CN108904533A - 牙髓间充质干细胞在制备肝硬化治疗药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，具体涉及牙髓间充质干细胞在制备肝硬化治疗药物中的用途。本发明通过试验首次证实了牙髓间充质干细胞系统注射对肝硬化具有明显的治疗效果，为肝硬化的治疗提供全新的技术方案和选择。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及牙髓间充质干细胞在制备肝硬化治疗药物中的用途。
背景技术
肝硬化是一种常见的慢性肝病,可由一种或多种原因引起,肝脏呈进行性、弥漫性、纤维性病变。具体表现为肝细胞弥漫性变性坏死,继而出现纤维组织增生和肝细胞结节状再生,这三种改变反复交错进行,肝小叶结构和血液循环途径逐渐被改建,使肝变形、变硬而导致肝硬化。该病早期无明显症状,晚期则出现一系列不同程度的门静脉高压和肝功能障碍,出现上消化道出血、肝性脑病等并发症直至死亡。据资料统计，我国病毒性肝炎发病率达113.2/10万人,乙型肝炎病毒感染约1.2亿,丙型肝炎及酒精性肝炎、脂肪性肝炎、药物性肝炎、自身免疫性肝炎等发病率也在不断增加,慢性肝炎中,肝硬化失代偿期发生率为3％，5年累计发生率16％，失代偿期肝硬化的年病死率为70-86％。
目前晚期肝硬化尚缺乏特效的治疗手段,最好的选择是原位肝移植,但供肝缺乏、免疫排斥反应及器官移植费用昂贵等问题大大限制了肝移植的临床应用。
因此，迫切需要一种治疗效果好的肝硬化治疗药物及治疗方法。
发明内容
为了解决现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于，提供牙髓间充质干细胞在制备肝硬化治疗药物中的用途。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明的的第一方面，提供了牙髓间充质干细胞用于制备肝硬化治疗药物的用途。
所述牙髓间充质干细胞为现有技术，可通过市购途径获得，也可由本领域技术人员根据具体需要自行制备获得。
一种实施方式中，所述肝硬化治疗药物至少具有以下功用之一：
(1)恢复肝脏表面光滑性；(2)减少肝脏脂肪结节的形成；(3)恢复受破坏的肝脏细胞；(4)减少肝脏中纤维组织沉积；(5)降低肝脏纤维化面积比例；(6)降低肝脏纤维化指数；(7)恢复受损的肝脏功能；(8)降低血清AST水平；(9)降低血清ALT水平；(10)降低血清ALP水平；(11)降低血清total bilirubin水平。
所述肝硬化治疗药物必然包括牙髓间充质干细胞，并以牙髓间充质干细胞作为前述功用的有效成分。
所述肝硬化治疗药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为牙髓间充质干细胞亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，牙髓间充质干细胞为所述肝硬化治疗药物的唯一有效成分或有效成分之一。
所述肝硬化治疗药物形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。
所述肝硬化治疗药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。
本发明的第二方面，提供了一种治疗肝硬化的方法，为向对象施用牙髓间充质干细胞。
所述的对象可以为哺乳动物。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。
所述对象可以是罹患肝硬化的患者或者期待治疗的肝硬化的个体。
所述牙髓间充质干细胞可以在接受肝硬化治疗前、中、后向对象施用。
一种实施方式中，可采用注射方式向对象施用牙髓间充质干细胞。
一种实施方式中，所述注射方式选自系统注射。
本发明的第三方面，提供一种肝硬化治疗药物，包括有效剂量的牙髓间充质干细胞。
所述肝硬化治疗药物必然包括牙髓间充质干细胞，并以牙髓间充质干细胞作为前述功用的有效成分。
所述肝硬化治疗药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为牙髓间充质干细胞亦可包含其他可起到类似功用的分子。
亦即，牙髓间充质干细胞为所述肝硬化治疗药物的唯一有效成分或有效成分之一。
所述肝硬化治疗药物形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。
所述肝硬化治疗药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。
本发明的第四方面，提供一种肝硬化联合治疗药物组合，包括有效量的牙髓间充质干细胞和至少一种其他肝硬化治疗药物。
