CN113057939B - 一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法和应用 - Google Patents

一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法和应用，所述药物包括纳米胶束和包载在纳米胶束内的雷公藤红素药物；所述纳米胶束为油酸与明胶以酰胺键共价作用得到油酸‑明胶两亲分子，或是由取代苯硼酸、油酸与明胶以酰胺键共价作用得到的苯硼酸‑油酸‑明胶两亲分子。相对于现有雷公藤红素制剂技术，本发明采用新型纳米胶束对雷公藤红素进行包载，解决了雷公藤红素水中溶解度小，难以进行溶液型制剂配制的问题；且雷公藤红素胶束具有的纳米尺寸使得雷公藤红素更容易进行有效的透皮给药，有利于提高生物利用度。

Description

一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法和 应用
技术领域
本发明属于中药制剂领域，具体的说是将中药雷公藤的三萜类单体成分雷公藤红素制成纳米胶束，所述纳米胶束是化学修饰的明胶形成的两亲分子，以及其制备方法和在制备采用透皮给药途径治疗银屑病药物中的应用。
背景技术
雷公藤红素(celastrol，简称CE)，又名南蛇藤素，是从传统中药雷公藤的根部分离得到的一种五环三萜类化合物，可以和体内蛋白的半胱氨酸残基中的巯基发生迈克尔加成反应，生成共轭加成产物影响多种蛋白或酶的活性，从而调节细胞内多种信号途径，产生多种药理作用，如抗炎及免疫抑制、抗肿瘤、抗氧化及抗肥胖等药理作用。近些年雷公藤红素的抗肿瘤活性受到广泛关注，其对肺癌、肝癌、乳腺癌、骨肉瘤、胃癌、白血病、宫颈癌等均具有显著的抑制作用，其抗肿瘤机制涉及阻滞细胞周期、诱导凋亡、抑制血管新生及细胞侵袭和转移等方面，同时也是一种P-糖蛋白(P-gp)抑制剂，可以逆转机体多药耐药等。但是雷公藤红素在生物药剂学分类系统(BCS)中属于BCS II类，水溶性差(溶解度为1.192μg/mL)、溶出度低、生物利用度低、肝和生殖毒性等限制了其临床应用。
聚合物胶束由独特的核壳结构构成。两亲性聚合物至少是由亲水和亲脂两部分组成的高分子聚合物，疏水性的内核可以包载难溶性药物，亲水性外壳将药物与水溶性环境隔开可以稳定胶束，同时防止胶束被机体内网状内皮系统排出体外。聚合物胶束作为给药载体在难溶性药物、基因、显像剂的应用比较广泛，在中药提取分离后得到的单体的制剂之中也有广泛的应用。研究发现将纳米胶束用于经皮给药，具有生物相容性好，对皮肤无刺激作用；纳米级颗粒能提高角质层的水合程度，促进药物透过；具有缓释作用；可以提高难溶性药物生物利用度并极大地降低药物因口服产生的毒性。
明胶纳米颗粒被广泛应用于递送亲水性和疏水性抗癌药物，包括甲氨蝶呤、阿糖胞苷、喜树碱、姜黄素、环己酰亚胺、白藜芦醇、多柔比星、紫杉醇、诺斯卡平等药物以提高抗肿瘤活性，控制药物的释放，靶向作用肿瘤以减少系统生理毒性。其中，油酸修饰明胶已被报道在溶液状态下可自组装形成胶束，是一种潜在的药物传递系统。由于油酸是主要透皮吸收促进剂之一，可用于提高极性到中等极性分子的渗透能力。油酸偶联明胶形成的纳米颗粒可增加药物的经皮吸收，减少副作用，靶向乳腺癌细胞等使药物的细胞毒性效果最大化。
将雷公藤红素用化学修饰的两亲明胶分子包载形成纳米胶束，并采用经皮给药的方式，可有效抑制由银屑病而导致的皮肤炎症及过增生等现象，并可降低雷公藤红素对正常组织的毒副作用。其在银屑病、类风湿性关节炎、皮肤癌及乳腺癌方面的治疗优势，将具有很好的应用开发前景。目前未见用化学修饰的两亲明胶分子包载雷公藤红素形成纳米胶束，并采用经皮给药方式治疗银屑病的研究报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种可实现经皮吸收且治疗效果好的雷公藤红素药物。本发明解决上述技术问题所采用的方案是：
一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物，所述药物包括纳米胶束和包载在纳米胶束内的雷公藤红素药物；所述纳米胶束为油酸与明胶以酰胺键共价作用得到油酸-明胶两亲分子，或是由取代苯硼酸、油酸与明胶以酰胺键共价作用得到的苯硼酸-油酸-明胶两亲分子。
