CN108931595B - 一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法。该方法包括以下步骤：(1)标准品溶液制备：制备磷脂酰丝氨酸标准品溶液；(2)供试品溶液制备：向经过预处理的供试品明胶型凝胶糖果中加入盐酸溶液，进行酸法水解，水解后冷却至室温，然后加入萃取剂进行萃取得到萃取液，将萃取液中的萃取剂吹干，用氯仿/甲醇溶液定容作为供试品溶液；(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定。本发明首次建立了一种适用于测定明胶型凝胶糖果中PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法，该方法针对性强、准确度高、重复性好、回收率高和检出限低。

Description

一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法。

背景技术

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine，以下简称PS)是一种酸性磷脂，又称复合神经酸或丝氨酸磷脂。PS由三部分组成：亲水性的甘油骨架为头部，2个较长链烃的亲油基团为尾部。PS结构中的脂链烃多种多样，具有不同长度，因此PS是一类化合物，而不是单一的化合物。PS被誉为继胆碱和“脑黄金DHA”之后的一大新兴的“智能营养素”，也被称作“脑专一性营养物质”，是唯一能够调控细胞膜关键蛋白功能状态的磷脂，具有改善大脑功能、修复大脑损伤，是人体不可或缺的物质。近年来，由于PS具有独特的理化性质和营养价值，获得了越来越多国家食药局的认可。中国国家卫计委2010年第15号公告批准了PS为新资源食品。PS现已被广泛应用在食品、医药和饲料等领域。

目前，在中国食品市场上常见的PS产品类型主要是：软胶囊、冲剂、奶粉、复合片、压片糖果和明胶型凝胶糖果(以下简称“明胶软糖”)。明胶软糖的主要基质是糖类和凝胶剂明胶，二者均可溶于水，形成的水溶液较黏稠。在水溶液中，明胶具有胶凝性，它的长链分子之间相互交联而形成能将PS、糖类等原料固定在内的三维网络，因此如何克服明胶对PS的束缚是样品前处理的关键。明胶软糖具有咀嚼性、低甜度、低热量、多种口味、营养且方便等特点，越来越受到消费者的喜欢。

国家卫计委2010年第15号公告规定PS的最大食用量为600mg/天，然而关于PS的分析方法，并没有现行有效的国家标准和行业标准，因此市场监管比较困难。对于软胶囊、冲剂、奶粉、复合片和压片糖果中PS的测定已有相关企业标准和文献报道，而对于明胶软糖中PS的测定还是空白。参照软胶囊、冲剂、奶粉、复合片和压片糖果中PS的分析方法来测定明胶软糖中PS的含量，结果表明PS提取率不足5％，检测值远低于理论值。由于明胶软糖的基质和质构不同于其它PS产品，所以上述分析方法不适用明胶软糖。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，特别是适用于测定明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法，通过优化明胶型凝胶糖果的酸法水解，克服了明胶型凝胶糖果的基质和质构对PS提取率的影响，使得提取率大大提高，该前处理方法针对性强、重复性好、分析周期短和操作简便。建立并优化了测定PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射法的色谱分析条件，该色谱条件耐用性良好，环境友好，分析时间短，分离度高和灵敏度高。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)标准品溶液制备：制备磷脂酰丝氨酸标准品溶液；

(2)供试品溶液制备：向经过预处理的供试品明胶型凝胶糖果中加入浓度为1.0～5.0mol/L的盐酸溶液，摇匀后置于恒温水浴摇床中50℃～70℃水解10～50min，水解后冷却至室温，然后向冷却后的水解溶液中加入萃取剂进行萃取得到萃取液，将萃取液中的萃取剂吹干，用氯仿/甲醇溶液定容作为供试品溶液；

(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对步骤(2)得到的供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定。