所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：
一)将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。
当其他肝硬化治疗药物为抗体时，一般采用胃肠外给药型。当其他肝硬化治疗药物为化学药物时，给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药。
二)将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物配置成复方制剂，在将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。
本发明的第五方面，提供了一种治疗肝硬化的方法，为向对象施用有效量的牙髓间充质干细胞以及向对象施用有效量的其他肝硬化治疗药物和/或向对象实施其他肝硬化治疗手段。
可以同步地或顺序地给予有效量的牙髓间充质干细胞和至少一种有效量的其他肝硬化治疗药物。
基于本发明通过试验研究发现，牙髓间充质干细胞可用于治疗肝硬化，在与牙髓间充质干细胞以外的其他肝硬化治疗药物联合用药中，至少可以起到疗效相加的效果，进一步增强对于肝硬化的治疗作用。
本发明还提供牙髓间充质干细胞的如下用途：
牙髓间充质干细胞用于制备肝脏表面光滑性恢复剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备肝脏脂肪结节形成减少剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备受破坏的肝脏细胞恢复剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备肝脏中纤维组织沉积减少剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备肝脏纤维化面积比例降低剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备肝脏纤维化指数降低剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备受损的肝脏功能恢复剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备血清AST水平降低剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备血清ALT水平降低剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备血清ALP水平降低剂的用途。
牙髓间充质干细胞用于制备血清total bilirubin水平降低剂的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明通过试验首次证实了牙髓间充质干细胞系统注射对肝硬化具有明显的治疗效果，为肝硬化的治疗提供全新的技术方案和选择。
附图说明
图1：牙髓间充质干细胞治疗肝硬化技术路线。
图2：DPSCs系统注射可以改善肝脏大体观表面颗粒状改变。
图3：DPSCs对CCl4诱导肝硬化治疗效果分析，(A)HE染色；Sirius Red及Masson染色；(B)肝脏纤维化比例(Liver Fibrous area)；(C)肝脏纤维化指数(Liver FibrousScore)*，P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001，Control：空白对照组；CCl4:CCl4诱导肝硬化组；CCl4+DPSC:DPSC系统注射组。
图4：DPSCs对CCl4诱导肝硬化治疗后血清生化指标检测分析，(A)AST；(B)ALT；(C)ALT；(D)Total bilirubin*，P<0.05；**,P<0.01；***,P<0.001，Control：空白对照组；CCl4:CCl4诱导肝硬化组；CCl4+DPSC:DPSC系统注射组。
具体实施方式
