CN109010618B - 一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及天然药物化学技术领域，具体公开了一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及制备方法和应用。所述的中药组合物由包含如下重量份的中药制成：人参1～5份；黄芪1～5份；铁皮石斛1～3份；蒲公英1～3份。该组合物优选地制备方法包含如下步骤：(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取1～3次，浓缩乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物。所述的中药组合物所述是通过调节肠道菌群来增强免疫力，从而预防肿瘤的发生；实验证明经本发明所述方法制备得到的中药组合物具有增强免疫和抗肿瘤作用；因此，采用本发明所的中药组合物可以用于制备调节肠道菌群以及具有增强免疫和/或抗肿瘤作用的药物或保健品。

Description

一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及制备方法和应用
技术领域
本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及制备方法和应用。
背景技术
科学家的许多体内或体外试验指出，益生菌会通过活化巨噬细胞及淋巴细胞而强化免疫球蛋白(IgA)的浓度，並产生γ-干扰素(interferon)刺激免疫系统抑制肿瘤形成。益生菌还可通过其细胞壁上的多肽或多糖成分吸附肠内有害致癌物质，使其失去活性而具有防癌抗癌的作用。最新科学研究成果表明，天然活性成分能通过改变人体内的菌群来增强免疫力，从而预防肿瘤的发生。
肿瘤是临床上的常见病。此类疾病是严重威胁人类身体健康的重大疾病，同时也是致死率最高的疾病。我国癌症死亡人数超过全球20％，且成低龄化趋势，因此肿瘤防治形势异常严峻。目前治疗肿瘤手段主要有放疗、化疗和手术。放化疗存在着毒副作用大、不能区分正常细胞和肿瘤细胞等缺点，手术治疗易复发。天然活性成分具有毒副作用小、与人组织相容性好等优点，在抗肿瘤的研究中越来越受到人们的重视。我国天然产物资源丰富，其抗肿瘤成分多而复杂，药理作用广泛，具有多靶点、多环节、多效应等方面特点，从整体进行调节，提高机体自身抗病能力，通过多种机制达到抗肿瘤的作用。
人参是“保元汤”(主要有增强机体免疫等功效)等中医名方的主要药材；黄芪是“补中益气汤”(主要有补中益气、提高免疫等功效)等中医名方的主要药材。文献报道人参、黄芪均有增强免疫力、缓解体力疲劳、调节肠道菌群、抗肿瘤等功效；铁皮石斛有增强免疫力、缓解体力疲劳、抗肿瘤等功效，蒲公英有增强免疫力、调节肠道菌群、抗肿瘤等功效。
虽然现有技术有报道人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英具有增强免疫和抗癌作用，但并未见将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英组合使用的报道。更没有将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英组合后采用何种方法才能获得抗肿瘤有效成分的报道；尤其是采用何种方法才能获得具有显著抗肿瘤作用的有效成分的报道。
发明内容
本发明所要解决的问题是，提供一种具有抗肿瘤作用的中药组合物及制备方法。
本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
一种具有抗肿瘤作用的中药组合物，由包含如下组分的中药制成：人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英。
优选地，所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物，由包含如下重量份的中药制成：
人参1～5份；黄芪1～5份；铁皮石斛1～3份；蒲公英1～3份。
进一步优选地，所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物，由包含如下重量份的中药制成：
人参3～5份；黄芪3～5份；铁皮石斛1～2份；蒲公英1～2份。
上述具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备方法，其包含如下步骤：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取1～3次，浓缩乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物。
优选地，步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为70～95％的乙醇水溶液。