步骤(1)的具体步骤为：取磷脂酰丝氨酸标准品，加入氯仿/甲醇溶液溶解制成浓度为1.5mg/mL的磷脂酰丝氨酸标准品溶液。

优选地，步骤(3)中非正己烷正相高效液相色谱条件为：色谱柱：硅胶柱，尺寸为4.6mm×250mm×5μm，流动相A：正己烷：异丙醇：乙酸：三乙胺的体积比为83:17:1.5:0.08，流动相B：异丙醇：水：乙酸：三乙胺的体积比为85:15:1.5:0.08或流动相C：水：乙酸：三乙胺的体积比为100:1.5:0.08，，流动相流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；蒸发光散射检测器条件为：漂移管温度：90℃～110℃；载气为氮气，载气流速：1.5～3.5L/min。

PS易溶于石油醚，萃取效率高；石油醚沸点低，毒性小；石油醚与水不溶，易分层。因此本发明步骤(2)中的的萃取剂选用石油醚。

本发明中非正己烷正相高效液相色谱条件的洗脱方式为等度洗脱，不会引起蒸发光散射检测器基线的较大波动，操作方便快捷；流动相只选用一种有机溶剂异丙醇，环境友好，节约成本；色谱峰形良好，分析时间短，分离度高。

优选地，步骤(2)中所述的供试品明胶型凝胶糖果的预处理的具体步骤是：将明胶型凝胶糖果剪碎，再使用研钵将剪碎后的明胶型凝胶糖果挤压研磨成均匀的粘稠状，备用。

优选地，步骤(2)中供试品溶液的具体制备步骤是：

(a)称取经过预处理的供试品于离心管中，加入摩尔浓度为1.0～5.0mol/L盐酸溶液，混匀后，水平置于50℃～70℃的恒温水浴摇床水解10～50min后冷却至室温；

(b)往上述溶液中加入石油醚，振摇萃取5min后，4000r/min离心5min，移出上层石油醚溶液；再重复萃取下层一次，合并两次萃取后的石油醚溶液；

(c)将合并的石油醚溶液中的石油醚用氮气吹干，用氯仿/甲醇溶液对其定容作为供试品溶液。本发明建立并优化了测定明胶型凝胶软糖中PS的样品前处理方法：样品预处理—酸法水解—液液萃取—浓缩—定容。其中酸法水解是影响PS提取率的最关键的一步。通过优化明胶型凝胶软糖的酸法水解，克服了软糖基质和质构对PS提取率的影响，使得提取率大大提高。该前处理方法针对性强、重复性好、分析周期短和操作简便。

步骤(a)中具体的步骤为：称取经过预处理的供试品1.5g于离心管中，加入摩尔浓度为1.8mol/L盐酸溶液20mL，混匀后，水平置于60℃的恒温水浴摇床水解17min后冷却至室温。

优选地，所述的氯仿/甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为90:10。

本发明的方法克服了现有技术样品处理方法的不足，与现有技术相比，本发明有以下优良效果：

1、建立了一种适用于测定明胶型凝胶糖果中PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法，填补了明胶软糖中PS测定方法的空白，该方法准确度高、重复性好、精密度好、回收率高和检出限低，可为指导建立相应国家标准提供技术参考。

2、建立并优化了测定明胶型凝胶糖果中PS的样品前处理方法，克服了样品基质和质构对PS提取率的影响，该方法针对性强、重复性好、分析周期短和操作简便。该方法既可为软糖中其它磷脂的检测提供方法参考，也可为类似基质样品中PS的测定提供技术借鉴。

3、建立并优化了测定PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射法的色谱分析条件，该色谱条件的洗脱方式采用等度洗脱，不会引起蒸发光散射检测器基线的较大波动，操作方便快捷；流动相只选用一种有机溶剂异丙醇，环境友好，节约成本；某些品牌液相色谱仪器的泵头选用的是标准活塞密封圈，不适合走含有正己烷的流动相，该色谱条件不含正己烷，可满足该类仪器的使用要求；PS的色谱峰形良好，分析时间短，分离度高，灵敏度高。

附图说明

图1为各因素交互影响的响应曲面，图1a为水解时间和水解温度交互影响的响应曲面，图1b为水解时间和酸浓度交互影响的响应曲面，图1c为水解温度和酸浓度交互影响的响应曲面；