干细胞是一类具有自我复制的多潜能细胞，间充质干细胞是其中被认为最具有医学价值的干细胞种类。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)作为间质起源的非造血干细胞，其存在于多种人体组织，如骨髓(bone marrow，BM)，脐带(umbilical cord，UC)、脐带血(umbilical cord blood，UCB)、脂肪组织(adipose tissue，AT)、牙髓(dentalpulp、DP)和皮肤。根据不同的组织来源及分离培养方法，MSC由一大类特征和功能各异的细胞亚型所组成。MSC对于主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)I类分子的表达水平较低，并且不表达MHC II类分子和共刺激因子(CD80、CD86、CD40)，因而其免疫原性低，移植排斥风险小。既往研究显示，MSC可在多种炎症状态下介导免疫耐受作用。它们通过细胞间的直接接触以及分泌免疫调节分子，影响先天性和获得性免疫细胞(如T细胞、B细胞、DC、自然杀伤细胞)的发生发育和免疫功能。
牙髓间充质干细胞(dpMSC)作为机体的重要MSC成员，其存在于牙髓、牙周膜、脱落乳牙、根尖乳头和牙囊组织中。与骨髓MSC相比，牙髓MSC异质性低、增殖迅速、型别稳定并无成瘤现象。牙髓MSC可诱导调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)增殖，并抑制DC的分化成熟。据我们查阅中外文献所知，目前牙髓MSC尚未被用于治疗肝硬化。
牙髓间充质干细胞肝脏移植是将牙髓中的间充质干细胞移植到肝脏内，分化为有功能的实质细胞，以替代因退变、损伤、基因缺陷或自身免疫而受损的肝细胞,重构组织器官的结构和功能。牙髓间充质干细胞是从乳牙牙髓中分离的间充质干细胞，移植具有以下几个方面的优点：①来源广泛，采集方便，不会给供者造成任何损伤；②较成人骨髓中的干细胞更原始,，有更强的增殖分化能力；③免疫功能不够成熟,其免疫原性较弱，移植物抗宿主病发生率较低；④不会有肿瘤细胞；⑤易于分离。目前，围绕牙髓间充质干细胞肝脏移植所采用的临床治疗措施均为已经应被多项临床研究证实用多年的成熟技术，因此在理论与技术方面均为干细胞肝脏移植提供了保障。
牙髓间充质干细胞治疗肝硬化的机制：肝硬化是慢性肝病共有的病理改变，不同病因引起的慢性肝损伤，导致以胶原为主的细胞外基质合成增多，降解相对不足，过多沉积在肝内引起肝纤维化。若进一步发展引起肝小叶改建、假小叶和结节形成，则进入肝硬化。各种肝脏损伤因子引起肝细胞损伤、坏死、凋亡及肝组织炎症反应，激活Kupper细胞等分泌多种细胞因子，与肝细胞、血小板及窦内皮细胞分泌的细胞因子、脂质过氧化物等化学递质,共同作用于肝星状细胞，使之激活转变为肌成纤维细胞，发生表型及功能改变，并通过旁分泌或自分泌机制，使肌成纤维细胞增殖，合成大量的胶原和蛋白多糖等。而肝星状细胞的激活是肝纤维化及肝硬化发生的中心环节，涉及多种递质间的相互作用。间充质干细胞直接分化为肝细胞，补充肝细胞数量，改善肝功能，从而可以防止肝纤维化的进一步发展。间充质干细胞的可获得性、可扩增性及可多向分化性展示了良好的研究及应用前景。它具有向肝脏细胞分化的能力，故其能作为种子细胞应用于修复替代受伤的肝脏组织，间充质干细胞同时支持造血作用并具有免疫调节作用，对引起肝硬化的感染及炎症等具有良好的抑制作用，同时对肝脏细胞具有营养和支持作用，提高其存活率，加快肝脏系统及免疫系统的重建。
牙髓间充质干细胞用于制备肝硬化治疗药物
本发明通过试验研究首次证实和发现，牙髓间充质干细胞可用于治疗肝硬化。因此，牙髓间充质干细胞可用于制备肝硬化治疗药物。
以牙髓间充质干细胞为主要活性成分或主要活性成分之一制备药物。通常，药物中除了有效成分外，根据不同剂型的需要，还会包括一种或多种药学上可接受的载体或辅料。
“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。
“药学上可接受的载体或辅料”应当与牙髓间充质干细胞相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如Tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成注射剂、针剂、口服液、片剂、胶囊、滴丸、喷剂等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。
牙髓间充质干细胞联合治疗药物组合和施用方法
所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：
一)将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。使用时，可几种药同时使用，也可几种药先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对机体有效的期间内向机体施加其他药物。
二)将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物配置成复方制剂，在将牙髓间充质干细胞和其他肝硬化治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。