优选地，步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1～3次，每次的提取时间为0.5～1.5h；其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为6～12mL：1g。
优选地，步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：10～20mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的0.5～1.5倍。
优选地，步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：
将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用3～5倍柱体积的体积分数为10～13％的甲醇洗脱除杂，再用4～8倍柱体积的体积分数为16～20％的甲醇洗脱；收集体积分数为16～20％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物。
进一步优选地，步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：
将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4～5倍柱体积的体积分数为12％的甲醇洗脱除杂，再用5～6倍柱体积的体积分数为18％的甲醇洗脱；收集体积分数为18％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物。
上述ODS层析柱是指装有ODS填料的层析柱；ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的20～40倍。
所述的柱体积是指用ODS填料装柱后，从柱的底板到ODS填料沉积表面的体积。
本发明还提供一种上述中药组合物在制备具有增强免疫和/或抗肿瘤作用的药物或保健食品中的应用。
优选地，所述的肿瘤为肝癌、肺癌以或宫颈癌。
有益效果：本发明提供了一种全新组成的中药组合物，所述的中药组合首次以人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英为原料制备得到，又由于原料人参、黄芪均有增强免疫力、缓解体力疲劳、调节肠道菌群、抗肿瘤等功效；铁皮石斛有增强免疫力、缓解体力疲劳、抗肿瘤等功效，蒲公英有增强免疫力、调节肠道菌群、抗肿瘤等功效；因此，本发明所述的中药组合物可以通过调节肠道菌群来增强免疫力，从而预防肿瘤的发生；
进一步地，实施例实验证明通过本发明所述的制备方法制备得到的中药组合物具备增强免疫和抗肿瘤作用；此外，所述的中药组合物通过本发明所述的ODS柱层析方法进一步制备后，富集了大量的抗肿瘤成分，其对肝癌、肺癌以及宫颈癌的抑制作用显著；尤其是对宫颈癌的抑制作用最为明显；同时通过ODS柱层析方法进一步制备后，也富集了大量的增强免疫力的成分，提高免疫能力的效果显著增强。
综上所述，采用本发明所的中药组合物可以用于制备调节肠道菌群以及具有增强免疫和/或抗肿瘤作用的药物或保健品。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
实施例1具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4倍柱体积的体积分数为12％的甲醇洗脱除杂，再用6倍柱体积的体积分数为18％的甲醇洗脱；收集体积分数为18％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；其中ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍。
实施例2具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4倍柱体积的体积分数为13％的甲醇洗脱除杂，再用6倍柱体积的体积分数为20％的甲醇洗脱；收集体积分数为20％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；其中ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍。
实施例3具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用5倍柱体积的体积分数为10％的甲醇洗脱除杂，再用8倍柱体积的体积分数为16％的甲醇洗脱；收集体积分数为16％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；其中ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍。
实施例4具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物即所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，每次的提取时间为1.5h；其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