图2为本发明的操作流程图；

图3为PS标准品的液相色谱图；

图4为实施例3中明胶型凝胶糖果的液相色谱图(流动相Ⅰ)；

图5为实施例3中明胶型凝胶糖果的液相色谱图(流动相Ⅱ)。

具体实施方法

本发明通过以下具体实施例作进一步描述，但不限制本发明。

实验仪器、试剂及工作条件

1)仪器

LC-20AB高效液相色谱仪(日本岛津公司)；ELSD 2000蒸发光散射检测器(Alltech)；SY-2230恒温水浴摇床(Crystal)；CF16RXⅡ高速冷冻离心机(Hitachi)；BT125D电子天平(Sartorius)；KL512型氮吹仪(北京康林科技有限责任公司)；XW-80A漩涡混合器(上海琪特分析仪器有限公司)。

2)试剂

磷脂酰丝氨酸(97％，Sigma)；异丙醇(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)；盐酸、石油醚(沸程30℃～60℃)、氯仿、甲醇、乙酸、三乙胺(分析纯广州化学试剂厂)、去离子水。

3)色谱条件

色谱条件是：色谱柱：硅胶柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：异丙醇：水：乙酸：三乙胺＝84:16:1.5:0.08；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；ELSD检测器参数：漂移管温度：100℃；载气(氮气)，流速：2.0L/min；不分流模式(Impact off)。

实施例1

一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)标准储备液：精密称取0.01546g(精确至0.01mg)磷脂酰丝氨酸于10mL棕色容量瓶中，用氯仿/甲醇(90/10)溶液溶解并定容至刻度，得到浓度为1.5mg/mL的标准储备液。

标准工作液：用氯仿/甲醇(90/10)溶液将标准储备液逐级稀释成浓度分别为300mg/L、150mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L的系列标准工作液；

(2)供试品液制备：

(a)将明胶型凝胶糖果剪碎，再使用研钵将剪碎后的明胶型凝胶糖果挤压研磨成均匀的粘稠状，备用；

(b)称取上述经过预处理的供试品1.5g于离心管中，加入摩尔浓度为1.0～5.0mol/L盐酸溶液20mL，用旋涡混合仪混匀2min后，水平置于50℃～70℃的恒温水浴摇床水解10～50min后冷却至室温；

(c)往上述溶液中加入石油醚，振摇萃取5min后，4000r/min离心5min，移出上层石油醚溶液；再重复萃取下层一次，合并两次萃取后的石油醚溶液；

(d)将合并的石油醚溶液中的石油醚用氮气吹干后，加入氯仿/甲醇溶液定容至25mL作为供试品溶液；

(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对步骤(2)得到的供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定，高效液相色谱条件为：色谱柱：硅胶柱，尺寸为4.6mm×250mm×5μm，流动相：异丙醇：水：乙酸：三乙胺的体积比为84:16:1.5:0.08，流动相流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；蒸发光散射检测器：漂移管温度：100℃；载气为氮气，载气流速：2.0L/min。

本实施例中对酸法水解的条件进行优化和筛选，首先，影响供试品酸法水解的3个主要因素是：酸法水解时间、酸法水解温度和盐酸溶液浓度；其次通过单因素试验，以PS含量为响应值，对上述因素进行优化；最后，以单因素试验结果为基础，通过响应面分析法进一步优化酸法水解的水解条件。

酸法水解的时间分别选择10min、20min、30min、40min和50min。以PS的含量为指标，当水解时间达到20min之后，每增加10min，PS含量的增长率不足2.0％，甚至出现下降趋势，综合考虑PS含量和实验成本，选定酸法水解时间为20min。

酸法水解的温度分别选择50℃、55℃、60℃、65℃和70℃。以PS的含量为指标，通过单因素试验确定了水解温度为60℃时测得软糖中PS含量最高，因此选定水解温度为60℃。

盐酸溶液的浓度分别选择1.0mol/L、2.0mol/L、3.0mol/L、4.0mol/L、5.0mol/L。以PS的含量为指标，通过单因素试验确定了盐酸浓度为2.0mol/L时测得软糖中PS含量最高，因此选定盐酸浓度为2.0mol/L。

