一种肝肿瘤靶向载体材料、胶束制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及靶向药物载体和制剂技术领域,尤其是涉及一种肝肿瘤靶向载体材料、胶束制剂及其制备方法。
背景技术
近年来,肿瘤对人们安康所带来的危害非常大,并带有许多并发症。通过近年来的研究调查,人们因肿瘤而引起的死亡率居所有疾病的第二位,仅次于心脑血管疾病,其中肝肿瘤在我国的发病率非常的高。随着我国人口老龄化进程的加快,肝肿瘤的发病率日益增加,对肝肿瘤的治疗与防治也越来越受到人们的关注。
现阶段,对于肝肿瘤的治疗措施主要包含手术、放射和药物治疗,目前仍然以药物治疗为主。传统抗肝肿瘤药物给药后,通过多种途经分布于全身,抵达一定的血药浓度后发挥作用。这种治疗方法虽抗瘤谱广,反应性高,但不能准确选择肿瘤细胞,将其去除掉而发挥治疗作用,反而有可能对正常细胞如干细胞等造成显著损伤,最终表现出毒副作用较大。另外化疗药可能会对身体中除肝脏以外的器官造成损伤,且可能对细胞毒药物产生耐药性。
随着人们对于转化医学与分子学的深刻研讨,许多科学家已经把对抗肝肿瘤药物的研究朝着分子靶点的方向发展。这种方法弥补了传统药物的缺点,具有治疗效果显著和选择性高的特点,因此对靶向性抗肿瘤药物的研究成为热门。
有鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种肝肿瘤靶向载体材料,所述载体材料具有还原敏感性,能够对还原物质高的肿瘤微环境实现靶向选择,解决了现有技术中抗肝肿瘤药物不能准确选择肿瘤细胞的技术问题。
本发明的第二目的在于提供一种肝肿瘤靶向载体材料的制备方法,所述制备方法操作简单,条件温和。
本发明的第三目的在于提供一种肝肿瘤靶向胶束制剂,所述胶束制剂采用载体材料和抗肝肿瘤药物自组装形成,利用所述载体材料的聚合物-药物缀合物的特性,增强疏水性药物的溶解性和稳定性,并能够在还原环境下进行药物释放。
本发明的第四目的在于提供一种肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,通过透析法制备胶束制剂,制备条件温和,制备得到的胶束制剂包封率和载药量相对较高。
为了实现本发明的上述目的,特采用以下技术方案:
一种肝肿瘤靶向载体材料,主要由当归多糖、甘草次酸和抗肝肿瘤药物依次共价连接而成;其中,所述甘草次酸与抗肝肿瘤药物之间通过二硫键共价连接。
优选的,所述抗肝肿瘤药物包括姜黄素、槲皮素、紫杉醇、喜树碱、淫羊藿素和白藜芦醇中的任一种,优选为姜黄素。
中药当归是当归的干燥根,具有补充并活化血液,促进肠道顺滑舒畅,加速排泄和新陈代谢及治疗痛经等功效。当归多糖(Angelica sinensispolysaccharide,APS)是运用许多种分离技术从传统中药当归中提取出来的重要成分之一。APS具有水溶性良好、相对毒性低及生物相容性好等优势,并且在肝肿瘤免疫应答方面具有显著效果。
甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)是从中药甘草中提取的有效成分,属于五环三萜类化合物,不溶于水,易溶于有机溶剂,无毒且成本低。肝细胞膜表面存在大量的GA特异性结合位点,GA修饰的载体可通过细胞内容作用,与肝细胞表面的甘草次酸受体特异性结合,使药物靶向送至肝肿瘤细胞中而发挥药理作用,减少对其它器官的毒副作用。
姜黄素(Curcumin,Cur)是一种天然疏水性多酚类色素,广泛存在于姜科类植物的根茎中,是从姜黄中提取出的治疗性癌症药物。姜黄素不容易被氧化降解,对肿瘤、炎症、糖尿病等疾病有很好的防御作用,尤其抗肿瘤作用特别显著,且毒副作用较小。但姜黄素在溶解、吸收、分布、代谢等方面存在很多局限性,其在肿瘤组织中的全身性副作用和非靶向性限制了其在临床治疗方面的应用价值。
