CN108998488A - 一种活性蜂王浆oco多肽冻干粉及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
王浆蛋白口服进入人体，会在胃肠道被人体胃蛋白酶、胰蛋白酶等酶类降解成小分子多肽而被人体吸收利用，为了更好地促使蜂王浆更易于人体吸收利用，促使蜂王浆快速起效，增强其抗氧化性，本发明在原有蜂王浆冻干粉生产技术基础上，对蜂王浆进行前处理，经过胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对王浆蛋白进行组合酶解，使蜂王浆中复杂的高分子量蛋白质酶解成分子量更小更加均匀的小肽，即纳米活性寡肽胶原(OCO)，使得产品更易于人体吸收，同时抗氧化、抗衰老、增强免疫力的功能更强。因此，本发明方法更加有利发挥蜂王浆的营养功能和保健功能。
Description
技术领域
本发明属于蜂王浆深加工、保健食品和美容化妆品技术领域，涉及一种蜂王浆冻干粉及其制备方法，特别涉及一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉、制备方法及其应用。
背景技术
蜂王浆是哺育蜂咽下腺和上颚腺分泌的，用以饲喂蜂王和1～3曰龄幼虫的浆状物质。蜂王浆富含蛋白质，且具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗菌、抗肿瘤和调节心血管系统等多种生物学功能。蜂王浆研究结果表明，新鲜蜂王浆功效成分的稳定性与蜂王浆营养价值、保健功效是正相关的，蜂王浆功效成分稳定性的强弱反映了蜂王浆质量和营养保健功效的优劣，蜂王浆功效成分的稳定性是王浆质量和营养保健作用的外在表现，是衡量鲜王浆好坏的一种有效的评定方法。然而，蜂王浆是极不稳定的天然产物，如空气对蜂王浆能起到氧化作用；水蒸气对蜂王浆有水解作用；光对蜂王浆犹如催化剂，催化还原其醛、酮基团；贮藏时间的长短和温度的变化更是严重影响了鲜蜂王浆的品质。以上这些因素，容易造成蜂王浆在生产、贮藏过程中品质发生变化，从而导致蜂王浆营养和保健功效的降低，甚至消失。
目前，蜂王浆保鲜技术主要为真空冷冻干燥技术，用冷冻干燥法将鲜蜂王浆进行真空低温干燥处理而制成蜂王浆冻干粉，保质期在常温下可达1～2年。其最大的优点是能最大限度地保留原料原有的色、香、味及营养成分，不含有防腐剂等添加成分，有效地解决了蜂王浆运输和储存问题。但上述生产方法存在以下缺点，蜂王浆中的蛋白质绝大多数为复杂锁链状连接蛋白质，其无法直接被人体吸收，没有充分发挥该产品的营养价值和保健功能；且冻干粉水溶性能不是很好，限制其更广泛的用途。
蜂王浆中蛋白质是最主要成分，是王浆中含量最丰富的重要营养和活性成分。蜂王浆蛋白水溶生化特性分为水溶性蛋白和非水溶性蛋白，其中水溶性蛋白是主要蛋白，被称为王浆主蛋白。这些蛋白质口服进入胃肠道，需要经过消化才能被吸收。Matsui等通过体外实验发现完整的王浆主蛋白对血管紧张素转换酸活性无影响，只有当通过胃蛋白酶、胰岛素和胰凝乳蛋白酶水解之后才表现出抑制活性，表现抗高血压的作用。Bilicova发现蜂王浆中的小分子多肽有刺激人单核细胞增殖的作用，其能剌激昆虫细胞生长，能够刺激鼠科动物的前脂肪细胞转化为成熟脂肪细胞，其效果比胰岛素好几倍，还能对海拉人类子宫癌细胞产生生长抑制作用，具有对昆虫、鼠科动物和人类癌细胞分别有促生长、促分化和抑制生存的作用。用胃蛋白酶、胰蛋白酶或者木瓜蛋白酶酶解鲜王浆，发现酶解产物均具有很强的抗氧化能力。与水提成分和碱提成分相比，低浓度的酶解产物显示出更强的清除超氧阴离子自由基和羟基自由基的能力，说明酶解产物抗氧化能力更强，然而单一酶酶解的产物分子量一般在30KDa以上。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入，人们已逐渐认识到肽营养的重要性。小肽(纳米胶原蛋白或纳米胶原，OCO多肽)，分子量一般在1KDa左右，具有更优异的抗氧化性和生理活性。
目前，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶动物蛋白酶以及木瓜蛋白酶等植物蛋白酶酶解蜂王浆有较多研究，但同时采用动物蛋白酶和植物蛋白酶组合酶解蜂王浆获得OCO多肽产物及其应用等仍未见报道。
发明内容