抗体常用的用药方法为静脉注射、静脉滴注或动脉灌注。其用法用量可参考现有技术。
小分子化合物常用的用药方法可以是胃肠道给药或者是胃肠外给药。siRNA、shRNA、抗体则一般采用胃肠外给药。可以是局部给药亦可以为全身给药。
可以同步地或顺序地给予有效量的牙髓间充质干细胞和至少一种有效量的其他肝硬化治疗药物。
使用时，可将有效量的牙髓间充质干细胞和有效量的其他肝硬化治疗药物同时使用，也可将有效量的牙髓间充质干细胞和有效量的其他肝硬化治疗药物先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对生物体有效的期间内向生物体施加其他药物。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。
当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组DNA技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见Sambrook等MOLECULAR CLONING：A LABORATORY MANUAL，Second edition，Cold Spring HarborLaboratory Press，1989and Third edition，2001；Ausubel等，CURRENT PROTOCOLS INMOLECULAR BIOLOGY，John Wiley&Sons，New York，1987and periodic updates；theseries METHODS IN ENZYMOLOGY，Academic Press，San Diego；Wolffe，CHROMATINSTRUCTURE AND FUNCTION，Third edition，Academic Press，San Diego，1998；METHODS INENZYMOLOGY，Vol.304，Chromatin(P.M.Wassarman and A.P.Wolffe，eds.)，AcademicPress，San Diego，1999；和METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，Vol.119，ChromatinProtocols(P.B.Becker，ed.)Humana Press，Totowa，1999等。
实施例1牙髓间充质干细胞治疗肝硬化
CCl4是诱导小鼠肝硬化模型的常用药物，其诱导模型成功率高，可重复性高等特点。本研究利用CCl4诱导的小鼠模型，研究牙髓干细胞(Dental Pulp Stem Cells,DPSCs)对肝硬化的治疗作用及其分子机制，为其临床转化应用提供线索和依据。
本发明的研究技术路线，可参加图1。本研究采用CCl4(CCl4:Olive oil＝1：1)0.5ml/kg体重经腹腔注射，每周2次，经过8周时间诱导，获得肝硬化的小鼠(C57BL/6J)模型。每组5只，4周时，对进行治疗。治疗4周后取材对治疗效果进行分析，以评估牙髓干细胞(DentalPulp Stem Cells,DPSCs)对肝硬化的治疗效果。
具体的，
1、实验动物
C57BL/6J小鼠，雌性，15只，8周龄，SPF级。
购买小鼠在SPF级动物房饲养一周后，做标记，称量体重。随机分3组：正常组、肝硬化组、DPSC治疗组(DPSC iv.)。每组5只。
实验涉及的所有动物处理内容均遵从实验动物实验管理和动物福利相关条例和法规。实验设计经过伦理委员会批准并由其监督支持。
2、受试物
实验用DPSCs细胞在GMP条件下培养，细胞采用生理盐水进行重悬，密度为4×106/ml。Olive Oil为分析级纯度。
3、仪器
Micro-CT、显微镜、切片机、二氧化碳培养箱、生物安全柜、离心机。
4、方法
1)DPSCs培养及注射液制备
复苏P2代DPSC种子库细胞，培养基成分为90％的α-MEM和10％FBS。汇合率至90％时进行传代，收获P4细胞进行实验。收获P4代细胞，经过洗涤后，进行计数，根据计数结果用生理盐水调整密度为4×106/ml。细胞注射液在使用前保存在冰上，并在2小时内使用。
2)肝硬化小鼠模型诱导
四氯化碳(CCl4)与橄榄油(Olive Oil)按体积比1:1混合，选用8周龄的C57BL/6J小鼠，按0.5ml/kg体重腹腔注射，每周注射两次，诱导肝硬化。诱导时间为8周。
3)阻断性治疗干预
肝硬化诱导4周后，治疗组通过尾静脉注射200μl含有1×106个DPSCs的细胞悬液；正常组和肝硬化组分别注射相同量的生理盐水。4周后评估DPSCs对肝硬化的治疗作用。