本发明利用当归多糖的良好的水溶性和肝肿瘤靶向性,甘草次酸的疏水性和肝肿瘤靶向性,并利用二硫键结合姜黄素,制备得到两亲性的载体材料,可在水中自组装成胶束,作为药物载体材料等。并且,当归多糖是一种具有生物相容性的亲水性多糖,本发明通过当归多糖接枝甘草次酸,形成具有水溶性和生物相容性的聚合物,再通过二硫键结合姜黄素,形成聚合物-药物缀合物,其可增强疏水性药物的溶解性和稳定性,选择性应对肿瘤环境的恶化。
优选的,所述肝肿瘤靶向载体材料的结构式如下:
其中,m为10-30的整数,n为20-60的整数。
优选的,所述肝肿瘤靶向载体材料的分子量为5000-20000Da。
本发明还提供了一种肝肿瘤靶向载体材料的制备方法,包括如下步骤:
(a)当归多糖与甘草次酸进行酯化反应,得到A;
(b)抗肝肿瘤药物与化合物B进行酰基化反应,得到的物质与所述A进行酯化反应,得到所述肝肿瘤靶向载体材料;
所述抗肝肿瘤药物中含有两个或两个以上的羟基基团。
优选的,所述步骤(a)中,当归多糖在EDC和DMAP的催化作用下与甘草次酸进行酯化反应,得到A。更优选的,所述步骤(a)中,反应的温度为40-70℃,优选45-65℃,如55℃。进一步优选的,所述当归多糖、EDC和DMAP的质量比为1﹕(1-1.2)﹕(0.5-1),优选为1﹕1﹕0.75。
优选的,所述步骤(a)中,当归多糖与甘草次酸的质量比为1﹕(2-4)。
优选的,所述步骤(b)中,抗肝肿瘤药物与化合物B在碱性条件下反应。更优选的,所述步骤(b)中,酰基化反应的温度为30-60℃,优选为40-50℃,如45℃。
优选的,所述步骤(b)中,化合物B的制备方法包括:3,3-二硫代二丙酸与草酰氯反应制备得到。更优选的,所述反应的温度为25-45℃,优选为30-40℃,如35℃。
优选的,所述步骤(b)中,3,3-二硫代二丙酸与草酰氯的摩尔比为1﹕(2-4),如1﹕3。
优选的,所述步骤(b)中,A在EDC和DMAP的催化作用下与酰基化反应得到的物质进行酯化反应,得到所述肝肿瘤靶向载体材料。更优选的,所述步骤(b)中,酯化反应的温度为40-70℃,优选45-65℃,如55℃。
优选的,所述步骤(b)中,A、EDC和DMAP的质量比为1﹕(1-3)﹕(1-2),优选为1﹕2﹕1.5。
优选的,所述步骤(b)中,A与酰基化反应得到的物质进行酯化反应后,将反应后的物质置于透析袋中,于水中透析10-30h。以除去未反应的原料。更优选的,将透析后透析袋中的物质冷冻干燥得到所述肝肿瘤靶向载体材料。进一步优选的,所述透析袋的截留分子量为2000D。
本发明还提供了一种肝肿瘤靶向胶束制剂,包括所述肝肿瘤靶向载体材料与抗肝肿瘤药物,所述抗肝肿瘤药物包载于所述肝肿瘤靶向载体材料中。
优选的,包载于所述肝肿瘤靶向载体材料中的抗肝肿瘤药物包括姜黄素、槲皮素、紫杉醇、喜树碱、淫羊藿素和白藜芦醇中的任一种。
优选的,所述包载于所述肝肿瘤靶向载体材料中的抗肝肿瘤药物与所述载体材料中的抗肝肿瘤药物相同;优选二者均为姜黄素。
优选的,所述肝肿瘤靶向胶束制剂中,包封率为15-20%,优选为16-20%。
优选的,所述肝肿瘤靶向胶束制剂中,载药量为5-10%,优选为8-10%。
优选的,所述肝肿瘤靶向胶束制剂的粒径为100-350nm。
本发明还提供了一种肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,包括如下步骤:
肝肿瘤靶向载体材料与抗肝肿瘤药物混合溶解于溶剂中,置于透析袋中于水中透析8-20h;
将透析后的溶液离心,收集上清液,经微孔滤膜过滤,收集滤液,即得所述肝肿瘤靶向胶束制剂。
本发明采用透析法制备得到的胶束制剂粒径均匀、电位合适,并且包封率和载药量较好。而采用溶剂挥发发或薄膜分散法,所述肝肿瘤靶向载体材料在常用有机试剂如甲醇、甲酰胺、DMF等中溶解时,会出现肉眼可见未溶解的小颗粒,而无法实现胶束的制备。