本发明在蜂王浆冻干粉生产技术和酶解基础上，根据蜂王浆主蛋白的特性和各种蛋白酶的作用点位优选出胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对蜂王浆王浆蛋白进行组合酶解，使蜂王浆中复杂的高分子量蛋白质酶解成分子量更均匀的活性小分子OCO多肽，水溶性增强，同时保留原有的功能的，使得活性OCO多肽成分更易于人体吸收。
为达到上述目的，本发明提供了一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
1)选料：选用新鲜的蜂王浆或保持生物活性的冷冻蜂王浆；
2)除杂：冷冻蜂王浆解冻后或新鲜的蜂王浆直接在水中溶解，按蜂王浆质量3～5倍加入水，搅拌混合均匀，再用100～120目的滤布滤过，滤液备用；
3)组合酶解，通过不同蛋白酶对滤液进行酶解：
一次酶解：将上述滤液调节pH至2.0，加入质量比0.2～0.4％的胃蛋白酶，在37℃～42℃温度下恒温酶解2～3h，得第一酶解液；
二次酶解：调节第一酶解液pH至7.5，加入质量比0.2～0.4％的胰蛋白酶和0.4％的木瓜蛋白酶，在37℃～42℃温度下恒温酶解2～3h，得第二酶解液；
4)冻干保存：冻干制得活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，并在阴凉干燥避光条件下保存。
蜂王浆水溶性主蛋白质水解后的多肽也含有许多的抗氧化成分，多肽易吸收还可以降低胆固醇等作用。利用蛋白酶水解蜂王浆蛋白，可以得到肽、氨基酸等营养物质，大大提高蜂王浆的营养价值。酶水解法条件温和且不会造成环境污染。
本发明采用组合酶解的方式，对蜂王浆水溶解酶解为小分子活性蜂王浆OCO多肽。该方法较单一蛋白质酶酶解不同之处在于，单一蛋白质酶酶解作用位点较少，酶解所得多肽分子量较大，一般得到30KDa～100KDa的酶解产物。而采用组合酶解方式，酶解作用位点相对增加，酶解多肽产物分子量更小，更有利发挥蜂王浆的营养功能和保健功能。
本发明采用动物蛋白酶和植物蛋白酶组合的方式对蜂王浆水溶液进行酶解。胃蛋白酶和胰蛋白酶可以模拟消化系统对蜂王浆的酶解环境，胃蛋白酶在剪切时，倾向于剪切氨基端或羧基端为芳香族氨基酸(如苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)或亮氨酸的肽键；胰蛋白酶是肽链内切酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断，蜂王浆得到初步酶解，提高了蜂王浆在人体内消化吸收的能力。在此基础上，发明人增加了植物蛋白酶——木瓜蛋白酶的酶解，木瓜蛋白酶属巯基蛋白酶，具有较宽的底物特异性，作用于蛋白质中L-精氨酸、L-赖氨酸、甘氨酸参与形成的肽键。此酶属内肽酶，能切开全蛋白质分子内部肽链-CO-NH-生成分子量较小的多肽类。通过组合酶酶解作用，得到分子量分布集中在小于1KDa小分子多肽。众所周知，分子量小于1KDa小分子多肽具有优异的抗氧化活性，因此，通过本发明动物蛋白酶和植物蛋白酶组合酶解的方法，能够得到具有抗氧化性强的活性蜂王浆OCO多肽。
优选地，所述蛋白酶为固定化蛋白酶，包括固定化胃蛋白酶、固定化胰蛋白酶或/和固定化木瓜蛋白酶。固定化蛋白酶具有易分离、有效提高酶的稳定性，可反复使用，成本低的特点。
优选的，一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法还包括蛋白酶固定化步骤，具体步骤如下：
1)在氧气氛下，将基底浸渍于多巴胺化碱性溶液中6h～24h，形成改性基底，烘干备用；
2)将改性基底放入缓冲液中，在一定pH条件下，加入蛋白酶溶液，摇床摇动固定化，完毕后去除溶液，冷冻干燥后备用。
进一步地，改性基底和/或蛋白酶固定化过程中可采用超声辅助。
众所周知，存在于海洋中的贻贝能够牢固地附着在岩石以及船底上，并且在广泛的温度、盐度、湿度条件，以及潮水、大浪等海洋环境中均能形成良好的粘接。具有这种超强防水黏附和万能黏附性能的关键主要取决于贻贝的足须触角结构中分泌的蛋白质多巴。本发明采用蛋白质多巴的类似物多巴胺对基底进行预改进，经过多巴胺修饰的物质表面，被赋予了新的活性位点，可以作为二次反应平台与含有氨基或巯基物质进行迈克尔加成或西夫碱反应，在其上链接蛋白质酶，能确保蛋白质酶的高效回收率，并且工艺简单，条件温和，容易实现。在使用时，该方法所得固定化蛋白质酶的使用效果较好，重复性强，反复利用率高。
