d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在45℃下密封加热提取2h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在45℃下密封加热提取2h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到16mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.5MPa的压力下，以10000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以55m/s的速度通过80℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为70wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:10mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1500W的功率超声分散处理20min，得到益生元基人参皂苷饮液。
实施例3：
（1）取新鲜的10年生人参根际10cm处的土壤为原料，过80目筛，加入无菌水，以230r/min的转速振荡14min，静置22min，取上清液加无菌水稀释4倍后，接种至液体培养基中，在31℃下恒温培养2d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在27℃下，以130r/min的速率摇床培养4d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28-30℃下，以150-200r/min的速率摇床培养3-5d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养4d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以28℃为起始温度，一边以1.2℃/min的速度降温至24℃，一边以振荡频率为280r/min进行振荡，保温处理1-3h，然后以0.7℃/min的速度升温至31℃一边以振荡频率为150r/min进行振荡，保温处理2-4h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于1.2%食盐水溶液中浸泡4min后，取出，切段至7mm，加入无菌水，然后接种3.5wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.25，固态发酵的培养基的含水量为36%，在31℃下固态发酵10d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在43℃下密封加热提取1.3h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在44℃下密封加热提取1.5h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到15mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.4MPa的压力下，以9000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以54m/s的速度通过75℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为50wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:8mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1300W的功率超声分散处理10min，得到益生元基人参皂苷饮液。
实施例4：
（1）取新鲜的15年生人参根际15cm处的土壤为原料，过60目筛，加入无菌水，以220r/min的转速振荡14min，静置23min，取上清液加无菌水稀释4倍后，接种至液体培养基中，在32℃下恒温培养4d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在25-28℃下，以100-150r/min的速率摇床培养4.5d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在29℃下，以190r/min的速率摇床培养4d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养4.5d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以27℃为起始温度，一边以1.3℃/min的速度降温至24℃，一边以振荡频率为290r/min进行振荡，保温处理1-3h，然后以0.9℃/min的速度升温至31℃一边以振荡频率为190r/min进行振荡，保温处理3.5h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于1.4%食盐水溶液中浸泡4min后，取出，切段至8mm，加入无菌水，然后接种4.5wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.27，固态发酵的培养基的含水量为38%，在31℃下固态发酵9d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在44℃下密封加热提取1h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在43℃下密封加热提取1h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到15mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.35MPa的压力下，以8500r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以53m/s的速度通过75℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为65wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:8mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1350W的功率超声分散处理10min，得到益生元基人参皂苷饮液。
实施例5：
（1）取新鲜的5年生人参根际20cm处的土壤为原料，过50目筛，加入无菌水，以250r/min的转速振荡10min，静置25min，取上清液加无菌水稀释3倍后，接种至液体培养基中，在32℃下恒温培养1d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28℃下，以100r/min的速率摇床培养5d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28℃下，以200r/min的速率摇床培养3d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养5d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以25℃为起始温度，一边以1.5℃/min的速度降温至23℃，一边以振荡频率为300r/min进行振荡，保温处理1h，然后以1℃/min的速度升温至30℃一边以振荡频率为200r/min进行振荡，保温处理2h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于1.5%食盐水溶液中浸泡3min后，取出，切段至10mm，加入无菌水，然后接种3wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.3，固态