优选的,所述肝肿瘤靶向载体材料与抗肝肿瘤药物的质量比为(10-20)﹕1。
优选的,所述溶剂包括DMSO、二甲基甲酰胺和二氯甲烷中的任一种。
优选的,所述肝肿瘤靶向载体材料在溶剂中的浓度为2-8mg/mL,如在不同实施例中可以为2mg/mL、3mg/mL、4mg/mL、5mg/mL、6mg/mL、7mg/mL、8mg/mL等,优选为5mg/mL。
优选的,所述离心的转速为2000-4000rpm/min,所述离心的时间为10-20min。
优选的,所述微孔滤膜的孔径为0.4-0.8μm。
优选的,经微孔滤膜过滤,弃去初滤液,收集续滤液。
优选的,在避光条件下,置于透析袋中于水中透析。
与现有技术相比,本发明的有益效果为:
(1)本发明研究出一种新型肝肿瘤靶向载体材料,所述载体材料利用当归多糖的良好的水溶性和肝肿瘤靶向性,甘草次酸的疏水性和肝肿瘤靶向性,并利用二硫键结合抗肝肿瘤药物,制备得到两亲性的载体材料,可在水中自组装成胶束,用于包载药物等;
(2)本发明所述的肝肿瘤靶向载体材料中,通过当归多糖接枝甘草次酸,形成具有水溶性和生物相容性的聚合物,再通过二硫键结合抗肝肿瘤药物,形成聚合物-药物缀合物,其可增强疏水性药物的溶解性和稳定性,选择性应对肿瘤环境;
(3)本发明所述的肝肿瘤靶向载体材料的制备方法,操作简便、原料易得;
(4)本发明采用透析法制备得到包载有抗肝肿瘤药物的胶束制剂,所述胶束制剂中,包封率为16.19%,载药量为8.37%;在还原环境下,能够提高对抗肝肿瘤药物的释放量,能够对还原物质高的肿瘤微环境实现靶向选择;
(5)本发明的胶束制剂,利用所述载体材料的聚合物-药物缀合物的特性,增强疏水性药物的溶解性和稳定性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例提供的所述肝肿瘤靶向载体材料的反应过程路线图;
图2为本发明实施例制备得到的A、原料GA和APS的核磁氢谱图;
图3为本发明实施例制备得到的A、化合物C和所述肝肿瘤靶向载体材料的核磁氢谱图;
图4为本发明实施例制备得到的胶束制剂的照片;
图5为本发明实施例制备得到的胶束制剂的粒径分布图;
图6为本发明实施例制备得到的胶束制剂的电位分布图;
图7为本发明实施例制备得到的胶束制剂在含有GSH的还原环境中和不含有GSH的环境中的姜黄素累计释放曲线图。
具体实施方式
下面将结合附图和具体实施方式对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,但是本领域技术人员将会理解,下列所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例,仅用于说明本发明,而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明提供了一种肝肿瘤靶向载体材料,主要由当归多糖、甘草次酸和抗肝肿瘤药物依次共价连接而成;其中,所述甘草次酸与抗肝肿瘤药物之间通过二硫键共价连接。
在本发明一优选实施方式中,所述抗肝肿瘤药物包括姜黄素、槲皮素、紫杉醇、喜树碱、淫羊藿素和白藜芦醇中的任一种,优选为姜黄素。
在本发明一优选实施方式中,所述肝肿瘤靶向载体材料的结构式如下:
其中,m为10-30的整数,n为20-60的整数。
如图1所示,其为所述肝肿瘤靶向载体材料反应过程路线图。其中,当归多糖与甘草次酸进行酯化反应,得到A;姜黄素与化合物B进行酰基化反应,得到化合物C;所述A与化合物C进行酯化反应,得到所述肝肿瘤靶向载体材料。
本发明所述的肝肿瘤靶向载体材料,能够通过透析法将姜黄素包载在其中,在水中自组装形成胶束制剂。所述胶束制剂在还原环境下,能够提高对姜黄素的释放量,能够对还原物质高的肿瘤微环境实现靶向选择。
本发明具体实施例中采用的部分试剂和仪器信息如下:
当归多糖,武汉胜天宇生物科技有限公司;
甘草次酸,阿拉丁试剂有限公司;
姜黄素,天津市登科化学试剂有限公司;
N,N-二甲基甲酰胺(DMF),天津博迪化工股份有限公司;
二甲基亚砜(DMSO),天津市永大化学试剂有限公司;
1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC),阿拉丁试剂有限公司;
4-二甲氨基吡啶(DMAP),Sigma-Aldrich有限公司;
透析袋(MWCO=3000、2000),北京索莱宝科技有限公司。
实施例1
本实施例提供了一种肝肿瘤靶向载体材料的制备方法,步骤如下:
1、A的合成
(1)称取0.020g的APS于EP管中,加入2mL的DMF,借助水浴加热或超声方法使APS完全溶解;其中,APS经下述预处理:将APS经透析和G50葡萄糖凝胶柱分离提纯,得到糖含量为92%,分子量约10000Da的精制的当归多糖;
(2)称取0.020g的EDC和0.015g的DMAP于EP管中,加入3mL的DMF使其溶解,合并步骤(1)和步骤(2)制备得到的溶液,密封,于55℃活化30min;
(3)称取0.047g的GA于EP管中,加入2mL的DMF,借助水浴加热或超声方法使GA完全溶解;将溶解于DMF的GA在搅拌条件下缓慢滴加入步骤(2)中活化好的溶液中,滴加完成后,密封,于55℃反应24h;
(4)反应结束后,将反应后的溶液转移至截留分子量为3000D的透析袋中,将透析袋置于盛有适量去离子水的容器中,室温下透析24h(透析过程不断换水)以除去未反应的APS和GA;将透析完成后的溶液离心,收集上清液,将上清液冷冻干燥,得到所述A。
请参阅图2,其是本实施例制备得到的A、原料GA和APS的核磁氢谱图,图中对相同位置处的峰进行了框选,以对照查看。从图中可知,A的核磁氢谱中,在化学位移为0.5-2.5ppm之间有很多甲基上的氢的特征峰,这些特征峰来源于GA,在化学位移为3.0-5.5ppm之间的特征峰来源于APS;另外,GA的核磁氢谱中在11.39处的峰为羧基上的氢的特征峰,而在A中对应位置没有峰,证明了GA的羧基发生了反应;APS的核磁氢谱中,在4.3ppm处的强峰为羟基上的氢的特征峰,而在A中峰明显变弱,可见有羟基参与了反应,由此可以判断GA和APS反应合成了A。
2、化合物C的合成
(1)称取0.040g的3,3-二硫代二丙酸,加入1mL的无水THF使其溶解;
(2)取48μL的草酰氯,将其加入1mL的无水THF中,混匀后,缓慢加入步骤(1)得到的溶液中,于35℃条件下反应2h后旋蒸除去溶剂,得到化合物B;
(3)称取0.050g姜黄素,加入1mL的无水THF使其溶解,加入34μL的三乙胺;将步骤(2)得到的化合物B溶解于1mL的THF中,然后滴加至前述含姜黄素的溶液中,于45℃反应6h;反应结束后,旋蒸除去溶剂,即得所述化合物C。
3、肝肿瘤靶向载体材料的合成
(1)称取0.010g的A于EP管中,加入2mL的DMSO使其完全溶解;
(2)称取0.020g的EDC和0.015g的DMAP于EP管中,加入2mL的DMF使其溶解;
(3)将上述制得的化合物C溶解于2mL的DMSO中,将步骤(1)和(2)得到的溶液滴加其中,密封,于55℃中反应24h;
(4)反应结束后,将反应后的溶液转移至截留分子量为2000D的透析袋中,将透析袋置于盛有适量去离子水的容器中,室温下透析24h(透析过程不断换水)以除去未反应的化合物C,将透析完成后的溶液离心,收集上清液,将上清液冷冻干燥,得到所述肝肿瘤靶向载体材料。