优选地，所述基底为金属网、织物、介孔材料、硅胶中的一种。
优选地，蛋白酶溶液为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合溶液，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1～2:2。优选地，所述固定化蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的多酶固定化。两种酶在同一基底上与蜂王浆蛋白质发生反应。
优选的，在组合酶解时，可进行超声处理，增加酶解速率，降低酶解产物的氧化几率。
优选的，组合酶解后还包括离心过滤步骤：将第二酶解液在10000～20000r/min，2～4℃条件下离心10～20min，收集上清液；用1μm微孔滤膜过滤后得到微孔滤液，将微孔滤液经3KDa的纳滤膜过滤得到纳滤滤液，最后将纳滤滤液经100Da的纳滤膜过滤浓缩，并收集截留物，得到100～3KDa的蜂王浆酶解浓缩液。
优选的，将蜂王浆除杂的滤液进行预处理，用胶体磨等进行高速剪切匀质，颗粒细度≤20μm，形成均质液。均质液颗粒一致，物态均匀，便于酶解时搅拌混合均匀，以提高酶解效率和产品得率。
本发明另一个目的是提供一种由所述制备方法得到的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，此活性蜂王浆OCO多肽冻干粉具有较好的水溶性，具有优质的抗氧化性能，因此，所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，可在保健食品领域或美容化妆品领域的应用。
本发明还提供一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的口服液体制剂配方，配方中组分按质量份数计算如下，水：700份；聚葡萄糖、麦芽糖醇或蜂蜜中的一种或多种组合：250份；蜂王浆OCO多肽冻干粉：50份。
本发明制备的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉具有以下明显的特点：
1、酶解后产物小分子肽居多，分子量低于2KD的占90％，低于1KD的占80％；
2、体外抗氧化能力、清除超氧阴离子自由基等明显高于单独使用动物蛋白酶或者植物蛋白酶酶解的蜂王浆冻干粉；
3、小鼠体内实验表明：本活性蜂王浆OCO多肽冻干粉具有抗氧化抗衰老、提高免疫力的效果；
4、与单独采用动物蛋白酶或者植物蛋白酶酶解比较，本发明所采用动物蛋白酶和植物蛋白酶组合酶解的方法所得到的冻干粉产品产量显著提高；
5、本发明提供的固定化蛋白酶方法的重复利用率高，酶的回收率优异。
因此，本发明方法应用于蜂王浆深加工中，更加发挥蜂王浆的营养功能和保健功能。
附图说明
图1为以细胞色素C(Mw 12355Da)、胰岛素(Mw 5808Da)、杆菌肽(Mw 1450Da)和乙氨酸-乙氨酸-络氨酸-精氨酸(Mw 451Da)、乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(Mw 189Da)作为参照制作相对分子量标准曲线；
图2蜂王浆组合酶解产物的相对分子量分布图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉通过下述方法制备得到：
1)选料：选用新鲜的蜂王浆5.0kg；
2)除杂：加入5倍水(25kg)，搅拌混合均匀，再用100目的滤布过滤去除混入蜂王浆中的幼虫、蜡屑等异物，滤液用胶体磨等进行高速剪切匀质，颗粒细度≤20μm，备用；
3)酶解：
一次酶解：调节pH至2.0，加入质量比0.2％的胃蛋白酶，混合均匀，在37℃温度下恒温酶解3h；
二次酶解：调节pH至7.5，依次加入蜂王浆质量比0.2％的胰蛋白酶和0.4％木瓜蛋白酶，混合均匀，在37℃温度下恒温酶解3h；
4)离心、过滤、浓缩：在10000r/min，2～4℃条件下离心10～20min，得上清液；用1μm微孔滤膜过滤得到微孔滤液，将微孔滤液经3KDa的纳滤膜过滤得到纳滤滤液，将纳滤滤液经100Da的纳滤膜进行浓缩，得到100Da～3KDa的活性蜂王浆OCO多肽浓缩液；