以单因素试验结果为基础，采用响应面优化法Box-Behnken设计进行优化，以酸法水解时间(A,min)、酸法水解温度(B，℃)和盐酸溶液浓度(C，mol/L)为自变量，PS含量为响应值进行实验设计，其因素水平设计表见表1，根据表1中的响应面试验方案，得到响应面试验设计与结果见表2。使用Design Expert 7.0软件对表2的实验结果进行响应面分析，分析结果见表3。

表1响应面试验因素及水平

表2响应面试验设计与结果

表3回归方程的方差分析

注：P<0.001影响极显著；P<0.01影响高度显著；P<0.05影响显著；P>0.05影响不显著。

由表3可知，整体模型P<0.001，失拟项P＝0.3329，说明该模型拟合成功。使用Design Expert 7.0软件对表2的实验结果进行二次多项式模型拟合，得到的回归方程如下：

Y_含量＝190.2-6.625A-1.25B-12.625C-4.25AB-5BC-7.85A²-14.6B²-22.85C²(R²＝0.9989)。

使用Design-Expert7.0软件对表2的实验结果进行响应曲面分析，得出两两因素之间对PS含量的影响，结果如图1a、图1b和图1c。

通过对比表3中各因素P值和对图1a、图1b和图1c中两两因素之间的响应曲面进行分析，得出3个显著因素之间对PS含量的影响顺序为：酸法水解时间＝盐酸浓度>酸法水解温度，Design-Expert7.0软件给出最佳酸法水解条件：水解时间为16.5min，水解温度为60.1℃，盐酸浓度为1.76mol/L。在此条件下，PS的理论含量为192.8mg/100g。为方便实际操作，修正后的最佳酸法水解条件为水解时间17min，水解温度60℃，盐酸浓度1.8mol/L。在修正后的最佳实验条件下进行6次平行实验，测得PS含量的平均值为190.5，与理论预测值误差仅为-1.2％，说明采用响应面分析所得到的最佳酸法水解条件准确可靠。

实施例2

一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，包括以下步骤：

(1)标准储备液：精密称取0.01546g(精确至0.01mg)于10mL棕色容量瓶中，用氯仿/甲醇(90/10)溶液溶解并定容至刻度，得到浓度为1.5mg/mL的标准储备液。

标准工作液：用氯仿/甲醇(90/10)溶液将标准储备液逐级稀释成浓度分别为300mg/L、150mg/L、100mg/L、50mg/L、25mg/L的系列标准工作液；

(2)供试品溶液制备：

(a)将明胶型凝胶糖果剪碎，再使用研钵将剪碎后的明胶型凝胶糖果挤压研磨成均匀的粘稠状，备用；

(b)称取上述经过预处理的供试品1.5g于离心管中，加入摩尔浓度为1.8mol/L盐酸溶液20mL，用旋涡混合仪混匀2min后，水平置于60℃的恒温水浴摇床水解17min后冷却至室温；

(c)往上述溶液中加入石油醚，振摇萃取5min后，4000r/min离心5min，移出上层石油醚溶液；再重复萃取下层一次，合并两次萃取后的石油醚溶液；

(d)将合并的石油醚溶液中的石油醚用氮气吹干后，加入氯仿/甲醇溶液定容至25mL作为供试品溶液；

(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对步骤(2)得到的供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定，高效液相色谱条件为：色谱柱：硅胶柱，尺寸为4.6mm×250mm×5μm，流动相异丙醇：水：乙酸：三乙胺的体积比为84:16:1.5:0.08，流动相流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；蒸发光散射检测器：漂移管温度：100℃；载气为氮气，载气流速：2.0L/min。

将PS的系列标准工作液进行上机测定，以PS峰面积的常用对数为纵坐标(Y)，进样质量的常用对数(X)为横坐标作图，求得线性回归方程为Y＝1.345X+14.331，线性回归方程相关系数r＝0.99996，可知PS在25～300mg/L范围内呈现良好线性。当取样量为1.5g、定容体积为25mL时，检出限为5.0mg/100g(信噪比S/N＝3)。