优选地，所述油酸-明胶两亲分子纳米胶束水合粒径为215.3±2nm，Zeta电位为-7.6±0.2mv；所述苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束水合粒径为267.83±2nm，Zeta电位为-6.0±0.1mv。
优选地，所述取代苯硼酸为化学修饰苯硼酸，具体包括二羧酸类化合物与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物，包括但不限于：丁二酸酐与3-氨基苯硼酸的反应产物；马来酸酐与3-氨基苯硼酸的反应产物；谷氨酸与3-氨基苯硼酸的反应产物；门冬氨酸与3-氨基苯硼酸的反应产物等。
本发明的另一目的是提供一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法，包括如下步骤：
(1)获得化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束；
(2)将化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束溶于去离子水得到A溶液；
(3)将雷公藤红素溶于有机溶剂中得到B溶液；
(4)将B溶液滴加到高速搅拌的A溶液中得到C溶液；
(5)将所得C溶液置于透析袋中37℃透析后冷冻干燥得到载药纳米颗粒。
优选地，所述化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束的制备方法包括如下步骤：
(1)将油酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，再加入巯基乙醇淬灭得到溶液a；
(2)将明胶溶解于乙醇溶液中37℃磁力搅拌溶解得到溶液b；
(3)将溶液b加入到溶液a中于37℃磁力搅拌，反应完毕后，向反应液中加入无水乙醇，析出固体后用无水乙醇洗涤得到油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
(4)将所得纳米胶束重溶于水中再置于透析袋中，置于水中室温下透析1～3天后冷冻干燥得到纯化后的油酸-明胶两亲分子纳米胶束。
优选地，所述油酸与明胶的投料质量比例为0.5:1～0.85:1，更加优选是0.75:1。
优选地，所述化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束还包括如下制备方法：
(1)将油酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，再加入巯基乙醇淬灭得到溶液a；
(2)将明胶溶解于乙醇溶液中37℃磁力搅拌溶解得到溶液b；
(3)将溶液b加入到溶液a中于37℃磁力搅拌，反应完毕后，向反应液中加入无水乙醇，析出胶束后用无水乙醇洗涤得到油酸-明胶两亲分子组成的纳米胶束；
(4)将所得纳米胶束重溶于水中再置于透析袋中，置于水中室温下透析1～3天后冷冻干燥得到纯化后的油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
(5)将取代苯硼酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，然后加入巯基乙醇淬灭得到溶液c；
(6)将步骤(4)所得纳米胶束溶解于乙醇溶液中，得到溶液d；
(7)将溶液d加入到溶液c中37℃磁力搅拌，直至反应完毕；
(8)将所得反应液加入无水乙醇，析出固体，用无水乙醇洗涤得到苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
(9)将所得纳米胶束重溶于水中再进行透析纯化和冷冻干燥，得到纯化后的苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束。
优选地，所述取代苯硼酸为化学修饰苯硼酸，具体包括与二羧酸类化合物与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物。包括但不限于：丁二酸与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物；马来酸与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物；谷氨酸与3-氨基苯硼酸反应生成的反应产物；门冬氨酸与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物等，更加优选的是丁二酸与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物。