5)冻干制备：直接进行冻干制得活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，并在阴凉干燥避光条件下保存。
鲜蜂王浆5.0kg照上述方法生产得到活性蜂王浆OCO多肽冻干粉490g。
6)活性蜂王浆OCO多肽冻干粉分子量高效液相色谱法测试：
色谱条件：凝胶色谱柱(TSK GEL2000SW 7.8mm×300mm，5μm)；流动相：三氟醋酸-乙腈-水(1：400：600)；流速：1.0mL/min；检测波长：220nm。
图1给出以细胞色素C(Mw12355Da)、胰岛素(Mw5808Da)、杆菌肽(Mw1450Da)和乙氨酸-乙氨酸-络氨酸-精氨酸(Mw451Da)、乙氨酸-乙氨酸-乙氨酸(Mw189Da)作为参照制作相对分子量标准曲线。
图2给出所记录的色谱图，进样条件为取蜂王浆酶解产物冻干粉加水稀释制成10mg/ml的溶液，取20μL进样，可以看出，蜂王浆组合酶解产物分子量分布中共有6个主要成分蜂(A、B、C、D、E、F)；蜂王浆组合酶解产物90％以上的相对分子量在2000Da以下，80％以上在1000Da以下。
实施例2
一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法与实施例1类似，不同之处在于：
1)选料：选用保持生物活性的冷冻蜂王浆5kg；
2)除杂：加入3倍水(15kg)，搅拌混合均匀，再用120目的滤布过滤去除混入蜂王浆中的幼虫、蜡屑等异物，滤液备用；
3)蛋白酶固定化步骤：通入足量的氧气，将基底浸渍于多巴胺碱性溶液中6h～24h，形成改性基底，烘干备用；将改性基底放入缓冲液中，在一定pH条件下，加入1:1蛋白酶溶液，摇床摇动固定化，固定化期间采用超声辅助，完毕后去除溶液，冷冻干燥后备用；
4)酶解：一次酶解：调节pH至2.0，加入质量比0.4％的织物固定化的胃蛋白酶，混合均匀，在42℃温度下恒温酶解2h；二次酶解：调节pH至7.5，依次加入蜂王浆质量比0.4％的陶瓷固定化胰蛋白酶及木瓜蛋白酶，胰蛋白酶与木瓜蛋白酶的质量比为1:1，混合均匀，在42℃温度下恒温酶解2h；
5)过滤、离心、浓缩；
6)冻干制备。
实施例3(蜂王浆蛋白酶解活性多肽制备、质量分析及抗氧化实验)
为了质量分析及抗氧化实验，本实施例设计1#和2#两项对比实验，蜂王浆主蛋白分别按上述1#、2#、3#编号进行制备蜂王浆酶解多肽冻干粉，实验条件见表1：
表1不同酶的酶解实验方法
1#、2#、3#酶解实验制备蜂王浆多肽冻干粉得率、相对分子量分布等，经检测分析，其结果见表2。
表2不同酶的酶解实验所得多肽冻干粉得率和相对分子量分布
上述检测数据表明：采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶处理蜂王浆王浆主蛋白，在产品得率明显高于另外两种酶解方式，高出20％～50％；且在相对分子量分布也更加的小分子化，经实施例2(3#)酶解所制得的活性蜂王浆OCO多肽多为分子量100Da～3KDa的小肽、缩氨酸或氨基酸，小肽集中分布在1KD以下；相对分子量在2000Da以下占95％以上，1000Da以下也占到80％以上。
蜂王浆多肽抗氧化实验
采用DPPH法和FRAP法测定蜂王浆和酶解多肽产物的体外抗氧化活性。
DPPH法是目前广泛应用的评价抗氧化剂清除自由基能力方法，DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其乙醇溶液呈紫色，在517nm附近有强吸收。当DPPH溶液中加入自由基清除剂时，DPPH的单电子被配对，在最大吸收波长处的吸光度变小，颜色变浅，且这种颜色的变浅程度与配对电子数成剂量关系。因此，可通过在此波长处吸光度的测定来评价自由基的清除情况，从而评价实验样品的抗氧化能力，此抗氧化能力用清除率表示，即清除率％＝[1一A517试样组/A517空白组]×100％。清除率越大，抗氧化性越大。
FRAP是铁离子还原抗氧化能力法，是典型的检测抗氧化剂总体氧化还原能力的方法。FRAP法是基于氧化还原反应，在酸性pH值下，Fe3+与TPTZ形成复合物(Fe3+-TPTZ)，在还原物质的作用下，复合物被还原为二价铁而呈明显的蓝色，在593nm有最大吸收，其吸光度的变化与还原物质的含量呈比例关系。根据吸光度的大小计算样品抗氧化性的强弱，以FRAP值表示，FRAP值越大抗氧化性越强。