实施例3

本实施例在实施例2的处理方法的基础上，对PS的非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射法的色谱分析条件进行优化和筛选。

1、非正己烷正相高效液相色谱条件的优化：

首先根据分析对象的性质选择色谱方法。PS具有双亲性，既有亲水性又有亲油性，可采用反相或正相两种色谱方法进行分析。因为PS是一类化合物，反相色谱法主要用于PS中不同类型分子的分离，所以选定硅胶柱作为PS分离的色谱柱。

流动相的选择：测定PS的流动相体系主要分三类：(1)甲醇-乙腈-水；(2)氯仿-甲醇-水；(3)正己烷-异丙醇-水-有机改性剂。其中甲醇-乙腈-水体系主要用于PS中不同类型分子的分离。氯仿-甲醇-水体系容易造成蒸发光检测器基线不稳，噪声升高。因此选定正己烷-异丙醇-水-有机改性剂作为PS的流动相。

配制三种流动相：流动相A：正己烷：异丙醇：乙酸：三乙胺＝83:17:1.5:0.08；流动相B：异丙醇：水：乙酸：三乙胺＝85:15:1.5:0.08；流动相C：水：乙酸：三乙胺＝100:1.5:0.08。采用等度洗脱，通过调整流动相A和流动相B的混合比例来优化供试液中PS的保留时间、色谱峰形和分离度。优化好的PS流动相Ⅰ为：正己烷：异丙醇：水：乙酸：三乙胺＝5:81:14:1.5:0.08，得到的供试液色谱图见图4，对应的保留时间、理论塔板数、不对称因子和分离度见表4。同理，通过调整流动相B和流动相C的混合比例，优化后的流动相Ⅱ为异丙醇：水：乙酸：三乙胺＝84:16:1.5:0.08，得到的供试液色谱图见图5，对应的保留时间、理论塔板数、不对称因子和分离度见表4。

表4供试液中PS的色谱参数

通过对比表4的数据可知，二者分离度均≥1.5，都实现基线分离，PS在流动相Ⅱ的保留时间更短，可节省时间成本。流动相Ⅱ的理论塔板数高于流动相Ⅰ，说明PS在流动相Ⅱ的柱效高于流动相Ⅰ。

此外，流动相Ⅱ只选用一种有机溶剂异丙醇，环境友好，节约成本；某些品牌液相色谱仪器的泵头选用的是标准活塞密封圈，不适合走含有正己烷的流动相，该色谱条件不含正己烷，可满足该类仪器的使用要求。因此，选定流动相Ⅱ作为检测明胶软糖中PS的流动相。

2、蒸发光散射法的色谱条件的优化：蒸发光检测器操作模式包括：分流或不分流双操作模式。依据流动相的组成、流速、样品基质和PS的性质，为了既保证流动相的充分挥发又实现样品完全进入检测器内，获得更高的灵敏度，本实施例选择不分流模式。

雾化气载气流速和漂移管温度是影响蒸发光检测器检测性能的两个最重要参数。基于基线噪音值≤1.0mV，表明流动相挥发趋于完全的准则，本实施例的载气流速和漂移管温度的推荐值分别为1.5L/min和90℃，以此推荐值为起点进行条件优化。

漂移管温度的选择：首先设定载气流速为2.0L/min不变，考察50mg/L的PS标准品溶液在漂移管温度分别为90℃、95℃、100℃、105℃和110℃条件下的信噪比(S/N)，结果见表5。由表5可知，漂移管温度为100℃时，信噪比最大，故选择漂移管温度为100℃。

表5漂移管温度对信噪比的影响

载气流速的选择：设定漂移管温度为100℃不变，考察50mg/L的PS标准品溶液在载气流速分别为1.5、2.0、2.5、3.0和3.5L/min条件下的信噪比(S/N)，结果见表6。由表6可知，载气流速为2.0L/min时，信噪比最大，故选择载气流速为2.0L/min。

表6载气流速对信噪比的影响

实施例4

加标回收率

在PS含量为75.9mg/100g的明胶软糖中，分别加入3个浓度水平的PS标准品溶液，按实施例2处理方法及测定条件进行加标回收率实验，每个添加浓度做2个平行实验，求得加标回收率结果见表7。由表7可以得出PS的加标回收率为88.7％～106.3％，该方法加标回收率良好，可满足测定要求。