优选地，所述取代苯硼酸、油酸、明胶的投料质量比例为0.5:1:1.3～1.5:1:1.8，更加优选1:1:1.5。
本发明的另一目的是提供上述化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物或者上述制备方法所得的化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物在制备银屑病透皮给药药物中的应用。
相对于现有雷公藤红素制剂技术，本发明采用新型纳米胶束对雷公藤红素进行包载，解决了雷公藤红素水中溶解度小，难以进行溶液型制剂配制的问题；且雷公藤红素胶束具有的纳米尺寸使得雷公藤红素更容易进行有效的透皮给药，有利于提高生物利用度。
附图说明
图1为油酸-明胶两亲分子纳米胶束(GOC-1)与苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束(GOC-2)的1H-NHR谱图，可以看到GOC-2比GOC-1在化学位移10.00～7.27ppm范围内多增加了APBA的苯环氢信号峰，说明实现了APBA对明胶的进一步化学修饰；
图2为GOC与GOC-PBA包载雷公藤红素的溶液外观图，从左至右依次为GOC-2载雷公藤红素、雷公藤红素和GOC-1载雷公藤红素，显然，在相同体积的水溶液中，雷公藤红素几乎不溶于水，而GOC-1和GOC-2均能形成均匀、分散、稳定的溶液；
图3为GOC-1与GOC-2包载雷公藤红素形成纳米胶束的TEM图，采用透射电镜观察GOC-1(A)与GOC-2(B)的形貌，通过透射电镜照片可观察到所制备的纳米胶束为大小较均一、圆整度较好的类球形粒子；
附图4是GOC-1与GOC-2形成纳米胶束的临界胶束浓度(CMC)；
附图5是GOC-1与GOC-2包载雷公藤红素的透皮扩散试验累积渗透量与时间关系；
附图6是GOC-1与GOC-2包载雷公藤红素形成纳米胶束的体外释放曲线图；
附图7是GOC-1与GOC-2包载雷公藤红素纳米胶束溶液治疗银屑病模型小鼠效果图，其中，A为雷公藤红素软膏组、B为载雷公藤红素GOC-1受试组、C为载雷公藤红素GOC-2受试组。
具体实施方式
实施例1
本实例提供的GOC-1包载雷公藤红素纳米胶束，制备的胶束水合粒径为180-220nm。制备方法如下：
称取油酸0.15g于50ml 60％的乙醇中37℃磁力搅拌溶解，加入2.7g EDC和0.6gNHS活化10min后，加入0.3ml巯基乙醇淬灭20min得到溶液a；
称取0.2g明胶于50ml 60％的乙醇中37℃磁力搅拌溶解得到溶液b；
将溶液b加入到溶液a中37℃磁力搅拌12h。反应完毕后，加入适量无水乙醇，析出固体后用无水乙醇洗涤三次得到约0.5g油酸-明胶纳米胶束。将所得固体重溶于20ml水中再置于14KD透析袋中，置于500ml水中室温下透析48h后冷冻干燥得到纯化后的油酸-明胶纳米胶束(GOC-1)。采用TNBS法测得GOC-1中明胶的氨基的取代度为45.8％。
称取300mg GOC-1于300ml去离子水中配成1mg/ml的A溶液置于冰浴中冷却；称取雷公藤红素270mg溶于3.75ml二氯甲烷:丙酮＝3:1混合溶剂中配成72mg/ml的B溶液置于冰浴中冷却；
将B溶液匀速缓慢滴加到转速为13000rpm/min高速搅拌下的A溶液中搅拌20min得到溶液；再将其置于14KD透析袋中37℃透析48h，使用0.22μm滤膜过滤再冷冻干燥得到载雷公藤红素的油酸-明胶两亲分子纳米胶束。结构确证如图1所示。
实施例2
本实例提供的GOC-2包载雷公藤红素纳米胶束，制备的胶束水合粒径为220-270nm。制备方法如下：
按照实施例1制取GOC-1；
称取0.15g 3-丁二酰胺基苯硼酸于50ml 60％的乙醇中于37℃磁力搅拌溶解，加入2.7g EDC和0.6g NHS活化10min后，加入0.3ml巯基乙醇淬灭20min得到溶液c；
称取0.2g GOC-1于8ml60％的乙醇中37℃磁力搅拌溶解得到溶液d；