测定蜂王浆和酶解多肽产物的清除自由基能力和抗氧化能力的相关数据并比较，以此评价蜂王浆酶解工艺与产物特性的相关性。
经检测，数据见表3.
表3酶解液体外抗氧化实验数据
上述检测数据经过统计学分析，酶解后的产物在抗氧化实验中存在极显著差异，p远小于0.01；用胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合酶解与其他两种酶解在抗氧化实验中液同样存在极显著差异，p＝0.00047＜0.01。胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合酶解产物在抗氧化方面明显好于单纯的木瓜蛋白酶酶解产物，也明显优于胃蛋白酶和胰蛋白酶组合酶解的酶解产物。
可以看出，活性OCO小肽在抗氧化性、抗衰老和免疫调节上的活性更加明显，在美容化妆品中吸收作用更强。本发明制得的活性蜂王浆多肽冻干粉水溶性极佳，应用范围更广。
实施例4
一种活性蜂王浆OCO多肽口服液体制剂：
配方：
此产品中蜂王浆多肽冻干粉溶解性能好，所配制的蜂王浆水溶液状态均一，性质稳定，其保健功效较蜂王浆冻干粉有明显提高，在36个月常温长期储存中均无变化。
上述配方中，蜂王浆多肽冻干粉优选胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶组合酶解所制备活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，在动物氧化损伤模型鼠实验中，其抗氧化功能更强。
产品按照保健食品检验与评价技术规范(2003版)规定的方法进行动物抗氧化实验。选用25-30g健康成年小鼠，用D-半乳糖颈背部皮下注射,连续造模6周，按MDA水平分组。随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组，3个剂量组经口给予三种不同酶解方法的酶解产物所配制的相同计量的受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖颈背部皮下，受试样品给予时间30天后即实验结束后一天采血，分离血清，测血清中脂质氧化产物含量、抗氧化酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶活力和蛋白质羰基含量。试验数据见表4。
表4蜂王浆酶解产物对小鼠抗氧化活性的影响
试验数据表明，三种方式的酶解产物在小鼠氧化损伤模型抗氧试验中，均体现出极强的抗氧化能力，与模型组比较，MDA、SOD、GSH-Px和蛋白质羰基含量均存在极显著性差异，p＜0.01。另外，三种酶解方式的产物，以胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解所得到的产物(组3#)抗氧化性能力最强，与木瓜蛋白酶产物(组1#)或者胃蛋白酶和胰蛋白酶组合酶解的产物(组2#)比较，数据显示液存在极显著差异，p＜0.01。
实施例5
一种活性蜂王浆OCO多肽片剂：
组方：
经混合、制粒、压片而制得的活性蜂王浆片剂。
活性蜂王浆OCO多肽冻干粉选择以胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶按本专利的组合酶解所制备的活性多肽冻干粉。其在抗氧化、抗衰老增强免疫上活性更强，功能更大。
本发明并不限于前面的描述的实施例。相反，本发明的保护范围由这些描述连同所附的权利要求书及其等同特征一起限定。
Claims (10)
1.一种活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)选料：选用新鲜的蜂王浆或保持生物活性的冷冻蜂王浆；
2)除杂：冷冻蜂王浆解冻后或新鲜的蜂王浆直接在水中溶解，按蜂王浆质量3～5倍加入水，搅拌混合均匀，再用100～120目的滤布滤过，滤液备用；
3)组合酶解，通过不同蛋白酶对滤液进行酶解：
一次酶解：将上述滤液调节pH至2.0，加入质量比0.2～0.4％的胃蛋白酶，在37℃～42℃温度下恒温酶解2～3h，得第一酶解液；