4)组织学检测
取肝脏组织后进行大体拍照，然后立即浸入10％多聚甲醛溶液(pH7.2-7.4)，固定2-3天。经过梯度乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。5um连续切片，HE，Sirius Red或者Masson染色，透明后中性树胶封皮，显微镜下观察拍照。
5)生化指标检测
收集小鼠血清，利用试剂盒检测血清AST,ALT,ALP及total bilirubin。
4、统计
结果均采用均值±标准差表示，用SPSS21.0进行统计分析，根据需要进行t检测或one way ANOVA分析。P<0.05表示具有显著差异。
5、实验结果
经过4周的治疗后，肝脏大体图显示(图2)，CCl4诱导肝硬化，肝脏表面光滑性降低，显示出小颗粒结节，同时有类似脂肪结节形成。DPSCs系统注射后可以恢复CCl4诱导的肝脏表面光滑性，减少脂肪结节的形成。HE及Masson，Sirius Red染色(图3中的A)显示，CCl4诱导肝硬化组肝脏细胞排列紊乱，肝小叶结构受破坏，肝脏中纤维组织沉积增多，DPSCs系统注射可一定程度上恢复其受破坏的肝脏细胞及肝小叶结构，并减少肝脏中纤维组织沉积。综合HE及Masson，Sirius Red染色结果分析显示诱导肝硬化组肝脏纤维化面积比例显著高于对照组，同时根据Masson染色计算的肝脏纤维化指数(liver fibrousscore，Ishak scoring)高于对照组，而DPSCs系统注射可以降低CCl4诱导的肝脏纤维化面积比例及肝脏纤维化指数(图3中的A和B)。
生化检测分析结果显示，CCl4诱导肝硬化组肝脏功能受损，而DPSCs系统注射可以恢复受损的肝脏功能，包括降低CCl4诱导升高的血清AST，ALT，ALP及total bilirubin等(图4)。
6、结论：
CCl4:可以稳定可重复的诱导小鼠肝硬化模型，DPSCs系统注射对肝硬化具有明显的治疗效果。
以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法、组合物的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。
Claims (10)
1.间充质干细胞用于制备肝硬化治疗药物的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述间充质干细胞选自牙髓间充质干细胞。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述间充质干细胞为所述肝硬化治疗药物的唯一有效成分或有效成分之一。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肝硬化治疗药物至少具有以下功用之一：(1)恢复肝脏表面光滑性；(2)减少肝脏脂肪结节的形成；(3)恢复受破坏的肝脏细胞；(4)减少肝脏中纤维组织沉积；(5)降低肝脏纤维化面积比例；(6)降低肝脏纤维化指数；(7)恢复受损的肝脏功能；(8)降低血清AST水平；(9)降低血清ALT水平；(10)降低血清ALP水平；(11)降低血清total bilirubin水平。
5.一种治疗肝硬化的方法，为向对象施用间充质干细胞，优选为牙髓间充质干细胞。
6.一种肝硬化治疗药物，包括有效剂量的间充质干细胞，优选为牙髓间充质干细胞。
7.一种肝硬化联合治疗药物组合，包括有效量的间充质干细胞和至少一种其他肝硬化治疗药物，所述间充质干细胞优选为牙髓间充质干细胞。
8.一种治疗肝硬化的方法，为向对象施用有效量的间充质干细胞以及向对象施用有效量的其他肝硬化治疗药物和/或向对象实施其他肝硬化治疗手段，所述间充质干细胞优选为牙髓间充质干细胞。
9.间充质干细胞的如下任一或多种用途：(1)用于制备肝脏表面光滑性恢复剂的用途；(2)用于制备肝脏脂肪结节形成减少剂的用途；(3)用于制备受破坏的肝脏细胞恢复剂的用途；(4)用于制备肝脏中纤维组织沉积减少剂的用途；(5)用于制备肝脏纤维化面积比例降低剂的用途；(6)用于制备肝脏纤维化指数降低剂的用途；(7)用于制备受损的肝脏功能恢复剂的用途；(8)用于制备血清AST水平降低剂的用途；(9)用于制备血清ALT水平降低剂的用途；(10)用于制备血清ALP水平降低剂的用途；(11)用于制备血清total bilirubin水平降低剂的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述间充质干细胞选自牙髓间充质干细胞。
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