将溶液d加入到溶液c中37℃磁力搅拌12h；
将上步反应完毕后的溶液加入适量无水乙醇，析出固体，用无水乙醇洗涤三次得到约0.15g油酸-明胶纳米胶束。
将得固体重溶于20ml水中再置于14KD透析袋中，置于500ml水中37℃下透析48h后冷冻干燥得到纯化后的苯硼酸-油酸-明胶纳米胶束GOC-2。采用TNBS法测得GOC-2中明胶的氨基取代度为62％。
称取300mg GOC-2于300ml去离子水中配成1mg/ml的A-2溶液置于冰浴中冷却；
称取雷公藤红素270mg溶于3.75ml二氯甲烷：无水乙醇＝3:1混合溶剂中配成72mg/ml的B-2溶液置于冰浴中冷却；
将B-2溶液匀速缓慢滴加到转速为13000rpm/min高速搅拌下的A-2溶液中搅拌20min得到溶液；再将其置于14KD透析袋中37℃透析48h后使用0.22μm滤膜过滤再冷冻干燥得到载雷公藤红素的苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束。结构确证如图1所示。
实施例3
为确定GOC-1和GOC-2的胶束行为特征，以芘为疏水探针，采用探针荧光技术测定了载药雷公藤红素后GOC-1和GOC-2的临界胶束浓度(CMC)。具体操作如下：在6×10-7M处将芘溶解在丙酮中。在50℃蒸发除去丙酮后，分别向芘中加入5ml不同浓度的GOC-1或GOC-2溶液(0.00025、0.0005、0.001、0.0025、0.005、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5和1mg/ml)。超声作用2h使芘和胶束达到平衡。荧光光谱用荧光分光光度计(Perkin Elmer Asia LS-55BM-2721,USA)测定。激发波长为336nm，芘的发射光谱在35-450nm范围内。激发和发射的狭缝孔径分别设置为10nm和5nm。测定了CMC的第一个能带(375nm,I1)与第三个能带(386nm,I3)的强度比。绘制logC与I1/I3数值的关系图。如图4所示。经过计算，GOC-1和GOC-2的临界胶束浓度(CMC)分别为0.056mg/ml和0.042mg/ml。
实施例4
体外皮肤渗透性测试
对实施例1和2制备得到的样品采用Franz透皮扩散池进行体外皮肤渗透性试验。具体操作如下：取小鼠(购于湖北省疾病控制预防中心)，脱颈椎处死后立即用剃毛刀剃净腹部毛发，剥取无毛发部分皮肤，随后除净皮下脂肪组织等，剪取无损部分皮肤用生理盐水洗净，-20℃冷藏备用。
采用改良Franz扩散池法进行试验。将离体皮肤固定于Franz扩散池(扩散面积为2.88cm2)的供给池和接收池之间，皮肤角质层朝向供给池。随后向接收池内加入含0.5％吐温80的20％乙醇作接收液，同时排净接收池内的气体，实验过程中采用循环水浴加热，使温度保持在(37±0.5)℃、并以100r/min的转速搅拌。
用移液枪分别取溶解于水中的实施例1和2制备好的样品5ml(浓度均为1mg/ml)，加入到供给室中，并用保鲜膜密封以防止样品蒸发。在规定的时间(2、4、6、8、10、12、24、28、32、36、48、56h)抽取上层样品500μl，随即补充同温等量接收液，吸取的接收液中加入甲醇1ml，涡旋混匀后离心(6 950×g)10min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，用高效液相色谱法测定接收液中雷公藤红素的含量。并通过计算得知随时间的增加样品透过皮肤的累积量。以药物累积渗透率为纵坐标，时间为横坐标作图，绘制GOC-1和GOC-2的累积渗透率-时间曲线，如图5所示。
试验进行24h后，取下扩散区域的皮肤，用流水反复洗净皮肤表面附着的接收液和待测药膏，用生理盐水润洗皮肤，随后用滤纸吸干表面水分，称重，然后将皮肤置10ml塑料离心管内，用剪刀将皮肤剪至约1mm2大小，加入适量甲醇，立即超声40min，放至室温，涡旋混合均匀，于25℃离心(6 950×g)10min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，用高效液相色谱法测定上清液中雷公藤红素的含量，计算其皮肤滞留量。GOC-1和GOC-2的皮肤滞留量分别为16.836μg·cm-2和19.299μg·cm-2，GOC-2的滞留量略高与药物作用力更强有关。