实施例4与实施例1的区别在于，制备方法不同，实施例4仅仅通过提取得到，不包括实施例1后续的萃取以及ODS柱层析步骤。
实施例5具有抗肿瘤作用的中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物，即所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
实施例5与实施例1的区别在于，制备方法不同，实施例5仅仅通过提取和萃取得到，不包括实施例1后续的ODS柱层析步骤。
对比例1中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4倍柱体积的体积分数为12％的甲醇洗脱，收集体积分数为12％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物；其中ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍。
对比例1与实施例1的区别在于，在ODS柱层析步骤中，对比例1选用的是12％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物；而实施例1则是先用12％的甲醇洗脱除杂，再用18％的甲醇洗脱；收集体积分数为18％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物。
对比例2中药组合物的制备
原料重量份组成：人参4份；黄芪4份；铁皮石斛2份；蒲公英1份。
制备方法：
(1)将人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，合并并浓缩2次萃取得到的乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，提取时间为1.5h，其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4倍柱体积的体积分数为12％的甲醇洗脱除杂，再用6倍柱体积的体积分数为18％的甲醇洗脱除杂；再用6倍柱体积的体积分数为25％的甲醇洗脱；收集体积分数为25％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；其中ODS层析柱中ODS填料的重量用量为乙酸乙酯萃取物重量的30倍。
对比例2与实施例1的区别在于，在ODS柱层析步骤中，对比例2先用12％和10％的甲醇洗脱除杂，再用25％的甲醇洗脱；收集体积分数为25％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物；而实施例1则是先用12％的甲醇洗脱除杂，再用18％的甲醇洗脱；收集体积分数为18％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物。
实施例6中药组合物抗肿瘤活性测试
人体宫颈癌细胞Hela、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL-7404、置于培养基(RPMI1640培养基)中培养，癌细胞以10×103每孔加入96孔板中，在37℃含5％CO2的培养箱中培养24小时后贴壁后吸去原来的培养基。然后空白组再加入含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基；实验组分别加入含有0.01～100μg/mL待测药物的RPMI 1640培养基；继续培养48h后，再加入浓度5mg/mL的MTT，继续培养4h，吸去上清液，加入100μL DMSO，暗处放置10min，利用酶标仪(Sunrise公司)在570nm下测定吸光值，并根据吸光值计算细胞存活情况，每个处理设6个重复孔。细胞存活率(％)＝ΔOD药物处理组/ΔOD空白组×100。再根据剂量效应曲线计算细胞半抑制浓度(IC50)，结果见表1，其中IC50值越小说明其抗肿瘤效果越好。
实验组的药物分别为实施例1～5制备得到的中药组合物以及对比例1和2制备得到的中药组合物。
表1.中药组合物抗肿瘤活性测试结果表
Figure BDA0001808272750000091
从表1数据中可以看出，实施例1～5制备得到的中药组合物具有抗肺癌、肝癌以及宫颈癌的作用。
通过实施例1～3与实施例4～5比较发现，实施例1～3通过ODS柱层析方法制备得到的中药组合物，其对肺癌、肝癌以及宫颈癌细胞的IC50值比实施例4～5仅经过单纯的提取和萃取步骤制备得到的中药组合物的IC50值要大幅降低，这说明采用本发明所述的ODS柱层析方法能够大量富集抗癌成分，其对肺癌、肝癌以及宫颈癌的抗癌能力大幅提升。此外，从IC50值的降低幅度来看，经ODS柱层析方法制备得到的中药组合物，其对宫颈癌细胞的IC50值的降低幅最大，这说明按本发明所述的ODS柱层析方法制备得到的中药组合物对宫颈癌细胞的抗癌效果最显著，要明显强于对肺癌和肝癌的抗癌效果。