表7加标回收率结果

重复性实验

取同一批样品6份，按照实施例2处理方法及测定条件进行实验，分别上机测定，计算求得各份样品中PS的含量，并计算平均相对标准偏差RSD，结果见表8。由表8结果得出：该方法的重复性良好，可满足测定要求。

表8重复性实验结果

供试品溶液稳定性实验

取PS含量为191.7mg/100g的供试液在4℃条件下放置，分别于0、1h、2h、3h和4h上机测定，结果见表9。由表9结果得出：供试品溶液中PS在4h之内稳定。

表9供试品溶液稳定性实验结果

方法耐用性实验

选用三个不同品牌的硅胶柱测定供试品溶液中PS的含量。计算求得的分离度和含量见表10。

表10耐用性实验结果(n＝2)

由表10可知不同品牌色谱柱的选择对结果无明显影响，说明本发明提出的测定方法耐用性良好。

经过方法学评价得知：该方法准确度高、重复性好、精密度好、回收率高和检出限低，可以作为明胶型凝胶软糖中PS含量的测定方法。

样品含量测定

选取8批次不同含量的PS明胶软糖，按实施例2处理方法及测定条件进行含量测定，结果见表11。

表11 8批明胶软糖中PS的含量(n＝2)

表11测得的8批明胶软糖中PS的含量与理论值误差均＜10％，表明该测定方法可满足实验要求。

上列详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本案的专利保护范围中。

Claims (5)

1.一种明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)标准品溶液制备：制备磷脂酰丝氨酸标准品溶液；

(2)供试品溶液制备：向经过预处理的供试品明胶型凝胶糖果中加入浓度为1.0～5.0mol/L的盐酸溶液，摇匀后置于恒温水浴摇床中50℃～70℃水解10～50min，水解后冷却至室温，然后向冷却后的水解溶液中加入萃取剂进行萃取得到萃取液，将萃取液中的萃取剂吹干，用氯仿/甲醇溶液定容作为供试品溶液；

(3)测定：采用非正己烷正相高效液相色谱—蒸发光散射分析方法对步骤(2)得到的供试品溶液中的磷脂酰丝氨酸含量进行测定；所述的非正己烷正相高效液相色谱条件为：色谱柱：硅胶柱，尺寸为4.6mm×250mm×5μm，流动相Ⅱ：异丙醇：水：乙酸：三乙胺的体积比为84:16:1.5:0.08，流动相流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；蒸发光散射检测器条件为：漂移管温度：100℃；载气为氮气，载气流速：2.0L/min。

2.根据权利要求1所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述的供试品明胶型凝胶糖果的预处理的具体步骤是：将明胶型凝胶糖果剪碎，再使用研钵将剪碎后的明胶型凝胶糖果挤压研磨成均匀的粘稠状备用。

3.根据权利要求1所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(2)中供试品溶液的具体制备步骤是：

(a)称取经过预处理的供试品于离心管中，加入浓度为1.0～5.0mol/L盐酸溶液，混匀后，水平置于50℃～70℃的恒温水浴摇床水解10～50min后冷却至室温；

(b)向上述溶液中加入石油醚，振摇萃取5min后，4000r/min离心5min，移出上层石油醚溶液；再重复萃取下层一次，合并两次萃取后的石油醚溶液；

(c)用氮气吹干合并的石油醚溶液中的石油醚，用氯仿/甲醇溶液对其定容作为供试品溶液。

4.根据权利要求3所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，步骤(a)具体的步骤为：称取经过预处理的供试品1.5g于离心管中，加入摩尔浓度为1.8mol/L盐酸溶液20mL，混匀后，水平置于60℃的恒温水浴摇床水解17min后冷却至室温。

5.根据权利要求3所述的明胶型凝胶糖果中磷脂酰丝氨酸含量的测定方法，其特征在于，所述的氯仿/甲醇溶液中氯仿与甲醇的体积比为90:10。

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