从图5中可以看出，GOC-1和GOC-2载雷公藤红素的纳米胶束的累积渗透量均明显高于雷公藤红素的累积渗透量。这表明GOC-1和GOC-2纳米胶束在经皮吸收上有非常好的促渗作用，其中GOC-2比GOC-1的透过速率略慢，缓释效果更明显。
运用Excel对实验数据进行模拟拟合，药物渗透曲线符合Quadratic Model模型，即QGOC-1＝1.79246t-13.5926，r＝0.9939；QGOC-2＝1.12541t-5.171667，r＝0.9932；稳态渗透速率(J)分别为1.79、1.11μg/cm2.h。
透皮吸收结果表明，与雷公藤红素溶液相比，载药GOC可显著增加药物在皮肤中的滞留量，在皮肤角质层形成药物储库，随后与皮肤的脂质发生相互作用，进而透过皮肤，达到治疗效果。
实施例5
体外释放试验
采用透析法监测载药GOC-1和GOC-2的体外释放。以游离雷公藤红素为对照，具体操作如下：将预定量的雷公藤红素或待测的GOC-1和GOC-2分别悬浮在500μl的PBS(pH 7.4)中，将溶液放入预膨胀的透析袋(MWCO 3500)中，浸入含有20％乙醇(v/v)-5％吐温80(w/v)的相同PBS(pH 7.4)溶液中。通过水浴保持温度在37℃。在指定的时间点，取出一定体积的透析袋外释放液进行雷公藤红素的浓度测定，并且补加相同体积的新鲜释放液。计算雷公藤红素累积释放量，并绘制累积释放量与时间的曲线图。如图6所示。
载药GOC-1和GOC-2体外释放研究结果表明药物在前期不存在突释现象，与雷公藤红素溶液相比，药物从GOC中的释放表现为持续、缓慢的释放行为，可缓慢增加雷公藤红素在皮肤组织中的质量浓度，避免不良反应的发生。
实施例6
按照实施例1和2获得的纳米胶束，进行药效学实验，其中对比药物为自制雷公藤红素软膏。雷公藤红素软膏按照以下方法制备：
称取适量十八醇和凡士林，水浴加热至75℃得到油相；称取适量甘油、吐温80、纯化水，水浴加热至80℃得到水相；将水相缓慢滴入油相中，并加入雷公藤红素进行均质10min，得到雷公藤红素乳膏(含量约为5％)。
银屑病动物模型的建立
5％咪喹莫特乳膏均匀涂于小鼠背部6cm2皮肤，每日3次，连续1周，造成银屑病样模型。
药效学实验
取成功建模小鼠45只，随机分为5组：空白对照组5只，模型对照组10只，对比药物组10，两受试组每组各10只。每天固定时间(例如下午19:00)给药，给药方式：将药物涂抹于病患部位。给药剂量为折算后2mg雷公藤红素/kg。
空白对照组涂抹凡士林或者空白乳膏；模型对照组涂抹IMQ；对比药物组涂抹雷公藤红素软膏；两受试组分别涂抹载雷公藤红素GOC-1和载雷公藤红素GOC-2。
第1-4组为实施例3-6获得的制剂，给药剂量为2mg雷公藤红素/kg；第5组为雷公藤红素单体凝胶组，给药剂量为2mg雷公藤红素/kg；第6组为相应制剂空白基质组；第7组为模型对照组。
对小鼠银屑病样皮损面积和疾病严重程度(psoriasis area and severityindex，PASI)进行评分：每三天拍照记录小鼠皮损变化，并依据PASI评分标准，给予小鼠皮损处红斑(erythema)、鳞屑(scales)及浸润增厚程度(thickness)0～4的积分，将三者积分相加得到总积分。PAIS评分标准如下：0，无；1，轻度；2，中度；3，重度；4，极重度。对各组小鼠积分取平均值后绘制趋势线，观察各组小鼠皮损的变化情况。如图7所示。
从图中可以看出，空白基质对银屑病几乎无治疗作用，雷公藤红素纳米胶束制剂各组及雷公藤红素软膏均可抑制银屑病病情的发展，且雷公藤红素纳米胶束制剂各组表现的治疗效果相比雷公藤红素软膏更优。
以上所述是本发明的优选实施方式而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和变动，这些改进和变动也视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物，其特征在于，所述药物包括纳米胶束和包载在纳米胶束内的雷公藤红素药物；所述纳米胶束为油酸与明胶以酰胺键共价作用得到油酸-明胶两亲分子，或是由取代苯硼酸、油酸与明胶以酰胺键共价作用得到的苯硼酸-油酸-明胶两亲分子。