请参阅图3,其是本实施例制备得到的A、化合物C和所述肝肿瘤靶向载体材料的核磁氢谱图,图中对相同位置处的峰进行了框选,以对照查看。从图中可知,在所述肝肿瘤靶向载体材料的氢谱图中,在化学位移为6.5-7.5ppm以及3.5-4.5ppm之间的特征峰主要来源于化合物C,其中6.5-7.5ppm处的峰来源于姜黄素;在化学位移为0.5-2.5ppm之间的特征峰主要来源于A中的甲基上的氢的特征峰。另外,根据标准物质,可以看到3,3-二硫代二丙酸的-CH2-的质子峰出现在3.0ppm,由此可以判断A和化合物C反应合成了肝肿瘤靶向载体材料。
实施例2
本实施例参考实施例1的制备方法,区别仅在于:在A的制备过程中,APS、EDC和DMAP的质量比为1﹕1.2﹕1,APS与GA的质量比为1﹕4,步骤(3)中反应温度为45℃。
实施例3
本实施例参考实施例1的制备方法,区别仅在于:在化合物C的制备过程中,3,3-二硫代二丙酸与草酰氯的摩尔比为1﹕2,二者反应温度为40℃,姜黄素与化合物B的反应温度为30℃。
实施例4
本实施例参考实施例1的制备方法,区别仅在于:在肝肿瘤靶向载体材料的制备过程中,A、EDC和DMAP的质量比为1﹕1﹕1,A和化合物C的反应温度为40℃。
实施例5
本实施例提供了一种肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,以实施例1制备得到的肝肿瘤靶向载体材料为例。
所述肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,步骤如下:
(1)称取15mg实施例1中制备得到的肝肿瘤靶向载体材料和1mg姜黄素于容器中,加入1mL的DMSO,借助加热和超声使其完全溶解,确保溶液澄清,然后将溶液转移至截留分子量为3000D的透析袋中,用2mL的DMSO冲洗容器,然后加入透析袋中,将透析袋置于盛有1L去离子水的1L规格的容器中,避光条件下,室温下透析12h(透析过程不断换水);
(2)透析完成后,将透析袋中溶液于3000rpm/min的转速下离心15min,收集上清液,将上清液经0.8μm的微孔滤膜过滤,弃去初滤液,收集续滤液,即得所述肝肿瘤靶向胶束制剂。
请参阅图4,其为本实施例制备得到的胶束制剂的照片,从图中可知,溶液中有乳光出现,说明成功制备出胶束制剂。
实施例6
本实施例参考实施例5中的肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,区别仅在于:所述肝肿瘤靶向载体材料和所述姜黄素的质量比为10﹕1。
实施例7
本实施例参考实施例5中的肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,区别仅在于:所述肝肿瘤靶向载体材料和所述姜黄素的质量比为20﹕1。
实施例8
本实施例参考实施例5中的肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,区别仅在于:肝肿瘤靶向载体材料和姜黄素的用量分别为24mg和1.6mg。
实施例9
本实施例参考实施例5中的肝肿瘤靶向胶束制剂的制备方法,区别仅在于:肝肿瘤靶向载体材料和姜黄素的用量分别为6mg和0.4mg。
实验例1
为了测定本发明实施例制备得到的胶束制剂的包封率(Entrapment Efficiency,EE)和载药量(Drug Loading Content,DL),采用微孔过滤法测试EE和DL,具体测试方法如下。
配制浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、5.0μg/mL、10μg/mL的一系列姜黄素的无水乙醇标准溶液,采用高效液相色谱仪在425nm波长的参数下,测量这一系列浓度所对应的峰面积值,结果如表1所示。然后对数据的处理,得到峰面积随着姜黄素浓度的变化而变化的标准曲线方程为,峰面积S=1.5582x+4.5627(R
2=0.9999),其中x为姜黄素的浓度,单位为μg/mL。HPLC条件为:色谱柱:
ODS-SP(4.6×250mm,5μm);流动相:乙腈-5%冰醋酸水溶液(60﹕40,v/v);流速:1mL/min;柱温:25℃;进样量:20μL;检测波长:425nm。
表1 HPLC测的姜黄素各浓度所对应的峰面积
浓度(μg/mL) |
峰面积 |
0.1 |
19.8 |
0.5 |
91.2 |
1.0 |
151.3 |
5.0 |
784.1 |
10 |
1563 |
以实施例5为例,称取实施例5中制备得到的胶束制剂1mL置于10mL容量瓶中,用甲醇稀释定容至刻度下;采用移液枪移取1mL稀释后的胶束制剂,过0.45μm的微孔滤膜后,通过与上述相同的高效液相色谱仪进样,测定其峰面积值,代入至上述标准曲线方程中,计算出对应的姜黄素的浓度,进而金酸姜黄素的质量,代入公式即得到EE(%)和DL(%)。
计算公式如下:
通过HPLC法测的胶束制剂的峰面积为582.06,带入标准曲线方程中计算得到浓度为3.70μg/mL,带入上述包封率和载药量的计算公式,最终得出包封率为16.19%,载药量为8.37%。
实验例2
粒径是测量胶束集中程度的重要参数,电位是测量胶束稳定性的重要参数。为了测定本发明实施例制备得到的胶束制剂的集中程度和稳定性,对其粒径及电位,通过粒度仪进行测试,以实施例5为例。
用实验例1中经过0.45μm的微孔滤膜过滤后的胶束制剂,润洗比色皿,然后用滴管逐滴加入到比色皿中,至溶液约占比色皿的三分之二即可,利用粒度仪测定其粒径,测定时间2-3min,进行多次测定并记录实验数据图。随后同样操作进行电位的测试,测定时间20min,多次测定并保存实验数据图。
本发明实施例5制备得到的胶束制剂的粒径分布图和电位分布图分别如图5和6所示,从图中可知,本发明实施例5制备得到的胶束制剂的粒径大约在317.3nm左右,分散系数为0.182,小于0.3,说明胶束分布较均一,基本呈现正态分布;电位大约在-15.18mV左右,绝对值小于30mV,测得电位较好,说明胶束稳定性较好。
实验例3
为了验证本发明制备得到的胶束制剂的还原敏感性,进行以下体外药物释放实验,测试方法如下。
以含有体积分数计为0.5%的吐温80的pH为7.4的磷酸盐缓冲液作为释放介质。为了测试还原环境下胶束制剂的释药情况,加入GSH做一组对照实验,具体做法为:分别取上述pH为7.4的PBS溶液40mL两份,其中一份中加入10mM的GSH溶液作为实验组,另一份中不加GSH作为对照组。
以实施例5为例,移取实施例5制备得到的肝肿瘤靶向胶束制剂2mL。转移至截留分子量为3000D的透析袋中,然后置于40mL的上述含有0.5%吐温80和10mM的GSH的PBS缓冲液中,于温度为37℃、转速为100rpm/min的恒温水浴震荡器中,依照2015版中国药典中释放度测定的原理进行各时间点的取样操作。用不含有10mM GSH的PBS缓冲液作为释放介质作为对照组,同上述操作。待实验组和对照组的所有时间点的取样全部完成后依次进液相,然后用HPLC法测定峰面积,通过实验例1中的标准曲线方程,计算出姜黄素的浓度,进而计算出含有的姜黄素的质量,再计算出各时间点所对应的累积释放度(%),累积释放度的计算公式如下:
Er%为姜黄素累积释放度(%);Ve为取样体积(mL);Vo为释放介质的总体积(mL);Ci为第i次取样时姜黄素的浓度(μg/mL);Cn为第n次取样时姜黄素的浓度(μg/mL);mdrug为胶束中包载的姜黄素的质量(μg);n为取样次数。根据计算结果绘制出时间-累积释放度的曲线图,如图7所示。
从图中可知,在pH为7.4的近中性条件下,胶束制剂在对照组的条件下,即在不含有GSH的PBS溶液中较稳定,药物释放不太显著,但在含有GSH的还原环境下释放药物明显增多,说明其具有还原敏感性,能够对还原物质高的肿瘤微环境实现靶向选择。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。