发酵的培养基的含水量为30%，在32℃下固态发酵8d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在45℃下密封加热提取1h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在45℃下密封加热提取1h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到16mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.15MPa的压力下，以10000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以50m/s的速度通过80℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为40wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:10mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1000W的功率超声分散处理20min，得到益生元基人参皂苷饮液。
实施例6：
（1）取新鲜的20年生人参根际5cm处的土壤为原料，过100目筛，加入无菌水，以200r/min的转速振荡15min，静置20min，取上清液加无菌水稀释5倍后，接种至液体培养基中，在30℃下恒温培养5d，取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在25℃下，以150r/min的速率摇床培养3d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以150r/min的速率摇床培养5d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养3d，重复上述步骤3次，得到人参根际土壤的混合菌剂。
（2）将人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中,以28℃为起始温度，一边以1℃/min的速度降温至25℃，一边以振荡频率为250r/min进行振荡，保温处理3h，然后以0.5℃/min的速度升温至32℃，一边以振荡频率为100r/min进行振荡，保温处理4h，得到酵母菌和乳杆菌的混合物。
（3）将人参浸泡于0.9%食盐水溶液中浸泡5min后，取出，切段至5mm，加入无菌水，然后接种5wt%的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质蜂蜜，其中人参与蜂蜜的质量比为1:0.2，固态发酵的培养基的含水量为40%，在30℃下固态发酵12d，得到人参生物发酵剂。
（4）将人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，在40℃下密封加热提取2h，过滤，取滤渣再加入甲醇，在40℃下密封加热提取2h，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到13mg/mL的人参皂苷混合液。
（5）将人参皂苷混合液去除溶剂，在0.5MPa的压力下，以8000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以55m/s的速度通过60℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为70wt%的人参皂苷颗粒，将用料比为1mg:3mL的人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，以1500W的功率超声分散处理5min，得到益生元基人参皂苷饮液。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）取新鲜的人参根际土壤为原料，过筛，加入无菌水中进行振荡，静置，取上清液加无菌水稀释后，接种至液体培养基中，恒温培养，九轮筛选，得到人参根际土壤的混合菌剂；
（2）将步骤（1）制备的人参根际土壤的混合菌剂加入特殊培养基中，置于恒温培养箱中进行富集培养，得到酵母菌和乳杆菌的混合物；
（3）将人参放置于食盐水溶液中浸泡后，取出，切段，加入无菌水，然后接种步骤（2）制备的酵母菌和乳杆菌的混合物和营养物质，固态发酵，得到人参生物发酵剂；
（4）将步骤（3）制备的人参生物发酵剂进一步研磨后，加入甲醇，密封加热提取，过滤，取滤渣再加入甲醇，密封加热提取，将两次滤液合并后，经乙醚脱脂和正丁醇溶液萃取，得到人参皂苷混合液；
（5）将步骤（4）制备的人参皂苷混合液去除溶剂，喷雾干燥后，形成人参皂苷颗粒，将人参皂苷颗粒加入益生元溶液中，超声分散处理，得到益生元基人参皂苷饮液。
2.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，人参根际土壤为5-20年生人参根际5-20cm处的土壤，振荡的频率为200-250r/min，时间为10-15min，静置的时间为20-25min。
3.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中，九轮筛选的工艺为：取上清液接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在25-28℃下，以100-150r/min的速率摇床培养3-5d，得到一次培养混合菌液，吸取一次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在28-30℃下，以150-200r/min的速率摇床培养3-5d，得到二次培养混合菌液，吸取二次培养混合菌液，加入无菌水中稀释，根据酵母菌和乳杆菌的特征，挑选具有明显性状差异的菌落再接种于YEPD液体培养基中，加入氯霉素液体，先在30℃下，以250r/min的速率摇床培养3-5d，重复上述步骤3次。
4.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，富集培养的工艺为：以25-28℃为起始温度，一边以1-1.5℃/min的速度降温至23-25℃，一边以振荡频率为250-300r/min进行振荡，保温处理1-3h，然后一边以0.5-1℃/min的速度升温至30-32℃，一边以振荡频率为100-200r/min进行振荡，保温处理2-4h。
5.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，氯化钠水溶液的含量为0.9-1.5%，浸泡的时间为3-5min。
6.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，切段的长度为5-10mm，酵母菌和乳杆菌的混合物的接种量为3-5wt%，营养物质为蜂蜜，人参与蜂蜜的质量比为1:0.2-0.3。
7.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，固态发酵的培养基的含水量为30-40%，温度为30-32℃，时间为8-12d。
8.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，人参皂苷混合液中含量为13-16mg/mL。
9.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）中，喷雾干燥的工艺为：在0.15-0.5MPa的压力下，以8000-10000r/min转速把人参皂苷混合液雾化成微小雾滴，微小雾滴以50-55m/s的速度通过60-80℃的干燥区，得到粒径小于50μm的含量为40-70wt%的人参皂苷颗粒。
10.根据权利要求1所述的一种人参皂苷饮液的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）中，人参皂苷颗粒与益生元溶液的用料比为1mg:3-10mL。
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