2.如权利要求1所述的雷公藤红素药物，其特征在于，所述油酸-明胶两亲分子纳米胶束水合粒径为215.3±2 nm，Zeta电位为-7.6±0.2 mv；所述苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束水合粒径为267.83±2 nm，Zeta电位为-6.0±0.1mv。
3.如权利要求1所述的雷公藤红素药物，其特征在于，所述取代苯硼酸为二羧酸类化合物与3-氨基苯硼酸反应生成的单取代产物。
4.一种化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）获得化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束；
（2）将化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束溶于去离子水得到A溶液；
（3）将雷公藤红素溶于有机溶剂中得到B溶液；
（4）将B溶液滴加到高速搅拌的A溶液中得到C溶液；
（5）将所得C溶液置于透析袋中透析纯化后冷冻干燥得到载药纳米颗粒；
所述化学修饰的明胶两亲分子纳米胶束的制备方法包括方案1和方案2，方案1步骤如下：
（1）将油酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，再加入巯基乙醇淬灭得到溶液a；
（2）将明胶溶解于乙醇溶液中磁力搅拌溶解得到溶液b；
（3）将溶液b加入到溶液a中于磁力搅拌，反应完毕后，向反应液中加入无水乙醇，析出固体后用无水乙醇洗涤得到油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
（4）将所得油酸-明胶两亲分子重溶于水中再置于透析袋中，置于水中室温下透析1~3天后冷冻干燥得到纯化后的油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
方案2步骤如下：
（1）将油酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，再加入巯基乙醇淬灭得到溶液a；
（2）将明胶溶解于乙醇溶液中磁力搅拌溶解得到溶液b；
（3）将溶液b加入到溶液a中于磁力搅拌，反应完毕后，向反应液中加入无水乙醇，析出固体后用无水乙醇洗涤得到油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
（4）将所得油酸-明胶两亲分子重溶于水中再置于透析袋中，置于水中室温下透析1~3天后冷冻干燥得到纯化后的油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
（5）将取代苯硼酸溶于乙醇溶液中，加入EDC和NHS活化，然后加入巯基乙醇淬灭得到溶液c；
（6）将步骤（4）所得油酸-明胶两亲分子纳米胶束溶解于乙醇溶液中，得到溶液d；
（7）将溶液d加入到溶液c中37℃磁力搅拌，直至反应完毕；
（8）将所得反应液加入无水乙醇，析出固体，用无水乙醇洗涤得到苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束；
（9）将所得苯硼酸-油酸-明胶两亲分子重溶于水中再进行透析纯化和冷冻干燥，得到纯化后的苯硼酸-油酸-明胶两亲分子纳米胶束。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，方案1中油酸与明胶的投料质量比例为0.5:1～0.85:1。
6.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于：方案2中取代苯硼酸为与二羧酸连接的基团与3-氨基苯硼酸的取代产物。
7.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述取代苯硼酸、油酸、明胶的投料质量比例为（0.5~1.5）：1：（1.3~1.8）。
8.如权利要求1~3任一项所述的化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物用于制备治疗银屑病的透皮给药药物的应用。
9.如权利要求4~7任一项所述的制备方法所得的化学修饰明胶胶束包被的雷公藤红素药物用于制备治疗银屑病的透皮给药药物的应用。
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