通过实施例1～3与对比例1～2的对比可以发现：对比例1在ODS柱层析过程中选用的是12％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物，以及比例2先用12％和18％的甲醇洗脱除杂，再用25％的甲醇洗脱，收集体积分数为25％的甲醇洗脱部位作为所述的中药组合物；二者对肺癌、肝癌以及宫颈癌细胞的IC50值远远大于实施例1～3制备得到中药组合物。这说明在ODS柱层析过程中按本发明所述的方法(即先用3～5倍柱体积的体积分数为10～13％的甲醇洗脱除杂，再用4～8倍柱体积的体积分数为16～20％的甲醇洗脱；收集体积分数为16～20％的甲醇洗脱部位)得到的中药组合物富集得到了大量的抗癌成分，ODS柱层析中其他洗脱部位并不能富集得到抗癌成分。
实施例7中药组合物提高免疫力测试
取体重为体重20±2g的2月龄的昆明种小鼠，雌雄各半，随机分成，8组，每组各20只。分别为实验组1～7和对照组；实验组1～7每天分别灌胃浓度为1mg/mL的实施例1～5以及对比例1和2制备得到的中药组合物，每只灌胃1ml；对照组给予等容积生理盐水，连续灌胃15天。
停药后1小时每只小鼠腹腔注射5％鸡红细胞液0.5ml；注射10小时后将动物脱颈椎处死，仰位固定于鼠板。经腹部消毒后，剪开皮肤，腹腔注入生理盐水2.5ml；接着转动固定板1分钟，然后抽取腹腔洗液1ml，滴涂于载玻片上，每片0.2ml，共2片。将载玻片放在垫有湿纱布的搪瓷盒中，置于37℃孵箱中温育30分钟，取出载玻片，放入生理盐水中漂洗，去除未贴片的细胞。接着再进行晾干，用丙酮：甲醇液(1:1)固定5分钟，再用4％姬姆萨-瑞特氏液染色4分钟，用蒸馏水漂洗，晾干。最后在油镜下每片计巨噬细胞数200个，按下式计算吞噬百分率。其中，吞噬百分率(％)＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100。吞噬百分率越高说明小鼠的免疫力越强，具体结果见表2。
表2.中药组合物提高免疫力测试
组别 测试药品 吞噬百分率(％)
实验组1 实施例1制备得到的中药组合物 68.7±6.5
实验组2 实施例2制备得到的中药组合物 64.1±6.1
实验组3 实施例3制备得到的中药组合物 62.3±6.3
实验组4 实施例4制备得到的中药组合物 41.3±3.9
实验组5 实施例5制备得到的中药组合物 45.8±4.2
实验组6 对比例1制备得到的中药组合物 37.4±3.5
实验组7 对比例2制备得到的中药组合物 36.6±3.7
对照组 生理盐水 35.7±3.2
从表2实施例4和5制备得到的中药组合物的吞噬效果可以看出，本发明所述的醇提取和萃取后得到的中药组合物其吞噬百分率明显高于对照组，这说明本发明所述的中药组合物具有一定的提高免疫能力。此外，从实施例1～3制备得到的中药组合物的吞噬效果可以看出，所述的中药组合物经进一步的ODS柱层析后，其吞噬百分率进一步大幅提高，这说明，按本发明所述的ODS柱层析方法能富集大量的提高免疫力的成分。由对比例1和2制备得到的中药组合物的吞噬效果可以看出，其吞噬效果和对照组差别不大并不具有明显的提高免疫力作用。这说明在其他条件下进行ODS柱层析，并不能富集得到提高免疫力的有效成分。
综上所述，本发明所述的中药组合物具有明显的提高免疫力作用，尤其是在经ODS柱层析富集得到的中药组合物，其提高免疫力的效果尤为显著。因此，本发明所述的中药组合物可以作为提高免疫力的药物和保健品使用。本发明所述的中药组合物提高免疫作用的效果，可能是通过所述的中药组合物改变人体内的菌群来实现的。

Claims (2)

1.一种中药组合物在制备具有增强免疫和/或抗肿瘤作用的药物中的应用；所述的中药组合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将人参4份、黄芪4份、铁皮石斛2份以及蒲公英1份混合后，加乙醇水溶液进行提取，浓缩提取液得醇提取物；
(2)将醇提取物加水混悬，用乙酸乙酯萃取2次，浓缩乙酸乙酯萃取部位，得乙酸乙酯萃取物；
(3)将步骤(2)所述的乙酸乙酯萃取物经ODS柱层析富集有效成分后即得所述的具有抗肿瘤作用的中药组合物；
步骤(1)中所述的乙醇水溶液为体积分数为80％的乙醇水溶液；
步骤(2)中醇提取物与水的用量比为1g：15mL；乙酸乙酯每次萃取过程中乙酸乙酯用量为水的体积用量的1倍；
步骤(3)中所述的ODS柱层析的具体方法为：
将经步骤(2)制备得到的乙酸乙酯萃取物上ODS层析柱，先用4～5倍柱体积的体积分数为10～13％的甲醇洗脱除杂，再用6～8倍柱体积的体积分数为16～20％的甲醇洗脱；收集体积分数为16～20％的甲醇洗脱部位，浓缩干燥即得所述的中药组合物。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述的提取为加热回流提取，提取次数为1次，每次的提取时间为1.5h；其中乙醇水溶液的用量与人参、黄芪、铁皮石斛以及蒲公英总量的用量比为8mL：1g。
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