二次酶解：调节第一酶解液pH至7.5，加入质量比0.2～0.4％的胰蛋白酶和0.4％的木瓜蛋白酶，在37℃～42℃温度下恒温酶解2～3h，得第二酶解液；
4)冻干保存：冻干制得活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，并在阴凉干燥避光条件下保存。
2.根据权利要求1所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶为固定化蛋白酶。
3.根据权利要求1或2所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，还包括蛋白酶固定化步骤，具体步骤如下：
1)氧气氛下，将基底浸渍于多巴胺碱性溶液中6h～24h，形成改性基底，烘干备用；
2)将改性基底放入缓冲液中，在一定pH条件下，加入蛋白酶溶液，摇床摇动固定化，完毕后去除溶液，冷冻干燥后备用。
4.根据权利要求3所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，所述基底为金属网、织物、介孔材料、硅胶中的一种。
5.根据权利要求3所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，蛋白酶溶液为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合溶液，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比为1～2:2。
6.根据权利要求1所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，组合酶解后还包括离心过滤步骤：将第二酶解液在10000～20000r/min，2～4℃条件下离心10～20min，收集上清液；用1μm微孔滤膜过滤后得到微孔滤液，将微孔滤液经3KDa的纳滤膜过滤得到纳滤滤液，最后将纳滤滤液经100Da的纳滤膜过滤浓缩，并收集截留物，得到100～3KDa的蜂王浆酶解浓缩液。
7.根据权利要求1所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的制备方法，其特征在于，将蜂王浆除杂的滤液用胶体磨等进行高速剪切匀质，颗粒细度≤20μm，形成均质液。
8.一种根据权利要求1～7任一项所述制备方法所得到的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉。
9.根据权利要求8所述的活性蜂王浆OCO多肽冻干粉，在保健食品领域或美容化妆品领域的应用。
10.一种包含权利要求8所述活性蜂王浆OCO多肽冻干粉的口服液体制剂配方，其特征在于，按质量份数算：水：700份；聚葡萄糖、麦芽糖醇或蜂蜜中的一种或多种组合：250份；蜂王浆OCO多肽冻干粉：50份。
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Address after: 510700 Room 501, building G12, No. 31 Kefeng Road, Science City, Huangpu District, Guangzhou (Guangzhou high tech Industrial Development Zone), Guangdong Province Patentee after: Guangzhou Baikang Cell Life Technology Co.,Ltd. Address before: 510700 Room 501, building G12, No. 31 Kefeng Road, Science City, Huangpu District, Guangzhou (Guangzhou high tech Industrial Development Zone), Guangdong Province Patentee before: Guangzhou Zeus stem cell peptide New Material Technology Co.,Ltd. |
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